CN105092769A - 一种同时检测丁酸氯维地平以及有关物质的方法 - Google Patents
一种同时检测丁酸氯维地平以及有关物质的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105092769A CN105092769A CN201510019348.XA CN201510019348A CN105092769A CN 105092769 A CN105092769 A CN 105092769A CN 201510019348 A CN201510019348 A CN 201510019348A CN 105092769 A CN105092769 A CN 105092769A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- mobile phase
- impurity
- butyrate clevidipine
- solution
- dichlorophenyl
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
Abstract
本发明提供了一种可同时检测丁酸氯维地平以及十一种有关物质的方法以及测定丁酸氯维地平含量的方法，二者均采用反相高效液相色谱法，通过大量、反复的实验，摸索出了可同时将丁酸氯维地平以及十一种有关物质分离的色谱条件以及测定丁酸氯维地平含量的条件，使得本发明提供的色谱检测条件适用于置于不同环境中的丁酸氯维地平药物的成分以及含量分析，避免了现有技术中对不同环境中的丁酸氯维地平药物进行成分分析时，需要分别进行相应色谱条件摸索的麻烦，同时，本发明提供的色谱条件具有精密度高、重现性好、耐用性良好且易于掌握的优点。
Description
技术领域
本发明属于丁酸氯维地平原料药检测领域，具体涉及一种同时测定丁酸氯维地平以及十一种有关物质的方法。
背景技术
丁酸氯维地平(Clevidipinebutyrate,CLE)，其化学名为4-(2,3-二氯苯基)-1,4-二氢-2,6-二甲基-3,5-吡啶二甲酸甲基(1-丁酰氧基)甲酯，其结构式为：
丁酸氯维地平是由英国AstraZeneca公司研制开发的一种新型的静脉注射用抗高血压药物，于2008年8月经美国FDA批准上市，主要用于急性高血压的治疗及术后血压的控制。丁酸氯维地平是一种超短效二氢吡啶类钙离子通道拮抗剂，可选择性抑制动脉血管平滑肌细胞外的钙离子内流，其起效迅速，剂量响应呈线性，半衰期短(1-2min)，作用结束也迅速，因此可以通过对剂量的精细调节起到降压效果，有助于医生在临床使用中根据患者的具体血压监测值采取个体化用药，还可以避免一次用药过量导致过度降压，无法纠正的危险。与硝酸甘油、硝普钠相比，丁酸氯维地平维持血压更为有效且更加安全。
目前国内外对丁酸氯维地平的安全性考察以及血/尿样处理及含量测定方法的报道较多，主要集中在血药浓度及生物利用度上，而关于有关丁酸氯维地平以及有关物质测定方法的报道并不多见。袁慧雅等人对丁酸氯维地平及其一种中间体进行了简要的探究，并未对其他有关物质进行分析；专利号为CN10313489A的发明专利公开了一种采用高效液相色谱进行丁酸氯维地平和三种杂质的测定方法，但并未给出三种杂质的具体名称。
发明内容
本发明是为解决上述问题而进行的，提供了一种可同时检测丁酸氯维地平以及十一种有关物质的方法，用于丁酸氯维地平的药物分析。
本发明采用了如下技术方案：
本发明提供的同时检测丁酸氯维地平以及有关物质的方法，采用反相高效液相色谱法进行检测，具有这样的特征，包括以下步骤：
步骤1，制备混合对照品溶液以及供试品溶液；
步骤2，精密吸取混合对照品溶液以及供试品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，根据以下条件进行检测：
色谱柱：C18反相色谱柱；
流动相：流动相A为浓度为0.02mol/L～0.05mol/L且pH为2.0～3.0的磷酸二氢钠水溶液，流动相B为乙腈与甲醇的体积比为3:2的乙腈和甲醇的混合液；
洗脱程序如下，流动相比例为体积百分比：
0.0～14.0min，流动相A为50％～40％，流动相B为50％～60％；
14.0～42.0min，流动相A为40％，流动相B为60％；
42.0～44.0min，流动相A为40％～30％，流动相B为60％～70％；
44.0～63.0min，流动相A为30％，流动相B为70％；
63.0～65.0min，流动相A为50％～30％，流动相B为50％～70％；
检测波长：218nm～222nm；柱温：30℃～40℃；流速：1.1mL/min～1.5mL/min。
本发明提供的同时检测丁酸氯维地平以及物质的方法，还可以具有这样的特征：步骤1中的混合对照品溶液包含丁酸氯维地平以及十一种有关物质，每1mL混合对照品溶液含丁酸氯维地平对照品4.0mg，含十一种物质各4.0μg。
本发明提供的同时检测丁酸氯维地平以及有关物质的方法，还可以具有这样的特征：每1mL供试品溶液含有丁酸氯维地平药物4.0mg。
