CN1050996C

CN1050996C - 用酰化嘧啶核苷处理化学疗法试剂和抗病毒试剂的毒性

Info

Publication number: CN1050996C
Application number: CN92108868A
Authority: CN
Inventors: R·W·凡伯尔斯特尔; M·K·贝马特
Original assignee: Pro Neuron Inc
Current assignee: Pro Neuron Inc
Priority date: 1991-07-05
Filing date: 1992-07-04
Publication date: 2000-04-05
Anticipated expiration: 2007-07-04
Also published as: IL102407A0; CN1071577A; MX9203963A; IL102407A

Abstract

本发明公开了用于治疗和预防由化学治疗试剂和抗病毒试剂所致的毒性化合物、制剂和方法。所公开的是非甲基化的嘧啶核苷的酰化衍生物。这些化合物能缓解接受了抗病毒或抗肿瘤化学疗法的动物中促红细胞生成系统所受到的损害。

Description

用酰化嘧啶核苷处理化学疗法试剂和抗病毒试剂的毒性

本发明一般涉及用非甲基化的嘧啶核苷的酰化衍生物处理化学疗法试剂和抗病毒试剂的毒性。这些化合物能够减轻对正接受抗病毒或抗肿瘤化学疗法的动物中促红细胞生成系统的损害。本发明还涉及保护其它受抗病毒或抗肿瘤化学疗法影响的组织，这些组织包括胃肠上皮。

癌症化学疗法和抗病毒化学疗法的一个主要麻烦是损伤骨髓细胞或抑制它们的功能。特别是，化学疗法会损伤或破坏主要聚集于骨髓和脾脏中的促红细胞生成的母体细胞，减少新的血细胞(粒细胞、淋巴细胞、红细胞、单核细胞、血小板等)的产量。比如，用5-氟尿嘧啶(5-FU)治疗癌症患者会减少他们白细胞(淋巴细胞和/或粒细胞)的数目，并且会提高患者对感染的敏感度。许多癌症患者死于化学疗法后红细胞生成作用的失效所造成的感染或其它后果。化学疗法试剂还会使血小板的生成量低于正常水平，由此又会出现出血的倾向。红细胞生成的抑制会导致贪血。损害促红细胞生成系统或其它重要组织的危险性在于它会妨碍使化学疗法试剂的使用剂量大到足以发挥好的抗肿瘤或抗病毒效力的程度。

许多抗肿瘤或抗病毒的化学疗法试剂靠抑制核苷酸的生物合成、代谢或其功能来发挥作用，或者实际上它们是取代核酸中正常核苷酸，产生有缺陷的RNA或DNA的核苷酸取代衍生物。

5-氟尿嘧啶(5-FU)是一种临床上非常重要的细胞还原抗肿瘤化学疗法试剂，它部分地是通过进入RNA、产生有缺陷的RNA而发挥作用；用荧光脱氧尿苷的一磷酸盐来抑制胸苷酸合成酶还可能提高5-FU的细胞毒性。5-FU的临床应用(尤其是用在骨髓上)受其毒性的限制。特别是，其临床应用受到治疗比低的限制；治疗比就是毒物剂量与有效剂量之比，高治疗比意味着药物具有低毒性的治疗效力。

5-FU和许多其它化学疗法试剂还影响其它组织，特别是影响胃肠粘膜，造成粘膜炎、腹泻和溃疡。口炎(口中粘膜的溃疡)对患者来说特别麻烦，会使进食和吞咽非常痛苦。

D.S.Martin等人在Cancer Res.42：3964-70[1982]上报道，如果在施用5-FU几小时后开始给小鼠施用大剂量的尿苷、具有强烈的抗肿瘤活力的5-FU的毒物剂量施用给小鼠可以是无害的。现已证明这种“补救”策略能够增加5-FU在动物肿瘤模型中的治疗指数，能允许使用大剂量、有毒性的5-FU，这样大剂量的5-FU是使肿瘤消退或防止肿瘤生长所必须的，与此同时通过随后施用尿苷以优先保护正常组织(特别重要的是骨髓)(D.S.Martin等，Cancer Res 43：4653-61[1983])。

由于尿苷自身生物学性质的原因，包括施用尿苷在内的临床试验非常复杂。口服后尿苷吸收得很差；腹泻是人体中的剂量限制因素(Van Groeningen等； Proceedings of the AACR 28：195[1987])。结果，为在临床上显著改变5-FU的毒性，需要非肠道使用尿苷，这需要使用一根静脉内部导管，后来早期的临床试验就表明，当通过一根小的静脉内的导管注入尿苷时，静脉炎就已成为一个问题(Van Groeningen等，Cancer Treat Rep.70：745-50[1986])。由于通过静脉内部导管进行灌输需要很长时间，需要把患者送入医院治疗。另外，还存在一些使患者感到很不舒适和很不方便的问题。

就尿苷的情形而言，药品口服后生物利用率很差这样的问题限制了施用脱氧胞苷、胞苷和脱氧尿苷这几种药物来减缓化学疗法试剂毒性的临床使用价值。

阿糖胞嘧啶(Ara-C)是一种治疗白血病的重要试剂，同时作为一种免疫抑制剂使用效果也很好。可以通过使用脱氧胞苷来部分地预防使用Ara-C对骨髓(髓细胞和红细胞)的毒性(Belyanchikova等，Bull.Exp.Biol.Med，91：83-85[1981])，而脱氧胞苷对Arp-C对淋巴细胞毒性的作用比对白血球细胞强(K.Bhalla等，Blood 70：568-571[1987])。脱氧胞苷还会缓解细胞培养液中5-氮杂-2′-脱氧胞苷和阿糖5-氮杂胞嘧啶的毒性(K.Bhalla等，Leukmia 1：814-819[1987])。建议用一根静脉内部导管进行很长时间(5天)大剂量脱氧胞苷的灌注来作为临床上实现用脱氧脱苷来减轻Ara-C毒性的一种手段(KBhall等，Leukemia 2：709-710[1988])。

N-膦酰基乙酰基-L-天冬氨酸(PALA)是一种抗肿瘤试剂，它抑制被称为天冬氨酸氨甲酰基转移酶的这种酶，这种酶间接参与嘧啶核苷酸的生物合成。PALA的副作用主要是对胃肠的毒性损伤和粘膜炎。吡唑呋喃菌素(一种碳连接的嘧啶类似物)、6-氮杂尿苷和6-氮杂胞苷都会妨碍嘧啶核苷酸的合成和代射。

3′-叠氮脱氧胸苷(AZT)在临床上用于受人类免疫缺损病毒(即HIV，AIDS的传染媒介)感染的病人。AZT延长了受HIV感染患者的寿命，但也损害了红细胞生成作用，造成白细胞减少和贪血。在细胞培养物中，尿苷降低了AZT带给粒细胞/巨噬细胞的祖代细胞的毒性，同时并没有降低AZT的抗病毒作用(Sommadossi等，(1988)Antimicrobial Agents andChemotherapy，32：997-1001)；而胸苷同时降低了AZT的毒性和抗病毒活性。对小鼠以非肠道方式使用大剂量的尿苷可以在一定程度上缓解AZT导致的贪血，但研究中发现只有当尿苷剂量达到使死亡率增加的程度才会有这样的效果；较低的、非毒剂量的尿苷(500mg/Kg/d)不会降低AZT所致的血液学的毒性(A.Falcone等，Blood 76：2216-21[1990])。Sommadossi和el Kounj在美国专利5077280中提出用周期性静脉注射的方法使用尿苷来降低AZT的毒性。据Bhall等报道，脱氧胞苷能保护活体外部的正常的人类骨髓祖代细胞免受AZT细胞毒性的损害，同时又能保留其抗逆病毒的活性。(Blood 74：1923-1928[1989])。

5-氟乳清酸酯是嘧咳苷酸先质乳清酸的一种类似物，它对人类细胞具有抗增生的作用，不过它特别适用于治疗疟疾寄生物的感染，这些疟疾寄生物比如是Yoelii疟原虫或恶性疟原虫，这些疟原虫依赖于新的嘧啶生物合成。对用5-氟乳清酸酯治疗过的小鼠使用尿苷会降低5-氟乳清酸酯的宿主毒性，这是由于后者不会破坏其抗疟疾的活性(Z M Gomez and P K Rathod，Antimicrob，Agents。Chemother.34：1371-1375[1990])。

二脱氧胞苷(ddc)还可用于抗包括HIV在内的逆病毒的感染，ddc的副作用包括引发周围神经病，口腔溃疡，降低血小板的数量。用脱氧胞苷可以缓解ddc对培养物中的人类骨髓祖代细胞的毒性，而且不会相应损害ddc抗逆病毒的效力，(K Bhalla等AIDS4：427-31[1990])。

上述已有技术中公开的、使用这些嘧啶核苷改善临床处置中化学疗法的方法或者实用性差(通过一静脉内部导管灌输脱氧胞苷或尿苷所需时间太长以至需要送入医院治疗，存在受感染的危险性，患者感到不舒适)，或者不能令人满意(口服尿苷吸收得很差；口服尿苷达到治疗所需剂量时会出现腹泻)。

为公众所拥有的、流水号为438493的美国专利申请说明了如何用胞苷和尿苷的酰化衍生物来提高血液中胞苷或尿苷含量。

现已合成出一些嘧啶核苷的酰基衍生物，用于保护低核苷酸或核苷类似物合成过程中的中间产物，这些衍生物如5′-O-苯甲酰尿苷、三乙酰胞苷和三乙酰尿苷。见Sigma化学公司1991年产品索引，第155、980、和981页。

本发明的一个主要目的是提供一种能有效防止或治疗抗病毒或抗肿瘤化学疗法的中毒症状的方法，这些症状包括(但不限于)对促红细胞生成系统和对胃肠粘膜的损害。

本发明的一个进一步的目的是提供一些能允许使用大剂量化学疗法试剂的化合物和方法。

本发明的一个进一步的目的是提供一些通过口服一种或一些化合物以提高尿苷和胞苷及它们相应的脱氧核苷、脱氧胞苷及脱氧尿苷在血液和组织中的含量的方法。

本发明的一个进一步的目的是提供一种防止或缓解细胞毒性化学疗法试剂对胃肠上皮的损害的方法。

本发明的这些目的和其它目的的实现是通过对动物(包括人等哺乳动物)口服或非肠道使用非甲基化的嘧啶核苷的酰化衍生物，如尿苷脱氧尿苷，胞苷或脱氧胞苷的酰化衍生物。单独或一同使用这些化合物有助于防止或缓解动物中细胞脱氧化学疗法的毒性作用。

于是，单独或一同使用本发明的化合物有助于治疗化学试剂所致的红细胞生成作用失常；有助于配合癌症和抗病毒的化学疗法；有助于治疗其它病理学的症状。

本发明的一个重要方面是发现非甲基化的嘧啶核苷的酰化衍生物有出人意料的治疗效果。

本发明的化合物

在除专门指定以外的所有情形中，在本发明化合物的化学结构中代表可变取代基的不带下标和带下标的那些字母只能加在就位于该符号所述的位置之前的那个结构上。

用于缓解抗癌或抗病毒试剂所致毒性的化合物的通用结构如下：

(1)尿苷的酰基衍生物，结构式为

其中R₁、R₂、R₃和R₄可以相同或不同，分别可以是氢原子或代谢产物的一个酰基(只是所述的R取代基中至少有一个不是氢原子)或取代基在药物学上可接受的一种盐。

(2)胞苷的酰基衍生物。结构式为

其中R₁、R₂、R₃和R₄可以相同或不同，分别可以是氢原子或代谢产物的一个酰基(只有所述的R取代基中至少有一个不是氢原子)或取代基的一种在药物学上可接受的盐。(3)脱氧胞苷的酰基衍生物，结构式为

其中R₁、R₂、和R₃可以相同或不同，分别可以是氢原子或代谢产物的一个酰基(只有所述的R取代基中至少有一个不是氢原子)或取代基的一种在药物学上可接受的盐。

(4)脱氧尿苷的酰基衍生物，结构式为：

本发明用于缓解抗癌或抗病毒化学疗法试剂毒性的化合物包括下列化合物：

(5)尿苷的酰基衍生物，结构式为：其中R₁、R₂和R₃可以相同或不同，分别可以是氢原子或下列物质的一个酰基，这些物质为：

a.一种带5至22个碳原子的无支链脂肪酸，

b.一种氨基酸，选自由下列物质组成的一组氨基酸：甘氨酸，L型丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，酪氨酸，脯氨酸，羟基脯氨酸，丝氨酸，苏氨酸，胱氨酸，半胱氨酸，天冬氨酸，谷氨酸，精氨酸，赖氨酸，组氨酸，肉碱和鸟氨酸，

c.一种带3至22个碳原子的二羧酸，

d.一种羧酸，选自由下列物质组成的一组物质的一种或多种，这些物质为：乙醇酸、丙酮酸、乳酸、烯醇丙酮酸、硫辛酸、泛酸、乙酰乙酸、P-氨基苯甲酸、β-羟丁酸、乳清酸以及肌酸。

