CN105143272A - 用于与抗体药物偶联物疗法一起使用的免疫成像剂 - Google Patents

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CN105143272A CN201480018581.XA CN201480018581A CN105143272A CN 105143272 A CN105143272 A CN 105143272A CN 201480018581 A CN201480018581 A CN 201480018581A CN 105143272 A CN105143272 A CN 105143272A
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Abstract

本发明涉及基于人源化单克隆抗体DS6的伴随诊断性抗体样结合蛋白用作针对体内检测和量化肿瘤相关MUC1-唾酸糖表位CA6的诊断工具。

Description

用于与抗体药物偶联物疗法一起使用的免疫成像剂
发明领域
本发明涉及伴随诊断性抗体样结合蛋白和使用方法。
发明背景
患者人群中用于治疗用途的药物开发存在很多挑战。多种初始作用剂由于多种原因不能到达市场(例如临床益处的缺乏或患者群体中经过验证的安全性的缺乏)。对于开发有效和安全的药物而言的一些关键问题是：(1)在患者群体中确立药物与其目的分子靶相互作用；(2)在相同患者群体中确立该特异性靶与治疗特定疾病相关；和(3)在相同的患者群体中基于药物对所述靶的作用鉴定生物学最佳剂量。对于特定药物的合适的伴随诊断剂的开发在对用于临床患者群体中使用的药物的开发中帮助显著。
与分子成像耦合(couple)的伴随诊断剂提供了一种对分子靶及其在体内与药物分子的相互作用有力的、非侵入性的4维评估。一些成像平台的实例包括：磁共振成像(MRI)；正电子发射断层扫描(PET)；单光子发射断层扫描(SPECT)；光学成像、计算机断层扫描(CT)；超声、X-射线或光声成像。成像对比的选择将特定分子探针和固有的组织特性考虑在内。伴随诊断剂与分子成像的耦合允许对患者中特定药物与其分子靶的相互作用进行更好的理解，这对鉴定特定药物的潜在响应者具有帮助且有助于理解和判断药物敏感性和抗性的机制(及其最佳剂量)。
发明概述
开发了基于人源化单克隆抗体DS6的伴随诊断性抗体样结合蛋白用作诊断工具，用于通过成像技术如正电子发射断层扫描(PET)生物成像来体内检测和量化肿瘤相关MUC1-唾酸糖表位CA6。所述抗体样结合蛋白促进患者分级和人源化DS6抗体药物免疫偶联物huDS6-DM4疗效(由针对肿瘤相关MUC1-唾酸糖表位CA6的人源化单克隆抗体与细胞毒性类美登素(maytansinoid)DM4偶联组成)的早期评估。
伴随诊断性抗体样结合蛋白可用于鉴别具有高度CA6表达的患者和患者亚群，其可优先响应于使用靶向具有高度CA6表达的组织(例如肿瘤组织)的药物的治疗，如使用靶向CA6表位的抗体药物偶联物(ADC)。所述ADC可以是举例来说与细胞毒性剂(如美登素衍生物如DM1或DM4)或另一作用剂(如国际公开No.WO2005/009369中所描述)附接的huDS6分子。伴随诊断性抗体样结合蛋白可在ADC施用前进行施用，例如以判断受试者是否可能对用ADC的治疗有响应。
伴随诊断性抗体样结合蛋白可通过生物成像技术如正电子发射断层扫描(PET)用于CA6体内检测，并允许较短的暴露时间和快速的成像，如48-24小时内或更短，所述伴随诊断剂(companiondiagnostic)是具有合适的清除动力学的高度特异性结合剂。
如本文公开，本发明提供特异性结合CA6的抗体样结合蛋白，其中所述抗体样结合蛋白进一步包含螯合剂。抗体样结合蛋白可通过生物成像技术如PET用作针对体内检测和量化人CA6肿瘤抗原的诊断工具，其中所述抗体样结合蛋白与合适的螯合剂偶联用于与生物成像示踪物耦合。
如本文公开本发明进一步提供特异结合CA6的抗体样结合蛋白，其中所述抗体样结合蛋白进一步包含螯合剂。所述抗体样结合蛋白可用作表达CA6肿瘤抗原的组织的成像或检测剂，其中所述抗体样结合蛋白与合适的螯合剂偶联用于与作用剂耦合。
如本文公开本发明进一步提供制备DS6抗体样结合蛋白的方法，其包括将来自人源化DS6抗体的各VL和VHDNA序列以串联排列并通过接头序列隔开。根据下列式[I]和[II]，所述DS6VL-接头-DS6VL和DS6VH-接头-DS6VH构建体在DNA水平融合至人恒定结构域序列的3′末端：
VL1-L1-VL2-CL[I]
VH1-L2-VH2-CH1[II]
其中
VL1是基于DS6的免疫球蛋白轻链可变结构域；
VL2是基于DS6的免疫球蛋白轻链可变结构域；
VH1是基于DS6的免疫球蛋白重链可变结构域；
VH2是基于DS6的免疫球蛋白重链可变结构域；
CL是免疫球蛋白轻链恒定结构域，如人IGKC免疫球蛋白轻链恒定结构域；
CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定结构域，如人免疫球蛋白CH1重链恒定结构域；
L1和L2是氨基酸接头；且
其中所述VL1和VL2多肽可以是相同或不同的基于DS6的免疫球蛋白轻链可变结构域，且所述VH1和VH2多肽可以是相同或不同的基于DS6的免疫球蛋白重链可变结构域；且其中式I的多肽和式II的多肽形成二价单特异性串联免疫球蛋白抗体样结合蛋白。CL和CH1结构域可接合起来，如通过二硫键。此外，式I和式II的多肽可包含任选的标签(例如多聚组氨酸或6x-His标签)。
如本文公开本发明可进一步提供在患者中治疗病症如癌症的方法，其包括以下步骤：获得患者中CA6的表达水平，其中将特异性地结合CA6且进一步包含螯合剂的抗体样结合蛋白施用至所述患者，并作出组织是否表达CA6的判断，且如果患者具有相比参照组织中的CA6表达水平高至少10％(例如比参照组织中CA6的表达水平高10％、20％、30％、40％或更高)的CA6表达水平，则施用huDS6-DM4至所述患者。在一些实施方案，本发明中的特征抗体样结合蛋白用于确定肿瘤组织中如浆液性卵巢癌瘤(serousovariancarcinoma)、子宫内膜样卵巢癌瘤(endometriodovariancarcinoma)、子宫颈赘生物(neoplasmoftheuterinecervix)、子宫内膜赘生物(neoplasmoftheendometrius)、外阴赘生物(neoplasmofthevulva)、乳腺癌瘤(breastcarcinoma)、胰腺肿瘤(pancreatictumor)和尿路上皮肿瘤(tumoroftheurothelium)中CA6的表达水平。
如本文公开本发明进一步提供判断癌症患者是否是用huDS6-DM4的治疗的候选者的方法，所述方法以下步骤：获得患者中CA6的表达水平，其中将特异性地结合CA6且进一步包含螯合剂的抗体样结合蛋白施用至所述患者，并作出CA6的表达水平相比参照组织中CA6的表达是否高至少10％(例如比参照组织中CA6的表达高10％、20％、30％、40％或更高)的判断；且当做出的判断为肯定时提供癌症患者是对于huDS6-DM4的治疗的候选者的指示。
如本文公开本发明进一步提供监测癌症患者对用huDS6-DM4的治疗的响应的方法，所述方法包括以下步骤：获得患者中的CA6的表达水平，将特异性地结合CA6且进一步包含螯合剂的抗体样结合蛋白施用至所述患者，用huDS6-DM4治疗前和治疗中，做出CA6的表达水平是否作为用huDS6-DM4治疗的结果而增加、保持相同或降低的判断；且如果患者中CA6的表达水平相比用huDS6-DM4治疗前CA6表达的水平已降低，则提供治疗应该继续的指示。
本发明提供特异性地结合CA6的抗体样结合蛋白，其中所述抗体样结合蛋白包含两条多肽，所述多肽具有由下列式[I]和[II]代表的结构：
VL1-L1-VL2-CL[I]
VH1-L2-VH2-CH1[II]
其中：
VL1是基于DS6的免疫球蛋白轻链可变结构域；
VL2是基于DS6的免疫球蛋白轻链可变结构域；
VH1是基于DS6的免疫球蛋白重链可变结构域；
VH2是基于DS6的免疫球蛋白重链可变结构域；
CL是免疫球蛋白轻链恒定结构域，如人IGKC免疫球蛋白轻链恒定结构域；
CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定结构域，如人免疫球蛋白CH1重链恒定结构域；
L1和L2是氨基酸接头；
其中所述式I的多肽和式II的多肽形成二价单特异性串联免疫球蛋白抗体样结合蛋白；且
其中所述抗体样蛋白进一步包含螯合剂。
本发明还提供制备特异性地结合CA6的抗体样结合蛋白的方法，其中所述抗体样结合蛋白进一步包含螯合剂，所述方法包括：
(a)在细胞中表达一种或多种编码多肽的核酸分子，所述多肽具有由下列式[I]和[II]代表的结构：
VL1-L1-VL2-CL[I]
VH1-L2-VH2-CH1[II]
其中：
VL1是基于DS6的免疫球蛋白轻链可变结构域；
VL2是基于DS6的免疫球蛋白轻链可变结构域；
VH1是基于DS6的免疫球蛋白重链可变结构域；
VH2是基于DS6的免疫球蛋白重链可变结构域；
CL是免疫球蛋白轻链恒定结构域，如人IGKC免疫球蛋白轻链恒定结构域；
CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定结构域，如人免疫球蛋白CH1重链恒定结构域；
L1和L2是氨基酸接头；且
其中式I的多肽和式II的多肽形成二价单特异性串联免疫球蛋白抗体样结合蛋白；且
(b)将所述抗体样结合蛋白与所述螯合剂附接。
本发明进一步提供在患者中用于治疗表达CA6的疾病组织的方法，其包括：施用特异性结合CA6且进一步包含螯合剂和成像剂的抗体样结合蛋白至所述患者；在患者中通过正电子发射断层扫描(PET)成像识别表达CA6的疾病组织；且如果CA6的表达在疾病组织中大于或等于参照标准中CA6表达的10％，则确定所述患者是使用huDS6-DM4的治疗的候选者。
本发明进一步提供在患者中治疗CA6阳性癌症的方法，其包括步骤：获得关于患者中CA6的表达水平的信息；且如果患者中CA6的表达水平大于或等于参照标准中CA6表达的10％，则施用huDS6-DM4至所述患者。
本发明进一步提供判断癌症患者是否为使用huDS6-DM4的治疗的候选者的方法，其包括步骤：获得关于患者中CA6表达水平的信息；且如果患者中CA6的表达水平大于或等于参照标准中CA6表达的10％，则确定所述患者是使用huDS6-DM4的治疗的候选者。
本发明进一步提供监测癌症患者对使用huDS6-DM4的治疗的响应的方法，其包括步骤：施用huDS6-DM4后获得关于患者中CA6的表达水平的信息；且如果患者中CA6的表达水平与使用huDS6-DM4治疗前CA6的表达水平相比已降低，则提供所述治疗应继续的指示。
本发明提供特异性地结合CA6的抗体样结合蛋白，其中所述抗体样结合蛋白包含两条多肽，所述多肽具有由下列式[I]和[II]代表的结构：
VL1-L1-VL2-CL[I]
VH1-L2-VH2-CH1[II]
其中
VL1是基于DS6的免疫球蛋白轻链可变结构域；
VL2是基于DS6的免疫球蛋白轻链可变结构域；
VH1是基于DS6的免疫球蛋白重链可变结构域；
VH2是基于DS6的免疫球蛋白重链可变结构域；
CL是免疫球蛋白轻链恒定结构域，如人IGKC免疫球蛋白轻链恒定结构域；
CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定结构域，如人免疫球蛋白CH1重链恒定结构域；
L1和L2是氨基酸接头；且