进一步的，本发明提供了同时检测丁酸氯维地平以及有关物质的优选方法，还可以具有这样的特征：C18反相色谱柱为Symmetry-C18色谱柱，检测波长为220nm，流动相A为浓度为0.05mol/L且pH为2.5的磷酸二氢钠水溶液，流动相流度为1.5mL/min，柱温为35℃。
本发明提供的同时检测丁酸氯维地平以及有关物质的方法，还可以具有这样的特征：用于制备混合对照品溶液以及供试品溶液的溶剂为体积分数为50％的乙腈水溶液。
本发明提供的同时检测丁酸氯维地平以及有关物质的方法，还可以具有这样的特征：丁酸氯维地平的有关物质为十一种，分别为：①水解杂质：4-(2,3-二氯苯基)-1,4-二氢-2,6-二甲基-3,5-吡啶二羧酸单甲酯；②双腈杂质：二氰基乙基-4-(2,3-二氯苯基)-1,4-二氢-2,6-二甲基-3,5-吡啶二羧酸酯；③双酸杂质：4-(2,3-二氯苯基)-1,4-二氢-2,6-二甲基-3,5-吡啶二羧酸；④重排杂质1：6-(2,3-二氯苯基)-2-甲基-4-氧代环己烯-2-甲酸甲酯；⑤脱羧氧化杂质：4-(2,3-二氯苯基)-2,6-二甲基-3-吡啶甲酸甲酯；⑥重排杂质2：6-(2,3-二氯苯基)-4-甲基-2-氧代环己烯-3-甲酸甲酯；⑦双甲酯杂质：4-(2,3-二氯苯基)-1,4-二氢-2,6-二甲基-3,5-吡啶二羧酸二甲酯；⑧脱羧杂质：4-(2,3-二氯苯基)-1,4-二氢-2,6-二甲基-3-吡啶甲酸甲酯；⑨氧化杂质：4-(2,3-二氯苯基)-2,6-二甲基-3,5-吡啶二羧酸甲基(1-氧代丁氧基)甲基酯；⑩乙酯杂质：4-(2,3-二氯苯基)-1,4-二氢-2,6-二甲基-3,5-吡啶二羧酸乙基(1-氧代丁氧基)甲基酯；双丁酯杂质：4-(2,3-二氯苯基)-1,4-二氢-2,6-二甲基-3,5-吡啶二羧酸双(1-氧代丁氧基)甲酯。
进一步的，本发明还提供了一种检测丁酸氯维地平含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1，制备对照品溶液以及供试品溶液；
步骤2，精密吸取对照品溶液以及供试品溶液各20品溶，注入高效液相色谱仪，根据以下条件进行检测：
色谱柱：C18反相色谱柱；
流动相：流动相A为浓度为0.05mol/L且pH为2.5的磷酸二氢钠水溶液，流动相B为乙腈与甲醇的体积比为3:2的乙腈和甲醇的混合液，流动相A和流动相B的体积比39～35:61～65；
检测波长：240nm；柱温：28℃～32℃；流速：1.45mL/min～1.55mL/min；理论塔板数至少为10000。
发明作用与效果
本发明提供了一种可同时检测丁酸氯维地平以及十一种有关物质的方法以及测定丁酸氯维地平含量的方法，二者均采用反相高效液相色谱法，通过大量、反复的实验，摸索出了可同时将丁酸氯维地平以及十一种有关物质分离的色谱条件以及测定丁酸氯维地平含量的条件，使得本发明提供的色谱检测条件适用于置于不同环境中的丁酸氯维地平药物的成分以及含量分析，避免了现有技术中对不同环境中的丁酸氯维地平药物进行成分分析时，需要分别进行相应色谱条件摸索的麻烦，同时，本发明提供的色谱条件具有精密度高、重现性好、耐用性良好且易于掌握的优点。
附图说明
图1是本发明中的杂质结构示意图；
图2(a)是本发明实施例一中的混合对照品的色谱图；
图2(b)是本发明实施例一中的溶剂的色谱图；
图2(c)是本发明实施例一中的丁酸氯维地平对照品溶液的色谱图；
图3(a)是本发明实施例一中处于高温环境中的丁酸氯维地平的色谱图；
图3(b)是本发明实施例一中处于光照环境中的丁酸氯维地平的色谱图；
图3(c)是本发明实施例一中处于酸性环境中的丁酸氯维地平的色谱图；
图3(d)是本发明实施例一中处于碱性环境中的丁酸氯维地平的色谱图；
图3(e)是本发明实施例一中处于氧化环境中的丁酸氯维地平的色谱图；
图3(f)是本发明实施例一中的酸空白(G)、碱空白(H)以及氧化空白(I)的色谱图；
图4是本发明实施例三实验(1)中的混合对照品的色谱图；
图5是本发明实施例三实验(2)中的混合对照品的色谱图；
图6(a)是本发明实施例四中的混合对照品的色谱图；
图6(b)是本发明实施例四中丁酸氯维地平对照品溶液的色谱图；
图6(c)是本发明实施例四中空白溶剂的色谱图。
具体实施方式
以下结合说明书附图，对本发明的具体实施方式进行说明。
1、杂质分析
根据丁酸氯维地平合成路线及其破坏性试验结果，对丁酸氯维地平的杂质的来源进行分析，主要有11种杂质。
图1为丁酸氯维地平的11种主要杂质的来源及其结构式。
如图1所示，丁酸氯维地平的11种主要杂质分别为：①水解杂质：4-(2,3-二氯苯基)-1,4-二氢-2,6-二甲基-3,5-吡啶二羧酸单甲酯；②双腈杂质：二氰基乙基-4-(2,3-二氯苯基)-1,4-二氢-2,6-二甲基-3,5-吡啶二羧酸酯；③双酸杂质：4-(2,3-二氯苯基)-1,4-二氢-2,6-二甲基-3,5-吡啶二羧酸；④重排杂质1：6-(2,3-二氯苯基)-2-甲基-4-氧代环己烯-2-甲酸甲酯；⑤脱羧氧化杂质：4-(2,3-二氯苯基)-2,6-二甲基-3-吡啶甲酸甲酯；⑥重排杂质2：6-(2,3-二氯苯基)-4-甲基-2-氧代环己烯-3-甲酸甲酯；⑦双甲酯杂质：4-(2,3-二氯苯基)-1,4-二氢-2,6-二甲基-3,5-吡啶二羧酸二甲酯；⑧脱羧杂质：4-(2,3-二氯苯基)-1,4-二氢-2,6-二甲基-3-吡啶甲酸甲酯；⑨氧化杂质：4-(2,3-二氯苯基)-2,6-二甲基-3,5-吡啶二羧酸甲基(1-氧代丁氧基)甲基酯；⑩乙酯杂质：4-(2,3-二氯苯基)-1,4-二氢-2,6-二甲基-3,5-吡啶二羧酸乙基(1-氧代丁氧基)甲基酯；双丁酯杂质：4-(2,3-二氯苯基)-1,4-二氢-2,6-二甲基-3,5-吡啶二羧酸双(1-氧代丁氧基)甲酯。