(6)一种胞苷的酰基衍生物，结构式为：

其中R₁、R₂和R₃可以相同或不同，分别可以是氢原子或下列物质的一个酰基，这些物质为：

a.一种带5至22个碳原子的无支链脂肪酸，

b.一种氨基酸，选自由下列物质组成的一组氨基酸：甘氨酸，L型苯基丙氨酸，丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，酪氨酸，脯氨酸，羟基脯氨酸，丝氨酸，苏氨酸，胱氨酸，半胱氨酸，天冬氨酸，谷氨酸，精氨酸，赖氨酸，组氨酸，肉碱和鸟氨酸，

c.一种带3至22个碳原子的二羧酸，

d.一种羧酸，选自由下列物质组成的一组物质的一种或多种，这些物质为：乙醇酸、丙酮酸、乳酸、烯醇丙酮酸、硫辛酸、泛酸、乙酰乙酸、p-氨基苯甲酸、β-羟丁酸、乳清酸，以及肌酸。(7)一种脱氧胞苷的酰基衍生物，结构式为：其中R₁、R₂、和R₃可以相同或不同，分别可以是氢原子或下列物质的一个酰基，这些物质为：

a.一种带3至22个碳原子的无支链脂肪酸，

c.烟酸，

d.一种带3-22个碳原子的二羧酸，(条件是R₁、R₂和R₃不全是H，并且当R₃不是H时，R₁和/或R₂也可以是酰基)或为其一种在药物学上可接受的盐。

(8)一种脱氧尿苷的酰基衍生物，结构式为：

a.一种带3至22个碳原子的无支链脂肪酸，

c.烟酸，

d.一种带3-22个碳原子的二羧酸(条件是R₁，R₂和R₃不全是H，并且当R₃不是H时，R₁和/或R₂也可是酰基)或为一种在药物学上可接受的盐。

(9)一种尿苷的酰基衍生物，结构式为：

其中R₁、R₂或R₃至少有一个是含2-26个碳原子的烃基氧化羰基部分，并且其余的R取代基彼此不相关，可以是烃基氧化羰基部分或烃基羰基部分或H或磷酸盐。

(10)一种胞苷的酰基衍生物，结构式为：

其中R₁、R₂、R₃或R₄至少有一个是含2-26个碳原子的烃基氧化羰基部分，并且其余的R取代基彼此不相关，可以是烃基氧化羰基部分或烃基羰基部分或H或磷酸盐。(11)一种脱氧胞苷的酰基衍生物，结构式为：

其中R₁、R₂、或R₃至少有一个是含2-26个碳原子的烃基氧化羰基部分，并且其余的R取代基彼此不相关，可以是烃基氧化羰基部分或烃基部分或H或磷酸盐。

(12)一种脱氧尿苷的酰基衍生物，结构式为：

其中R₁或R₂中至少有一个是含2-26个碳原子的烃基氧化羰基部分，并且其余的R取代基彼此不相关，可以是烃基氧化羰基部分或烃基羰基部分或H或磷酸盐。

阅读下列的详细叙述部分并参考下列例子中所讨论实验的所附结果，可以更清楚，全面地理解本发明及其其它目的，特点和优点。

本附属发明涉及使用非甲基化的嘧啶核苷的酰基衍生物-即尿苷，脱氧尿苷，胞苷或脱氧胞苷的酰基衍生物(如三乙酰尿苷)来缓解在活的机体中的化学疗法试剂和抗病毒试剂的毒性。本发明还涉及对动物单独或一同使用这些嘧啶核苷化合物，同时使用或不使用其它试剂。

对许多抗肿瘤或抗病毒试剂的情形而言，受它们作用的细胞当暴露在适当的天然核苷下时可以避免或缓解上述试剂对那些细胞的损害。本附属发明的化合物和方法使在维持抗病毒或抗瘤试剂治疗效力不变的同时降低其毒性成为可能。反过来，也使把毒性维持在一可接受水平的同时增大化学疗法试剂的剂量成为可能。

本发明提供了通过口服或非肠道使用非甲基化嘧啶核苷的酰基衍生物来治疗或防止抗病毒或抗癌化学疗法的中毒症状的化合物或方法。

A.定义：

这里所用的“非甲基化的嘧啶核苷”一词表示天然存在的核苷，而不是指胸苷(5-甲基脱氧尿苷)或5-甲基胞苷及其它类似的天然存在的甲基化的核苷。非甲基化的嘧啶核苷的例子包括尿苷，胞苷，脱氧尿苷，和脱氧胞苷。

这里所用的“酰基衍生物”一词指一种非甲基化的嘧啶核苷的衍生物，其中以一羧酸衍生出的一个基本无毒的有机酰化取代基通过一个酯键接到一非甲基化的嘧啶核苷中核糖部分的一个或多个自由羟基上，并且/或者这样一个取代基通过一个酰胺键接到胞苷或脱氧胞苷的嘧啶环上的胺取代基上。这样的酰取代基是从以下羧酸衍生的。这些羧酸包括(但不限于)选自下列物质组成的一组化合物，这些物质是脂肪酸，氨基酸，烟酸，二羧酸，乳酸，对氨基苯甲酸和乳清酸，比较好的酰化取代基为羧酸，它们或者作为食物构成成分或者作为中间代谢产物存在于体内。

这里所用的“类似物”一词指通过不同于酰化或附着其它在生物学上不稳定的取代基(如糖上的羟基的磷酸化)的方法在嘧啶环或核糖(或脱氧核糖)部分上经过化学改性的一种核苷。本发明范围中的核苷类似物特别指那些结构与天然存在的核苷类似，但具有抗病毒、抗肿瘤或细胞毒性作用的药物。抗肿瘤核苷类似物的例子包括(但不限于)下列物质：5-氟尿嘧啶(5-FU)，5- FU药物前体[如呋氟尿嘧啶(ftorafur)，5′-脱氧氟尿苷，己胺甲酰氟尿嘧啶(carmofur)]，氟尿苷，2′-脱氧氟尿苷，氟尿苷或2′-脱氧氟尿苷的药物前体衍生物，氟胞嘧啶，阿糖胞嘧啶，阿糖胞嘧啶的药物前体，环胞苷，5-氮杂-2′-脱氧胞苷，阿糖5-氮杂胞嘧啶，6-氮杂尿苷，楝碱(azaridine)6-氮杂胞苷，三氟-甲基-2′-脱氧尿苷，胸苷，以及3-脱氮杂尿苷。抗病毒核苷类似物的例子包括(但不限于)下列物质：5-乙基-2′-脱氧尿苷，5-碘代-2′-脱氧尿苷，5-溴代-2′-脱氧尿苷，5-甲氨基-2′-脱氧尿苷，阿糖尿嘧啶，二脱氧尿苷，二脱氧胞苷，2′，3′-二脱氧胞苷，-2′-烯，3′-脱氧胸苷-2′-烯，3′-叠氮基-2′，3′-二脱氧尿苷，以及3′-叠氮脱氧胸苷(AZT)。本词也包括了嘧啶核苷先质的类似物(如N-膦酰乙酰基-L-天冬氨酸，即PALA)。

据认为一些核苷类似物的结构与特定的天然存在的核苷的结构相似。在本发明化合物的范围内，如果核苷类似物在嘧啶环的4位置有一个外环氨基(在该位置有一个氨基表明了胞苷和尿苷之间的区别)，则可把这些核苷类似物细分为胞苷类似物。专指胞苷类似物的那些核苷类似物包括(但不限于)：氟胞嘧啶，阿糖胞嘧啶，阿糖胞嘧啶的药物前体，环胞苷、5-氮杂-2′-脱氧胞苷，阿糖5-氮杂胞嘧啶、6-氮杂胞苷和二脱氧胞苷。特指尿苷类似物的那些核苷类似物包括(但不限于)：5-FU，5-FU的药物前体[如呋氟尿嘧啶(ftorafur)、5′-脱氧氟尿苷，己胺甲酰氟尿嘧啶(carmofur)]、氟尿苷、2′-脱氧氟尿苷、氟尿苷的药物前体衍生物、2′-脱氧氟尿苷的药物前体衍生物、三氟-甲基-2′-脱氧尿苷、6-氮杂尿苷、楝碱(azaribine)、3-脱氮杂尿苷、5-乙基-2′-脱氧尿苷、5-碘代-2′-脱氧尿苷、5-溴代-2′-脱氧尿苷、5-甲氨基-2′-脱氧尿苷，阿糖尿嘧啶和二脱氧尿苷。一些细胞毒性核苷类似物也是特定的胸苷类似物，如AZT。

这里所用的“在药物学上可接受的盐”一词指的是那些带有衍生物的在药物学上可接受的酸的加成盐的盐，那些酸包括(但不限于)硫酸，盐酸或磷酸。

这里所用的“共同引入的”一词指在一时间段的时期至少引入两种本发明的化合物，在这一时间段内各药物相应的药物活性期间相重叠。

这里所用的“烃基羰基”一词指羧酸的一个酰基，羧酸中与羰基碳原子相连的原子是另一个碳原子。母羧酸比如可以是一种脂肪酸，一种芳香酸，(如苯甲酸，烟酸或同类物)，一种氨基酸，一种环烷基羧酸或一种二羧酸。

此处所用的“烃基氧化羰基”一词指一羧酸中的一个酰基，羧酸中与羰基碳原子相邻的是氧原子，该氧原子又与另一个碳原子共价连接。也可把该基看做是醇的碳酸酯的基。当使用后从一种非甲基化的嘧啶核苷上断裂开时进一步降解为二氧化碳和一种醇。比较合适的醇应该是那些毒性较小，特别是那些很容易进入正常代谢或排泄通道的醇。

这里所用的“脂肪酸”一词指带2-22个碳原子的脂族羧酸。这样的脂肪酸可以是饱和的，部分饱和的或聚合不饱合的。

这里所用的“氨基酸”一词包括(但不限于)甘氨酸，L型丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，苯基丙氨酸、酪氨酸，脯氨酸，羟基脯氨酸，丝氨酸，苏氨酸，半胱氨酸，胱氨酸，甲硫氨酸，色氨酸，天冬氨酸，谷氨酸，精氨酸，赖氨酸，组氨酸，鸟氨酸，羟基赖氨酸，肉碱，以及其它天然存在的氨基酸。

此处所用的“二羧酸”一词指带第二个羧酸取代基的脂肪酸。

此处所用的“疗效量”一词指对一特定的条件和使用方法能达到治疗效果的量。

B.本发明的化合物

在除专门指定以外的所有情形中，在本发明化合物的化学结构中代表可变取代基的不带下标的和带下标的那些字母只能加在就位于该符号所述的位置之前的那个结构上。

用于缓解抗癌抗病毒试剂所致毒性的化合物的通用结构如下：用于缓解抗癌或抗病毒试剂所致毒性的化合物的通用结构如下：(1)尿苷的酰基衍生物，结构式为

(2)胞苷的酰基衍生物，结构式为：

其中R₁、R₂、R₃和R₄可以相同或不同，分别可以是氢原子或代谢产物的一个酰基(只是所述的R取代基中至少有一个不是氢原子)，或取代基的一种在药物学上可接受的盐。

(3)脱氧胞苷的酰基衍生物，结构式为

其中R₁、R₂、和R₃可以相同或不同，分别可以是氢原子或代谢产物的一个酰基(只是所述的R取代基中至少有一个不是氢原子)或取代基的一种在药物学上可接受的盐。

(4)脱氧尿苷的酰化衍生物，结构式为：

其中R₁，R₂和R₃可以相同或不同，分别可以是氢原子或代谢产物的一个酰基(只是所述的R取代基中至少有一个不是氢原子)或取代基的一种在药物学上可接受的盐。

(5)尿苷的酰化衍生物，结构式为：

其中R₁，R₂和R₃可以相同或不同，分别可以是氢原子或下列物质的一个酰基，这些物质为：

a.一种带5至22个碳原子的无支链脂肪酸，

c.一种带3至22个碳原子的二羧酸，

d.一种羧酸，选自由下列物质组成的一组物质的一种或多种，这些物质为：乙醇酸、丙酮酸、乳酸、烯醇丙酮酸、硫辛酸、泛酸、乙酰乙酸、p-氨基苯甲酸、β-羟丁酸、乳清酸，以及肌酸。

(6)一种胞苷的酰基衍生物，结构式为：

a.一种带5至22个碳原子的无支链脂肪酸，

c.一种带3至22个碳原子的二羧酸，

(7)一种脱氧胞苷的酰基衍生物，结构式为：其中R₁、R₂和R₃可以相同或不同，分别可以是氢原子或下列物质的一个酰基，这些物质为：

a.一种带3至22个碳原子的无支链脂肪酸，

c.烟酸，

d.一种带3-22个碳原子的二羧酸，条件是R₁，R₂和R₃不全是H，并且当R₃不是H时，R₁和/或R₂也可是酰基，或为其一种在药物学上可接受的盐。

(8)一种脱氧尿苷的酰基衍生物，结构式为：其中R₁、R₂和R₃可以相同或不同，分别可以是氢原子或下列物质的一个酰基，这些物质为：

a.一种带3至22个碳原子的无支链脂肪酸，

b.一种氨基酸，选自由下列物质组成的一组氨基酸：甘氨酸，L型丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，酪氨酸，脯氨酸，羟基脯氨酸，丝氨酸，苏氨酸，胱氨酸，半胱氨酸，天冬氨酸，谷氨酸，精氨酸，赖氨酸，组氨酸，肉碱和鸟氢酸，

c.烟酸，

d.一种带3-22个碳原子的二羧酸，条件是R₁，R₂和R₃不全是H，并且当R₃不是H时，R₁和/或R₂也可酰基，或为其一种在药物学上可接受的盐。

(9)一种尿苷的酰基衍生物，结构式为：其中R₁，R₂或R₃至少有一个是含2-26个碳原子的烃基氧化羰基部分，并且其余的R取代基彼此不相关，可以是烃基化羰基部分或烃基羰基部分或H或磷酸盐。

(10)一种胞苷的酰基衍生物，结构式为

其中R₁、R₂、R₃或R₄至少有一个是含2-26个碳原子的烃基氧化羰基部分，并且其余的R取代基彼此不相关，可以是烃基氧化羰基部分，或烃基羰基部分或H或磷酸盐。(11)一种脱氧胞苷的酰基衍生物，结构式为：

其中R₁，R₂或R₃至少有一个是含2-26个碳原子的烃基氧化羰基部分，并且其余的R取代基彼此不相关，可以是烃基氧化羰基部分或烃基羰基部分或H或磷酸盐。

(12)一种脱氧尿苷的酰基衍生物，结构式为：其中R₁或R₂中至少有一个是含2-26个碳原子的烃基氧化羰基部分，并且其余的R取代基彼此不相关，可以是烃基氧化羰基部分或烃基羰基部分或H或磷酸盐。