其中式I的多肽和式II的多肽形成二价单特异性串联免疫球蛋白抗体样结合蛋白。
本发明还提供用于制备特异性结合CA6的抗体样结合蛋白的方法，其包括在细胞中表达一种或多种编码多肽的核酸分子，所述多肽具有由下列式[I]和[II]代表的结构：
VL1-L1-VL2-CL[I]
VH1-L2-VH2-CH1[II]
其中：
VL1是基于DS6的免疫球蛋白轻链可变结构域；
VL2是基于DS6的免疫球蛋白轻链可变结构域；
VH1是基于DS6的免疫球蛋白重链可变结构域；
VH2是基于DS6的免疫球蛋白重链可变结构域；
CL是免疫球蛋白轻链恒定结构域，如人IGKC免疫球蛋白轻链恒定结构域；
CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定结构域，如人免疫球蛋白CH1重链恒定结构域；
L1和L2是氨基酸接头；且
其中式I的多肽和式II的多肽形成二价单特异性串联免疫球蛋白抗体样结合蛋白。
本发明的具体实施方案将从下文对一些实施方案的详述和权利要求变得显而易见。
附图简述
图1.二价工程化的抗体样结合蛋白、二价单特异性串联免疫球蛋白片段(B-Fab)的示意图。B-Fab蛋白的实例包括：具有G4SG4S接头(SEQIDNO:3)和C-末端6x-His标签的B-Fab、具有G4SG4S接头(SEQIDNO:3)而无C-末端6x-His标签的B-Fab和具有G4S接头和C-末端6x-His标签的B-Fab。
图2.经由凝胶电泳(图2A)、尺寸排阻色谱(SEC)(图2B)和荧光激活细胞分选(FACS)(图2C和图2D)对具有GGGGSGGGGS((G4S)2)接头(SEQIDNO:3)和C-末端6x-His标签的基于B-FabDS6的工程化抗体的评估。
图3.经由凝胶电泳(图3A)、SEC(图3B)和FACS(图3C和图3D)对具有(G4S)2接头的基于B-FabDS6的工程化抗体的评估。
图4.经由凝胶电泳(图4A)、SEC(图4B)和FACS(图4C和图4D)对具有GGGGS(G4S)接头和C-末端6x-His标签的基于B-FabDS6的工程化抗体的评估。
图5.经由FACS使用A2780细胞无DOTA(图5A)、WISH细胞无DOTA(图5B)、WISH细胞和DOTA(图5C)对基于B-FabDS6的工程化抗体的评估，证明DOTA偶联并不改变DS6结合。
图6.64Cu-DOTA-DS6B-Fab抗体样结合蛋白的评估证明用64Cu的放射性标记和DOTA偶联允许理想的放射化学(图6A)和血清稳定性(图6B)。
图7.具有双抗体支架(图7A)和B-Fab支架(图7B)的抗体样结合蛋白间的比较。
发明详述
如本文公开本发明涉及基于人源化单克隆抗体DS6的伴随诊断性抗体样结合蛋白通过PET生物成像用作针对体内检测和量化人CA6肿瘤抗原的诊断工具。所述伴随诊断性抗体样结合蛋白将促进患者分级和DS6抗体药物免疫偶联物huDS6-DM4(由抗肿瘤相关MUC1-唾酸糖表位的人源化单克隆抗体CA6与细胞毒性类美登素DM4偶联组成)疗效的早期评估。所述抗体药物免疫偶联物huDS6-DM4描述于举例来说国际公开号WO2005/009369，其在本文通过提述并入。DS6抗体和CA6肿瘤抗原描述于举例来说Kearse等(IntJCancer.2000Dec15；88(6):866-72)，其在本文通过提述并入。
HuDS6-DM4是抗体药物免疫偶联物的首选，其由抗肿瘤相关MUC1-唾酸糖表位CA6的人源化单克隆抗体(huDS6)与细胞毒性类美登素DM4偶联组成。粘蛋白在形成上皮表面上的保护性粘膜屏障中起关键作用，且表达于排列在许多不同组织(包括肺、乳腺、卵巢、胃和胰腺)的粘膜表面的上皮细胞的顶端表面上。MUC1(粘蛋白-1)已知在多种上皮癌中过表达，且CA6过表达与人癌症中的侵袭性行为和较差的患者预后相关。CA6在正常成人组织中具有限制性的分布，因此使得DS6抗体成为用于CA6阳性肿瘤(例如卵巢、子宫、胰腺、乳房或肺肿瘤)的选择性治疗的有希望的作用剂。在抗体/抗原结合和内化时，huDS6-DM4免疫偶联物释放DM4，其与微管蛋白结合并破坏微管组装/拆装动力学，导致CA6-表达肿瘤细胞的有丝分裂停滞。HuDS6-DM4目前正在诊断具有CA6抗原阳性实体肿瘤的患者中经历I期临床试验。
为鉴别在肿瘤中显示CA6表达且因此可能对用huDS6-DM4的治疗响应的患者，开发了以高亲和力结合CA6的伴随诊断工具。此外，该伴随诊断性抗体样结合蛋白作为早期效力标志发挥作用，为非侵入性监测患者对huDS6-DM4疗法的响应提供了辅助工具，由此促进临床试验和临床治疗中的患者分级(即与肿瘤萎缩或与效力不足耦合的靶下调相关的CA6信号的降低)。这种伴随诊断可降低损耗并更迅速地帮助递送有效的治疗(medicine)至患者。如本文公开的伴随诊断性抗体样结合蛋白还可通过PET生物成像用于CA6的体内检测。为以高肿瘤比血液信号允许较短的暴露时间和快速的成像例如48至24小时内或更短，需要具有合适的清除动力学的高度特异性的结合剂。
连同合适的螯合剂和放射性标记一起开发了源自DS6抗体序列的不同新型抗体样结合蛋白，进而满足对于PET成像的所需规定(例如更好的肿瘤穿透、快速的清除动力学和出色的肿瘤比血液比率)。基于预先确定的影像学优点(IFOM)，选择～70kDa的抗体片段(二价单特异性串联免疫球蛋白，称为B-Fab)用于特异性评估和最终的临床翻译。B-Fab形式提供下列优势：(1)对热应激的高稳定性(在42℃温育一周)；(2)人血清中的高度稳定性(在37℃温育24h)；和(3)瞬时细胞培养中的合理生产力(～2mg/L)。与全长的抗体(～150kDa)相比，抗体片段(～50-75kDa)显示更加快速的肾排除和血液清除，这导致PET生物成像过程中更高的信号比噪音比率。
B-FabDS6抗体样结合蛋白包含两个基于DS6人源化单克隆抗体的CA6抗原识别位点的CA6抗原识别位点且显示与CA6抗原的高结合亲和力。与螯合剂(例如DOTA、NOTA、DTPA、TETA或Df)偶联后，DS6B-Fab被放射性标记且用于体内PET生物成像实验。
使用标准的DNA方法学以构建编码形成本发明的伴随诊断性抗体(基于DS6抗体)的多肽的多核苷酸，将这些多核苷酸并入重组表达载体，并将这些载体引入宿主细胞。参见例如Sambrook等,2001,MolecularCloning:ALaboratoryManual(ColdSpringHarborLaboratoryPress,3rded.)。酶反应和纯化技术可根据制造商的说明实施，如本领域通常实现或如本文所述。除非提供特定的定义，本文描述的与分析化学、合成有机化学和医学和药物化学联合应用的术语为本领域的技术人员公知的那些。相似地，常规技术可用于化学合成、化学分析、物制备、配制、递送和患者的治疗。
1.一般性定义
依照本公开的应用，除非另外表明，下列术语将理解为具有下列的含义。除非文本所需，单数的术语将包括复数且复数的术语将包括单数。
如本文使用的术语"多核苷酸"指代长度上至少10个核苷酸的单链或双链核酸多聚物。在一些实施方案中，包括多核苷酸的核苷酸可以是核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸或修饰形式的任何核苷酸。这种修饰包括碱基修饰如溴尿苷，核糖修饰如阿拉伯糖苷和2',3'-二脱氧核糖，和核苷酸间连接基修饰如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯(phosphoroselenoate)、二硒代磷酸酯(phosphorodiselenoate)、苯胺基硫代磷酸酯(phosphoroanilothioate)、苯胺基磷酸酯(phoshoraniladate)和氨基磷酸酯(phosphoroamidate)。术语"多核苷酸"具体包括单链和双链形式的DNA。
"分离的多核苷酸"是基因组、cDNA或合成来源或其中一些的组合的多核苷酸，凭借其来源，分离的多核苷酸：(1)不与该分离的多核苷酸在自然界所发现处的全部或部分多核苷酸关联，(2)与其在自然界中不连接的多核苷酸连接，或(3)在自然界中不作为更大序列的一部分存在。
"分离的多核苷酸"是：(1)不含正常会与之同时存在的至少一些其它多肽，(2)基本不含来自相同来源(例如来自相同物种)的其它多肽，(3)通过来自不同物种的细胞表达，(4)已与其与之天然缔合的多核苷酸、脂质、碳水化合物或其它物质的至少约50％分离，(5)不与“分离的多肽”在自然界与之缔合的多肽的部分缔合(通过共价或非共价相互作用)，(6)与其与之天然不缔合的多肽有效缔合(通过共价或非共价相互作用)，或(7)天然不存在。所述分离的多肽可由基因组DNA、cDNA、mRNA或其它RNA编码，是合成来源的或是其任何组合。优选分离的多肽基本不含在其自然环境中存在的可能干扰其应用(治疗、诊断、预防、研究或其它)的多肽或其它污染物。
如本文使用的术语“抗体”涵盖嵌合、人源化、人和鼠类抗体。
本文所用术语“人抗体”包括基本对应于人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。在一些实施方案中，人抗体在非人哺乳动物中产生，包括但不限于啮齿动物(例如小鼠和大鼠)和兔类动物(例如兔)。在其它实施方案中，人抗体在杂交瘤细胞中产生。在另外其它的实施方案中，人抗体经重组产生。
天然存在的抗体通常包含四聚体。每个这样的四聚体通常由两个相同的多肽链对组成，每对具有一条全长“轻”链(通常分子量为约25kDa)和一条全长“重”链(通常分子量为约50-70kDa)。本文所用术语“重链”和“轻链”是指任何具有足以赋予针对靶抗原的特异性的可变结构域序列的免疫球蛋白多肽。各轻链和重链的氨基端部分通常包括约100-110个或更多个氨基酸的可变结构域，其通常负责抗原识别。各链的羧基端部分通常限定负责效应子功能的恒定结构域。因此，在天然存在的抗体中，全长重链免疫球蛋白多肽包括可变结构域(VH)和三个恒定结构域(CH1、CH2和CH3)，其中VH结构域位于多肽的氨基端，且CH3结构域位于羧基端，而全长轻链免疫球蛋白多肽包括可变结构域(VL)和恒定结构域(CL)，其中VL结构域位于多肽的氨基端，CL结构域位于羧基端。
哺乳动物轻链特别是人轻链通常分类为κ和λ轻链，人重链通常分类为μ、δ、γ、α或ε，分别限定抗体的同种型为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。IgG具有若干亚类，包括但不限于IgGl、IgG2、IgG3和IgG4。IgM具有亚类，包括但不限于IgMl和IgM2。IgA同样被细分为亚类，包括但不限于IgAl和IgA2。在全长轻链和重链内，可变和恒定结构域通常通过约12个或更多个氨基酸的“J”区连接，其中重链还包含约10多个氨基酸的“D”区。参见例如FundamentalImmunology(Paul,W.,ed.,RavenPress,2nded.,1989)，其出于各种目的以其全文通过提述并入。各轻链/重链对的可变区通常形成抗原结合位点。天然存在的抗体的可变结构域通常显示由三个超变区(亦称互补决定区或CDR)连接的相对保守的框架区(FR)的相同通用结构。每对的两条链的CDR通常通过框架区对齐，这可以使得能够结合特定的表位。从氨基端到羧基端，轻链和重链两者的可变结构域通常包含结构域FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。
