CN105125665A

CN105125665A - 一种含灰树花的植物组合物提取方法和应用

Info

Publication number: CN105125665A
Application number: CN201510655326.2A
Authority: CN
Inventors: 严白双
Original assignee: Nanjing City Qixia District Huichuntang Electronic Commerce Consulting Center
Current assignee: Nanjing City Qixia District Huichuntang Electronic Commerce Consulting Center
Priority date: 2015-10-11
Filing date: 2015-10-11
Publication date: 2015-12-09

Abstract

本发明提供一种含灰树花的植物组合物提取方法，由灰树花100g，回心草50g、野梨枝叶80g、甘肃棘豆150g作为原料药制成，采用微波提取方法制备而成，使得含量有很大提高，用量减少，本发明还提供了含灰树花的植物组合物在制备抑制小鼠神经成纤维细胞瘤N2a细胞增殖药物中的应用。

Description

一种含灰树花的植物组合物提取方法和应用

技术领域

本发明涉及中药制剂技术领域，具体涉及一种含灰树花的植物组合物提取方法及应用。

背景技术

含灰树花的植物组合物由灰树花100g，回心草50g、野梨枝叶80g、甘肃棘豆150g作为原料药制成，目前的提取方法是加水煎煮二次，每次2-3小时，合并煎液，滤过，浓缩成稠膏，制粒，干燥，压制成1000片，包糖衣，即得，能提高免疫力。

现有技术中，尚未有含灰树花的植物组合物在提取制备方面采用微波技术的报道，而采用水煎煮的方法，工艺粗糙、落后，杂质多，导致患者用量过大，不方便服用，严重影响了本品在临床上应用。

发明内容

发明目的：为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种含灰树花的植物组合物提取方法。

本发明的另一个目的在于提供一种含灰树花的植物组合物在制备抑制小鼠神经成纤维细胞瘤N2a细胞增殖药物中的应用。

技术方案：本发明的目的是通过如下的方案实现的：

一种含灰树花的植物组合物提取方法，植物组合物由灰树花100g，回心草50g、野梨枝叶80g、甘肃棘豆150g作为原料药制成，制备方法由下列步骤组成：取上述原料药，粉碎，加入2L的70％乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率为400-600W，萃取2次，每次4-8分钟，合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50％乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，加常规辅料制备成片剂、胶囊或颗粒剂。

上述一种含灰树花的植物组合物提取方法，制备方法中微波萃取功率为500W，每次萃取6分钟。

一种含灰树花的植物组合物在制备抑制小鼠神经成纤维细胞瘤N2a细胞增殖药物中的应用，含灰树花的植物组合物由灰树花100g，回心草50g、野梨枝叶80g、甘肃棘豆150g作为原料药制成，制备方法由下列步骤组成：取上述原料药，粉碎，加入2L的70％乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率为400-600W，萃取2次，每次4-8分钟，合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50％乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，加常规辅料制备成片剂、胶囊或颗粒剂。

上述一种含灰树花的植物组合物在制备抑制小鼠神经成纤维细胞瘤N2a细胞增殖药物中的应用，制备方法中所述微波萃取功率为500W，每次萃取6分钟。

现有技术中，含灰树花的植物组合物每片0.4g，每次4片，一日3次，采用本发明制备成的含灰树花的植物组合物每片0.4g，但含有的药材量是原来的2倍，因此每次仅需2片，一日服用3次，在具有更多活性成分的条件下大大减少了服用量。

具体实施方式

以下通过实施例形式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

实施例1

取灰树花100g，回心草50g、野梨枝叶80g、甘肃棘豆150g，粉碎，加入2L的70％乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率为400-600W，萃取2次，每次4-8分钟，合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50％乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，加常规辅料制备成片剂，每片0.4g。

实施例2

取灰树花100g，回心草50g、野梨枝叶80g、甘肃棘豆150g，粉碎，加入2L的70％乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率为400-600W，萃取2次，每次4-8分钟，合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50％乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，加常规辅料制备成胶囊。