2、仪器与试剂
Agilent1260高效液相色谱仪配DAD检测器(美国Agilent公司)；电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)；pH计(丹佛仪器有限公司)；KQ-250E型超声波清洗器(昆山市超声波仪器有限公司)；涡旋混合器(海门市其林贝尔仪器制造有限公司)。
杂质①、杂质②、杂质③、杂质⑤、杂质⑦、杂质⑧、杂质⑨、杂质⑩以及杂质均为自制，杂质④和杂质⑥为深圳市倍素特科技有限公司提供，批号分别为20131226-3、20131226-5；杂质①～纯度依次为97.61％、94.34％、88％、85.05％、99.17％、98.48％、99.56％、90.54％、99.25％、98.48％、98.61％；丁酸氯维地平对照品为自制，纯度为99.81％；各自制杂质对照品及丁酸氯维地平对照品均按规定标化(委托上海医药工业研究院标化)。
无水磷酸二氢钠(国药集团化学试剂有限公司,分析纯)；磷酸(国药集团化学试剂有限公司,分析纯)；水为超纯水；乙腈(HPLC级,Merck公司)；甲醇(HPLC级,Merck公司)。
3、溶液配制
混合对照品溶液
精密称取各杂质标准品，加50％乙腈溶解并定容，摇匀，配制成2000mg/L单标储备液；准确移取各标准储备液0.5mL混合于10mL量瓶中，50％乙腈定容，配制成100mg/L混合标准工作液。另精密称取丁酸氯维地平对照品40mg，置10mL量瓶中，加入0.4mL混合标准工作液，加入50％乙腈溶解并定容，即得每1mL含丁酸氯维地平对照品4.0mg，各杂质4.0μg的适用性溶液。
供试品溶液
精密称取丁酸氯维地平药品，加50％乙腈溶解并定容，配制成每1mL含丁酸氯维地平4.0mg的供试品溶液。
丁酸氯维地平对照品溶液
精密称取适量丁酸氯维地平对照品，用50％乙腈溶解并定容，配制200mg/L对照品储备液，精密移取储备液1mL于10mL量瓶中，用50％乙腈定容，制成20.0mg/L对照品溶液。
实施例一高效液相色谱条件的优化
本实施例通过分析混合对照品溶液，确定最优的高效液相色谱条件，从检测波长、色谱柱、流动相、流速及柱温方面入手，摸索最优的色谱条件。
本实施例中，对丁酸氯维地平及其11种杂质实现有效分离的标准为：各色谱峰间分离度≥分离度。
(1)紫外波长的考察
由各物质的紫外吸收特性可知，杂质⑤、杂质⑧、杂质⑨仅在末端有吸收，考虑基线稳定，选用220nm为检测波长，在该检测波长下主成份及其他杂质也有良好的吸收。
(2)色谱柱的考察
选用0.05mol/L磷酸二氢钠缓冲液(pH2.5)作为流动相A，乙腈：甲醇3：2作为流动相B，检测波长为220nm，柱温为35℃，流速1.3mL/min。分别考察了LP-C18柱(3.0mm液(测波长下主成份及μm)、WatersSymmetryC18柱(4.6mmSymmetryC18m)、AgilentSB-C18柱(4.6mmSB-C18yC18m)、XDB-C18柱(4.6mmSB-C18yC18m)及ODS-2柱(4.6mmSB-C18yC18m)对适用性溶液中各物质峰之间分离度的影响。结果表明，仅WatersSymmetryC18柱(4.6mmSymmetry5μm)能够很好的满足分离要求；使用LP-C18柱，杂质峰形较差，出现杂质包合现象，且杂质②与主峰完全未分离；使用AgilentSB-C18柱，杂质⑥和杂质⑦无法完全分离；使用XDB-C18柱，杂质②完全包在主峰里；使用ODS-2柱，杂质⑧和杂质⑨完全重合。
(3)流动相A、流速以及柱温的考察
流动相A考察磷酸二氢钠水溶液的浓度及其pH的考察。本实施例采用磷酸二氢钠水溶液作为流动相的水相，分别考察了浓度为0.02mol/L、0.04mol/L、0.05mol/L及pH为2.0、2.5、3.0时各物质峰分离度，而后考察流速为1.1mL/min、1.3mL/min、1.5mL/min时，各峰的分离情况，最后在柱温为30～40℃时，对分离结果进行分析。
表1方法优化结果
注：1～11分别对应杂质①～杂质
表1结果表明，随着磷酸二氢钠的浓度增加，杂质⑦与杂质⑧的分离度增加，且当pH为2.5时，各成分间的分离度最佳，故选择浓度为0.05mol/L的磷酸二氢钠水溶液(pH2.5)作为水相。
随着流速的增大，杂质⑧与杂质⑨及杂质⑨与主峰之间分离度均有所改善，考虑到柱压及色谱柱的耐用性，并没有继续升高流速，最终选择1.5mL/min的流速为最佳条件。
随着柱温的升高，杂质⑧与杂质⑨的分离度增大，而杂质⑨与主峰的分离度减小，当柱温为40℃时，杂质⑨与主峰无法分离，因此，在35℃时分离效果最佳。