本文所用术语“天然Fc”是指这样的分子，其包含因抗体消化得到的或通过其它方法产生的非抗原结合片段的序列，不论呈单体还是多聚体形式，并可含有铰链区。天然Fe的原始免疫球蛋白来源优选为人源的，并可以是任何的免疫球蛋白，虽然优选IgGl和IgG2。天然Fe分子由单体多肽组成，所述单体多肽可通过共价(即二硫键)和非共价缔合连接成为二聚或多聚体形式。天然Fe分子单体亚单元间的分子间二硫键的数量范围为1-4，这取决于类别(例如IgG、IgA和IgE)或亚类(例如IgGl、IgG2、IgG3、IgA1和IgGA2)。天然Fc的一个实例是自木瓜蛋白酶消化IgG所得的二硫键键合的二聚体。本文所用术语“天然Fc”是单体、二聚和多聚体形式的通称。
本文所用术语“Fc变体”是指这样的分子或序列，其自天然Fc修饰但仍包含针对补救受体(salvagereceptor)FcRn(新生儿Fc受体)的结合位点。示例性的Fc变体及其与补救受体的相互作用是本领域已知的。因此，术语“Fc变体”可包含来自非人天然Fc经人源化的分子或序列。而且，天然Fc包含可被除去的区域，因为它们提供非本发明的抗体样结合蛋白所需的结构特征或生物活性。因此，术语“Fc变体”包含缺乏一个或多个天然Fc位点或残基的分子或序列，或其中一个或多个Fc位点或残基被修饰，其影响或参与:(I)二硫键形成，(2)与选定宿主细胞的不相容性，(3)在选定宿主细胞中表达时的N端异质性，(4)糖基化，(5)与补体的相互作用，(6)与非补救受体的Fc受体结合，或(7)抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。
本文所用术语“Fc结构域”包括天然Fc和上文定义的Fc变体和序列。如同Fc变体和天然Fc分子一样，术语“Fc结构域”包括呈单体或多聚体形式的分子，不论是自完整抗体消化还是通过其它方法产生。
本文所用术语“抗体样结合蛋白”是指与至少一种靶抗原特异性结合的非天然存在的(或重组的)工程化的分子。其涵盖例如F(ab)片段、F(ab')片段和双抗体。
一些方面，"抗体样结合蛋白"包含根据下列式[I]和[II]的来自抗体的以串联连排列并由较短的氨基酸接头序列隔开的各VL和VHDNA序列：
VL1-L1-VL2-CL[I]
VH1-L2-VH2-CH1[II]
其中：
VL1是免疫球蛋白轻链可变结构域；
VL2是免疫球蛋白轻链可变结构域；
VH1是免疫球蛋白重链可变结构域；
VH2是免疫球蛋白重链可变结构域；
CL是免疫球蛋白轻链恒定结构域；
CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定结构域；
L1和L2是氨基酸接头；且
其中式I的多肽和式II的多肽形成Fab片段(二价单特异性串联免疫球蛋白片段)。
一些方面，VL1和VL2是相同的多肽，而一些方面VH1和VH2是相同的多肽。
一些方面，L1和L2各自具有至少5、6、7、8、9或10个氨基酸的长度。
一些方面，或通常，所述CL和CH1结构域通过二硫键连接。
一些方面，L1和L2分别是GGGGS或GGGGSGGGGS(SEQIDNO:3)。
一些方面，式[I]的多肽包含与SEQIDNO:1至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的序列。
一些方面，式[II]的多肽包含与SEQIDNO:7至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的序列。
一些方面，所述抗体样结合蛋白进一步包含至少一种放射性标记、成像剂、治疗剂或诊断剂。
一些方面，所述抗体样结合蛋白具有至少1、1.1、1.2、1.3、1.4或1.5Ci/μMole(Ci/微摩尔)的比活性。
一些方面，当结合例如用游离的抗体样结合蛋白通过FACS测量时，所述抗体样结合蛋白可具有最多8、7、6、5或4nM的表观Kd。
一些方面，所述抗体样结合蛋白呈现对热应激的高稳定性。更具体地，在42℃温育一周后，可损失少于25、20、15、10或5％的可溶抗体样结合蛋白。
一些方面，所述抗体样结合蛋白呈现在人血清中的高度稳定性。更具体地，在人血清中于37℃温育24小时后，至少70、75、80、85、90或95％的抗体样结合蛋白可以为单体。
“分离的”抗体样结合蛋白是已从其天然环境的组分中鉴定和分离和/或回收的抗体样结合蛋白。其天然环境的污染物组分是可能干扰抗体样结合蛋白的诊断或治疗用途的物质，可包括酶、激素和其它蛋白质性或非蛋白质性溶质。在优选的实施方案中，抗体样结合蛋白可被纯化至：(1)通过Lowry方法测定，按抗体重量计大于95％并且最优选按重量计大于99％；(2)通过使用转杯式序列分析仪(spinningcupsequenator)，足以获得N端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度；或(3)使用考马斯蓝或优选银染色在还原或非还原条件下通过SDS-PAGE的同质性。分离的抗体样结合蛋白包括重组细胞内的原位抗体样结合蛋白，因为抗体样结合蛋白的自然环境的至少一个组分将不存在。
本文所用术语“基本纯的”或“基本纯化的”是指是存在的主要种类的任何化合物或种类(即以摩尔浓度基础计，比组成中的任何其它各个种类丰富)。在一些实施方案中，基本纯化的级分是其中所述种类占存在的所有大分子种类的至少约50％(以摩尔浓度基础计)的组合物。在其它实施方案中，基本纯的组合物占存在于组合物中的所有大分子种类的大于约80％、85％、90％、95％或99％。在另外其它的实施方案中，该种类被纯化至基本同质性(通过常规检测方法无法在组合物中检出污染种类)，其中组合物基本由单一大分子种类组成。
本文所用术语“抗原”或“靶抗原”是指这样的分子或分子的部分，其能够被抗体或抗体样结合蛋白结合，且另外能够用于动物以产生与该抗原的表位结合的抗体。靶抗原可具有一个或多个表位。就抗体样结合蛋白识别的各个靶抗原而言，抗体样结合蛋白能够与识别靶抗原的完整抗体竞争。认为“二价”抗体样结合蛋白而非“多特异性”或“多功能”抗体样结合蛋白包含具有相同抗原特异性的抗原结合位点。
双特异性或双功能抗体通常是具有两个不同的重链/轻链对和两个不同的结合位点或表位的人工杂合抗体。双特异性抗体可通过各种方法产生，包括但不限于杂交瘤的融合或F(ab’)片段的连接。
F(ab)片段也称为Fab，其通常包括一条轻链和一条重链的VH和CH1结构域，其中F(ab)片段的VH-CH1重链部分不能与另一重链多肽形成二硫键。本文使用的F(ab)片段还可包括一条含有两个由氨基酸接头隔开的可变结构域的轻链和一条含有两个由氨基酸接头隔开的可变结构域的重链和CH1结构域。F(ab)片段还可包括CL和CH1间的二硫键。
F(ab')片段通常包含一条轻链和含有多于恒定区(CH1和CH2结构域之间)的一条重链的部分，由此链间二硫键可在两重链间形成以形成F(ab')2分子。
“双抗体”通常是两个单链可变片段(scFv)的二聚体，各片段由通过小的肽接头连接的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)组成，所述肽接头过短使得两可变区无法折叠在一起，迫使scFvs二聚化。
关于本发明的抗体样结合蛋白的短语“生物学性质”、“生物学特性”和术语“活性”在本文中可互换使用，包括但不限于表位亲和力和特异性、拮抗抗原靶(或靶向多肽)的活性的能力、抗体样结合蛋白的体内稳定性和抗体样结合蛋白的免疫原性性质。抗体样结合蛋白的其它可鉴定的生物学性质或特性包括例如交叉反应性(即一般为与抗原靶的非人同源物或与其它抗原靶或组织的交叉反应性)和保持蛋白质在哺乳动物细胞中的高表达水平的能力。可采用本领域已知的技术观察或测量上述性质或特性，所述技术包括但不限于ELISA、竞争性ELISA、表面等离振子共振分析、体外和体内中和测定法和用来自不同来源(包括人、灵长类动物或可能需要的任何其它来源)的组织切片的免疫组织化学。
本文所用术语“免疫功能性免疫球蛋白片段”是指至少含有多肽片段来源于其中的免疫球蛋白重链或轻链的CDR的多肽片段。免疫功能性免疫球蛋白片段能够与靶抗原结合。
本文所用“中和”抗体样结合蛋白是指能够阻断或实质性降低与之结合的靶抗原的效应子功能的分子。本文所用“实质性降低”意指靶抗原的效应子功能降低至少约60％、优选至少约70％、更优选至少约75％、甚至更优选至少约80％、还更优选至少约85％、最优选至少约90％。
术语“表位”包括任何决定簇，优选能够与免疫球蛋白或T细胞受体特异性结合的多肽决定簇。在某些实施方案中，表位决定簇包括例如氨基酸、糖侧链、磷酰基或磺酰基等分子的化学活性表面群聚，并且在某些实施方案中，可具有特定的三维结构特性和/或特定的电荷特性。表位是被抗体或抗体样结合蛋白结合的抗原的区域。在某些实施方案中，当抗体样结合蛋白优先识别其在蛋白质和/或大分子的复杂混合物中的靶抗原时，被称为与抗原特异性结合。在优选的实施方案中，当平衡解离常数≤10-8M，更优选当平衡解离常数≤10-9M，且最优选当解离常数≤10-10M时，抗体样结合蛋白被称为与抗原特异性结合。
可通过例如表面等离振子共振，测定抗体样结合蛋白的解离常数(Kd)。一般而言，表面等离振子共振分析采用BIAcore系统(PharmaciaBiosensor；Piscataway,NJ)，通过表面等离振子共振(SPR)，测量配体(生物传感器基质上的靶抗原)和分析物(溶液中的抗体样结合蛋白)之间的实时结合相互作用。表面等离振子分析也可通过使分析物固定(抗体样结合蛋白固定在生物传感器基质上)和呈递配体(靶抗原)来进行。本文所用术语“KD”是指特定抗体样结合蛋白和靶抗原间的相互作用的解离常数。
本文所用术语“特异性结合”是指抗体样蛋白或其抗原结合片段以至少约1x10-6M、1x10-7M、1x10-8M、1x10-9M、1x10-10M、1x10-11M、1x10-12M或更大的Kd与含有表位的抗原结合和/或以其对非特异性抗原的亲和力至少2倍大的亲和力与表位结合的能力。
本文所用术语“接头”是指插入免疫球蛋白结构域中为轻链和重链的结构域提供足够的可动性以折叠成交叉双重可变区免疫球蛋白的一个或多个氨基酸残基。非限制性实例包括甘氨酸/丝氨酸接头如GGGGS或GGGGSGGGGS(SEQIDNO:3)和甘氨酸/丙氨酸接头。在序列水平，接头分别在可变结构域间或可变结构域和恒定结构域间的过渡处插入。由于免疫球蛋白结构域的大致大小已熟知，因此可确定结构域间的过渡。结构域过渡的精确定位可通过定位不形成二级结构元件如β片层或α螺旋的肽段确定，如通过实验数据所证明或通过建模或二级结构预测技术所假设。所述接头是独立的，但在某些情况中其可具有相同的序列和/或长度。典型的氨基酸接头为本领域已知且适于本文描述的用途。
本文使用术语“标签”指代任何连接的分子或基于亲和力的序列，其通常符合读框地融合在多肽或抗体样结合蛋白的任何位置处(通常为N-末端或C-末端)。合适的标签的存在可用于改进抗体样蛋白的检测、纯化或其他特性。合适的基于亲和力的标签包括任何可特异性地与另一部分(非限制性实施例包括多聚-组氨酸、6x-组氨酸、FLAG、V5、生物素、HA、GST或MBP)结合的序列。在一些情况中，连接分子可以是发光报告分子，其可包括任何可报告多肽存在的结构域。合适的发光报告结构域包括萤光素酶、荧光蛋白或其发光变体。
本文所用术语“载体”是指用于将编码信息转移至宿主细胞中的任何分子(例如核酸、质粒或病毒)。术语“载体”包括能够转运已与其连接的另一个核酸的核酸分子。载体的一个类型是“质粒”，是指另外的DNA区段可插入其中的环状双链DNA分子。载体的另一个类型是病毒载体，其中另外的DNA区段可插入病毒基因组。某些载体能够在其所导入的宿主细胞中自主复制(例如具有细菌复制起点的细菌载体和附加型哺乳动物载体)。其它载体(例如非附加型哺乳动物载体)可在导入宿主细胞中时整合到宿主细胞的基因组中，从而与宿主基因组一起复制。另外，某些载体能够指导其与之可操作连接的基因表达。这类载体在本文称为“重组表达载体”(或简称“表达载体”)。一般而言，在重组DNA技术中应用的表达载体常常为质粒的形式。术语“质粒”和“载体”在本文可互换使用，因质粒是最常使用的载体形式。然而，本发明意在包括表达载体的其它形式，例如病毒载体(例如复制缺陷型逆转录病毒、腺病毒和腺伴随病毒)，其所起功能等同。