本发明还包括上述化合物的在药物学上可接受的盐。

本发明中有益的化合物为尿苷和脱氧胞苷的脂肪酸酯，特别是那些在酰取代基中带4个或更少的碳原子的脂肪酸酯。转别有益的化合物是酰取代基中带2或3个碳原子的尿苷或脱氧胞苷的脂肪酸酯。

本发明中其它有益的化合物为尿苷和脱氧胞苷的烃基氧化羰基衍生物，特别是那些烃基氧化羰基部分中带3-6个碳原子的衍生物。

在本发明的一个实施例中，通过把磷酸盐接到酰化了的非甲基化嘧啶核苷的醛糖部分上的一个自由羟基上，制备出了水溶性提高了的本发明化合物的药物前体。

C.本发明的制剂

本发明的制剂包括与一种在药物学上可接受的载体结合在一起的一种或多种上述化合物。

在另一个实施例中，除本发明的一种或多种化合物外，本发明的制剂还包括下列至少一种能增强促红细胞生成作用的试剂：羟基嘌呤核苷、羟基嘌呤核苷的同类物，羟基嘌呤核苷的酰基衍生物及它们的同类物，如鸟苷或脱氧鸟苷的脂肪酸酯，(见1991年2月8日入藏的，流水号为653882的美国专利申请，在此引入以供参考)，一种非离子表面活性剂，一种中间白细胞素，(如IL-1，-2，-3，-4，-5，-6，-7，-8，较好的为IL-1，3，或6)，一种菌落刺激因子，如粒细胞菌落刺激因子，(G-CSF)，粒细胞/巨噬细胞菌落刺激因子(GM-CSF)，以及干细胞因子，(SCF)促红细胞生成素，(EPO)葡聚糖，聚肌苷-聚胞苷，或者其它任何对促进红细胞生成有积极作用的试剂。

能提高促红细胞生成作用并可任意与本发明的化合物一同使用的羟基嘌呤核苷的酰化衍生物的结构通式如下：

R_A＝H或带2至30个碳原子的羧酸的酰基，并且

R_B＝H或带2至30个碳原子的羧酸的酰基，并且

Z＝H，OH，＝O，或者NHRc，其中Rc＝H或带2-30个碳原子的羧酸的酰基，并且

L＝H或OR_D，这里R_D＝H，或带2-30个碳原子的羧酸的酰基，并且

M＝_H或OR_E，这里R_E＝H，或带2-30个碳原子的羧酸的酰基，并且

Q＝H、-卤素、NHR_F，在这里R_F为H或含1至10个碳原子的一个酰基或烷基、S(S以二价键连接在碳上，在这种情况下，相邻的碳氮双键是一个键并且一个H随后接到N上)、SR_G(这里R_G是H或含1至10个碳原子的一个酰基或烷基)、O(O与C二价键合，在这种情况下相邻的碳氮双键为一个键并且一个H随后接到N上)，或者是OR_H(这里R_H为H或一个含1至10个碳原子的酰基或烷基)，并且

醛糖部分的2′和3′位置之间的C-C键可有可无。

在本发明的另一个实施例中，酰化了的非甲基化嘧啶核苷是通过使一种能促进核苷向细胞内摄入和磷酸化的化合物，(如胰岛素或一种能生成胰岛素的碳水化合物)而制成的。

在本发明的另一个实施例中，制剂包括至少一种本发明的化合物和一种抗病毒或抗肿瘤试剂(见下面题为“本发明化合物和试剂的治疗用途”部分中对这些试剂的详细叙述。)

在另一个实施例中，本发明的试剂包括一种尿苷或脱氧尿苷的酰基衍生物和一种能抑制尿苷磷酸化酶的化合物。尿苷磷化酶是一种初级酶，参与尿苷的分解代谢，代谢后生成尿嘧啶和核糖磷酸酯。使用抑制尿苷磷酸化酶的化合物将提高尿苷和脱氧尿苷的药物动力学和生物学活性，所述的尿苷和脱氧尿苷是通过对这两种非甲基化的嘧啶核苷的酰化衍生物进行脱酰作用而生成的，尿苷磷酸化酶的合适的抑制剂的例子包括(但不限于)5-苄基巴比妥酸酯或5-亚苄基巴比妥酸酯的衍生物，包括5-苄基巴比妥酸酯，5-苄氧基苄基巴比妥酸酯、5-苄氧基苄基-1-[(1-羟基-2-乙氧基)甲基]巴比妥酸酯、5-苄氧基苄基乙酰基-1-[(1-羟基-2-乙氧基)甲基]巴比妥酸酯、5-甲氧苄基乙酰基无环巴比妥酸酯、2′，2′-脱水-5-乙基尿苷；以及无环尿苷类化合物，特别是被5-苄基取代的无环尿苷同类物，包括(但不限于)苄基无环尿苷、苄氧基苄基无环尿苷、氨甲基-苄基无环尿苷、氨甲基-苄氧基苄基无环尿苷、羟甲基-苄基无环尿苷以及羟甲基-苄氧基苄基无环尿苷。另见WO89/09603和WO91/16315，在此引入以供参考。

在本发明的另一个实施例中，制剂包括一种非甲基化嘧啶核苷的酰基衍生物以及一种化合物，该化合物能抑制细胞摄入或排泄非甲基化嘧啶核苷，进而在使用一定剂量的非甲基化嘧啶核苷的酰基衍生物而发生酶的脱酰作用后有助于维持血液中的核苷含量，这样的尿苷输送或排泄的调节剂包括(但不限于)潘生丁(dipyridamole)、4-苯甲酸，利多氟嗪(lidoflazine)或硝基苄基巯肌苷(nitrobenzylthioinosine)。

在本发明的另一个实施例中，制剂包括胞苷的一种酰基衍生物和一种能抑制尿苷磷酸化酶这种酶的化合物。因为当胞苷的酰基衍生物经脱酰作用后胞苷在血液中被部分脱氨，所以抑制这种酶连同胞苷一起有助于向组织提供尿苷。

在本发明的另一个实施例中，制剂包括胞苷或脱氧胞苷的一种酰基衍生物和一种能抑制脱氧胞苷脱氨基酶的化合物。通过抑制脱氧胞苷或胞苷的脱氨基作用，胞苷脱氨基酶或脱氧胞苷脱氨基酶的抑制剂(如四氢尿苷或四氢-2′-脱氧尿苷)，提高了胞苷或脱氧胞苷的酰基衍生物的效力。在本发明的另一个实施例中，使用一种胞苷脱氨基酶或脱氧胞苷脱氨基酶的抑制剂来减轻一种抗病毒或抗癌核苷类似物的毒性(见例11)

在本发明的另一个实施例中，特别是为防止或治疗对胃肠粘膜的损害，制剂包括一种非甲基化嘧啶核苷的一种酰基衍生物和一种或多种用于帮助粘膜恢复或降低不舒适程度的试剂。这样的试剂的例子包括(但不限于)硫糖铝(sacralfate)、两种或更多种1989年4月21日入藏的，流水号为341,925，的美国专利申清(在此引入以供参考)中所公开的脱氧核糖核苷组成的混合物，别嘌呤醇，抗菌素[如洗必泰葡萄糖酸盐(chlorhexidine gluconate)]或局部麻醉剂(如苯坐卡因)。

根据预期的用途，可以把制剂制成液体，悬浮体，片剂，胶囊，糖衣药丸，可注射的溶液，局部使用的溶液或者栓剂等多种形态(见下面对配方的讨论)。

作为对含本发明一种化合物和另一种活泼试剂(见上述的讨论)的制剂的配方的一种替换物，在另一个实施例中，本发明的化合物与其它活泼剂共同使用。

D.本发明化合物和试剂的治疗用途

本发明的化合物可用于防止或治疗对动物体内红细胞生成作用过程和免疫系统功能的损害。这些化合物在抗病毒或抗肿瘤试引起对骨髓的损伤或抑制之后通过将血细胞数的损失降至最低的方式来减小对红细胞生成作用的损害，所述抗病毒或抗肿瘤试剂影响核苷酸的生物合成、代谢和利用。本发明的化合物可用于对人的治疗：不过，本发明并不打算仅限于此，本发明期望能用来治疗所有那些使用了本发明的活性化合物后效果良好的动物。

本发明还进一步体现在分别或一同使用本发明的一种药物化合物或试剂，以达到预防，减弱或改变与使用能影响核苷酸的生物合成、代谢或利用的抗病毒或抗肿瘤试剂有关的毒性的目的。

使用本发明的化合物，制剂和方法而获益的特定情况包括促红细胞生成系统已受到或很可能受到化学疗法(特别是能影响核苷酸的生物合成，代谢或利用的比学疗法)损害的情况。这样的情况包括治疗受到细胞还原癌症化学疗法或抗病毒化学疗法影响的动物(如人类患者)，此外，还特别包括需要保持血细胞数的兽医上的应用。

化合物和制剂还可用于防止和治疗抗癌或抗病毒化学疗法试剂对其它组织(包括-但不限于-胃肠上皮)造成的损害。用于该目的时，可以任选口服、栓剂或非肠道方式使用这些化合物和制剂。

通过减轻抗癌或抗病毒化学疗法对促红细胞生成系统和免疫系统的损害，本发明的化合物和方法可降低对机会感染或二次感染(细菌，病毒或真菌感染)敏感度高的危险。

通过与能促进嘧啶核苷被细胞摄入和磷酸化的试剂一同使用，可以提高本发明化合物的效力。这样的试剂包括促红细胞生长因子(如G-CSF，GM-CSF，SCF，酰化了的羟基嘌呤核苷及其同类物，促红细胞生成素，及中间白细胞素)、胰岛素，以及能生成胰岛素的碳水化合物(如单糖或单糖聚合物)。

与抗癌化学疗法有关的并发症的治疗

用标准的抗肿瘤化疗试剂[如5-氟尿嘧啶、氟脱氧尿苷、长春花生物碱(vinca alkafoids)，环磷酰胺和其它氮芥子气的烷化试剂、道诺红霉素、道克索红霉素、阿霉素(doxorubicin)氨甲蝶呤、胞嘧啶阿糖(cytosine arabinosine)、6-巯基嘌呤、硫代乌嘌呤、鬼臼毒、二氨二氯铂、或者这些细胞还原试剂的组合物]治疗的病人的白血细胞数(特别是嗜中性白细胞数)经常会急剧减少。对靠影响核苷酸的生物合成，代谢或利用而发挥作用的细胞毒性试剂的情形来说，每天使用(口服或非肠道使用)一有效剂量(如0.1-10.0克)的本发明的一种化合物(如三乙酰尿苷或其它尿苷、胞苷、脱氧胞苷或脱氧尿苷的酰基衍生物)，连续使用几天，可以降低嗜中性白细胞减少症的严重程度，而这种病经常在开始化学疗法后几天至几周内出现。这样就减少了整个疗程中病人受感染的可能性，使病人可能接受更大剂量的化学疗法试剂和/或接受比没有使用尿苷衍生物的对照组的病人更频繁的重复剂量药物的治疗，与此类似，通过使用本发明的化合物和试剂，可以弥补化学疗法所致的其它类型血细胞(淋巴细胞、血小板、红细胞等)数目的变化。

与本发明的化合物和方法一起使用特别有用的抗瘤试剂包括：5-氟尿嘧啶(5-FU)、5-FU的药物前体(如呋氟尿嘧啶ftorafur)、5′-脱氧氟尿苷、己胺甲酰氟尿嘧啶(carmofur)、氟尿苷、2′-脱氧氟尿苷、氟尿苷或2′-脱氧氟尿苷的药物前体衍生物、氟胞嘧啶(它还具有抗真菌活性)、阿糖胞嘧啶、阿糖胞嘧啶的药物前体、环胞苷、5-氮杂-2′-脱氧胞苷、阿糖5-氮杂胞嘧啶、N-磷酰基乙酰基-L-天冬氨酸(PALA)、吡唑呋喃菌素、6-氟杂尿苷、氮尿苷乙酯(azaribine)、6-氮杂胞苷、三氟-甲基-2′-脱氧尿苷、胸苷，以及3-脱氮杂尿苷。这样的抗肿瘤试剂以及各种其它治疗用的核苷类似物通过影响核苷或核苷酸的生物合成，利用或代谢起作用，于是，可通过使用本发明的嘧啶化合物来降低它们的毒副作用。

可在使用抗肿瘤或抗病毒试剂过程之前，之中和/或之后使用本发明的化合物。典型的情况是，在使用了一定剂量的癌症化学疗法试剂之后使用本发明的化合物，作为在使用了有效剂量的抗瘤试剂之后对正常组织的一个“补救”措施。

胃肠上皮对癌症化学疗法试剂(如氟尿嘧啶)很敏感。胃肠粘膜的粘膜炎、口炎或溃疡是化学疗法很普通的副作用，能导致腹泻、电解质不平衡和消瘦。本发明的化合物和制剂可用于防止或治疗由癌症化学疗法试剂引起的对胃肠通道(包括口腔)的损害。为这种目的使用本发明的化合物和制剂时可以随意把它们制成流体形态的溶液或悬浮液(作为漱口水、作为一种吞咽的制剂、或作为灌肠剂)，胶囊、糖衣药丸、药片、注射溶液或栓剂。有计划地使用本发明的化合物和制剂也能减轻抗癌或抗病毒核苷类似物对胃肠粘膜造成的损害。

局部使用本发明的化合物(如对头皮)可用来防止化学疗法所致的脱发症。

尿苷的酰基衍生物有助于防止或治疗由于氟尿嘧啶或尿苷的有关的氟化类似物(如氟尿苷或其药物前体，氟脱氧尿苷及其药物前体、呋氟尿嘧啶(ftorafur)，5′-脱氧氟尿苷)引起的毒性反应。对口服情形来说，有益的尿苷酰基衍生物是那些用短链脂肪酸取代的衍生物，(特别是醋酸酯)，或者用短链二价碳基氧基碳酸盐(如乙氧基碳酸酸酯)取代的衍生物。胞苷或脱氧胞苷的酰基衍生物也有助于治疗氟尿嘧啶或有关的氟化嘧啶类似物引起的毒性反应。