(4)溶剂的考察
选择流动相作为溶剂，丁酸氯维地平及各杂质的溶解性较差，供试品溶液在4℃放置数小时后会有固体析出；选择乙腈作为溶剂，杂质①和杂质②的色谱峰对称性差，对称因子约为2.0；选择50％乙腈作为溶剂，各母液在4℃放置数天均未见固体析出；故最终确定使用50％乙腈作为溶剂。
综上，同时检测丁酸氯维地平以及11中有关物质的优选色谱条件为：色谱柱选用SymmetryC18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)；进样体积：20μL；柱温：35℃；检测波长：220nm；流动相A为0.05mol/L磷酸二氢钠水溶液(取无水磷酸二氢钠6.0g,加水1L溶解,用磷酸调节pH至2.5)，流动相B为乙腈：甲醇(V/V)3:2。
洗脱程序如下，流动相比例为体积百分比：0.0～14.0min，流动相A为45％，流动相B为55％；14.0～42.0min，流动相A为40％，流动相B为60％；42.0～44.0min，流动相A为35％，流动相B为65％；44.0～63.0min，流动相A为30％，流动相B为70％；63.0～65.0min，流动相A为40％，流动相B为60％；流速：1.5mL/min。
实施例二、混合对照品溶液、丁酸氯维地平对照液以及供试品溶液测试
本实施例采用实施例一中的色谱条件进行混合对照品溶液、丁酸氯维地平对照液以及供试品溶液的测试。
(一)、混合对照品溶液以及丁酸氯维地平对照液检测
按照3中溶剂配置的方法，分别配置混合对照品溶液以及丁酸氯维地平对照液，精密吸取两种溶液各20μL，注入辅以光电二极管阵列检测器的高效液相色谱仪，而后按照实施例一中优选的色谱条件进行检测。
图2(a)为本实施例中的混合对照品的色谱图。
图2(b)为本实施例中空白溶剂的色谱图。
图2(c)为本实施例中丁酸氯维地平对照液的色谱图。
如图2(a)所示，按出峰前后，对杂质命名，分别为杂质①～各自保留时间分别为7.657、8.485、11.926、13.962、15.316、16.018、17.527、26.385、28.232、41.299、48.341min；丁酸氯维地平出峰时间为29.911min；各峰之间均能达到良好分离(各色谱峰之间分离度≥之间分离；
如图2(b)所示，空白溶剂对物质的测定无干扰。
如图2(c)所示，丁酸氯维地平对照液中丁酸氯维地平的纯度很高，几乎不含杂质。
(二)、处于不同环境中的丁酸氯维地平的供试品溶液测试
步骤一，对丁酸氯维地平进行强制破坏处理，分别取丁酸氯维地平40mg于10mL量瓶中，经高温、光照、强酸、强碱和氧化破坏。各破坏条件如下：(1)高温破坏：120℃保温24h；(2)光照破坏：4500：如下：光照、光照20d；(3)强酸破坏：加入2mol/L盐酸溶液1mL，70℃保温4h；(4)强碱破坏：加入1mol/L氢氧化钠溶液1mL，室温放置1h；(5)氧化破坏：加入质量分数30％的过氧化氢液1mL，70℃保温4h。将破坏后样品加50％乙腈溶解并定容(酸、碱破坏样品需先分别中和)，即得。
步骤二，精密吸取五种溶液各20二，，分别注入辅以光电二极管阵列检测器的高效液相色谱仪，而后按照以上优选色谱条件进行检测。
图3(a)是本实施例中处于高温环境中的丁酸氯维地平色谱图；
图3(b)是本实施例中处于光照环境中的丁酸氯维地平色谱图；
图3(c)是本实施例中处于酸性环境中的丁酸氯维地平色谱图；
图3(d)是本实施例中处于碱性环境中的丁酸氯维地平色谱图；
图3(e)是本实施例中处于氧化环境中的丁酸氯维地平色谱图；
图3(f)是本实施例中的酸空白(G)、碱空白(H)以及氧化空白(I)的色谱图；
如图3所示，丁酸氯维地平经高温、光照、酸、碱和氧化破坏后，结果显示：丁酸氯维地平在高温及光照环境中较稳定，基本无降解；对碱性环境极不稳定，主要的降解产物为杂质①和杂质⑧。在各降解条件下，丁酸氯维地平与各杂质峰及降解产物均能达到良好分离，方法专属性良好。由强制降解试验可知，在强制条件下，杂质①、杂质⑧、杂质⑨及杂质为丁酸氯维地平主要的降解杂质，后面的方法验证实验主要以这四种杂质为主进行分析。
实施例三方法验证
本实施例对实施例一中的优选色谱条件进行方法学验证，主要在以下五个方面进行：
(一)、线性范围，检出限和定量限
分别称取11种杂质及丁酸氯维地平对照品适量，配制成相当于含量测定条件下50％、80％、100％、120％以及150％的系列浓度溶液，测定并考察各成分的线性关系及相对校正因子。以进样浓度(mg/L)为横坐标，峰面积为纵坐标，进行回归曲线分析，同时以10倍信噪比(S/N＝10)计算方法的定量限，以3倍信噪比(S/N＝3)计算方法的检出限，结果见表2。
由表2数据可知，杂质②与杂质①0相对于主成分的校正因子在0.9-1.1之间，可采用不加校正因子的主成分外标法测定该物质；对于其他杂质，其校正因子均超出此范围，因此选用加校正因子的主成分外标法进行研究以严格标准。
表2线性范围、回归方程与校正因子
(二)精密度实验
平行配制6份供试品溶液(丁酸氯维地平未做强制破坏处理)，按限度加入杂质①、杂质⑧、杂质⑨及杂质按实施例一中的方法检测，记录色谱图，计算各杂质的RSD％值。杂质①、杂质⑧、杂质⑨及杂质的重复性RSD值分别为0.56％、2.3％、1.3％、1.1％(n＝6)；结果表明，该方法重复性良好(RSD≤10.0％)。