本文使用术语“可操作地连接”是指侧翼序列的排列，其中所述侧翼序列经配置或装配，使得进行其常规功能。因此，与编码序列可操作连接的侧翼序列可能能够实现编码序列的复制、转录和/或翻译。举例来说，当启动子能够指导编码序列转录时，所述编码序列与启动子可操作地连接。侧翼序列不必与编码序列邻接，只要它正确地发挥功能即可。因此，例如，可在启动子序列和编码序列间存在插入的不翻译但转录的序列，启动子序列可仍被视为与编码序列“可操作地连接”。
本文所用短语“重组宿主细胞”(或“宿主细胞”)是指重组表达载体已导入其中的细胞。重组宿主细胞或宿主细胞不仅意指特定的受试细胞，而且还指这类细胞的子代。由于因其突变或环境影响所致某些修饰可发生在后代中，因此尽管这样的后代实际上可能与亲代细胞不同，但这样的细胞仍包括在本文所用术语“宿主细胞”的范围内。可使用各种宿主细胞表达系统表达本发明的抗体样结合蛋白，包括细菌、酵母、杆状病毒和哺乳动物表达系统(以及噬菌体展示表达系统)。合适细菌表达载体的实例为PUC19。为了重组表达抗体样结合蛋白，将宿主细胞用一个或多个携带编码抗体样结合蛋白的多肽链的DNA片段的重组表达载体转化或转染，使得多肽链在宿主细胞中表达，并优选分泌到在其中培养宿主细胞的培养基中，可从所述培养基中回收抗体样结合蛋白。
本文所用术语“转化”指细胞遗传特性的改变，当细胞被修饰以含有新的DNA时，细胞被转化。例如，当它自其天然状态被遗传修饰时，细胞被转化。在转化后，转化的DNA可通过在物理上整合至细胞染色体中而与细胞的DNA重组，或可作为附加型元件瞬时保持而不复制，或可作为质粒独立复制。当DNA随细胞分裂而复制时，细胞被视为已稳定转化。本文所用术语“转染”是指异质或外源DNA被细胞摄取，当外源DNA被导入细胞膜内时，细胞被“转染”。多种转染技术为本领域已知。可采用这类技术将一个或多个外源DNA分子导入合适的宿主细胞中。
本文所用和应用于客体的术语“天然存在的”是指该客体可存在于大自然中并且未被人为操作的事实。例如，存在于可从天然来源分离的生物(包括病毒)中且未被人为有意修饰的多核苷酸或多肽是天然存在的。类似地，本文所用“非天然存在的”是指自然中不存在或已人为进行结构修饰或合成的客体。
如本文所用，20个常用氨基酸及其缩写按照常规用法。20个常用氨基酸的立体异构体(例如d-氨基酸)；非天然氨基酸例如α-氨基酸、α-二取代的氨基酸、N-烷基氨基酸、乳酸和其它不常用的氨基酸也可是本发明的抗体样结合蛋白多肽链的合适组分。不常用氨基酸的实例包括：4-羟脯氨酸、γ-羧谷氨酸、ε-N,N,N-三甲基赖氨酸、ε-N-乙酰赖氨酸、O-磷酸丝氨酸、N-乙酰丝氨酸、N-甲酰甲硫氨酸、3-甲基组氨酸、5-羟赖氨酸、σ-N-甲基精氨酸和其它类似氨基酸和亚氨基酸(例如4-羟脯氨酸)。在本文所用多肽表示法中，按照标准用法和惯例，左侧方向为氨基端方向，右侧方向为羧基端方向。
可根据共有的侧链性质，将天然存在的残基分类：
(1)疏水：Met、Ala、Val、Leu、Ile、Phe、Trp、Tyr、Pro；
(2)极性亲水：Arg、Asn、Asp、Gln、Glu、His、Lys、Ser、Thr；
(3)脂肪族：Ala、Gly、Ile、Leu、Val、Pro；
(4)脂肪族疏水：Ala、Ile、Leu、Val、Pro；
(5)中性亲水：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；
(6)酸性：Asp、Glu；
(7)碱性：His、Lys、Arg；
(8)影响链取向的残基：Gly、Pro；
(9)芳香族：His、Trp、Tyr、Phe；和
(10)芳香族疏水：Phe、Trp、Tyr。
保守氨基酸取代可包括这些类别之一的成员与相同类别的另一个成员交换。保守氨基酸取代可包括非天然存在的氨基酸残基，其通常通过化学肽合成而非通过生物系统合成掺入。这些包括拟肽(peptidomimetic)和氨基酸残基的其它反转或反向形式。非保守取代可包括这些类别之一的成员交换为另一类别的成员。
采用已知的技术，本领域的技术人员将能够确定本发明的抗体样结合蛋白多肽链的合适变体。举例来说，通过靶向被认为对活性不重要的区域，本领域的技术人员可鉴定可被改变但又不破坏活性的多肽链的合适区域。或者，本领域的技术人员可鉴定在类似多肽中是保守的分子的残基和部分。另外，甚至可对对于生物活性或对结构可能是重要的区域进行保守氨基酸取代而不破坏生物活性或不利地影响多肽结构。
术语“螯合剂”是杂环形式的化学化合物，其可包含与至少两个非金属原子配位的金属。硬酸阳离子螯合部分在抗体样结合蛋白上的存在帮助确保伴随诊断剂在体内的快速清除。
螯合剂与抗体或抗体样结合蛋白使用生物偶联的标准方法共价连接。抗体上包含胺的残基(例如赖氨酸或N-末端)经历与包含激活的酯的螯合剂(例如N-羟基琥珀酰亚胺酯)的酰胺键形成。包含硫的残基(例如半胱氨酸)经历与包含激活的酯或马来酰亚胺部分的螯合剂的偶联。可替换地，当抗体上激活的羧酸残基经历与分别在螯合剂上的胺或巯基基团形成酰胺或巯基酯时，生物偶联物形成。需要时可使用双功能接头如举例来说PEG-马来酰亚胺(PEG–Mal)、琥珀酰-4-(N-马来酰亚胺基)环已烷-1-羧酸酯(SMCC)或N-琥珀酰亚胺3-(2-吡啶基硫代)丙酸酯(SPDP)。
针对其金属结合特征选择螯合剂，且可酌情改变。螯合剂如NOTA(1,4,7-三氮杂环壬烷-N,N',N”-三乙酸)、DOTA(1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸)、DTPA(1,1,4,7,7-二乙烯三胺五乙酸)、TETA(对溴代乙酰氨基苯甲基四乙胺四乙酸)和Df(去铁胺B)可与多种放射性标记、放射性核素、放射性同位素、金属和放射性金属使用。当配体包括硬碱螯合功能如羧酸酯或胺基基团时，DOTA-类型的螯合剂对于螯合硬酸阳离子特别是Ⅱa族和Ⅲa族金属阳离子最有效。这种金属螯合复合物可通过将环的大小适应于感兴趣的金属调整而变得非常稳定。此外，多于一种类型的螯合剂可与可靶向的构建体偶联以结合多重金属离子，例如诊断性放射性核素和/或治疗性放射性核素。
可与抗体或工程化的抗体样结合蛋白的螯合剂结合的特别有用的诊断放射性标记、放射性核素或放射性同位素包括但不限于110In、111In、177Lu、18F、52Fe、62Cu、64Cu、67Cu、67Ga、68Ga、86Y、90Y、89Zr、94Tc、94Tc、99mTc、120I、123I、124I、125I、131I、154-158Gd、32P、11C、13N、15O、186Re、188Re、51Mn、52mMn、55Co、72As、75Br、76Br、82mRb、83Sr或其他γ、β或正电子发射体。诊断放射性标记包括25-10,000的衰变能量，更优选地25-4,000的衰变能量，且甚至更优选地20-1,000keV的衰变能量，且仍更优选地70-700keV的衰变能量。有用的正电子发射放射性核素的总衰变能量优选<2,000keV，更优选低于1,000keV，且最优选<700keV。应用γ射线检测的用作诊断剂的放射性标记包括但不限于：Cr-51、Co-57,Co-58、Fe-59、Cu-67、Ga-67、Se-75、Ru-97、Tc-99m、In-111、In-114m、I-123、I-125、I-131、Yb-169、Hg-197和T1-201。有用的发射γ射线的放射性标记的衰变能量优选为20-2000keV，更优选为60-600keV，且最优选为100-300keV。
本文所用术语“患者”包括但不限于人和动物受试者。
“病症”是可获益于使用本发明的抗体或工程化的抗体样结合蛋白治疗的任何病况。“病症”和“病况”在本文中可互换使用，包括慢性和急性病症或疾病，包括使患者易患所述病症的那些病理病况。一些方面，所述病症是癌症，如实体肿瘤癌症。一些方面，所述癌症是乳腺癌、结肠癌、卵巢癌瘤、子宫内膜癌、骨肉瘤、宫颈癌、前列腺癌、肺癌、滑膜癌瘤、胰腺癌、肾癌、淋巴系统的癌症，其中表达CA6的肉瘤或癌瘤或其他待在其中确定CA6糖表位主要表达的癌。所述癌症可以是举例来说浆液性卵巢癌瘤、子宫内膜样卵巢癌瘤、子宫颈赘生物、子宫内膜赘生物、外阴赘生物、乳腺癌瘤、胰腺癌肿瘤和尿路上皮肿瘤。
任何可通过杀伤所选细胞群体进行治疗的病症适于使用本文描述的抗体样结合蛋白，如癌症；自身免疫性疾病如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎和多发性硬化；移植排斥如肾移植排斥、肝移植排斥、肺移植排斥、心脏移植排斥和骨髓移植排斥；移植物抗宿主病；病毒感染如mV感染、HIV感染、AIDS等；和寄生物感染如贾第鞭毛虫病、阿米巴病、血吸虫病和其他如本领域的普通技术人员所确定的。
参照表达水平可以是举例来说，CA6在患者的非疾病组织中的表达水平(例如来自于与包含肿瘤的组织类型相同的组织类型)或参照标准可以举例来说由本领域接受的标准确定，如源自在出自个体群体的非疾病组织中的表达水平。
本文所用术语“治疗”或“医治”是指治疗性治疗和预防或防止性措施两者。需要治疗的受试者包括患有病症的受试者以及易患病症的受试者或其中病症待被预防的受试者。
本文所用术语“药物组合物”或“治疗组合物”指当适当给予患者时能够引起所需治疗作用的化合物或组合物。
本文所用术语“可药用载剂”或“生理学上可接受的载剂”指适于实现或增强抗体或工程化抗体样结合蛋白的递送的一种或多种制剂材料。
术语“有效的量”和“治疗上有效的量”当用于提及包含一种或多种抗体或工程化的抗体样结合蛋白的药物组合物时，是指足以产生所需治疗结果的量或剂量。更具体地，治疗上有效的量是足以抑制与待治疗病况相关的一个或多个临床上确定的病理过程达一定时间的抗体或工程化抗体样结合蛋白的量。本文使用的“治疗上有效的量”还指有效使CA6表达组织例如肿瘤组织可视化的抗体样蛋白的量。有效的量可依赖于使用的特定抗体或工程化的抗体样结合蛋白发生变化，且还依赖于多种因素和与治疗的患者相关条件以及病症的严重程度。举例来说，如果抗体或工程化的抗体样结合蛋白将在体内施用，则例如患者的年龄、体重和健康状况以及在临床前动物研究中获得的剂量反应曲线和毒性数据等因素将在所考虑的那些因素内。给定药物组合物的有效量或治疗有效量的确定完全在本领域技术人员的能力范围内。
本文使用术语"获得"或"取得"指获得物理实体或值例如数值的持有，其通过"直接获得"或"间接获得"物理实体或值来获得。"直接获得"意为实施过程(例如实施合成或分析的方法)以获得物理实体或值。"间接获得"指从另一方或来源接受物理实体或值(例如直接获得物理实体或值的第三方实验室)。直接获得物理实体包括实施其中包括物理物质例如原料的物理变化的过程。示例性的变化包括从两种或多种原料制备物理实体、将物质切断或片段化、分离或纯化物质、将两种或多种独立实体组合成为混合物、实施包括断裂或形成共价或非共价键的化学反应。直接获得值包括实施这样的过程，该过程包括在样品或另一物种中的物理改变，例如实施分析过程，其中包括物质例如样品、分析物或试剂中的物理改变(有时本文中称为"物理分析")。
间接获得的信息可以报告的形式提供，例如纸质或电子形式提供，如来自在线数据库或应用(“App”)。报告或信息可由举例来说医疗机构如医院或诊所或医疗服务提供者如医生或护士提供。
