CN105154325B - 真菌寄生大豆胞囊线虫检测装置 - Google Patents

真菌寄生大豆胞囊线虫检测装置 Download PDF

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Abstract

真菌寄生大豆胞囊线虫检测装置，本发明属于农业生物实验领域，它为了解决现有实验室难以准确测定寄生真菌对不同虫态大豆胞囊线虫的寄生情况的问题。该真菌寄生大豆胞囊线虫检测装置由检测管和细胞培养板组成，其中检测管是在管体的上端盖有管盖，管盖的顶面上开有圆孔，在管体的下端开有通孔，检测管置于细胞培养板中的培养槽中，在检测管管盖的上表面盖有两层擦镜纸，培养槽中填充有ZnCl2溶液或灭菌水。本发明的检测装置能够准确测定寄生真菌对不同虫态大豆胞囊线虫的寄生情况，直观的检测寄生真菌对不同虫态大豆胞囊线虫的作用，为大豆胞囊线虫生防资源的筛选提供了一个更为有效的方法。

Description

真菌寄生大豆胞囊线虫检测装置
技术领域
本发明属于农业生物实验领域，具体涉及用于真菌对不同虫态大豆胞囊线虫寄生情况测定研究、大豆胞囊线虫生防资源筛选和测定的实验设备。
背景技术
大豆胞囊线虫病(Soybean cyst nematode，简称SCN)是世界大豆生产中的主要限制因子之一。因其病原大豆胞囊线虫分布广、危害重、寄主范围大、传播途径多、胞囊抗逆性强且存活时间长等特点，成为一种极难防治的土传病害。由于生物防治对环境和人类的危害较小，大豆胞囊线虫病生物防治的研究已经成为焦点。
目前根据真菌对大豆胞囊线虫的作用机制来分，可以将生防真菌归纳为5类：捕食性真菌、专性寄生线虫菌物、机会真菌、产毒真菌和菌根菌(VAM)。捕食性真菌是在线虫的诱导下，利用自身营养菌丝产生的粘性菌丝、粘性网、收缩环、三维菌网等捕食器官，对土壤中运动的线虫进行捕食。机会真菌和内寄生真菌则是通过与寄主线虫的相互识别，吸附或粘着于虫体表面，并同时在几丁质酶的作用下菌丝能够穿透体壁将其卵壳消解，侵染其中的卵和幼虫，通过胞囊和卵中的营养物质来进行繁殖菌体，从而达到防治的效果。一些生防真菌还可以通过分泌某些能够分解线虫体壁的酶类物质进行防治线虫。例如某些内寄生真菌能够产生多种与侵染线虫相关的胞外蛋白酶，如胞外丝氨酸蛋白酶和几丁质酶，它们能够降解大豆胞囊线虫胞囊和卵的蛋白质组分，从而达到抑制大豆胞囊线虫病的作用。除此之外还有很多微生物是通过产生具有杀线作用的代谢产物来进行防治的。
生防资源的筛选成为生防因子在实际生产中应用的关键。实验室筛选工作目前主要是通过制备不同真菌的发酵液，通过调查不同虫态的大豆胞囊线虫在发酵液中的孵化程度和致死作用，初步判断该真菌是否对大豆胞囊线虫具有抑制作用。该方法是从代谢产物方面筛选生防资源，忽略了真菌自身寄生对大豆胞囊线虫的防治作用，另外该方法无法直观检测真菌对大豆胞囊线虫的作用形态，为生防资源的筛选带来了一定的局限性。
发明内容
本发明目的是为了解决现有实验室难以准确测定寄生真菌对不同虫态大豆胞囊线虫的寄生情况的问题，而提供一种真菌寄生大豆胞囊线虫检测装置。
本发明真菌寄生大豆胞囊线虫检测装置由检测管和细胞培养板组成，其中检测管是在管体的上端加盖有管盖，管盖的顶面上开有圆孔，在管体的下端开有通孔，检测管置于细胞培养板中的培养槽中，在检测管管盖的上表面盖有两层擦镜纸，在培养槽中填充有ZnCl2溶液或灭菌水，ZnCl2溶液或灭菌水的加入量至擦镜纸的高度。
目前利用大豆胞囊线虫寄生真菌来防治大豆胞囊线虫病害是研究较为广泛的生物防治措施。准确测定寄生真菌对不同虫态大豆胞囊线虫的寄生情况，是开发和利用寄生真菌防治大豆胞囊线虫病害的关键步骤之一。
本发明所述的真菌寄生大豆胞囊线虫检测装置中的检测管可以由离心管改装而成，能够准确直接地测定寄生真菌对不同虫态大豆胞囊线虫寄生和抑制作用。目前关于生防真菌在生物防治中的研究主要集中在发酵液对大豆胞囊线虫的抑制作用，本发明的检测装置则能够更直观的检测寄生真菌对不同虫态大豆胞囊线虫的作用，同时为大豆胞囊线虫生防资源的筛选提供了一个更为有效的方法。
附图说明
图1为检测管的结构示意图；
图2为检测管置于细胞培养板中的结构示意图。
具体实施方式
具体实施方式一：本实施方式真菌寄生大豆胞囊线虫检测装置由检测管1和细胞培养板2组成，其中检测管1是在管体1-1的上端加盖有管盖1-2，管盖1-2的顶面上开有圆孔1-3，在管体1-1的下端开有通孔1-4，检测管1置于细胞培养板2中的培养槽2-1中，在检测管1管盖的上表面盖有两层擦镜纸3，在培养槽2-1中填充有ZnCl2溶液或灭菌水，ZnCl2溶液或灭菌水的加入量至擦镜纸3的高度。
本实施方式管体下端的通孔起到通气作用，能够让培养板中的液体更加容易接触到检测管的擦镜纸。
本实施方式能够检测真菌对不同虫态大豆胞囊线虫的寄生作用，根据真菌对大豆胞囊线虫胞囊和卵寄生后在ZnCl2溶液中的孵化程度，及被寄生后的大豆胞囊线虫二龄幼虫(J2)是否能通过擦镜纸爬到检测管下层水中，来判断该真菌是否对大豆胞囊线虫具有抑制作用，测定真菌对大豆胞囊线虫的直接作用，更加直观和充分地体现真菌对大豆胞囊线虫的抑制作用，为生防资源的筛选提供更有理的依据，也为生防真菌防治大豆胞囊线虫的机理研究提供参考和帮助。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是所述的管体1-1的高度为12～15mm。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二不同的是所述的管体1-1的内径为6～20mm。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一至三之一不同的是细胞培养板2中的培养槽2-1的深度为15～18mm。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一至四之一不同的是培养槽2-1的直径为15～27mm。
具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式一至五之一不同的是在细胞培养板2的上表面还覆盖有灭菌滤纸4。
具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式一至六之一不同的是检测管1的材质为硬质塑料。
实施例一：本实施例真菌寄生大豆胞囊线虫检测装置由检测管1和细胞培养板2组成，其中检测管1是在管体1-1的上端加盖有管盖1-2，管盖1-2顶盖上开有7mm的圆孔1-3，在管体1-1的下端开有通孔1-4，检测管1置于细胞培养板2中的培养槽2-1中，在检测管1管盖的上表面盖有两层擦镜纸3，在培养槽2-1中填充有ZnCl2溶液或灭菌水，ZnCl2溶液或灭菌水的加入量至擦镜纸3的高度；其中检测管的高度为13mm，检测管内径为8mm，圆柱形培养槽的深度为18mm，培养槽的直径为17mm。
本实施例所述的检测管可以通过塑料离心管改造而成。
应用本实施例所述的真菌寄生大豆胞囊线虫检测装置的检测过程如下：在实验室条件下，用灭菌的蒸馏水将细胞培养板内检测管上端擦镜纸润湿，接入待测寄生真菌菌丝，然后在每个检测管擦镜纸上分别加入经NaClO消毒后不同虫态(胞囊、二龄幼虫、卵)的大豆胞囊线虫，用湿润的灭菌滤纸盖在培养板上用来保湿，25℃条件下培养5-7d，培养天数根据寄生真菌生长速度而定，培养期间注意擦镜纸和上面滤纸的湿润程度，要及时补充灭菌水保持湿润。待培养板内擦镜纸上的大豆胞囊线虫被真菌寄生后，在解剖镜下检查大豆胞囊线虫的不同虫态寄生情况，取出培养板，加入胞囊和卵的培养板沿板壁加入0.4mmol·L- 1ZnCl2溶液，溶液加入量以刚好到达测试管擦镜纸为标准，每隔3d记录胞囊和卵的孵化情况，直到没有线虫孵化为止。加入J2的培养板沿板壁加入灭菌水，灭菌水加入量也以刚好到达测试管擦镜纸为标准，24h后记录水中的线虫数。根据线虫的孵化数和水中的J2数量判断真菌对大豆胞囊线虫的寄生和抑制作用。
在实验室条件下进行应用，寄生真菌菌株对大豆胞囊线虫不同虫态的寄生情况如表1所示，能够明显检测出寄生真菌菌株寄生大豆胞囊线虫不同虫态的情况，不同菌株之间存在显著差异。本发明简单有效，使用方便，成本低廉，易于推广应用。
表1