在典型的治疗过程中，患者接受一定剂量的氟尿嘧啶，氟尿嘧啶可以作为一种单独用的治疗试剂，或作为还包括使用其它抗肿瘤药物(如氨甲蝶吟、甲酰四氢叶酸、PALA或环磷酰胺)的治疗方法的一部分。使用5-FU几小时至一天以后，患者口服1至10克剂量的三乙酰尿苷。在随后2至4天的疗程中患者每隔6至8小时还口服一次同样剂量的5-FU。患者还可每周(或在更长时间间隔内)另外接受5-FU加TAU疗程的治疗。

尿苷(其次是胞苷)的酰基衍生物也有益于治疗或预防由N-膦酰基乙酰基-L-天冬氨酸(PALA)、吡唑呋喃菌素、6-氮杂尿苷、氮尿苷乙酯(azaribine)、三氟-甲基-2′-脱氧尿苷和3-脱氮杂尿苷引起的毒性反应。

脱氧胞苷的酰基衍生物有助于治疗或预防由抗肿瘤核苷类似物引起的毒性反应，上述类似物特指胞苷的类似物，如阿糖胞嘧啶或其药物前体、环胞苷、5-氮杂-2′-脱氧胞苷，阿糖5-氮杂胞嘧啶或6-氮杂胞苷。对口服的情形，脱氧胞苷有益的酰基衍生物为那些被短链脂肪酸取代的衍生物(特别是乙酸酯)

在一个涉及使用阿糖胞嘧啶或有关的胞苷的抗肿瘤类似物(主要用它们治疗白血病)的典型临床过程中，在使用一定剂量Ara-C之前或之后或与其同时口服0.5-10克剂量的脱氧胞苷的酰基衍生物。此后每隔6至8小时继续服用该剂量的脱氧胞苷的酰基衍生物1至4天。根据临床反应，每星期(或在更长的时间间隔内)重复这种治疗方法。

我们的意图是用抗肿瘤试剂来治疗它们常用来治疗的那些类型的肿瘤，比如，Ara-C及其有关的胞苷类似物对白血病有效，而氟尿嘧啶及其有关的氟化尿苷类似物则用于治疗结肠，胃，胰腺以及头颈部的肿瘤。在一个实施例中，用通常的剂量使用这些抗肿瘤试剂，在这种情况下，本发明的化合物主要是缓解了毒副作用的程度。在另一个实施例中，作用高于通常剂量的抗肿瘤试剂，在这种情况下能保证使用这样剂量较高的，疗效积极的剂量抗癌药物的安全。此外，由于使用本发明的化合物和制剂提高了抗癌试剂的治疗指数，可以使用一些特定的抗肿瘤试剂来治疗目前的标准疗法中不用它们来治疗的那些肿瘤。

病毒感染引起的并发症的治疗

受HIV感染的病人，特别是那些感染已经发展到“获得性免疫缺损综合症”(AIDS)的病人，会出现多种免疫系统严重受损引起的症状和疾病，而这些症状和疾病在一些情况下又进一步加重了免疫系统严重受损的程度。这些病人中有很多都使用了抗病毒化学疗法试剂(如AZT)，这些试剂同时对人体的免疫功能和红细胞生成作用有不利影响，会进一步降低人体对所有形式感染的抵抗力。使用本发明的化合物(口服，静脉注射或非肠道注射)能提高因抗病毒化学疗法试剂(特别是那些促进核苷酸的合成、代谢或利用的试剂，如AZT或二脱氧胞苷)而降低的血细胞数。因为在AIDS病人的化学治疗中贫血和对感染较高敏感度是限制剂量和限制速率的因素，所以用这些化合物治疗病人会降低化学治疗的副作用(进而提高人的健康程度)，并且如果适合，允许采用强度更大的化学治疗方法。AZT和二脱氧胞苷对骨髓以外的组织(包括肌肉和周围神经系统)有不利的副作用。本发明的化合物和制剂也可用于治疗或预防这样的副作用。

AZT和二脱氧胞苷以外的多种抗病毒核苷类似物都用于治疗病毒感染，包括(但不限于)HIV、疱疹或肝炎。这样的试剂的例子包括：5-乙基-2′-脱氧尿苷、5-碘代-2′-脱氧尿苷、5-溴代-2′-脱氧尿苷、5-甲氨基-2′-脱氧尿苷、2′，3′-二脱氧胞苷-2′-烯、3′-脱氧胸苷-2′-烯、3′-叠氮基-2′，3′-二脱氧尿苷、阿糖尿嘧啶、二脱氧尿苷、2′，3′-二脱氧-3′-氟胸苷以及(S)-1-(3-羟基-2-膦酰基甲氧基丙基)胞嘧啶(HPMPC)，参见WO89/09603，在此引入以供参考。本发明的化合物可用来治疗或预防这些和有关的其它抗病毒核苷类似物的有害副作用。

在治疗或预防抗病毒化学疗法引起的毒性反应过程中，可以在使用抗病毒试剂过程之前，之中和/或之后使用这些化合物和制剂。常用的抗病毒化学疗法(特别是用于治疗慢性病毒感染，如HIV感染的疗法)涉及每天，(经常是每天数次)使用一种或多种抗病毒试剂。根据观察到的临床效果，本发明化合物的使用可以每天几次，每天一次或次数更少。在所有的情形中，按通常的治疗方法，用这些抗病毒药物来治疗在临床上已证实上述药物对它们有效的那些类型的病毒感染。用抗病毒核苷类似物来治疗病人，或者可以降低标准剂量药物的副作用，或者可允许使用高于常规容许的或使用的剂量的抗病毒试剂。

为治疗AZT引起的毒性反应，可以使用尿苷和/或胞苷的酰基衍生物或者脱氧胞苷的酰基衍生物。脱氧胞苷的酰基衍生物特别有益。对口服使用方法来说，用短链脂肪酸(特别是乙酸酯)，或用短链二价碳基氧基碳酸酯(如乙氧碳酸酯)取代的脱氧胞苷，尿苷和胞苷的酰基衍生物较为可取。

在通常的临床条件下，患者每天需接受AZT2至4次，而且一般须无限期地使用下去。根据临床反应，可以每周一次乃至每天经4次口服1-10克剂量的尿苷、胞苷或脱氧胞苷(或者两种或全部上述核苷混合物)的酰基衍生物。

脱氧胞苷的酰基衍生物有益于治疗或防止二脱氧胞苷引起的毒性反应。

与疟疾感染有关的并发症的治疗

疟疾寄生物(如yoelli疟原虫或恶性疟原虫)，依赖于嘧啶核苷酸生物合成的新生合成通道(de novo sythesis pathway)；哺乳动物的细胞一般能利用新生通道或“抢救”通道，通过这些通道高级的核苷酸先质(如尿苷或胞苷)被结合进细胞内的核苷酸集中处。

5-氟乳清酸酯(一种嘧啶核苷酸先质乳清酸的类似物)对依赖于新生嘧啶生物合成的疟疾寄生物有毒。其它新生嘧啶生物合成的抑制剂(如PALA 、吡唑呋喃菌素或6-氮杂尿苷也对疟疾寄生物有类似的毒性。嘧啶生物合成的抑制剂(特别包括氟乳清酸酯)还对哺乳动物有毒。不过对用5-氟乳清酸酯(或其它嘧啶生物合成的抑制剂)治疗过的哺乳动物使用尿苷会减弱前者的宿主毒性而不会降低其抗疟疾的活性。口服用的能提高血液中尿苷含量的活性试剂是本文中尿苷的有益的来源。这样的试剂包括本发明的尿苷的酰基衍生物。在治疗疟疾过程中，使用了有效抗疟疾剂量的氟乳清酸酯。在使用氟乳清酸酯之前，之后或与此同时，使用了尿苷或胞苷的酰基衍生物(三乙酰尿苷特别有益)，其使用剂量足以减轻氟乳清酸酯的毒性。酰化了的尿苷或胞苷衍生物(如三乙酰尿苷)的常用剂量为1-10克，使用次数应满足使氟乳清酸酯的毒性降至最低的要求，如每天一至四次，根据需要可重复使用上述剂量的氟乳清酸酯或尿苷，以分别克服疟疾感染和降低宿主毒性。

E.本发明化合物和试剂的使用和组成

根据治疗情况，可以采用口服，非肠道注射、静脉注射、局部使用或其它方式使用本发明的化合物和试剂。

通过监视治疗效果，本领域的技术人员可以很容易地确定三乙酰尿苷，(或尿苷、胞苷、脱氧胞苷或脱氧尿苷的其它酰基衍生物)的最佳剂量和服药次数安排。

可以长期或间歇地使用本发明的化合物和试剂。根据化学治疗试剂的毒性特征，可以选择在使用细胞还原或抗病毒化学治疗试剂之前，之中或之后使用这些化合物和试剂。

用于口服的尿苷、胞苷、脱氧胞苷或脱氧尿苷的有益的酰基衍生物是那些核糖或脱氧核糖环上的羟基被短链(2-6个碳原子)脂肪酸取代的衍生物。用于口服的、有益的衍生物还有羟基被含3-7个碳原子的烃基氧化羰基取代的嘧啶核苷。

口服尿苷、胞苷、脱氧胞苷或脱氧尿苷的酰基衍生物的剂量一般在每天0.5-20克之间，最常见的是在每天2-10克之间。

粉末状的尿苷、胞苷、脱氧胞苷或脱氧尿苷的酰基衍生物都是以胶囊或药片形式口服，尽管溶液、乳剂或悬浮液形式也可用于口服。

本发明的化合物可随意在可生物降解，可生物腐蚀或其它逐渐释放的基质中配制而成，以便在口服或皮下注入后持续释放这些化合物。对静脉内或肌肉注射的情形，可随意在脂质体中配制上述化合物。

将具有药理学活性的化合物与适当的在药物学上可接受的载体任意结合到一起，上述载体包括使上述活性的化合物便于处理的赋形剂和助剂。可以把它们制成药片，糖衣药丸，胶囊和栓剂来使用。制剂比如可以口取，经直肠或阴道的方式使用，或通过口腔的颊囊释放，并且可随意以溶液的形态注射、口服或局部使用。制剂可以含约0.1-99％，(最好约50-90％)的活性化合物，并使它(们)与赋形剂结合在一起。

对注射或静脉内输注这样的非肠道使用方法，活性化合物悬浮或溶解在水溶介质(如无菌水或盐水溶液)之中。可注射的溶液或悬浮液可随意含一种表面活性剂，如聚氧乙烯脱水山梨醇酯、脱水山梨醇酯、聚乙烯醚或溶剂(如丙二醇或乙醇)。溶液通常含0.01-5％的活性化合物。活性化合物可随意溶解在药物及植物油中供肌肉内注射用。这样的制剂是一种油溶液其中含约10％-50％的活性化合物。

合适的赋形剂包括填料以及粘合剂，填料比如可以是糖，如乳糖，蔗糖，甘露糖醇或山梨醇，纤维素制剂和/或钙的磷酸盐(如磷酸三钙，磷酸氢钙)；粘合剂可以是用比如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉或土豆淀粉制成的淀粉糊、或者是明胶，黄蓄胶，甲基纤维素，羟基丙基甲基纤维素，羧基甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮。

辅助剂包括流动调节试剂和润滑剂，比如硅石、滑石、硬脂酸及其盐(比如硬脂酸镁或硬脂酸钙和/或聚乙二醇。糖衣药丸的核心外有一适当的包层，需要的话它应能抗胃液的腐蚀。为此，采用了浓缩的糖溶液，溶液可随意含有阿拉伯树胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化钛，漆溶液和适当的有机溶剂或溶剂混合物。为制备抗胃液腐蚀的包层，采用了适当的纤维素制剂(如邻苯二甲酸乙酰纤维素或邻苯二甲酸羟基丙基甲基纤维素)的溶液。比如，也可随意把染料或色素加入药片或糖衣药丸的包层中，用来区别或表现不同剂量化合物的特性。

制备本发明的药物制剂的方法本身是众所周知的，比如，可通过通常的混合、造粒、制造糖衣、分离以及冻干工艺来完成。于是，生产口服药物制剂的方法是，使活性化合物与固态赋形剂结合，并且如果想要或需要的话，可以随意粉碎所得的混合物并加工粒状的混合物，最后得到药片或糖衣丸。

其它用于口服的药物制剂包括用明胶做的挤压成形的胶囊，以及用明胶和增塑剂(例如甘油或山梨醇)做的软包皮胶囊。挤压成形的胶囊含有粒状的活性化合物，这些化合物可随意与填料(如乳糖)、粘合剂(如淀粉)和/或润滑剂(如滑石或硬脂酸镁以及增塑剂相混合。在软胶囊中，活性化合物最好溶解或悬浮在适当的液体(如脂肪酸、液态石蜡或聚乙二醇)中。此外，也可随意加入稳定剂。

非肠道使用试剂的合适的配方包括水溶性活性化合物(如水溶性盐)的水溶液。此外，也可使用适于与油溶性注射悬浮液共容的活性化合物的悬浮液。适用的亲油溶剂或媒介包括脂肪油(如芝麻油或椰子油)或合成的脂肪酸酯(比如油酸乙酯或甘油三酯)。水溶性注射悬浮液可随意包括能提高悬浮液粘度的物质，这些物质比如可以包括羧基甲基纤维素钠，山梨醇和/或葡聚糖。悬浮液可随意含有稳定剂。

在另一个实施例中，活性化合物可以配制成皮肤洗剂的一部分，用于局部使用。适用的亲油溶剂或媒介包括脂肪油(如芝麻油或椰子油)或合成的脂肪酸酯(比如油酸乙酯或甘油三酯)。

在另一个实施例中，把活性化合物配在用于直接治疗胃肠粘膜疾病的媒介中。这样的例子包括口腔漱洗液，即将要吞下去的液体(溶液或悬浮液)，或粘性液体(例如甲基纤维素、羧基甲基纤维素，黄原胶等的溶液。这些液体是通过口服或通过直肠使用的。