连续两天，由两名操作人员，各平行配制6份样品溶液，按限度加入杂质①、杂质⑧、杂质⑨及杂质按实施例一中的方法检测，记录色谱图，并计算各杂质的RSD值(RSD≤15.0％)。杂质①、杂质⑧、杂质⑨及杂质的中间精密度RSD分别为2.6％、2.2％、3.1％、1.4％(n＝12)；结果表明，该方法的中间精密度良好。
(三)溶液稳定性实验
取丁酸氯维地平对照品溶液及加入限度有关物质的样品溶液，分别在0、5、10、17、24h按实施例一中的方法检测，每个时间点各测定2次。结果显示：对照品溶液峰面积RSD为1.6％(n＝10)；按限度加入杂质①、杂质⑧、杂质⑨及杂质的峰面积RSD分别为1.6％、2.7％、1.8％及3.1％(n＝10)；结果表明，对照品溶液及各杂质在室温放置24h内稳定性良好(RSD≤5.0％)。
(四)准确度实验
采用加标回收实验，制备加标浓度分别为限度浓度50％、100％和150％水平的供试品溶液，每个水平平行制备三份。计算所得的回收率应在80％～120％，RSD≤10.0％。结果显示，杂质①的回收率在98.75％～103.76％范围内，平均回收率为101.06％，RSD为0.9％(n＝9)；杂质⑧的回收率在96.26％～108.74％范围内，平均回收率为102.77％，RSD为4.9％(n＝9)；杂质⑨的回收率在94.28％～106.00％范围内，平均回收率为99.60％，RSD为3.3％(n＝9)；杂质的回收率在100.51％～113.28％范围内，平均回收率为106.62％，RSD为3.1％(n＝9)。结果表明，该方法的准确度良好。
(五)耐用性试验
通过前面的分析可知，除色谱柱型号外，波长以及柱温的变化对分离效果的影响仅次于色谱柱型号，因此，以下考察波长和柱温在存在较小波动时的方法的耐用程度。
耐用性测试条件如下：
检测波长变化：在原色谱条件波长220nm基础上变更±2nm，即218nm和222nm。
柱温变化：在原色谱条件柱温35℃基础上变更±2℃，即33℃和37℃。
实验(1)
按照3中溶液配置的方法，配置混合对照液，精密吸取混合对照品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，根据以下条件进行检测：
色谱柱：WatersSymmetryC18柱；
流动相：流动相A为浓度为0.02mol/L且pH为2.0的磷酸二氢钠水溶液，流动相B为乙腈与甲醇的体积比为3:2的乙腈和甲醇的混合液；
洗脱程序如下，流动相比例为体积百分比：
0.0～14.0min，流动相A为50％，流动相B为50％；14.0～42.0min，流动相A为40％，流动相B为60％；42.0～44.0min，流动相A为40％，流动相B为60％；44.0～63.0min，流动相A为30％，流动相B为70％；63.0～65.0min，流动相A为50％，流动相B为50％；
检测波长：218nm；柱温：33℃；流速：1.1mL/min。
图4为本实施例中本测试条件下的混合对照品的色谱图。
如图4所示，丁酸氯维地平可和11种杂质完全分离。
实验(2)
按照3中溶液配置的方法，配置混合对照液，精密吸取混合对照品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，检测如下：
色谱柱：WatersSymmetryC18柱；
流动相：流动相A为浓度为0.05mol/L且pH为2.5的磷酸二氢钠水溶液，流动相B为乙腈与甲醇的体积比为3:2的乙腈和甲醇的混合液；
洗脱程序如下，流动相比例为体积百分比：
0.0～14.0min，流动相A为40％，流动相B为60％；14.0～42.0min，流动相A为40％，流动相B为60％；42.0～44.0min，流动相A为30％，流动相B为70％；44.0～63.0min，流动相A为30％，流动相B为70％；63.0～65.0min，流动相A为30％，流动相B为70％；
检测波长：222nm；柱温：37℃；流速：1.3mL/min。
图5为本实施例中本测试条件下的混合对照品的色谱图。
如图5所示，丁酸氯维地平可和11种杂质完全分离。
实施例四
本实施例提供了一种测定丁酸氯维地平含量的方法，包括以下步骤：
步骤1，溶液制备：
丁酸氯维地平对照品溶液：精密称取对照品50mg，置50mL量瓶中，加体积分数为50％的乙腈溶解并定容至刻度，摇匀，作为对照品储备液，精密量取对照品储备液1.0mL，置10mL量瓶中，加50％乙腈稀释定容至刻度，摇匀，配制成0.1mg/mL对照品溶液；
供试品溶液：精密称取供试品50mg，置50mL量瓶中，加乙腈溶解并定容至刻度，摇匀，作为样品储备液，精密量取对照品储备液1.0mL，置10mL量瓶中，加乙腈稀释定容至刻度，摇匀，配制成0.1mg/mL供试品溶液；
混合对照品溶液：精密称取供试品适量，加入杂质对照品适量，制备每1mL含丁酸氯维地平0.1mg，各杂质约含0.01mg的混合对照品溶液；