本发明的一个实施方案提供包含可药用载剂和治疗上有效的量的抗体或工程化的抗体样结合蛋白的药物组合物。
2.抗体样结合蛋白的用途
本发明的抗体或工程化的抗体样结合蛋白可用于与任何已知的试验方法如竞争性结合试验、直接和间接的三明治试验和用于检测和量化一种或多种靶抗原的免疫沉淀试验。所述抗体或工程化的抗体样结合蛋白将以适于采用的试验方法的亲和力与一种或多种靶抗原结合。
对于诊断应用，在一些实施方案中，工程化的抗体样结合蛋白可以可检测的部分标记。可检测的部分可以是能够直接或间接产生可检测的信号的任何一种。举例来说，所述可检测的部分可以是放射性标记、放射性同位素、放射性核素、成像剂、治疗剂或诊断剂，如3H、14C、32P、35S、125I、99Tc、111In、18F、11C、68Ga、64Cu、89Zr、124I或67Ga；荧光或化学发光化合物，如异硫氰酸荧光素、若丹明、萤光素或酶如碱性磷酸酶、β半乳糖苷酶或辣根过氧化物酶。
合适的报告部分可通过特定的成像技术检测(例如用于PET成像的18F/11C/68Ga/64Cu/89Zr/124I放射性标记的报告分子，用于SPECT成像的99mTc/111In标记的报告分子，用于光学成像的荧光染料标记的报告分子或用于MRI的顺磁性材料标记的报告分子)。对抗体或抗体样结合蛋白的生物半衰期和放射性标记的物理半衰期间合适的匹配进行了推荐(参见表1)。
表1.放射性标记的实例及其半衰期
放射性标记 半衰期
68Ga 68min
18F 109min
64Cu 12.7hr
89Zr 78.4hr
124I 100.2hr
成像伴随诊断性探针或抗体样结合蛋白的开发实质上需要与药物开发相似的过程(例如，起始于靶探针、辐射剂量、优良实验室规范毒性研究、优良制造规范生产、临床前评估、目标探针的临床前验证和临床评估)。额外需要评估的参数是：成像相对于示踪物施用的最佳时机、与离体分析的相关性、示踪物生物分布和靶特异性(用放射性标记非相关片段测试)。一旦完全建立，可将分子成像探针用作用于特定药物或作用剂的分子成像伴随诊断剂。
本发明的工程化的抗体样结合蛋白还可用于体内成像。可将用可检测的部分标记的抗体样结合蛋白施用至动物，优选地施用入血液中，且对宿主中的标记抗体的存在和定位进行试验。抗体样结合蛋白可用任何在动物中可检测的任何部分标记，无论通过核磁共振、正电子发射断层扫描或其他本领域已知的检测方式。
体内成像技术可用于成像组织如肿瘤组织以评估所述组织中CA6糖表位的表达水平。在组织中测定CA6的表达水平是十分有用的，举例来说，可判断患者如癌症患者对于用靶向CA6糖表位的治疗是否为好的候选者。举例来说，所述抗体样结合蛋白对于huDM6-DM4细胞毒性剂可用作伴随诊断剂。
一个实施方案中，针对用CA6靶向分子如huDM6-DM4的治疗对患者进行评估。举例来说，通过获得在疾病组织中如肿瘤组织(例如组织活检)中关于CA6的表达信息评估患者，如果CA6的表达水平测定大于参照表达水平的10％(例如大于或等于参照水平的10％、20％、30％、40％或更多)，则判断该患者是使用CA6-靶向分子的治疗的好的候选者。预测对于用CA6-靶向分子治疗是好的候选者的患者将对用所述分子的治疗具有积极响应。不具有合适的CA6表达水平的患者，例如与参照标准的CA6表达相比少于10％，则判断该患者并非是使用CA6-靶向分子治疗的好的候选者。
参照表达水平可以是举例来说，CA6在患者的非疾病组织中的表达水平(例如与来自于包含肿瘤的组织类型相同的组织类型)或参照标准可以举例来说由本领域接受的标准确定，如源自出自个体群体的非疾病组织的表达水平。
在一个实施方案中，受试者的组织中CA6的表达水平是间接获得的，如来自服务提供商如从医疗机构如医院或门诊或医生办公室，或来自专业医护人员如医生或护士，或来自保险提供商，或来自数据库。另一实施方案中，直接测定CA6的表达水平，如将具有本发明特征的抗体样结合蛋白施用至受试者，并通过生物成像技术测定CA6的表达水平。
判断为使用CA6-靶向分子治疗的好的候选者的患者可任选地进一步施用CA6靶向分子。在一些实施方案中，施用CA6靶向分子后，将对用CA6靶向分子治疗的患者以一定时间间隔进行监测(例如每周、每两周、每月、每两个月)以测定CA6的表达水平是否发生变化(例如减少)。如果一定时间后或患者表现出副作用后，若疾病组织中CA6表达水平保持不变，则可作出停止或持续用CA6靶向分子治疗的决定。
在一个实施方案中，在用CA6靶向分子如huDM6-DM4治疗的过程中对患者进行监测。对患者的监测如下进行，举例来说通过在施用CA6靶向分子或用CA6靶向分子如huDM6-DM4治疗后，获得疾病组织如肿瘤组织中关于CA6的表达水平的信息，并且如果CA6的表达水平被测定大于参照表达水平的10％(例如大于或等于参照水平的10％、20％、30％、40％或更多)，则判断患者是使用该CA6-靶向分子持续治疗的好的候选者。如果在用CA6靶向分子如huDM6-DM4治疗的过程中测定出CA6的表达水平已减少，则判断该患者对于用所述分子的治疗已响应且用huDS6-DM4的治疗应该继续。不具有合适的CA6表达水平的患者例如与参照标准的CA6表达相比少于10％或具有增加的CA6表达水平的患者判断为不是使用CA6靶向分子持续治疗的好的候选者。
如本文公开的本发明还涉及试剂盒，其包含抗体样结合蛋白和其他用于在生物样品中检测靶抗原的试剂。这些试剂可包括可检测的标记、阻断血清、阳性和阴性对照样品和检测试剂。
4.工程化的抗体样结合蛋白组合物及其施用
包含工程化的抗体样结合蛋白的组合物在本发明的保护范围之内。这种诊断、治疗或药物组合物可包含诊断或治疗上有效的量的抗体样结合蛋白或抗体样结合蛋白-药物偶联物，并与针对与施用模式的适合性进行了选择的药物或生理上可接受的配制剂混合。
可接受的配制材料优选在采用的剂量和浓度上对于受体无毒性。
诊断或药物组合物可包含用于修饰、维持或保持例如组合物的pH、渗透压、粘度、透明度、颜色、等渗性、气味、无菌、稳定性、溶出或释放速率、吸附或渗透的配制材料。合适的配制材料包括但不限于氨基酸(如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸)、抗微生物剂、抗氧化剂(如抗坏血酸、亚硫酸钠或氢钠-亚硫酸盐)、缓冲剂(如硼酸盐、碳酸氢盐、Tris-盐酸、柠檬酸盐、磷酸盐或其它有机酸)、填充剂(如甘露醇或甘氨酸)、螯合剂(如乙二胺四乙酸(EDTA))、络合剂(如咖啡因、聚乙烯吡咯烷酮、β-环糊精或羟基丙基-β-环糊精)、填料、单糖、二糖和其它碳水化合物(如葡萄糖、甘露糖或糊精)、蛋白(例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白)、着色剂、调味剂和稀释剂、乳化剂、亲水性聚合物(如聚乙烯吡咯烷酮)、低分子量多肽、成盐抗衡离子(例如钠)、防腐剂(如苯扎氯铵、苯甲酸、水杨酸、硫柳汞、苯乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、氯己定、山梨酸或过氧化氢)、溶剂(如甘油、丙二醇或聚乙二醇)、糖醇(如甘露糖醇或山梨糖醇)、悬浮剂、表面活性剂或润湿剂(如普朗尼克；PEG；山梨糖醇酯；聚山梨醇酯如聚山梨酸酯20或聚山梨酯80；TRITON；氨丁三醇；卵磷脂；胆固醇或tyloxapal)、稳定性增强剂(例如蔗糖或山梨糖醇)、张力增强剂(例如碱金属卤化物-优选氯化钠或钾-或甘露醇山梨醇)、递送媒介、稀释剂、赋形剂和/或药物佐剂(参见例如Remington'sPharmaceuticalSciences(18thEd.,A.R.Gennaro,ed.,MackPublishingCompany1990)及其随后版本，其在本文出于任何目的通过提述并入)。
最佳的诊断或药物组合物将由本领域的技术人员判断，其依赖于举例来说施用的目标路径、递送的形式和预期的剂量。这种组合物可影响抗体样结合蛋白的生理状态、稳定性和体内的释放速率和体内的清除速率。
诊断或药物组合物中首选的媒介或载剂性质上可以是水性或非水性。举例来说，对于注射合适的媒介或载剂可以是水、生理盐水溶液或人工脑脊髓液、可能补充在用于肠胃外施用的组合物中常见的其他材料。中性缓冲盐水或与血清白蛋白混合的盐水是进一步示例性的媒介。其他示例性的药物组合物包括pH约7.0-8.5的Tris缓冲液或pH约4.0-5.5的醋酸缓冲液，其可进一步包含山梨糖醇或合适的替代品。本发明的一个实施方案中，工程化的抗体样结合蛋白组合物可通过混合所选的具有预期纯度的组合物与任选地冻干饼或水溶液形式的配制剂来制备用于保存。
可选择本发明的诊断或药物组合物用于肠胃外递送。可替换地，可选择组合物用于吸入或用于通过消化道的递送如口服。这种可药用的组合物的制备为本领域已知。
配制组分以对于施用位点可接受的浓度存在。举例来说，将缓冲液用于维持所述组合物在生理pH或在稍微更低的pH，通常为约5至约8的范围。
当考虑肠胃外给药时，用于本发明的诊断或治疗组合物可以是在可药用的媒介中包含预期的抗体样结合蛋白的无热源、肠胃外可接受、水性溶液形式。用于肠胃外注射的特别合适的媒介是无菌蒸馏水，其中抗体样结合蛋白以无菌、等渗溶液配制，合适保存。而另一种制备可包括将预期分子与作用剂如可注射微球体、生物可侵蚀的颗粒、聚合化合物(例如聚乳酸或聚乙醇酸)、珠或脂质体一起配制，所述作用剂提供用以产品的控制或持续释放，所述产品随后经由贮存注射递送。还可使用透明质酸，且其可具有在循环过程中促进持续时间的效果。其他合适的用于引进预期分子的方式包括可植入药物递送装置。
在一个实施方案中，诊断或药物组合物可配制用于吸入。举例来说，抗体或工程化的抗体样结合蛋白可配制为干粉用于吸入。抗体样结合蛋白吸入溶液可与推进物一起配制用于气溶胶递送。而在另一实施方案中，可将溶液雾化。
还可预期一些配制物可口服施用。本发明的一个实施方案中，以这种方式施用的抗体样结合蛋白可与或不与习惯用于固体剂型如片剂和胶囊复合的载剂配制。举例来说，可设计胶囊以在胃肠道的位点处当生物利用度最大化且全身前降解(pre-systemicdegradation)最小化时释放配制物的活性成分。可包括额外的作用剂以促进抗体样结合蛋白的吸收。还可采用稀释剂、调味剂、低熔点蜡、植物油、润滑剂、悬浮剂、片剂崩解剂和粘合剂。
其他诊断或药物组合物可包括有效的量的与适于制造片剂的非毒性赋形剂混合的抗体样结合蛋白。通过在无菌水或其他合适的媒介中溶解所述片剂，可以单位剂型配制溶液。合适的赋形剂包括但不限于惰性稀释剂如碳酸钙、碳酸钠或碳酸氢钠、乳糖或磷酸钙；或粘合剂如淀粉、明胶或阿拉伯胶；或润滑剂如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。
本发明额外的诊断或药物组合物将对本领域的技术人员显而易见，包括以持续或受控递送配制物形式的含有抗体样结合蛋白的配制物。用于配制多种其他持续或受控递送方式的技术如脂质体载剂、生物可侵蚀的(bio-erodible)微粒或多孔珠和贮存注射剂也为本领域已知。持续释放的配制物的实例包括成型制品形式的半透性聚合物基质例如薄膜、微胶囊。持续的释放基质包括聚酯、水凝胶、聚交酯、L-谷氨酸和γ-乙基-L-谷氨酸、聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯)、乙烯醋酸乙烯酯或聚-D(-)-3-羟基丁酸。持续释放的组合物还可包括脂质体，其可通过数种本领域已知方法中的任一种制备。