直肠使用的其它药物制剂(特别是用于治疗结肠和直肠的制剂)包括如由活性化合物与一种栓剂的基剂结合而成的栓剂。适用的栓剂基剂比如可以是天然的或合成的甘油三脂、链烷烃、聚乙二醇或高级链烷醇。此外，也可用由活性化合物与一种基剂结合而成的明胶直肠胶囊。基剂材料比如可包括液态的甘油三酯、聚乙二醇或链烷烃。

F.本发明化合物的合成

通过使一种嘧啶核苷与一种被活化的羧酸反应，可以合成出非甲基化的嘧啶核苷的酰化衍生物，被活化的羧酸是已用适当的试剂处理过的羧酸，处理后其羧酸根的C比原来羧酸中的C对亲核的侵袭更加敏感。用于合成本发明化合物的有用的活性羧酸的例子为酰基氯、酸酐、n-羟基丁二酰胺酯或者用BOP-DC活化的羧酸。作为另一种选择，羧酸也可通过偶合剂(像二环己基碳二亚胺，如DCC)与嘧啶核苷相连接。

在制备本发明的酰基化合物的过程中，当期望的酰基衍生物的酸来源带有影响酰化反应的基团(例如羟基或氨基)时，这些基团在制备酐之前分别被保护基团如叔丁基二甲基甲硅烷醚或t-BOC基团阻挡住。比如乳酸被用带叔丁基二甲基氯硅烷转化为的2-叔丁基二甲基甲硅烷氧丙酸，然后所生成的甲硅烷酯被水溶性基剂水解。通过使被护酸与DCC反应可以生成酐。采用标准工艺，用氨基酸制备出N-t-BOC或N-CBZ衍生物，然后N-t-BOC或N-CBZ又被DDC转化为酐。在含有多于一个羧酸根的酸(如琥珀酸、富马酸或己二酸)的参与下，所期望的二羧酸的酸酐与嘧啶核苷在嘧啶中或在嘧啶加上二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺中发生反应。

按照标准方法，在一适当的溶剂，特别是在(i)二氯甲烷以及(ii)在二甲基乙酰胺或二甲基甲酰胺的混合物中使用DCC，使氨基酸与胞苷和脱氧胞苷的外向环氨基、以及与嘧啶核苷的醛糖部分上的羟基相偶合。

通过使核苷在溶剂(例如嘧啶或者嘧啶加上二甲基甲酰胺)中在酐条件下与适当的二价碳基氯甲酸酯反应，可以制备出非甲基化嘧啶核苷的二价碳基氧化羰基衍生物。在真空环境下排除溶剂，用柱色谱法提纯残渣。

本领域普通技术人员显然清楚，用其它合成方法也可制备出本发明的化合物。

下列例子示意了(但不限定)本发明的方法和制剂。其它对本领域普通技术人员显而易见的，在临床治疗中经常遇到的，其它适当改进和相互适应的多项条件和参数也应包括在本发明的精神和保护范围之中。

实施例

例1：口服三乙酰尿苷缓解5-氟嘧啶的血液学毒性

目的：进行这项研究的目的是想确定口服TAU以使小鼠摆脱5-FU毒性影响的效果是否比口服尿苷本身更好。用骨髓细胞构成(Bone marrow cellularity)和周围血细胞数作为5-FU毒性的指数。

方法：在实验开始那天的中午12时对45个雌性Balb/C小鼠(每个20克重)使用5-FU[150mg/Kg，腹膜内注射(i.p.)]然后把这些动物分为5组：对照组[水，口服(i.p.)]，口服尿苷400mg/Kg剂量，口服尿苷800mg/Kg剂量，非肠道使用(腹膜内注射)尿苷400mg/Kg剂量以及口服TAU500mg/Kg/剂量。

使用5-FU2小时后，开始用尿苷或三乙酰尿苷进行抢救治疗。各组在使用5-FU当天下午2时，4时，6时以及次日上午9时、11时、下午1时、3时、和5时接受指定的治疗。根据情况，每剂量的尿苷或TAU溶解在0.2ml水中用管饲法使用，或溶解在0.2ml盐水中用i.p.注射法使用。

使用5-FU7天后，从每组5个小鼠的眼眶之下的窦中采集0.2-0.3ml血，注入到EDTA中，供随后血细胞分类计数用。用颈部脱位法处死小鼠。取下股骨，排出其中的血细胞供计数用；取出脾并进行称重。使用5-FU13天后，对每组剩下的5个小鼠进行放血、处死并取出它们的脾脏。

结果

第7天

使用5-FU致使所有检测到的类型的血细胞都下降。使用5-FU7天后，通过口服TAU治疗过的动物中的嗜中性白细胞、淋巴细胞和血小板数都显著地高于对照组的动物(表1)。特别值得注意的是接受了TAU的小鼠中的白细胞数比腹膜内注射同等摩尔数剂量的尿苷的小鼠高。口服TAU的小鼠中的细胞数也比口服同样摩尔数(400mg/Kg/剂量)或两倍摩尔数(800mg/Kg/剂量)剂量的尿苷的小鼠高。

口服TAU及腹膜内注射尿苷的小鼠中的血小板数在正常范围内(700-800K/μl)。血小板数在其他组中低于正常水平，在对照组小鼠中最低(表1)。

用口服TAU及非肠道使用尿苷法治疗过的小鼠中的骨髓细胞数显著高于其他组中的任何一个(表2)。

第11天

一个重要的结果是，接受TAU的组中小鼠的嗜中性白细胞和RBC的含量高于用其他方法治疗过的组，包括腹膜内注射同等摩尔数剂量尿苷的那些小鼠(表3)。

脾重是从骨髓损伤中恢复的小鼠中促红细胞生成活性的一个指数。使用5-FU11天后，口服TAU的小鼠中的脾重显著大于其他治疗组，对照组中的脾重最小(表4)。

结论

这项研究的结果表明，口服TAU使小鼠从5-FU毒性中解救出来的效果好于仅口服同等摩尔数或两倍摩尔数的尿苷，并且好于腹膜内注射同等摩尔数剂量尿苷的效果。

表1 使用5-FU7天后的血细胞数

WBC 嗜中性白细胞淋巴细胞血小板 RBC对照 3.4±0.1 0.24±0.05 3.18±0.07 387±72K/μl 8.05±0.11尿苷400口服 4.4±0.5* 0.48±0.23 3.01±0.77 434±114 7.66±0.12尿苷800口服 4.6±0.4* 0.88±0.22* 3.76±0.27 646±108 8.24±0.26尿苷400i.p. 4.6±0.4* 0.83±0.24* 3.80±0.30 773±54** 8.06±0.05TAU500口服 5.9±0.4* 1.20±0.23** 4.72±0.36** 723±57** 8.27±0.16除RBC的血细胞数单位为M/μl外，其余皆为K/μl。*＝大于对照值，P＜0.05**＝大于对照值，P＜0.01

表2 使用5-FU7天后髓细胞数和脾重

髓细胞数脾重对照 1.5±0.2×10⁶/股骨 71±2.6mg尿苷400口服 1.6±0.2×10⁶ 74±2.4尿苷300口服 2.9±0.9×10⁶ 74±6.4尿苷400i.p. 5.0±0.7×10⁶** 78±5.5TAU500口服 3.0±0.5×10⁶* 78±3.5*＝大于对照值，P＜0.05**＝大于对照值，P＜0.01

表3 使用5-FU7天后的血细胞数

WBC 嗜中性白细胞数淋巴细胞数血小板数 RBC对照 5.2±0.3 0.48±0.12 4.68±0.11 2280±193 7.31±0.05尿苷400口服 4.6±0.5 0.84±0.19 3.65±0.27 1940±177 7.44±0.14尿苷800口服 4.9±0.4 0.82±0.19 4.07±0.38 2127±143 7.33±0.16尿苷400i.p. 5.1±0.5 1.20±0.21* 3.84±0.38 1706±88 7.78±0.22TAU 500口服 5.4±0.5 1.89±0.12** 3.29±0.36 1446±160 8.05±0.16**除RBC细胞数单位为M/μl外，其他都为K/μl*＝大于对照值，P＜0.05**＝大于对照值，P＜0.01

表4 使用5-FU11天后的脾重

脾重对照 76±7mg尿苷400口服 103±15尿苷800口服 99±6*尿苷400i.p. 104±6*TAU500口服 143±11***＝大于对照值，P＜0.05**＝大于对照值，P＜0.01

例2 按一种剂量依赖关系TAU加速用5-FU治疗过的动物的促红细胞生成系统的恢复

目的

这项试验的目的是为了证实和发展以前的一些发现，即口服TAU能加速用5-氟尿嘧啶(5-FU)治疗过的小鼠中促红细胞生长系统的恢复，以及观察TAU剂量的增加与这些用5-FU治疗过的小鼠的促红细胞生成系统的响应之间的关系。

方法

在实验开始那天下午1时，对70只各重约20克的雌性Balb/G小鼠中的每一个在腹膜内注射5-FU(1500mg/Kg)。然后把这些动物分成5个不同的治疗组：对照组(水)以及剂量分别为100、250、500和1000mg/Kg/治疗的口服TAU组。在使用5-FU当天下午3时、5时、7时30分、10时以及第二天上午9时、11时、下午1时、3时、6时和10时使用试验的化合物；最后一次使用化合物是在那一次注射5-FU两天后的上午11时。每次治疗都是用管饲法与0.2ml体积的水同时口服，只有最后一份剂量的TAU是和0.4ml水一起使用的。

使用5-FU后的第7天和第11天，用眼眶后放血法从每组7个小鼠中采集0.2-0.3ml血并注入EDTA，供随后血细胞分类计数用。用颈部脱位法处死小鼠，取出它们的右股骨，排出骨内物质供细胞计数用；取出它们的脾进行称重。

结果

第7天

TAU剂量增加时，骨髓中有核细胞的数量也增加。接受TAU100这一组中这样的细胞数近似、等于对照组中的细胞数，而与对照组相比，TAU500和TAU1000组中骨髓细胞构成的差别显然更大(表5)。

TAU剂量为500和1000mg/Kg/治疗的治疗过程使其白细胞数显著大于对照组。

总的嗜中性白细胞数也显示出随剂量的增加而增加，TAU1000组中的上述数量约达到对照组的3倍。

与对照组相比，TAU500和TAU1000组中的淋巴细胞数显著提高。

TAU250、500和1000组中的血小板数显著提高。剂量响应曲线在500mg/Kg/治疗处达到平直部分(表6)。

表5 TAU剂量增加对使用5-FU7天后小鼠中红细胞生长作用的影响。所有的血细胞数单位都是K/μl 。

髓细胞 WBC 嗜中淋巴对照 1.70±.35 2.46±0.13 0.026±0.011 2.43±0.13TAU100 1.77±0.18 2.47 ±0.04 0.014±0.008 2.46±0.04TAU250 2.91±0.48 2.76±0.20 0.027±0.012 2.71±0.20TAU500 3.93±0.39* 4.06±0.14* 0.037±0.020 3.99±0.15*TAU1000 4.42±0.34* 3.57±0.25* 0.071±0.027 3.44±0.23**表示不同于对照组，P＜0.01

表6 TAU剂量增加对使用5-FU7天后小鼠中红血细胞(RBC)和血小板(PLT)的影响

RBC(M/μl) PLT(K/μl)对照 8.38±0.18 308±52TAU100 8.20±0.07 440±46TAU250 8.51±0.06 601±46**TAU500 8.43±0.16 712±42**TAU1000 8.65±0.15 715±35****表明不同于对照组，P＜0.01

第11天

与对照组相比，每个剂量的TAU处的脾重都略微增加，但只在TAU250组中有统计重要性(104.2±3.5mg比79.7±3.1；P＜0.05)

与对照值相比，TAU250、500和1000组中的总的嗜中性白细胞救显著提高。

对红细胞数来说，与对照值(每微升7.90±0.09×10⁶)相比，在TAU500组(每微升8.72±0.18×10⁶)和TAU1000组(每微升8.63±0.16×10⁶)中显著增加了的血细胞容量遵循一种类似的模式(表7)。

表7 TAU剂量对使用5-FU后第7天和第11天的小鼠中白细胞容量

(HCT)的影响

对照 T100 T250 T500 T1000HCT(7天) 38.50±0.88 37.77±0.37 40.04±0.38 39.50±0.61 40.84±0.68HCT(11天) 36.94±0.51 36.80±0.88 37.47±0.83 41.16±0.88 41.55±0.77

P＜0.01 P＜0.001

结论

本试验的结果证实和发展了以前的发现，即用TAU治疗接受了5-FU化学疗法试剂的动物可以迅速扭转5-FU对红细胞生成系统的有害作用，并且TAU的效果与使用的剂量有关。

例3.尿苷的酰基衍生物减轻了5-FU对骨髓的毒性

目的

本实验的目的是试验和比较尿苷和尿苷的衍生物对缓解化学疗法试剂5-氟尿嘧啶(5-FU)对小鼠促红细胞生成系统损害的效力。

方法

在研究开始的那天下午1时，对98个重约20克的雌性Balb/c小鼠中的每只进行一次性腹膜内注射5-FU(150mg/Kg)。然后把这些动物分为7组，对照(盐水)、尿苷(300mg/Kg/治疗)、三乙酰尿苷(TAU；455mg/Kg/治疗)、苯甲酰尿苷(BU，428mg/Kg/治疗)、乙氧羰基尿苷(ECU，389mg/Kg/治疗)，辛酰尿苷(OU；455mg/Kg/治疗)和戊酰尿苷(VU；403mg/Kg/治疗)。所有这些剂量都是等摩尔数的，并且药物溶于0.4ml水中通过腹膜内注射使用。在开始日的下午3：30，6：00和8：30，用与其相应的试剂治疗这些组中的小鼠。次日上午9：30、中午12：00、下午2：30和5：00使用这些化合物。再次日的上午10：00进行最后一次治疗。

使用5-FU后的第7天和11天，用眼窝后放血法从每组7个小鼠中采集0.2-0.3ml血并注入EDTA，供随后血细胞分类计数用，用颈部脱位法处死小鼠，取出它们的右股骨，排出血细胞供细胞计数用；取出它们的脾并进行称重。