步骤2，精密吸取空白乙腈、丁酸氯维地平对照品溶液、供试品溶液及混合对照品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，根据以下条件进行检测：
色谱柱：WatersSymmetryC18柱；
流动相：流动相A为浓度为0.05mol/L且pH为2.5的磷酸二氢钠水溶液，流动相B为乙腈与甲醇的体积比为3:2的乙腈和甲醇的混合液，流动相A和流动相B的体积比37:63；
检测波长：240nm；柱温：30℃；流速：1.50mL/min；理论塔板数至少为10000。
可接收标准：空白溶剂对无干扰，主成分与有关物质杂质峰分离度良好，分离度不得小于2.0。主峰纯度不得小于999，理论塔板数按丁酸氯维地平计不得小于10000。
图6(a)为本实施例中的混合对照品溶液的色谱图。
图6(b)为本实施例中的丁酸氯维地平对照品的色谱图。
图6(c)为本实施例中的空白溶剂的色谱图。
依据图6，空白溶剂对于物质的测试无干扰，主成份与有关物质杂质峰分离度良好，大于2.0，即杂质的存在不会影响丁酸氯维地平含量的测定，主峰纯度为999.943，理论塔板数按丁酸氯维地平计为10286，该方法的专属性良好。
实施例五
本实施例对实施例四中的丁酸氯维地平含量的测试方法的耐受性、精密度以及准确度进行验证。
(一)耐受性验证
取对照品适量，配制成1mL乙腈溶剂中约含丁酸氯维地平对照品0.1mg(相当于样品测定浓度的100％)，以主峰峰面积为研究对象，考察方法在测试条件有较小波动时的耐用程度，条件如下：
检测波长变化：在原色谱条件波长240nm基础上变更±础上变，即238nm和242nm。
流速变化：在原色谱条件流速1.50mL/min基础上变更±础上变更±/min件，即1.45mL/min和1.55mL/min。
柱温变化：在原色谱条件柱温30℃基础上变更±础℃，即28℃和32℃。
流动相比例变化：在原色谱条件流动相比例％B63％的基础上变更±基础，即61％和65％。
色谱柱变化：在原色谱条件色谱柱WatersSymmetry-C18(4.6ersSy，5.6)的基础上变更为AgilentXDB-C18(4.6lentX，5.6)和AgilentSB-C18(4.6lentS，5.6)。
可接受标准：主峰拖尾因子≤接受标；计算各条件改变时与原始条件主峰峰面积RSD值应不大于2.0％。
结果：
波长改变：将检测波长分别变更为238nm和242nm后，丁酸氯维地平主峰面积如表3所示，主峰峰面积有明显变化，RSD％＝3.37，因此需要严格控制波长为240nm。
流速变化：如表4所示，将流速变更为1.45mL/min和1.55mL/min，主峰面积随流速增加有下降趋势，但该变化在可接受范围内，与原始条件相比，RSD％＝0.82，结果显示该方法在1.45～1.55mL/min流速范围内耐用性良好。
柱温变化：如表5所示，将柱温变更为28℃和32℃，与原始条件相比，RSD％＝0.32，主峰峰面积无明显变化，结果显示该方法在28℃～32℃柱温范围内耐用性良好。
流动相比例变化：如表6所示，在原色谱流动相比例上，溶液B比例基础上变更±例基，与原始条件相比，RSD％＝0.55，主峰峰面积无明显变化，结果显示该方法在溶液B比例±例±范围内耐用性良好。
色谱柱变化：如表7所示，在原色谱条件的基础上，变更不同型号的C18色谱柱，与原始条件相比，RSD％＝0.98，结果显示该方法使用C18色谱柱耐用性良好。
表3波长变化对丁酸氯维地平主峰面积的影响
表4流速变化对丁酸氯维地平主峰面积的影响
表5柱温变化对丁酸氯维地平主峰面积的影响
表6流动相比例变化对丁酸氯维地平主峰面积的影响
表7色谱柱型号变化对丁酸氯维地平主峰面积的影响
(二)、系统精密度考察
精密量取实施例四中的丁酸氯维地平对照页，按实施例四中的测定法，连续进样6针，以所得峰面积的相对标准偏差考察方法的精密度。可接收标准：连续6次进样，主峰峰面积RSD％不得大于10％。
如表8所示，连续6次进样，主峰峰面积RSD％＝0.72，该方法的系统精密度良好。
表8精密度试验结果
(三)、准确度考察：
分别配置低浓度、中浓度以及高浓度丁酸氯维地平对照品溶液，配置方法如下：精密称取对照品40mg、50mg以及60mg对照品分别至50mL量瓶中，用乙腈溶解稀释至刻度，摇匀，取1mL至10mL量瓶中，乙腈稀释至刻度即得。每组平行三份，同时测定对照品溶液各5次，按照实施例四中的方法测定。计算各样品溶液的回收率及9份样品回收率的相对标准偏差。
可接收标准：9份样品回收率的RSD％不得大于2.0％。
结果：如表9所示，9份样品回收率的RSD％＝1.40，样品回收率平均值为99.32％，该方法的准确度良好。
表9加样回收率试验
实施例的作用与效果
本实施例提供了一种可同时检测丁酸氯维地平以及十一种有关物质的方法以及测定丁酸氯维地平含量的方法，二者均采用反相高效液相色谱法，通过大量、反复的实验，摸索出了可同时将丁酸氯维地平以及十一种有关物质分离的色谱条件以及测定丁酸氯维地平含量的条件，使得本实施例提供的色谱检测条件适用于置于不同环境中的丁酸氯维地平药物的成分以及含量分析，避免了现有技术中对不同环境中的丁酸氯维地平药物进行成分分析时，需要分别进行相应色谱条件摸索的麻烦；同时，本发明提供的色谱条件具有精密度高、重现性好、耐用性良好且易于掌握的优点。