实施例3

取灰树花100g，回心草50g、野梨枝叶80g、甘肃棘豆150g，粉碎，加入2L的70％乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率为400-600W，萃取2次，每次4-8分钟，合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50％乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，加常规辅料制备成颗粒剂。

回心草，拉丁名为Rhodobryumroseum(Hedw.)Limpr.，辛、苦、平。养心安神，清肝明目。用于心悸怔忡，神经衰弱，外用治目赤肿痛。多年生苔藓植物；多成片散生；根态茎横走，有多数毛状假根。茎多枝，直立，紫红色。下部叶细小，膜质，鳞片状贴生于茎；茎顶叶绿色，较长大，多层丛集成莲座状，叶片倒卵状披针形或长倒卵形，上部有细锯齿，下部全缘，内卷，中肋长达叶尖。茎顶叶丛中簇生数个孢子体；蒴柄细长，上端弓曲，孢蒴下垂，红黄色，长卵圆柱形，蒴盖凸，有短喙。本发明以全草入药。

野梨枝叶为蔷薇科植物豆梨的枝叶。治吐泻不止，转筋腹痛，反胃吐食。

甘肃棘豆为豆科植物甘肃棘豆的全草。解毒医疮，止血利尿。治各种内出血。

灰树花俗称“栗蘑”，是食、药兼用蕈菌，夏秋间常野生于栗树周围。子实体肉质，柄短呈珊瑚状分枝，重叠成丛，其外观，婀娜多姿、层叠似菊；其气味、清香四溢，沁人心脾；其肉质脆嫩爽口，百吃不厌；其营养具有很好的保健作用和很高的药用价值。近年来作为一种高级保健食品，风行日本、新加坡等市场。由于我国较早的权威专著《中国的真菌》的采用，灰树花便成为比较通用的汉语名称。灰树花具有松蕈样芳香，肉质柔嫩，味如鸡丝，脆似玉兰。据农业部质量检测中心分析河北省迁西人工栽培的灰树花，其营养和口味都胜过号称菇中之王的香菇，能烹调成多种美味佳肴。非褶菌目(Aphyllophorales)，科多孔菌科(Polyporaceae)，属灰树花属(Ramalina)。

实施例4：含灰树花的植物组合物抑制小鼠神经成纤维细胞瘤N2a细胞增殖的实验研究资料

1实验材料

1.1实验用细胞株

小鼠神经成纤维细胞瘤N2a细胞，南京医科大学实验动物中心实验室细胞库，DMEM+10％FBS常规培养。

1.2实验药物

研究药物：本发明含灰树花的植物组合物：按实施例1方法制备。

药液储液：称取100mg含灰树花的植物组合物，溶于5ml无水乙醇中，0.2μm滤器过滤，500μldoff管分装，-20℃存储，同时0.2μm滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。

1.3实验试剂

DMEM(GIBCO公司Cat.No.12100-061Lot.No.758137)；胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot.No.100419)；NaHCO3(上海久亿化学试剂有限公司Cat.No.11810-033Lot.No.1088387)；Trypsin(AMRESCO公司批号：2010/04)；EDTA(AMRESCO公司批号：2009/10)；PenicillinGSodiumSalt(AMRESCO公司批号：2010242)；StreptomycinSulfate(AMRESCO公司批号：2010382)；无水乙醇(南京化学试剂有限公司批号：080310182)；MTT(Biosharp批号：0793)；PBS(实验室自配)；

1.4实验器材

莱卡倒置显微镜(德国Leica型号：DM1L)；可见-紫外光微孔板检测仪(美国MD公司型号：SPECTRAMAX190)；CO2培养箱(FORMA型号：3111)；超净台(苏净集团安泰公司制造型号：SW-CJ-ZFD)；纯水仪(美国Spring公司型号：S/N020579)；精密移液器(法国吉尔森公司型号：P2)；电子天平(德国赛多利斯有限公司型号：BT323S)；全自动高压灭菌锅(日本SANYO公司型号：MLS-3020)；台式电热鼓风干燥箱(上海精密实验设备公司型号：DHG9123A)；冰箱(西门子公司型号：KG18V21TI)；液氮罐(CBS型号：2001)；低速离心机(上海安亭科学仪器厂型号：KA-1000)；0.2μm滤器(MILLIPORE型号：SLGP033RB)；10cm培养皿(NEST公司)、96孔培养板(NEST公司)；细胞计数板；离心管、移液管、Tips若干。