本发明用于体内施用的诊断或药物组合物通常必须为无菌的。这可由通过无菌过滤膜的过滤实现。当冻干组合物时，使用这种方法的除菌可在冻干和重构之前或之后实施。用于肠胃外施用的组合物可以冻干的形式或在溶液中保存。此外，肠胃外组合物通常可置于具有无菌存取口的容器中，举例来说静脉内溶液袋或具有由皮下注射针刺穿的塞子小瓶中。
一旦配制了所述诊断或药物组合物，其可作为溶液、悬液、凝胶、乳液、固体，或作为脱水或冻干粉保存在无菌小瓶中。这种配制剂可以随时可用的形式或需要在施用前重构的形式(例如冻干)保存。
本发明还涵盖用于产生单一剂量施用单位的试剂盒。所述试剂盒可各包含具有干燥蛋白的第一容器和具有水性配制物的第二容器。本发明的保护范围还包括含有单一或多重室的预灌装注射器的试剂盒(例如液体注射器和LYO注射器(lyosyringes))。
所述组合物还可经由将吸收或包被预期分子的膜、海绵或其它适当的材料植入来进行局部施用。当使用植入装置时，所述装置可植入任何合适的组织或器官，且预期分子的递送可经由扩散、定时释放推注或连续施用。
实施例
下列实施例是对本发明特定实施方案及其变化使用的阐述。该阐述仅出于示例目的而不应理解为是以任何方式对本发明的保护范围的限制。
实施例1:人源化DS6单克隆抗体和DS6-DM4的放射性标记和体外表征
临床上有用的分子成像剂在施用后的合理时间长度内产生高对比图像，证明肿瘤穿透，具有较快的清除动力学且显示良好的肿瘤比血液比率。在生物成像中使用完整的天然抗体需要注意的是固有的较慢的肿瘤吸收动力学和血液清除率；其还倾向于具有高背景并需要长时间(数小时至数天)以获得肿瘤的清晰图像。
之前已显示放射性标记的示踪物与生物成像的组合可从临床前肿瘤模型翻译出临床设置(Williams等,2008,CancerBiotherandRadiopharm23(6):797；Liu等,(2009)MolImagingBiol12:530)。我们进一步证明了放射性标记的DS6抗体和DS6-DM4在小鼠中有效地靶向WISH异种移植肿瘤。基于这些结果，开发了三种工程化的抗体样结合蛋白用于优化药代动力学作为基于成像的伴随诊断剂。
实施例2:DS6工程化的B-Fab的表达
编码相应的构建体的重链和轻链的表达质粒在大肠杆菌DH5α细胞中繁殖。用于转染的质粒从大肠杆菌使用QiagenEndoFreePlasmidMega试剂盒制备(B-Fab抗体样结合蛋白的多肽和DNA序列于表2中)。
DS6抗体样结合蛋白B-Fab由FreeStyleF17培养基(Invitrogen)中HEK293细胞的瞬时转染产生。转染7天后，收获上清，并进行离心和0.2μm过滤以去除颗粒。纯化通过在KappaSelect(GEHealthcare)上的捕获实施。结合KappaSelect柱后，用PBS或HEPES缓冲液(50mMHEPES，150mMNaCl，pH7.2，FP12016)洗涤该柱，随后用0.1M甘氨酸(pH2.5)洗脱并用1MTris/HClpH9中和。纯化的精制步骤由使用Superdex200(GEHealthcare)用PBS或HEPES缓冲液(50mMHEPES，150mMNaCl，pH7.2，FP12016)的尺寸排阻色谱组成。精制步骤后，纯化产物通过超滤浓缩，且最终使用0.22μm的膜无菌过滤DS6B-Fab。
蛋白浓缩通过测量280nm处的吸收确定。每一批次通过SDS-PAGE在还原和非还原条件下分析以确定每个单体和每个亚基的纯度和分子量。纯化的DS6B-Fab的质量通过下文描述的分析方法检查。
表2.基于DS6的B-Fab的多肽和DNA序列
实施例3:基于DS6抗体的工程化的抗体样结合蛋白的开发
为开发基于成像的伴随诊断性抗体样结合蛋白用于huDS6-DM4，生成了三种基于来自人源化DS6单克隆抗体的CA6结合序列的工程化的抗体样结合蛋白(B-Fab，参见图1)。纯化了三种工程化的抗体样结合蛋白的每一种并如下文所述测试；结果示于表3中。理想的特性包括通过HPLC或SDS-PAGE测定的>95％的纯度，～10mg/mL的浓度，稳定的肽，与DS6抗体相似的结合，且可确定多聚组氨酸(6x-His)标签的存在是否影响PET示踪物。额外的选择准则包括：>5％ID/g的肿瘤信号；3:1的肿瘤比肌肉比率；有效的肾清除率；和未阻断和阻断吸收间统计学上的显著差异(p<0.05)(参见表4对于放射性标记螯合的B-Fab的质量准则的总结)。
表3.DS6工程化的抗体样结合蛋白的总结
表4.对于放射性标记螯合的抗体样结合蛋白的质量准则的总结
已确定了含有(G4S)2接头且具有或不具有6x-His标签的B-Fab抗体保持与对照DS6单克隆抗体(CA6结合序列基于该抗体)相似的结合效率。每种纯化的抗体样结合蛋白的质量通过下列分析方法检查：
a)分析型尺寸排阻色谱(SEC)
分析型SEC使用用TSKgelG3000SWXL柱(7.8mmx30cm)和TSKgelSWXL防护柱(TosohBioscience)装配的探索者(explorer)10(GEHealthcare)实施。分析以1mL/min使用250mMNaCl，100mM磷酸Na，pH6.7进行并在280nm处检测。将三十微升的蛋白样品(0.5-1mg/mL)应用至所述柱上。对于分子尺寸的估算，所述柱使用凝胶过滤标准混合物(MWGF-1000，SIGMAAldrich)校准。数据评估使用UNICORN软件v5.11评估。
b)通过LC-MS的完整质量分析
将每种样品稀释至0.01mg/mL的浓度且随后通过添加DTT(最终10mM)还原。分离前，将所述样品捕获20分钟并在用15％EluentA(H2O/0.05％TFA)至50％EluentB(乙腈/0.05％TFA)的梯度洗脱前在单片式捕获柱上用2％乙腈/0.1％TFA(v/v)以20μL/min除盐。
每种样品在37℃单片柱(PSDVB；100μmI.D.x5cm)上以纳流(300nL/min)单独操作。每种样品的引进使用来自新实体(objective)的具有外直径为365μm、内直径为75μm且末端直径为15μm的加鞘气(sheathgas)的电喷射针实施。在QStarXL上获得后，在对应时间范围集合谱并使用从AppliedBiosystems/MDSSciex与BioAnalyst一并交付的蛋白重建工具去卷积。
c)通过使用LC-MS的肽质量指纹分析进行的蛋白鉴定
凿出感兴趣的带，将其脲基甲基化并用内切蛋白酶胰蛋白酶消化。随后使用OrbiTrapXL质谱仪通过LC-MS/MS分析样品。获得的谱与给定构建体已添加其中的使用者定义的数据库Swiss-ProtPP以及Swiss-ProtPP全物种数据库比较。
三种工程化的基于DS6的抗体样结合蛋白的每一种与硬酸阳离子螯合剂DOTA(1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸)偶联、用64Cu放射性标记并用于临床前肿瘤模型中的体内PET生物成像实验和体外细胞结合试验，进而表征三种工程化的基于DS6的抗体样结合蛋白的每一种。对于每种工程化抗体的来自活性和实验的数据的总结可见于表5和图2-4。
表5.DS6工程化的抗体样结合蛋白活性的总结
WISH是对于CA6抗原阳性的细胞系。
A2780是对于CA6抗原阴性的细胞系。
所有上述抗体样结合蛋白及其相应的DOTA偶联物(1.5-2.5DOTA/片段)具有与CA6阳性细胞(WISH细胞系)的高亲和力(Kd＝4-20nM)，表明DOTA衍生并未对抗原的亲和力产生不利影响。所述片段对CA6阴性细胞(A2780细胞系)具有较低的亲和力。64Cu标记的作用剂通过人血清稳定性研究和带有WISH或A2780皮下肿瘤的裸鼠中的体内成像和24小时生物分布研究评估。64Cu-DOTA-B-Fab以高收率合成(RCY-80％，SA-55GBq/微摩尔，>99％纯度)且在24小时的血清稳定性测试(94±5％,n＝3)中给出良好结果。带有异种移植肿瘤的小鼠中的体内生物分布实验(参见表6)显示相对高的WISH肿瘤吸收(7.6±0.87％ID/g，n＝4，20-206mg)和低的A2780肿瘤吸收(5.1±0.92％ID/g，n＝3，50-270mg)，伴随高肿瘤/肌肉(8.7:1)、肿瘤/血液(3.6:1)和阳性/阴性肿瘤(1.8，p<0.05,n＝7)比率。肿瘤吸收仅通过肾(62±4％ID/g)和肝(10±0.75％ID/g)穿越(surpass)。
表6.带有异种移植肿瘤的小鼠中生物分布研究的总结
进一步在带有WISH的肿瘤动物中对于特异性经由体内阻断研究评估64Cu-DOTA-B-Fab。阻断在施用放射性标记的作用剂前分别通过在2.5或25小时施用B-Fab(2mg，n＝5)或DS6(1mg，n＝4)实施。B-Fab阻断在WISH肿瘤吸收中承受了23％(p<0.05，n＝8)的降低而DS6阻断实现了26％(p<0.05，n＝7)的降低。在该研究中并未阻断对照肿瘤(n＝3)。这些临床前研究表明64Cu-DOTA-B-Fab在患者中对于huDS6-DM4是稳定的伴随诊断剂。
实施例4:开发的工程化抗体在临床前肿瘤模型中的体内PET研究
a)B-Fab(G4S)2接头和C-末端6x-His标签
B-Fab1151是基于DS6的工程化抗体样结合蛋白，其包含均作为GGGGSGGGGS((G4S)2)(SEQIDNO:3)的L1和L2接头两者且包含表达的C-末端6x-His标签。所述蛋白通过IMAC和SEC和体外结合溶液纯化并在PBS中以1.8mg/ml制备，且结合亲和力在WISHCA6+细胞系中使用流式细胞术表征(图2C和图2D)。
b)B-Fab(G4S)2接头
B-Fab1153是基于DS6的工程化的抗体样结合蛋白，其包含均作为(G4S)2的L1和L2接头两者，且不包含C-末端6x-His标签。由于该蛋白缺乏His标签，因此所述蛋白通过IMAC、Kappa-选择和SEC纯化。体外结合溶液在PBS中以1.6mg/ml制备且结合亲和力在WISHCA6+细胞系中使用流式细胞术表征(图3C和图3D)。
c)B-FabG4S接头和C-末端6x-His标签
B-Fab1152是基于DS6的工程化的抗体样结合蛋白，其包含均作为单拷贝的G4S的L1和L2接头两者，且包含C-末端6x-His标签。所述蛋白通过IMAC和SEC纯化，且体外结合溶液在PBS中以1.8mg/ml制备且结合亲和力在WISHCA6+细胞系中使用流式细胞术表征(图4C和图4D)。
实施例5:具有或不具有DOTA的DS6的体外结合结果
为表明DOTA偶联并未改变DS6活性，对DS6抗体样结合蛋白和DOTA-DS6偶联的抗体的结合在体外在CA6阳性WISH细胞系和A2780CA6阴性细胞系上进行了测试。荧光激活细胞分选实验确定了DOTA偶联并未改变CA6阳性WISH细胞中DS6的结合(参见图5)。
实施例6:64Cu-DOTA-DS6B-Fab抗体样结合蛋白的放射性标记和稳定性
在带有CA6阳性(WISH)或CA6阴性(A2780)皮下肿瘤的裸鼠中使用用铜-64标记的DOTA偶联的DS6B-Fab实施了人血清稳定性研究和24小时生物分布研究。放射化学研究显示64Cu-DOTA-DS6B-Fab工程化的抗体样结合蛋白具有～30％的放射化学收率、>95％的放射化学纯度和1.9Ci/微摩尔的比活性(参见图6A)。64Cu-DOTA-DS6B-Fab抗体样结合蛋白的血清稳定性实验于37℃在人血清中实施24小时，在0小时时间点显示97.2％的活性，并在24小时时间点显示96.3％的活性，证明24小时后活性上无显著损失(参见图6B)。
实施例7:具有不同支架的抗体样结合蛋白间的比较
将上文描述的B-Fab抗体样结合蛋白的特征与特异性结合CA6的那些双抗体进行了比较，进而评估哪一种支架最适合作为成像伴随诊断剂使用。形成同二聚体的抗CA6双抗体的氨基酸序列示于SEQIDNO:12(表7)。在一些实验中，同二聚双抗体进一步包含选自下组的C-末端标签：GGC标签、SEQIDNO:13的标签和SEQIDNO:14的标签。