本发明不限于具体实施方式的范围，对本技术领域的普通技术人员来讲，只要各种变化在所述的权利要求限定和确定的本发明的精神和范围内，这些变化是显而易见的，一切利用本发明构思的发明创造均在保护之列。
Claims (10)
1.一种同时检测丁酸氯维地平以及有关物质的方法，采用反相高效液相色谱法进行检测，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1，制备混合对照品溶液以及供试品溶液；
步骤2，精密吸取所述混合对照品溶液以及所述供试品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，根据以下条件进行检测：
色谱柱：C18反相色谱柱；
流动相：流动相A为浓度为0.02mol/L～0.05mol/L且pH为2.0～2.5的磷酸二氢钠水溶液，流动相B为乙腈与甲醇的体积比为3:2的乙腈和甲醇的混合液；
洗脱程序如下，流动相比例为体积百分比：
0.0～14.0min，流动相A为50％～40％，流动相B为50％～60％；
14.0～42.0min，流动相A为40％，流动相B为60％；
42.0～44.0min，流动相A为40％～30％，流动相B为60％～70％；
44.0～63.0min，流动相A为30％，流动相B为70％；
63.0～65.0min，流动相A为50％～30％，流动相B为50％～70％；
检测波长：218nm～222nm；
柱温：33℃～37℃；
流速：1.1mL/min～1.5mL/min。
2.根据权利要求1所述的同时检测丁酸氯维地平以及有关物质的方法，其特征在于：
其中，步骤1中的所述混合对照品溶液包含所述丁酸氯维地平以及所述有关物质，每1mL所述混合对照品溶液含所述丁酸氯维地平对照品4.0mg，含所述十一种有关物质各4.0μg，
每1mL所述供试品溶液含有所述丁酸氯维地平4.0mg。
3.根据权利要求1所述的同时检测丁酸氯维地平以及有关物质的方法，其特征在于：
其中，所述C18反相色谱柱为Symmetry-C18色谱柱。
4.根据权利要求1所述的同时检测丁酸氯维地平以及有关物质的方法，其特征在于：
其中，所述检测波长为220nm。
5.根据权利要求1所述的同时检测丁酸氯维地平以及有关物质的方法，其特征在于：
其中，所述流动相A为浓度为0.05mol/L且pH为2.5的磷酸二氢钠水溶液。
6.根据权利要求1所述的同时检测丁酸氯维地平以及有关物质的方法，其特征在于：
其中，所述流动相流度为1.5mL/min。
7.根据权利要求1所述的同时检测丁酸氯维地平以及有关物质的方法，其特征在于：
其中，所述柱温为35℃。
8.根据权利要求1所述的同时检测丁酸氯维地平以及有关物质的方法，其特征在于：
其中，所述用于制备所述混合对照品溶液以及所述供试品溶液的溶剂为体积分数为50％的乙腈水溶液。
9.根据权利要求1所述的同时检测丁酸氯维地平以及有关物质的方法，其特征在于：
所述丁酸氯维地平的相关物质为十一种，分别为：
①水解杂质：4-(2,3-二氯苯基)-1,4-二氢-2,6-二甲基-3,5-吡啶二羧酸单甲酯；②双腈杂质：二氰基乙基-4-(2,3-二氯苯基)-1,4-二氢-2,6-二甲基-3,5-吡啶二羧酸酯；③双酸杂质：4-(2,3-二氯苯基)-1,4-二氢-2,6-二甲基-3,5-吡啶二羧酸；④重排杂质1：6-(2,3-二氯苯基)-2-甲基-4-氧代环己烯-2-甲酸甲酯；⑤脱羧氧化杂质：4-(2,3-二氯苯基)-2,6-二甲基-3-吡啶甲酸甲酯；⑥重排杂质2：6-(2,3-二氯苯基)-4-甲基-2-氧代环己烯-3-甲酸甲酯；⑦双甲酯杂质：4-(2,3-二氯苯基)-1,4-二氢-2,6-二甲基-3,5-吡啶二羧酸二甲酯；⑧脱羧杂质：4-(2,3-二氯苯基)-1,4-二氢-2,6-二甲基-3-吡啶甲酸甲酯；⑨氧化杂质：4-(2,3-二氯苯基)-2,6-二甲基-3,5-吡啶二羧酸甲基(1-氧代丁氧基)甲基酯；⑩乙酯杂质：4-(2,3-二氯苯基)-1,4-二氢-2,6-二甲基-3,5-吡啶二羧酸乙基(1-氧代丁氧基)甲基酯；双丁酯杂质：4-(2,3-二氯苯基)-1,4-二氢-2,6-二甲基-3,5-吡啶二羧酸双(1-氧代丁氧基)甲酯。
10.一种检测丁酸氯维地平含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1，制备对照品溶液以及供试品溶液；
步骤2，精密吸取所述对照品溶液以及所述供试品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，根据以下条件进行检测：
色谱柱：C18反相色谱柱；
流动相：流动相A为浓度为0.05mol/L且pH为2.5的磷酸二氢钠水溶液，流动相B为乙腈与甲醇的体积比为3:2的乙腈和甲醇的混合液，流动相A和流动相B的体积比39～35:61～65；
检测波长：240nm；
柱温：28℃～32℃；
流速：1.45mL/min～1.55mL/min；