2实验方法

1)小鼠神经成纤维细胞瘤N2a细胞用DMEM+10％FBS于37℃、5％CO2进行常规培养(10cm培养皿)，当细胞生长至对数期时，收集细胞，弃去培养液，PBS轻洗3遍，加入3ml0.25％胰蛋白酶-0.04％EDTA，37℃消化2min后，向其中加入5ml完全培养基中和反应，吹打细胞后将其转入离心管中，1000rpm离心5min，调整细胞悬液浓度3×10⁴个/ml。

2)将细胞种入96孔培养板中，每孔加入细胞悬液180μl，培养板放入细胞培养箱中(37℃，5％CO2)常规培养。

3)根据细胞生长情况，一般长至50％-70％，加入含灰树花的植物组合物溶液，继续培养24h。

4)24h后加入20μlMTT溶液(5mg/ml，即0.5％MTT)，继续培养4h。

5)4h后扣板法倒去上清，用吸水纸轻轻拍干，每孔加入200μl二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。

6)同时设置本底(不加细胞，只加培养液)，对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜)，每组设定6个复孔。

7)结果以药物对细胞的抑制率表示：

细胞增值抑制率(％)＝(对照孔OD值-给药孔OD值)/对照孔OD值×100％。实验重复3次。

3统计处理

采用MicrosoftExcel2003软件中的相关分析和Studentt检验，数据以mean±S.D.表示。

4实验结果

MTT法实验后统计结果显示，与对照组比较，当剂量达到5mg/ml时，对小鼠神经成纤维细胞瘤N2a细胞增殖抑制有差异(P<0.05)，剂量在10mg/ml时该差异具有显著性(P<0.01)，当剂量达到15-20mg/ml时有极显著性差异(P<0.001)。

表1含灰树花的植物组合物对小鼠神经成纤维细胞瘤N2a细胞增殖抑制影响研究

注：与对照组比较，*P<0.01；**P<0.001

5实验结论

含灰树花的植物组合物可以抑制小鼠神经成纤维细胞瘤N2a细胞增殖，减少小鼠神经成纤维细胞瘤N2a细胞的细胞生长数目，该作用呈剂量依赖性。

Claims

1.一种含灰树花的植物组合物提取方法，其特征在于植物组合物由灰树花100g，回心草50g、野梨枝叶80g、甘肃棘豆150g作为原料药制成，制备方法由下列步骤组成：取上述原料药，粉碎，加入2L的70％乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率为400-600W，萃取2次，每次4-8分钟，合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50％乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，加常规辅料制备成片剂、胶囊或颗粒剂。

2.根据权利要求1所述一种含灰树花的植物组合物提取方法，其特征在于制备方法中微波萃取功率为500W，每次萃取6分钟。

3.一种含灰树花的植物组合物在抑制小鼠神经成纤维细胞瘤N2a细胞增殖药物中的应用，其特征在于含灰树花的植物组合物由灰树花100g，回心草50g、野梨枝叶80g、甘肃棘豆150g作为原料药制成，制备方法由下列步骤组成：取上述原料药，粉碎，加入2L的70％乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率为400-600W，萃取2次，每次4-8分钟，合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50％乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，加常规辅料制备成片剂、胶囊或颗粒剂。

4.根据权利要求3所述一种含灰树花的植物组合物在抑制小鼠神经成纤维细胞瘤N2a细胞增殖药物中的应用，其特征在于制备方法中所述微波萃取功率为500W，每次萃取6分钟。