结果

第7天

即使在这个第一时间点处，每一个尿苷衍生物都能加速促红细胞生成系统的一方面或多方面从5-FU损伤中恢复的过程。这样，与盐水对照组相比，所有组中的脾重都提高了。尿苷(80.4±7.8mg)ECU(75.7±5.0mg)和VU(69.1±1.7mg)组与对照62.7±1.8的差别达到了具有统计意义(P＜.05)的程度。

TAU的骨髓细胞数比对照值提高了40％(分别为每微升4.50±.77×10³和每微升2.78±.45×10³)。

对白血细胞数而言，与盐水对照(每微升4.60±.70×10³)相比，用ECU治疗过的(每微升7.26±.31×10³，P＜.01)和用VU治疗过的(每微升6.57±.49×10³；P＜.05)都显著提高。

对血小板而言，与盐水治疗过的对照，(每微升523.2±71.4×10³)相比，用尿苷(每微升785.3±57.5×10³：P＜.02)、BU(每微升829.6±×10³，P＜.01)和VU(每微升825.7±26.7×10³；P＜.002)治疗过的组中有显著提高。

与盐水对照组(每微升0.013±0.009×10³)相比，差不多所有的治疗中的总的嗜中性白细胞数都有升高的趋势，但只有VU组(每微升0.141±.027×10³)的提高确实具有统计学的意义(P＜.002)。

对淋巴细胞数而言，用ECU(每微升7.19±0.32×10³；P＜.01)和VU(每微升6.42±0.49×10³)治疗过的组显著大于盐水治疗的对照组，(每微升4.59±0.70×10³)。

仅就本实验中所用的剂量而言，和任何其它衍生物相比碳链最长的辛酰尿苷被证明略带毒性。本组中动物数量不足，无法提供第11天的数据。不过剂量最优化研究(见例3A)表明使用较低剂量的辛酰尿苷对使用5-FU后促红细胞生成作用的恢复具有良好的效果。

第11天

通过利用本实验中所用的尿苷衍生物的治疗，事实上促红细胞生成功能的每一个指数都得到显著改善，这些指数包括脾重、白血细胞数、红血细胞数、血细胞容量、嗜中性白细胞数和淋巴细胞数(表8)。每个治疗组的脾重都高于对照组(94.7±7.4)其中尿苷组(121.6±9.7)BU组(126.9±12.3)和VU组(139.4±8.0)与对照组的差别具有统计意义(P＜.05)。

结论

本发明种类繁多的尿苷衍生物都助于减轻使用化学疗法试剂5-FU所造成的损害。

表8.尿苷和尿苷衍生物对使用5-FU7天后的小鼠中红细胞生成作用的影响。白血细胞数(WBC)、嗜中性白细胞数(Neut)和淋巴细胞数(lym)的单位是K/μl；红血细胞的单位(RBC)是M/μl。

WBC RBC HCT％ Neut LymCon 3.37±.68 7.11±.1 32.97±0.4 .09±.047 3.3±.7Urd 5.20±.47* 7.32±.2 34.67±0.9 .60±.180** 4.6±.4TAU 6.23±.55** 7.35±.2 35.01±1.2 .55±.164** 5.6±.4*BU 6.20±.49** 7.62±.1** 36.87±0.6** 1.04±.295** 5.1±.4*ECU 5.51±.64* 7.65±.2* 37.54±1.0** .66±.166** 4.8±.5*VU 6.31±.42** 7.83±.1** 38.31±0.8** .97±.136** 5.2±.4**表明不同于对照组，P＜.05**表明不同于对照组，P＜.01Con＝对照，Urd＝尿苷；TAU＝三乙酰尿苷；BU＝苯甲酰尿苷；ECU＝乙氧羰基尿苷：VU＝戊酰尿苷

例3A 辛酰尿苷缓解了5-FU的血液学毒性。

目的

本实验的目的在于检验辛酰尿苷(Oct-U)缓解5-氟尿嘧啶(5-FU)对红细胞生成作用的毒性作用的效力。

方法

在研究开始当天的上午11：00，对重约20克的14只Balb/c雌性小鼠中的每只进行一次性腹膜内注射5-FU75mg/Kg。随后对这些动物中的一半进行Oct-U治疗(100mg/Kg/治疗，腹膜内注射)，同时对另一半(对照)注射生理盐水。在开始日的下午2：30、4：30和7：00以及次日上午9：30、中午12时，下午2：30和5：00使用Oct-U和盐水。另外一组7只小鼠(基础)不接受5-FU，也不接受治疗。

结果

正如利用本顶研究中所采用的每一顶和所有各顶指数所测量的那样，使用5-FU造成对促红细胞生成系统具有统计意义的损害，这些指数包括脾重，骨髓细胞构成、WBC数、总嗜中性白细胞数、淋巴细胞数、RBC数、血细胞容量百分比和血小板数(表9和10)。随后用Oct-U治疗接受了5-FU的小鼠，结果使得促红细胞生成作用的每一项以及各项参数部得显著的改善(表9和10)。

结论

用辛酰尿苷治疗接受了5-FU的小鼠可以缓解5-FU对红细胞生成作用的毒性作用。

表9.辛酰尿苷对使用5-FU7天后的小鼠中骨髓细胞构成和骨髓细胞生成的影响。

骨髓细胞白细胞嗜中性白细淋巴细胞数

(WBC) 胞数(Nent) (Lym)基础 8.96±.32 6.89±.25 1.85±.24 4.78±.23对照 4.16±.40* 4.04±.19* 0.26±.03* 3.74±.19*Oct-U 7.73±.68** 5.96±.47** 1.19±.22** 4.62±.29***表明对基础组P＜.01**表明对对照组P＜.0l

表10.辛酰尿苷对使用5-FU7天后的小鼠红血细胞(RBC)、血小板(PLT)和脾重的影响

RBC PLT 脾重

(M/μl) (K/μl) (mg)基础 8.56±.17 897±21 83.6±1.7对照 7.98±.13* 963±13* 75.4±2.4*Oct-U 8.13±.14 1243±59* 87.2±3.7***表示对基础P＜.05**表示对对照组P＜.05

例4.使用尿苷的酰基衍生物后的血浆尿苷含量。

方法

在使用例3中用来减轻5-FU所致毒性的尿苷的酰基衍生物后的多个时间点处(15分钟，30分钟，1小时，2小时)，测定小鼠中血浆的尿苷含量。小鼠(每种化合物每个时间点的n＝3)接受下列化合物的腹膜内注射：尿苷(300mg/Kg)三乙酰尿苷(TAU，455mg/Kg/治疗)、苯甲酰尿苷(BU；428mg/Kg/治疗)、乙氧羰基尿苷(ECU；389mg/Kg/治疗)；辛酰尿苷(OU；455mg/Kg/治疗)以及戊酰尿苷(VU；403mg/Kg/治疗)。尿苷的酰基衍生物的剂量与300mg/Kg尿苷的摩尔数相等。在适当的时间点，从小鼠眼窝后的窦处取出血样(200μl)并立刻进行离心处理。离心处理后用2倍体积的甲醇对75μl所得的血浆进行去蛋白。用50mM磷酸钠缓冲溶液(PH6.0)对上层清液进行冷冻干燥和重建，并且用HPLC法在一倒相(C13)柱上分析尿苷含量。用甲醇梯度法(15分钟内从2％至35％)将50mM磷酸钾缓冲溶液(PH6.0)中的尿苷从其它血浆成分中分离出来。用260nM处的UV吸收定量化检测尿苷。

结果

如表11中所示，使用所有试验的尿苷酰基衍生物都能提高血浆尿苷含量。对照动物(没有接受任何外来的尿苷或胞苷衍生物的小鼠)中的血浆尿苷含量为1.1±0.1μm。

表11 使用尿苷的酰基衍生物后小鼠中的血浆尿苷浓度时间： 15分 30分 1小时 2小时化合物：血浆尿苷浓度(μM)尿苷 911 415 185 5.3

±35 ±86 ±21 ±1.5三乙酰尿苷 666 348 24.5 15.1

±70 ±28 ±7.5 ±1.6苯甲酰尿苷 1160 353 178 8.6

±45 ±87 ±54 ±1.7戊酰尿苷 1001 347 266 7.4

±113 ±117 ±41 ±0.4辛酰尿苷 56 14 17 2.2

±22 ±7.4 ±2.9 ±0.04乙氧羰基尿苷 250 83 44 2.0

±18 ±0.1 ±12 ±1.6

使用所有的尿苷的酰基衍生物都能提高血浆尿苷含量，如表11所示，通过脱酰作用，酰基衍生物持续不断地形成尿苷。这并不能从血浆尿苷含量中反映出来，因为当通过酰化尿苷衍生物的脱酰作用而生成尿苷时，尿苷被摄入细胞会使过程中产生出来的尿苷不断减少。重要的是应注意到，酰化尿苷衍生物对缓解5-FU毒性的作用通常比等摩尔量的尿苷更好(见例子中的表8)。

例5.提高了5-FU的治疗指数(I)：TAU对单独将5-FU用于带肿瘤小鼠的补救作用。

目的

本实验的目的在于评价和比较尿苷和TAU提高带肿瘤小鼠模式中5-FU治疗指数的能力。

方法

对60个CD8F1(BALB/C×DBA/8)雌性小鼠(移植了第一代CD8F1自发哺乳动物的腺癌)进行每周一次的化学疗法治疗，治疗包括一次性使用150mg/Kg 5-FU，然后采取各种补救措施。化学疗法开始时平均肿瘤大小是157mg。将这样的每周一次的化学疗法过程重复进行三次。

为评价各种补救疗法，将这些动物分成6组，每组10个，各种情况如下：1.盐水：盐水(没有5-FU)2.单独用5-FU： 5-FU(150mg/Kg i.p.)3. 5-FU+媒介： 5-FU(150mg/Kg i.p.)

+媒介¹4.5-FU+i.p尿苷： 5-FU(150mg/Kg i.p.)

+尿苷(3500mg/Kg i.p.)5.5-FU+口服尿苷： 5-FU(150mg/Kg i.p.)

+尿苷(5000mg/Kg P.o.)²6.5-FU+口服TAU： 5-FU(150mg/Kg i.p.)

+TAU(7582mg/Kg p.o.)²1. 1∶1油水乳剂+2.5％吐温-802. 7582mg TAU和5000mg尿苷为等摩尔数剂量。

结果

在这三周化疗的结论中，比较了每个组中的死亡率，并且对足够数量的存活动物，比较它们的体重和肿瘤的大小。结果归纳在下面的表12中。

表12 联合使用5-FU和TAU或尿苷的作用组别死亡率平均最终肿瘤重量(mg)1.盐水 3/10 73912.只用5-FU 9/10 *3.5-FU+媒介 10/10 *4.5-FU+i.p.尿苷 1/10 16045.5-FU+口服尿苷 0/10 8966.5-FU+口服TAU 1/10 1013*由于死亡率高而变得没有意义

只接受盐水的组中的死亡是由于疾病的发展，接受了5-FU但不接受补救的组中的死亡是由于5-FU本身的毒性。

结论

TAU和尿苷有抢救带肿瘤小鼠脱离5-FU的毒害作用的效果。两种试剂都提高了5-F，U对带肿瘤小鼠的治疗指数，并容许使用与提高抗癌效果相称的更大剂量的药物。

例6：5-FU治疗指数的提高(II)：用TAU结合化学疗法抢救带肿瘤小鼠。

目的

本实验的目的在于评价和比较TAU和尿苷在与膦酰基乙酰基-L-天冬氨酸(PALA)、甲氨喋呤钠(MTX)和甲酸四氢叶酸(LV)一起使用时提高5-FU的治疗指数的能力，采用的是一种能提高5-FU的细胞毒性潜力的药物剂量投配方式。

方法

对40个移植了CD8F1自发胸部肿瘤(初始肿瘤重量为155mg)的雄性CD8F1小鼠进行下列方法的每周一次的治疗。

PALA-19小时→MTX-2.5小时→5-FU-

100mg/Kg 300mg/Kg 150mg/Kg2小时→LV-19小时→LV

300mg/Kg 300mg/Kg

为评价和比较TAU和尿苷的效力，将小鼠分成四组，每组10个动物。1.对照盐水2.尿苷i.p.：尿苷(3500mg/Kg)3.尿苷(口服)：尿苷(4000mg/Kg)4.TAU(口服)： TAU(6066mg/Kg)¹ ¹与4000mg/Kg尿苷同等摩尔数剂量

在每周开始使用一定剂量的5-FU两小时之后，每隔8小时使用一次盐水、尿苷或TAU，共进行5次这样的治疗。这样每周一次的治疗共连续进行三周。在化疗方法的第三个阶段的一周之后，检查每组的死亡率，对足够数量的存活动物，测量它们的体重和肿瘤的重量。

结果

表13 TAU对接受联合的化疗方法的带肿瘤小鼠死亡率的

影响组别死亡率平均最终肿瘤重量对照 10/10 **尿苷i.p. 0/10 110尿苷p.o. 5/10 **TAUp.o. 1/10 162**由于死亡率高而变得无意义

对照组的死亡是由于5-FU的毒性。未治疗小鼠在这个时间点的肿瘤重量平均值约为3000mg。

结论

TAU和尿苷提高了使用这样的试剂的临床相关组合的5-FU的治疗指数。口服TAU与腹膜内注射尿苷同样有效，并且比口服同等摩尔数剂量的尿苷效果更好。

例7 口服二乙酰脱氧胞苷缓解了阿糖胞嘧啶对促红细胞生成系统的毒性。

目的

本实验的目的是检验二乙酰脱氧胞苷(DAdC)和棕榈酰脱氧胞苷(PdC)对缓解化疗试剂阿糖胞嘧啶(Ara-C)对促红细胞生长系统的毒性作用的效力。

方法

21个重约20g的Balb/C雌性小鼠中的每一个每天腹膜内注射Ara-C100mg/Kg，共注射5天。将这些小鼠分成三个治疗组：口服水(对照组)；口服DAdC(411mg/Kg。/治疗)以及腹膜内注射PdC(200mg/Kg/治疗，在0.2％的吐温-80中使用)。在每天上午9时和下午6时两次用水、DAdC或PdC治疗小鼠。在每种情况下治疗容量为0.2ml。另外7个小鼠不接受Ara-C，也根本不接受治疗(基础组)。