如图7所示，双抗体具有与B-Fab抗体样结合蛋白不同的支架。举例来说，其并不包含任何CL或任何CH1结构域。
表7.特异性地结合CA6的双抗体的多肽序列
结果示于下表8A至8C中。这些结果通过比较与SEQIDNO:14的标签融合的SEQIDNO:12的双抗体以及B-Fab1153(其包含(G4S)2接头但无His-标签)获得。
表8A.B-Fab和双抗体间的比较
表8B.B-Fab和双抗体间的比较
表8C.B-Fab和双抗体间的比较
从这些结果可以的出结论：B-Fab对于用作伴随诊断剂优于双抗体。举例来说，所述双抗体在血浆稳定性试验和温度应激试验中表现出了降解，而B-Fab在两种试验中都稳定。
由于本发明已在多个实施方案中进行了描述，可以理解的是对于本领域的技术人员，变化和修饰将发生。因此，附加的权利要求意在覆盖全部的这些等同变化，其在本发明要求保护的范围之内。此外，本文使用的部分标题仅用于整理目的不应理解为是对描述主题的限制。
除非清除表明相反，则本文描述的每一个实施方案可与任何其他的一个或数个实施方案组合。具体地，除非清除表明相反，任何表示为优选或有利的特征或实施方案可与任何其他一个或多个表示为优选或有利的特征或一个或多个表示为优选或有利的实施方案组合。
本申请中引用的全部参考文献在本文通过提述并入。

Claims (78)

1.一种抗体样结合蛋白，其特异性地结合CA6，其中所述抗体样结合蛋白包含两种多肽，所述多肽具有由下列式[I]和[II]代表的结构：
VL1-L1-VL2-CL[I]
VH1-L2-VH2-CH1[II]
其中：
VL1是基于DS6的免疫球蛋白轻链可变结构域；
VL2是基于DS6的免疫球蛋白轻链可变结构域；
VH1是基于DS6的免疫球蛋白重链可变结构域；
VH2是基于DS6的免疫球蛋白重链可变结构域；
CL是免疫球蛋白轻链恒定结构域，如人IGKC免疫球蛋白轻链恒定结构域；
CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定结构域，如人免疫球蛋白CH1重链恒定结构域；
L1和L2是氨基酸接头；
其中式I的多肽和式II的多肽形成二价单特异性串联免疫球蛋白抗体样结合蛋白；且
其中所述抗体样蛋白进一步包含螯合剂。
2.权利要求1的抗体样结合蛋白，其中L1是GGGGS或GGGGSGGGGS(SEQIDNO:3)。
3.权利要求1或2的抗体样结合蛋白，其中L2是GGGGS或GGGGSGGGGS(SEQIDNO:3)。
4.权利要求1至3任一项的抗体样结合蛋白，其中L1和L2相同。
5.权利要求1至4任一项的抗体样结合蛋白，其中VL1和VL2相同。
6.权利要求1至5任一项的抗体样结合蛋白，其中VH1和VH2相同。
7.权利要求1至6任一项的抗体样结合蛋白，其中式[I]的多肽包含SEQIDNO:1。
8.权利要求1至7任一项的抗体样结合蛋白，其中式[II]的多肽包含SEQIDNO:7。
9.权利要求1至8任一项的抗体样结合蛋白，其中所述螯合剂是硬酸阳离子螯合剂。
10.权利要求9的抗体样结合蛋白，其中所述硬酸阳离子螯合剂是DOTA(1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸)、NOTA(1,4,7-三氮杂环壬烷-N,N',N”-三乙酸)、DTPA(1,1,4,7,7-二乙烯三胺五乙酸)或TETA(对溴代乙酰氨基苯甲基四乙胺四乙酸)。
11.权利要求10的抗体样结合蛋白，其中所述硬酸阳离子螯合剂是DOTA。
12.权利要求9至11任一项的抗体样蛋白，其中所述硬酸螯合剂是共价附接的。
13.权利要求12的抗体样蛋白，其中共价附接1-5个拷贝的硬酸螯合剂。
14.权利要求1至13任一项的抗体样结合蛋白，其进一步包含标签。
15.权利要求14的抗体样结合蛋白，其中所述标签是6x-组氨酸、生物素、MYC、V5、FLAG、MBP或谷胱甘肽-S-转移酶或HA。
16.权利要求15的抗体样结合蛋白，其中所述标签是6x-组氨酸标签。
17.权利要求1至16任一项的抗体样结合蛋白，其进一步包含至少一种放射性标记、成像剂、治疗剂或诊断剂。
18.权利要求17的抗体样结合蛋白，其中所述放射性标记、成像剂、治疗剂或诊断剂是110In、111In、177Lu、18F、52Fe、62Cu、64Cu、67Cu、67Ga、68Ga、86Y、90Y、89Zr、94Tc、94Tc、99mTc、120I、123I、124I、125I、131I、154-158Gd、32P、11C、13N、15O、186Re、188Re、51Mn、52mMn、55Co、72As、75Br、76Br、82mRb或83Sr。
19.权利要求18的抗体样结合蛋白，其中所述放射性标记、成像剂、治疗剂或诊断剂是64Cu。
20.权利要求17的抗体样结合蛋白，其中所述放射性标记、成像剂、治疗剂或诊断剂包含一种或多种用于磁共振成像(MRI)；正电子发射断层扫描(PET)；单光子发射断层扫描(SPECT)；光学成像，计算机断层扫描(CT)；超声、X-射线或光声成像的作用剂。
21.一种药物组合物，其包含可药用载剂和有效成像CA6表达组织的量的权利要求1至20任一项的抗体样结合蛋白。
22.一种用于制备特异性地结合CA6的抗体样结合蛋白的方法，其中所述抗体样结合蛋白进一步包含螯合剂，所述方法包括：
(a)在细胞中表达一种或多种编码多肽的核酸分子，所述多肽具有由下列式[I]和[II]代表的结构：
VL1-L1-VL2-CL[I]
VH1-L2-VH2-CH1[II]
其中：
VL1是基于DS6的免疫球蛋白轻链可变结构域；
VL2是基于DS6的免疫球蛋白轻链可变结构域；
VH1是基于DS6的免疫球蛋白重链可变结构域；
VH2是基于DS6的免疫球蛋白重链可变结构域；
CL是免疫球蛋白轻链恒定结构域，如人IGKC免疫球蛋白轻链恒定结构域；
CH1是免疫球蛋白CH1重链恒定结构域，如人免疫球蛋白CH1重链恒定结构域；
L1和L2是氨基酸接头；且
其中式I的多肽和式II的多肽形成二价单特异性串联免疫球蛋白抗体样结合蛋白；且
(b)将所述抗体样结合蛋白与所述螯合剂附接。
23.权利要求22的方法，其中L1是GGGGS或GGGGSGGGGS(SEQIDNO:3)。
24.权利要求22或23的方法，其中L2是GGGGS或GGGGSGGGGS(SEQIDNO:3)。
25.权利要求22至24任一项的方法，其中L1和L2是相同的。
26.权利要求22至25任一项的方法，其中VL1和VL2是相同的。
27.权利要求22至26任一项的方法，其中VH1和VH2是相同的。
28.权利要求22至27任一项的方法，其中所述式[I]的多肽包含SEQIDNO:1。
29.权利要求22至28任一项的方法，其中式[II]的多肽包含SEQIDNO:7。
30.权利要求22至29任一项的方法，其中所述螯合剂是硬酸阳离子螯合剂。
31.权利要求30的方法，其中所述硬酸阳离子螯合剂是DOTA(1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸)、NOTA(1,4,7-三氮杂环壬烷-N,N',N”-三乙酸)、DTPA(1,1,4,7,7-二乙烯三胺五乙酸)或TETA(对溴代乙酰氨基苯甲基四乙胺四乙酸)。
32.权利要求31的方法，其中所述硬酸阳离子螯合剂是DOTA。
33.权利要求22至32任一项的方法，其中所述硬酸螯合剂是共价附接的。
34.权利要求22至33任一项的方法，其中共价附接1-5个拷贝的硬酸螯合剂。
35.一种在患者中用于治疗表达CA6的疾病组织的方法，其包括：
(a)向所述患者施用特异性结合CA6且进一步包含螯合剂和成像剂的抗体样结合蛋白；
(b)在患者中通过正电子发射断层扫描(PET)成像识别表达CA6的疾病组织；且
(c)如果CA6的表达在疾病组织中大于或等于参照标准中CA6表达的10％，则确定所述患者是使用huDS6-DM4的治疗的候选者。
36.权利要求35的方法，如果患者被确定为使用huDS6-DM4的治疗的候选者，则所述方法进一步包括施用huDS6-DM4。
37.权利要求35或36的方法，其进一步包括使用步骤(a)的抗体样结合蛋白监测受试者对huDS6-DM4的响应。
38.权利要求35至37任一项的方法，其中所述抗体样结合蛋白是权利要求1至20任一项的抗体样结合蛋白。
39.一种在患者中治疗CA6阳性癌症的方法，其包括步骤：
(a)获得关于患者中CA6表达水平的信息；且
(b)如果患者中CA6的表达水平大于或等于参照标准中CA6表达的10％，则向所述患者施用huDS6-DM4。
40.权利要求39的方法，其中患者中关于CA6表达水平的信息通过施用特异性地结合CA6并包含螯合剂和成像剂的抗体样蛋白，并使用生物成像技术检测所述成像剂在患者中的定位获得。
41.权利要求40的方法，其中所述抗体样结合蛋白是权利要求1至20任一项的抗体样结合蛋白。
42.权利要求39至41任一项的方法，其中所述CA6阳性癌症是浆液性卵巢癌瘤、子宫内膜样卵巢癌瘤、子宫颈赘生物、子宫内膜赘生物、外阴赘生物、乳腺癌瘤、胰腺肿瘤和尿路上皮肿瘤。
43.权利要求39至42任一项的方法，其中所述患者中关于CA6的表达水平的信息通过磁共振成像(MRI)；正电子发射断层扫描(PET)；单光子发射断层扫描(SPECT)；光学成像，计算机断层扫描(CT)；超声、X-射线或光声成像获得。
44.权利要求40至42任一项的方法，其中所述螯合剂是硬酸阳离子螯合剂。
45.权利要求44的方法，其中所述硬酸阳离子螯合剂是DOTA(1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸)、NOTA(1,4,7-三氮杂环壬烷-N,N',N”-三乙酸)、DTPA(1,1,4,7,7-二乙烯三胺五乙酸)或TETA(对溴代乙酰氨基苯甲基四乙胺四乙酸)。
46.权利要求45的方法，其中所述硬酸阳离子螯合剂是DOTA。
47.权利要求40至46任一项的方法，其中所述抗体样结合蛋白进一步包含标签。
48.权利要求47的方法，其中所述标签是6x-组氨酸标签。
49.权利要求40至48任一项的方法，其中所述抗体样结合蛋白进一步包含至少一种放射性标记、成像剂、治疗剂或诊断剂。
50.权利要求49的方法，其中所述放射性标记、成像剂、治疗剂或诊断剂是110In、111In、177Lu、18F、52Fe、62Cu、64Cu、67Cu、67Ga、68Ga、86Y、90Y、89Zr、94Tc、94Tc、99mTc、120I、123I、124I、125I、131I、154-158Gd、32P、11C、13N、15O、186Re、188Re、51Mn、52mMn、55Co、72As、75Br、76Br、82mRb或83Sr。
51.权利要求50的方法，其中所述放射性标记、成像剂、治疗剂或诊断剂是64Cu。
52.权利要求49至51任一项的方法，其中所述放射性标记、成像剂、治疗剂或诊断剂包含一种或多种用于磁共振成像(MRI)；正电子发射断层扫描(PET)；单光子发射断层扫描(SPECT)；光学成像、计算机断层扫描(CT)；超声、X-射线或光声成像的作用剂。
53.一种判断癌症患者是否为使用huDS6-DM4的治疗的候选者的方法，其包括步骤：
(a)获得关于患者中CA6表达水平的信息；且
(b)如果患者中CA6的表达水平大于或等于参照标准中CA6表达的10％，则确定所述患者是使用huDS6-DM4的治疗的候选者。