Claims (6)

1.真菌寄生大豆胞囊线虫检测装置，其特征在于该真菌寄生大豆胞囊线虫检测装置由检测管(1)和细胞培养板(2)组成，其中检测管(1)是在管体(1-1)的上端加盖有管盖(1-2)，管盖(1-2)的顶面上开有圆孔(1-3)，在管体(1-1)的下端开有通孔(1-4)，检测管(1)置于细胞培养板(2)中的培养槽(2-1)中，在检测管(1)管盖的上表面盖有两层擦镜纸(3)，在擦镜纸(3)上接入待测寄生真菌菌丝，在培养槽(2-1)中填充有ZnCl2溶液或灭菌水，ZnCl2溶液或灭菌水的加入量至擦镜纸(3)的高度，在细胞培养板(2)的上表面还覆盖有灭菌滤纸(4)。
2.根据权利要求1所述的真菌寄生大豆胞囊线虫检测装置，其特征在于所述的管体(1-1)的高度为12～15mm。
3.根据权利要求1所述的真菌寄生大豆胞囊线虫检测装置，其特征在于所述的管体(1-1)的内径为6～20mm。
4.根据权利要求1所述的真菌寄生大豆胞囊线虫检测装置，其特征在于细胞培养板(2)中的培养槽(2-1)的深度为15～18mm。
5.根据权利要求1所述的真菌寄生大豆胞囊线虫检测装置，其特征在于培养槽(2-1)的直径为15～27mm。
6.根据权利要求1所述的真菌寄生大豆胞囊线虫检测装置，其特征在于检测管(1)的材质为硬质塑料。
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