在使用5-FU后的第7天和第11天，用眼窝后窦放血法从每组7个小鼠中采集0.2-0.3ml血，并注入EDTA，供随后血细胞分类计数用。用颈部脱位法处死小鼠，取下它们的脾并进行称重。

结果

与基础小鼠相比，使用Ara-C显著抑制了对照组小鼠的脾重、WBC数、总嗜中性白细胞数、淋巴细胞数和血小板数(表14)。没有发现Ara-C对促红细胞生长作用本身(RBC数、血红蛋白和血球容量)有任何毒性。

口服DAdC和腹膜内注射PdC对小鼠进行治疗显著扭转了Ara-C对红细胞生成作用的毒害。其脾重、WBC数、总嗜中性白细胞数和血小板数都显著高于对照组小鼠(表14)。

结论

对接受了Ara-C的小鼠使用DAdC和PdC缓解了Ara-C对促红细胞生长系统的毒性作用。

表14.二乙酰脱氧胞苷(DAdC)或棕榈酰脱氧胞苷(PdC)对接受阿糖胞嘧啶(Ara-C)达5天之久的小鼠的红细胞生成作用的治疗效果。

脾 WBC Neut PLT基础 93.0±2.5 8.66±0.53 1.84±0.12 854±30对照 37.1±1.3 3.60±0.55 0.04±0.02 230±21DAdC 87.8±3.5** 5.00±0.42 0.42±0.05** 728±64**PdC 126.0±5.3** 5.20±0.35* 1.22±0.27** 327±30**表示相对于对照组P＜0.05**表示相对于对照组P＜0.001

例8：口服TAU缓解了饮用水中的抗病毒化疗试剂叠氮胸苷(AZT)对促红细胞生成系统的有害作用。

目的

本实验目的是检验口照三乙酰尿苷(TAU)对缓解抗病毒化疗试剂叠氮胸苷(AZT)对促红细胞生长系统的损害。

方法

将每个重约19克的42个Balb-C雌性小鼠分成三个不同的组，每组各14个。这三个组分别为基础组(不服用AZT，不接受治疗)、对照组(AZT，水)以及TAU组(AZT，TAU的剂量为460mg/Kg/治疗)。在整个实验过程中把AZT随意放入饮用水中使用，浓度为1.5mg/ml。在所有治疗组中所用的AZT溶液的量相似，平均每只小鼠每天2.25ml，使AZT每天的剂量为每天约170mg/Kg。在研究的前24天里，水和TAU每天使用3次，每次用量0.2ml，以后改为每天两次。

在实验开始那天，每星期一次以及就在处死前对所有的动物进行称重。第24天和第35天对小鼠称重后，用眼窝后窦放血法从每组7个小鼠体内采集0.2-0.3ml血，并注入EDTA中，供随后血细胞(包括网织红血球)分类计数用。随后用颈部脱位法处死小鼠，取出它们的右股骨，排出其内部血液供细胞计数之用，取下它们的脾并进行称重。

结果

与基础组动物(重19.78±0.38)相比，在第7天只接受了AZT的小鼠的体重显著减小(17.55±0.47克，P＜0.002)，而在同一时间点，用TAU治疗过的小鼠的体重(19.51±0.38)却与基础组基本相同，并且显著大于(P＜0.005)对照组。在第13天，虽然各组之间的数据没有统计学上的显著差别，仍可发现这种趋势。在本实验的第24天，AZT对照组的体重同样在统计意义上都低于基础组(P＜0.001)和用TAU治疗过的小鼠(P＜0.05)。在这一时间点，用TAU治疗过的动物的体重还低于基础组动物。

第24天

对只接受AZT的小鼠的RBC数(8.49±0.16)显著低于(P＜0.01)基础组(9.07±0.11)。用TAU治疗过的动物的RBC数(9.01±0.09)与基础组没有明显区别，并且显著高于(P＜0.02)对照组。

只接受AZT的小鼠中的总的嗜中性白细胞数(0.67±0.09)也显著低于(P＜0.02)基础组(1.02±0.08)。用TAU治疗过的那些动物中的嗜中性白细胞的量(0.91±0.06)与基础组没有显著区别，并且显著大于(P＜0.05)只接受AZT的组。

第35天

基本上从这一时间点上所测得的每一参数中都可以看出AZT有很强的有害作用。就象RBC数、血红蛋白以及血球容量一样，与基础小鼠相比，骨髓细胞构成、WBC数和淋巴细胞数也显著减少(表15)。与基础组小鼠相比，对照组小鼠的平均细胞体积、平均细胞血球容量和血小板数都显著提高(表14)。所有这些参数都表明AZT造成了对促红细胞生成系统的损害。

正象能使平均细胞体积、平均细胞血球容量和血小板数显著低于对照组的值(表16)一样，口服TAU的疗法还使RBC数、血红蛋白和血球容量显著高于AZT对照组(表15)。

在对照组的网织红血球数(每微升0.256×10⁶，P＜0.001)比基础组数(每微升0.129×10⁶)显著提高的同时，用TAU治疗过的那些小鼠的网织红血球数(每微升0.371×10⁶)显著高于基础组(P＜0.001)和对照组(P＜0.01)。

结论

从这些数可以看出，口服TAU对AZT对促红细胞生长系统造成的损害有有益的治疗效果。

表15.TAU缓解了AZT对小鼠红细胞生成作用的有害作用。红血细胞(RBC)数的单位是M/μl，血球容量(HCT)用百分比表示，血红蛋白(HGB)的单位是gm/dl。

RBG HCT HGB基础 9.04±0.08 42.52±0.34 15.57±0.09对照 7.53±0.13 39.29±0.59 14.57±0.26TAU 8.20±0.20** 41.26±0.62* 15.14±0.12**表示相对于对照组P＜0.05**表示相对于对照组P＜0.01

表16.TAU缓解了AZT所致的细胞损害。血小板数(PLT)单位为K/μl，平均细胞体积(MCV)的单位为fl，平均红细胞血球容量(MCH)的单位为微微克。

PLT MCV MCH基础 736±24 47.03±.16 17.23±.13对照 903±18 52.16±.37 19.37±.20TAU 809±06** 50.41±.48* 18.49±.28*表示相对于对照组，P＜.05**表示相对于对照组，P＜.01

例9：口服TAU缓解了腹膜内注射AZT对促红细胞生成系统的有害作用。

目的

本实验的目的在于检验口服TAU对扭转非肠道使用叠氮胸苷(AZT)对促红细胞生成系统造成的损害的效力。

方法

在每天上午9时，下午4时和10时，对56个每只重约19克的雌性Balb/C小鼠使用AZT(100mg/Kg i.p)三次。每天三次(上午9时、下午4时和10时)用口服剂量为230、460、或920/Kg/治疗的水(对照)或TAU的方式治疗这些动物。治疗药量为：对于对照组和TAU460组0.2ml，对TAU230组0.1ml，对TAU920组0.4ml。另一组14只小鼠没有接受AZT和任何治疗(基础组)。

在实验开始日，第6天和第13天对所有动物称重。在第6天和第13天称重后，用眼窝后放血注从每组7个小鼠中采集0.2-0.3ml血，并注入EDTA中，供随后血细胞(包括网织红血球)分类计数用。然后用颈部脱位法处死小鼠，取出它们的右股骨，排出其内部物质供细胞计数用；并取下它们的脾，进行称重。

结果

第6天

用230mg/Kg TAU治疗过的组中的骨髓细胞构成(Bonemarrow cellularty)(8.89±0.46)显著高于(P＜.05)只接受AZT的组(7.54±0.23)。

基础组中的白血细胞数为每微升8.23±0.38×10³。AZT使WBC数降低到每微升6.8±0.66×10³，但如果除接受AZT外，还用TAU(920mg/kg)治疗，则WBC的量恢复到基础水平(每分数升8.46±0.63×10³)。

使用AZT使RBC水平从每升9.14±0.10×10³(基础组)降低到每微升8.80±0.31×10⁶(对照组)。在接受TAU(460mg/Kg/治疗)的小鼠和接受AZT(每微升9.15±0.07×10⁶)的小鼠中没有发现这样幅度的下降。

第13天

在这项研究中所用的每一个参数都可成为那些只使用了AZT13天的小鼠的促红细胞生成系统受到损害的有统计意义的证据。于是，WBC数、RBC数、血红蛋白、血球容量、网织红血球数、总的嗜中性白细胞数和淋巴细胞数都显著降低，同时，平均细胞血球容量和血小板数都显著提高。对接受AZT的小鼠对TAU进行的伴随治疗(460mg/Kg/治疗)使所有这些测量值的每一个都出现统计意义的提高(表17和18)。

结论

用AZT和TAU对小鼠进行的伴随治疗显著改善了促红细胞生成功能。这对白血细胞和红血细胞指数都是如此。

表17 口服TAU缓解了AZT对小鼠中骨髓生成系统的损害。这些数据是在研究的第13天得到的。

WBC Neutro 淋巴血小板

K/l K/μl K/μl K/μl基础 6.8±0.6 1.27±0.11 5.14±0.33 680±30对照 5.1*±0.28 0.49*±0.07 4.02±0.27 1025*±44TAU 7.0**±0.37 0.62±0.03 6.06**±0.38 863**±26*＝不同于基础组，p＜.05**＝不同于对照组，p＜.05

表18.口服TAU缓解了AZT对小鼠中骨髓生成系统的损害。这些数据是在研究的第13天得到的。

RBC HGB HCT 网织红血球

M/μl G/dl ％ M/μl基础 9.16±0.06 15.32±0.18 43.18±0.54 0.298±0.028对照 8.15*±0.07 14.08±0.13 38.90±0.43 0.086*±0.007TAU 8.58**±0.08 14.54**±0.13 40.83±0.37 0.162**±0.014*＝不同于基础组，p＜.05**＝不同于对照组，p＜.05

例10：口服二乙酰脱氧胞苷(DAdC)缓解了腹膜内使用AZT对DBA小鼠促红细胞生成系统所造成的毒性。

目的

本实验的目的在于检验DAdC对扭转非肠道使用抗病毒化学疗法试剂叠氮胸苷(AZT)对促红细胞生成系统所造成的损害的作用。

方法

在每天上午9时、下午4时和10时，对28只每只重约20克的雌性小鼠使用AZT三次(100mg/Kg i.p.)。每天上午9时，下午4时和10时，用把管子插进口中的方法对动物进行三次水(对照)或者DAdC(411mg/Kg/治疗)的治疗。治疗药量为0.2ml。另一组14只小鼠不接受AZT及任何治疗(基础)

在开始几天的治疗过程中，共有8只小鼠死于口服水和DAdC过程中的意外情况。于是，在处死日时对照组和DAdC中的动物数目如下：在第6天，在对照组内有4只小鼠，DAdC组内有5只小鼠；在第13天，在对照组内有7只小鼠，在DAdC内有3只小鼠。在这两个时间点，基础组动物的数目都是7只。

在第6天和第13天，用眼窝后放血法从每组7个小鼠中采集0.2-0.3ml血，并注入EDTA中，供随后血细胞(包括网织红血球)分类计数用。然后用颈部脱位法处死小鼠；取下它们的右股骨，排出其内部液体供细胞计数用；并取下它们的脾，进行称重。

结果

第6天

在第6天，使用AZT造成对促红细胞生成系统的损害，特别是对那些没有接受DAdC的小鼠(对照组)更是如此。这样，就象RBC数、血红蛋白(HGB)血球容量(HCT)和网织红血球数一样，WBC和淋巴细胞数也显著低于基础组(表17)。这些对照组小鼠中的血小板数显著提高。与基础组相比，对照组的骨髓瘤细胞数还降低了23％。

与此相反，那些接受了AZT但也接受了DAdC治疗的小鼠的骨髓细胞构成只略微(2.5％)降低，并且与基础组相比没有统计上的区别。DAdC组中的RBC数、HGB、HCT和网织红血球数与基础组相比并无区别，但却显著高于对照组(表19)。

第13天

与基础组动物相比，只接受AZT13天的小鼠差不多在每个方面的数据都成为AZT对促红细胞系统损害的有统计意义的证据。正如在第6天数据中所看到的那样，用DAdC对小鼠所进行的伴随治疗显著缓解或者扭转了AZT所致的对促红细胞生成作用的损害(表20)。用DAdC治疗过的小鼠中的血小板数(769±32，P＜.02)也显著高于对照组动物(950±34)。

结论

用DAdC治疗接受了AZT的小鼠可以显著改善促红细胞生成系统的功能，特别是红细胞生成作用。

表19 二乙酰脱氧胞苷(DAdC)对接受了AZT达6天的小鼠中红细胞生成作用的治疗作用

RBC HGB HCY 网织红血球基础 9.47±.18 13.93±.20 40.83±.83 .326±.039对照 8.53±.33* 12.60±.40* 36.32±1.54* .017±.004*DAdC 9.49±.32** 13.96±.40** 40.84±1.35** .205±.075***表示不同于基础组，P＜.05**表示不同于对照组，P＜.05表20 二乙酰脱氧胞苷(DAdC)对接受了AZT达13天的小鼠中红细胞生成作用的治疗作用

RBC HGB HCT 网织红血球基础 9.95±.13 14.83±.19 42.83±.41 .637±.044对照 8.51±.05* 13.06±.07* 37.21±.13* .365±.022*DAdC 9.16±.32** 13.97±.39** 41.53±1.17** .814±.069***表示不同于基础，P＜.05**表示不同于对照，P＜.05