54.权利要求53的方法，其中所述患者中关于CA6表达水平的信息通过施用特异性结合CA6并包含螯合剂和成像剂的抗体样蛋白，和在患者中使用生物成像技术检测所述成像剂的定位获得。
55.权利要求54的方法，其中所述抗体样结合蛋白是权利要求1至20任一项的抗体样结合蛋白。
56.权利要求53至55任一项的方法，其中所述患者中关于CA6表达水平的信息通过磁共振成像(MRI)；正电子发射断层扫描(PET)；单光子发射断层扫描(SPECT)；光学成像、计算机断层扫描(CT)；超声、X-射线或光声成像获得。
57.权利要求54至56任一项的方法，其中所述螯合剂是硬酸阳离子螯合剂。
58.权利要求57的方法，其中所述硬酸阳离子螯合剂是DOTA(1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸)、NOTA(1,4,7-三氮杂环壬烷-N,N',N”-三乙酸)、DTPA(1,1,4,7,7-二乙烯三胺五乙酸)或TETA(对溴代乙酰氨基苯甲基四乙胺四乙酸)。
59.权利要求58的方法，其中所述硬酸阳离子螯合剂是DOTA。
60.权利要求54的方法，其中所述抗体样结合蛋白进一步包含标签。
61.权利要求60的方法，其中所述标签是6x-组氨酸标签。
62.权利要求54的方法，其中所述抗体样结合蛋白进一步包含至少一种放射性标记、成像剂、治疗剂或诊断剂。
63.权利要求62的方法，其中所述放射性标记、成像剂、治疗剂或诊断剂是110In、111In、177Lu、18F、52Fe、62Cu、64Cu、67Cu、67Ga、68Ga、86Y、90Y、89Zr、94Tc、94Tc、99mTc、120I、123I、124I、125I、131I、154-158Gd、32P、11C、13N、15O、186Re、188Re、51Mn、52mMn、55Co、72As、75Br、76Br、82mRb或83Sr。
64.权利要求63的方法，其中所述放射性标记、成像剂、治疗剂或诊断剂是64Cu。
65.权利要求62至64任一项的方法，其中所述放射性标记、成像剂、治疗剂或诊断剂包含一种或多种用于磁共振成像(MRI)；正电子发射断层扫描(PET)；单光子发射断层扫描(SPECT)；光学成像、计算机断层扫描(CT)；超声、X-射线或光声成像的作用剂。
66.一种监测癌症患者对使用huDS6-DM4的治疗的响应的方法，其包括步骤：
(a)在施用huDS6-DM4后获得患者中关于CA6的表达水平的信息；且
(b)如果患者中CA6的表达水平与用huDS6-DM4治疗前CA6的表达水平相比已降低，则提供所述治疗应继续的指示。
67.权利要求66的方法，其中所述患者中关于CA6的表达水平的信息通过下列获得：
用huDS6-DM4持续规定的时间治疗所述患者；
施用特异性结合CA6并包含螯合剂和成像剂的抗体样蛋白；且
使用生物成像技术在患者中检测所述成像剂的定位。
68.权利要求67的方法，其中所述特异性结合CA6的抗体样结合蛋白是权利要求1至20任一项的抗体样结合蛋白。
69.权利要求66至68任一项的方法，所述患者中关于CA6的表达水平的信息通过磁共振成像(MRI)；正电子发射断层扫描(PET)；单光子发射断层扫描(SPECT)；光学成像、计算机断层扫描(CT)；超声、X-射线或光声成像获得。
70.权利要求67至68任一项的方法，其中所述螯合剂是硬酸阳离子螯合剂。
71.权利要求70的方法，其中所述硬酸阳离子螯合剂是DOTA(1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸)、NOTA(1,4,7-三氮杂环壬烷-N,N',N”-三乙酸)、DTPA(1,1,4,7,7-二乙烯三胺五乙酸)或TETA(对溴代乙酰氨基苯甲基四乙胺四乙酸)。
72.权利要求71的方法，其中所述硬酸阳离子螯合剂是DOTA。
73.权利要求67至72任一项的方法，其中所述抗体样结合蛋白进一步包含标签。
74.权利要求73的方法，其中所述标签是6x-组氨酸标签。
75.权利要求67至74任一项的方法，其中所述抗体样结合蛋白进一步包含至少一种放射性标记、成像剂、治疗剂或诊断剂。
76.权利要求75的方法，其中所述放射性标记、成像剂、治疗剂或诊断剂是110In、111In、177Lu、18F、52Fe、62Cu、64Cu、67Cu、67Ga、68Ga、86Y、90Y、89Zr、94Tc、94Tc、99mTc、120I、123I、124I、125I、131I、154-158Gd、32P、11C、13N、15O、186Re、188Re、51Mn、52mMn、55Co、72As、75Br、76Br、82mRb或83Sr。
77.权利要求76的方法，其中所述放射性标记、成像剂、治疗剂或诊断剂是64Cu。
78.权利要求75至77任一项的方法，其中所述放射性标记、成像剂、治疗剂或诊断剂包含一种或多种用于磁共振成像(MRI)；正电子发射断层扫描(PET)；单光子发射断层扫描(SPECT)；光学成像、计算机断层扫描(CT)；超声、X-射线或光声成像的作用剂。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117285631A (zh) * 2023-11-24 2023-12-26 原子高科股份有限公司 用于放射性免疫治疗的Lu-177标记MUC1抗体

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002002781A1 (en) * 2000-06-30 2002-01-10 Vlaams Interuniversitair Instituut Voor Biotechnologie Vzw Heterodimeric fusion proteins
CN101242855A (zh) * 2005-08-22 2008-08-13 伊缪诺金公司 Ca6抗原特异性细胞毒性偶联物及其应用方法
CN102316896A (zh) * 2008-12-02 2012-01-11 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 疫苗
CN102612524A (zh) * 2009-09-01 2012-07-25 雅培制药有限公司 双重可变结构域免疫球蛋白及其用途

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB201005063D0 (en) * 2010-03-25 2010-05-12 Ucb Pharma Sa Biological products

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002002781A1 (en) * 2000-06-30 2002-01-10 Vlaams Interuniversitair Instituut Voor Biotechnologie Vzw Heterodimeric fusion proteins
CN101242855A (zh) * 2005-08-22 2008-08-13 伊缪诺金公司 Ca6抗原特异性细胞毒性偶联物及其应用方法
CN102316896A (zh) * 2008-12-02 2012-01-11 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 疫苗
CN102612524A (zh) * 2009-09-01 2012-07-25 雅培制药有限公司 双重可变结构域免疫球蛋白及其用途

Non-Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CARRIGAN, C.; ZUANY-AMORIM, C.; MAYO, M.; 等.: "Preclinical evaluation of SAR566658 (huDS6-DM4) in mice bearing human tumor xenografts of breast, ovarian, lung, cervical and pancreatic cancer", 《EJC SUPPLEMENTS》 *
HUGHES O D M等: "Targeting superficial bladder cancer by the intravesical administration of c0pper-67-labeled anti-muc1 mucin monoclonal antibody c595", 《JOURNAL OF CLINICAL ONCOLOGY》 *
IONESCU ROXANA M等: "Contribution of variable domains to the stability of humanized IgG1 monoclonal antibodies", 《JOURNAL OF PHARMACEUTICAL》 *
LEWIS MICHAEL R等: "In vivo evaluation of pretargeted 64Cu for tumor imaging and therapy", 《JOURNAL OF NUCLEAR MEDICINE》 *
MARCO TAMPELLINI等: "Prognostic significance of changes in CA 15-3 serum levels during chemotherapy in metastatic breast cancer patients", 《BREAST CANCER RESEARCH AND TREATMENT》 *
MEDAROVA ZDRAVKA等: "Multiparametric Monitoring of Tumor Response to Chemotherapy by Noninvasive Imaging", 《CANCER RESEARCH》 *
NATARAJAN ARUTSELVAN等: "Development of multivalent radioimmunonanoparticles for cancer imaging and therapy", 《CANCER BIOTHERAPY AND RADIOPHARMACEUTICALS》 *
SALOUTI MOJTABA等: "Preparation and biological evaluation of Lu-177 conjugated PR81 for radioimmunotherapy of breast cancer", 《NUCLEAR MEDICINE AND BIOLOGY》 *
SCHUHMACHER, J等: "Pretargeting of human mammary carcinoma xenografts with bispecific anti-MUC1/anti-Ga chelate antibodies and immunoscintigraphy with PET", 《NUCLEAR MEDICINE AND BIOLOGY》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117285631A (zh) * 2023-11-24 2023-12-26 原子高科股份有限公司 用于放射性免疫治疗的Lu-177标记MUC1抗体

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