例11：口服二乙酰胞苷(DAdC)或四氢尿苷(THU)缓解了腹膜内注射使用AZT对Balb/C小鼠的促红细胞生成系统的有害作用。

目的

本实验的目的在于检验口服DAdC或非肠道使用THU对扭转非肠道使用抗病毒化疗试剂叠氮胸苷(AZT)对促红细胞生成系统的损害的效力。

方法

在每天上午9时、下午4时和10时，对21只每只重约20克的雌性Balb/C小鼠使用AZT三次(100mg/Kg/i.p)，每天上午9时、下午4时和10时，对7只动物进行水(对照，p.o.)或者DAdC(300mg/Kg/p.o.)或THU(12.5mg/Kg/治疗，在0.2％的吐温80中，腹膜内注射)的治疗。治疗药量为0.2ml。另一组7只小鼠不接受AZT及任何治疗(基础)。

在第13天，用眼窝后放血法从每组小鼠中采取0.2-0.3ml血，并注入EDTA中，供随后血细胞(包括网织红血球)分类计数用。然后用颈部脱位法处死小鼠，取下它们的右股骨，排出其内部液体供细胞计数用；并取下它们的脾进行称重。

结果

用DAdC对小鼠进行的伴随治疗显著缓解或扭转了AZT对促红细胞生成作用的损害(表21)。用DAdC治疗过的小鼠中的总的嗜中性白细胞数(1.39±0.14；P＜.01)也显著高于对照组动物(0.74±0.10)。

象红细胞生成作用一样，接受AZT并接受THU治疗的小鼠的骨髓组织生成也比对照组有显著改善。THU组中的总的白血细胞数(6.06±0.35，P＜.05)也显著高于对照组(4.73±0.36)。此外还观察到，用THU治疗过的组中的总的嗜中性白细胞数(1.16±0.15)与对照组(0.74±0.10)相比有显著的差别(P＜.05)。淋巴细胞数也有改善，但在本实验中其差别不具有统计意义。此外，THU治疗过的组中的网织红血球指数(百分比和M/μl)也显著高于(P＜.05)对照组。

结论

用DAdC或THU治疗接受了AZT的Balb/C小鼠可以改善促红细胞生长功能。

表21 二乙酰脱氧胞苷(DAdC)对接受了AZT达13天的Balb/C小鼠中红细胞生成作用的治疗作用

RBC HGB HCT 网织红血球基础 8.63±.11 15.37±.08 41.01±0.52 .089±.009对照 7.55±.11* 13.71±.22* 35.96±0.46* .039±.004*DAdC 8.26±.13** 14.97±.15** 39.51±0.61** .059±.006***表示不同于基础，P＜.05**表示不同于对照，P＜.05

例12.在有或没有潘生丁参与的情况下口服尿苷或二乙酰尿苷(TAU)后的血浆尿苷水平。

目的

本实验的目的在于证明TAU是一种比尿苷本身更有效的提高血浆尿苷水平的口服活性试剂，并且还证明潘生丁(即DPM，一种核苷的摄入-阻塞剂，还具有抗病毒活性)对使用TAU或尿苷后血浆尿苷水平的影响。

方法

将体重约20克的雌性Balb/C小鼠分成4组，每组8只：1.尿苷(1000mg/Kg)p.o.2.TAU(1500mg/Kg)p.o.3.尿苷(1000mg/Kg)p.o+DPM(25mg/Kgi.p)4.TAU(1500mg/Kg)p.o+DPM(25mg/Kgi.p.)(1500mg/Kg TAU为与1000mg/Kg尿苷等摩尔数的剂量)

在使用尿苷或TAU之前30分钟用腹膜内注射的方式使用潘生丁。

用管饲法口服尿苷的0.4ml的水溶液。

用管饲法把TAU配在一种乳剂煤介(1∶1的玉米油/水对2.5％吐温80)。

从每组取2个小鼠从眼眶下部血管网处放血：在使用TAU或尿苷后在下列每个时间点：0(在TAU或尿苷使用前的基础尿苷水平)0.5、1、2、和4小时。

加入0.2ml甲醇，对血浆样品(0.1ml)进行脱蛋白，然后进行离心处理。用HPLC缓冲溶液(100mM醋酸铵，PH6.5，供随后用254nm处的Uv吸收法借助倒相HPLC来测定尿苷)对样品进行冷冻干燥和重建。

数据点为每个时问点处两个样品的平均值。

结果

口服尿苷后，血浆中的尿苷达到6微摩尔的峰值浓度。相反，口服等摩尔剂量的TAU使峰值血浆尿苷水平达到260微摩尔，这样就证明TAU做为一种提高血浆尿苷水平的口服活性试剂比尿苷出色得多。

潘生丁进一步提高了(大约2倍)口服TAU后血液中尿苷水平的幅度(峰值尿苷水平达460微摩尔)和具有持久性。

与此类似，潘生丁也提高了口服尿苷后血液尿苷水平的持久性，虽然上述水平比接受了TAU的相应的小鼠低得多，(峰值血桨尿苷水平为20微摩尔)。

这些结果归纳在表22中。

表22.在有或没有潘生丁参与的情况下口服尿苷或TAU后的血浆尿苷浓度。

口服TAU或尿苷之后的血浆尿苷水平治疗 0小时 0.5小时 1小时 2小时 4小时尿苷 2 4 6 4 2TAU 2 240 260 110 12尿苷+DPM 2 10 20 10 4TAU+DPM 2 280 460 440 32

结论

口服TAU后的血浆尿苷水平比口服尿苷后所观察到的水平高得多。这样TAU口服后就是一个比尿苷本身好得多的血浆尿苷源。潘生丁抑制了尿苷被摄入进某一些类型的细胞，这样就提高了口服TAU或尿苷后血浆尿苷浓度的幅度和持久性。

例13：乙氧羰基尿苷的合成

将2.64mM(1.5倍等效量)的乙基氯甲酸酯一滴滴加入到0.5克2′，3′-异亚丙基尿苷(1.76mM)与10ml嘧啶的冰冷溶液，加入时不断搅拌。可以把反应加热到室温(25℃)下进行，并整夜搅拌(18小时)直到TLC(9∶1氯仿/甲醇)显示出所有的起始物质都转变成一种单一的产品。用旋转蒸发法在高真空度下去除溶剂，得到一种淡米黄色浆汁，此浆汁被移至下面的脱蛋白步骤。

把浆汁溶解在15ml 50％的甲酸中，在60-70℃下加热2小时，直到TLC显示出足量的亚丙基组分已完全被去除。在高真空度下用蒸发法去除水和甲酸，得到一种淡米黄色浆汁，然后把它放入一硅胶柱中，并用95∶5的氯仿/甲醇洗提。收集、集中并蒸发含有产品的组分，得到一种略微粉红色的玻璃状产品。

上述内容意在阐述本发明而不是限制本发明。在不背离本发明真实精神和范围的情况下本发明可以有各种有效的变型和改进。

Claims

1.一种制备包含非甲基化嘧啶核苷的酰基衍生物和抗肿瘤试剂的组合物的方法，它包括将非甲基化嘧啶核苷和抗肿瘤试剂以及任意性的可药用载体混合的步骤。

2.权利要求1所述的方法，其中所述的抗肿瘤试剂选自下列物质：5-氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶的药物前体、氟尿苷、2′-脱氧氟尿苷、氟尿苷或2′-脱氧氟尿苷的药物前体衍生物、氟胞嘧啶、三氟-甲基-2′-脱氧尿苷、阿糖胞嘧啶、阿糖胞嘧啶的药物前体、环胞苷、5-氮杂-2′-脱氧胞苷、阿糖5-氮杂胞嘧啶、6-氮杂胞苷、N-膦酰基乙酰基-L-天冬氨酸、吡唑呋喃菌素、6-氮尿苷、氮尿苷乙酯、栋碱、胸苷和3-脱氮尿苷。

3.权利要求1所述的方法，其中所述的非甲基化嘧啶核苷的酰基衍生物是胞苷的一种酰基衍生物，并且所述的抗肿瘤试剂是胞苷的一种类似物。

4.权利要求3所述的方法，其中所述的胞苷的抗肿瘤类似物是阿糖胞嘧啶或其药物前体、环胞苷、5-氮杂-2′-脱氧胞苷、阿糖5-氮杂胞嘧啶或6-氮杂胞苷。

5.权利要求1所述的方法，其中所述的非甲基化嘧啶核苷的酰基衍生物是脱氧胞苷，并且所述的抗肿瘤试剂是一种胞苷的类似物。

6.权利要求5所述的方法，其中所述的胞苷类似物是阿糖胞嘧啶或其药物前体、环胞苷、5-氮杂-2′-脱氧胞苷、阿糖5-氮杂胞嘧啶或6-氮杂胞苷。

7.一种制备包含非甲基化嘧啶核苷的酰基衍生物和抗病毒试剂的组合物的方法，它包括将非甲基化嘧啶核苷和抗病毒试剂以及任意性的可药用载体混合的步骤。

8.权利要求7所述的方法，其中所述的非甲基化嘧啶核苷的酰基衍生物是尿苷、胞苷或脱氧胞苷的一种酰基衍生物，并且所述的抗病毒试剂是AZT。

9.权利要求7所述的方法，其中所述的抗病毒试剂选自下列物质：AZT、二脱氧胞苷、2′，3′-二脱氧胞苷-2′-烯、3′-脱氧胸苷-2′-烯、3′-叠氮-2′，3′-二脱氧尿苷、5-乙基-2′-脱氧尿苷、5-碘代-2′-脱氧尿苷、5-溴代-2′-脱氧尿苷、2′，3′-二脱氧-3-氟胸苷、5-甲氨基-2′-脱氧尿苷、阿糖尿嘧啶、二脱氧尿苷和(S)-1-(3-羟基-2-膦酰基甲氧基丙基)胞嘧啶。

10.一种制备包含非甲基化嘧啶核苷的酰基衍生物和抗疟疾试剂的组合物的方法，它包括将非甲基化嘧啶核苷和抗疟疾试剂以及任意性的可药用载体混合的步骤。

11.权利要求10所述的方法，其中所述的非甲基化嘧啶核苷的酰基衍生物是尿苷或胞苷的一种酰基衍生物，并且所述的抗疟疾试剂是5-氟乳清酸酯。

12.权利要求10所述的方法，其中所述的抗疟疾试剂选自下列物质：5-氟乳清酸酯、N-膦酰基乙酰基-L-天冬氨酸或6-氮尿苷。

13.一种制备包含非甲基化嘧啶核苷的酰基衍生物和能促进红细胞生成作用的试剂的组合物的方法，它包括将非甲基化嘧啶核苷和能促进红细胞生成作用的试剂以及任意性的可药用载体混合的步骤。

14.权利要求13所述的方法，其中所述的能促进红细胞生成作用的试剂选自下列物质：非离子表面活性剂、中间白细胞素、菌落刺激因子、促红细胞生成素、葡聚糖和聚肌苷-聚胞苷。

15.权利要求13所述的方法，其中所述的能促进红细胞生成作用的试剂是羟基嘌呤核苷、羟基嘌呤核苷的同类物或羟基嘌呤核苷或羟基嘌呤核苷的同类物的酰基衍生物。

16.一种制备包含非甲基化嘧啶核苷的酰基衍生物和能促进细胞的摄入和核苷磷酸化的化合物的组合物的方法，它包括将非甲基化嘧啶核苷和能促进细胞的摄入和核苷磷酸化的化合物以及任意性的可药用载体混合的步骤。

17.权利要求16所述的方法，其中所述的能促进细胞的摄入和核苷磷酸化的化合物选自下列物质：胰岛素和能生成胰岛素的碳水化合物。

18.一种制备包含非甲基化嘧啶核苷的酰基衍生物和能促进粘膜组织愈合的试剂的组合物的方法，它包括将非甲基化嘧啶核苷和能促进粘膜组织愈合的试剂以及任意性的可药用载体混合的步骤。

19.权利要求18所述的方法，其中所述的能促进粘膜组织愈合的试剂选自下列物质：硫糖铝、两种或多种脱氧核糖核苷的混合物、别嘌呤、抗菌素或局部麻醉剂。

20.一种制备包含尿苷的酰基衍生物和能抑制尿苷磷酸化酶的化合物的组合物的方法，它包括将尿苷和能抑制尿苷磷酸化酶的化合物以及任意性的可药用载体混合的步骤。

21.权利要求20所述的方法，其中所述的尿苷磷酸化酶的抑制剂选自下列物质：苄基无环尿苷、苄氧基苄基无环尿苷、氨甲基-苄基无环尿苷、氨甲基-苄氧基苄基无环尿苷、羟基甲基-苄基无环尿苷，羟基甲基-苄氧基苄基-无环尿苷和2，2′-脱水-5-乙尿苷、5-苄基巴比妥酸酯、5-苄氧基苄基巴比妥酸酯、5-苄氧基苄基-1-〔(1-羟基-2-乙氧基)甲基〕巴比妥酸酯、5-苄氧基苄乙酰基-1-〔(1-羟基-2-乙氧基)甲基〕巴比妥酸酯和5-甲氧基苄基乙酰基无环巴比妥酸酯。

22.一种制备包含胞苷或脱氧胞苷的酰基衍生物和能抑制脱氧胞苷脱氨酶的试剂的组合物的方法，它包括将胞苷或脱氧胞苷和能抑制脱氧胞苷脱氨酶的试剂以及任意性的可药用载体混合的步骤。

23.权利要求22所述的方法，其中所述的胞苷脱氨基酶的抑制剂选自下列物质：四氢尿苷或四氢-2′-脱氧尿苷。

24.一种制备包含尿苷、胞苷或脱氧胞苷的酰基衍生物和能抑制核苷转移的化合物的组合物的方法，它包括将尿苷、胞苷或脱氧胞苷和能抑制核苷转移的化合物以及任意性的可药用载体混合的步骤。

25.权利要求24所述的方法，其中所述的核苷转移的抑制剂选自下列物质：潘生丁、4-苯甲酸、利多氟嗪或硝基苄基巯肌苷。

26.一种制备下式所示的尿苷的酰基衍生物的方法