理论塔板数至少为10000。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510019348.XA CN105092769A (zh) | 2015-01-15 | 2015-01-15 | 一种同时检测丁酸氯维地平以及有关物质的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510019348.XA CN105092769A (zh) | 2015-01-15 | 2015-01-15 | 一种同时检测丁酸氯维地平以及有关物质的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105092769A true CN105092769A (zh) | 2015-11-25 |
Family
ID=54573676
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510019348.XA Pending CN105092769A (zh) | 2015-01-15 | 2015-01-15 | 一种同时检测丁酸氯维地平以及有关物质的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105092769A (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107367569A (zh) * | 2016-05-13 | 2017-11-21 | 天津康鸿医药科技发展有限公司 | 一种丁酸氯维地平有关物质的检测方法 |
| CN107449834A (zh) * | 2016-05-31 | 2017-12-08 | 江苏正大丰海制药有限公司 | 一种氯维地平及其脂肪乳注射液中有关物质的检测方法 |
| CN107525875A (zh) * | 2017-09-15 | 2017-12-29 | 华北制药集团动物保健品有限责任公司 | 一种加米霉素有关物质的检测方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101759631A (zh) * | 2009-12-29 | 2010-06-30 | 中山大学 | 一种丁酸氯维地平的制备方法 |
| US20110275825A1 (en) * | 2010-05-07 | 2011-11-10 | Laboratorios Lesvi, S.A. | Preparation of dihydropyridines |
| CN102432527A (zh) * | 2011-11-04 | 2012-05-02 | 浙江九旭药业有限公司 | 丁酸氯维地平的制备方法 |
| CN103134891A (zh) * | 2011-11-30 | 2013-06-05 | 天津金耀集团有限公司 | 一种丁酸氯维地平含量和有关物质的测定方法 |
-
2015
- 2015-01-15 CN CN201510019348.XA patent/CN105092769A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101759631A (zh) * | 2009-12-29 | 2010-06-30 | 中山大学 | 一种丁酸氯维地平的制备方法 |
| US20110275825A1 (en) * | 2010-05-07 | 2011-11-10 | Laboratorios Lesvi, S.A. | Preparation of dihydropyridines |
| CN102432527A (zh) * | 2011-11-04 | 2012-05-02 | 浙江九旭药业有限公司 | 丁酸氯维地平的制备方法 |
| CN103134891A (zh) * | 2011-11-30 | 2013-06-05 | 天津金耀集团有限公司 | 一种丁酸氯维地平含量和有关物质的测定方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| MATTIAS JAREMO等: "Supercritical Fluid Extraction of Clevidipine from a Water Based Vegetable Oil Emulsion", 《JOURNAL OF LIQUID CHROMATOGRAPHY & RELATED TECHNOLOGIES》 * |
| 于世林: "《高效液相色谱方法及应用 第二版》", 30 April 2005 * |
| 熊野娟等: "RP-HPLC法检查丁酸氯维地平原料药中的有关物质", 《中国药房》 * |
| 袁慧雅等: "丁酸氯维地平及其有关物质的测定和处方前研究", 《沈阳药科大学学报》 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107367569A (zh) * | 2016-05-13 | 2017-11-21 | 天津康鸿医药科技发展有限公司 | 一种丁酸氯维地平有关物质的检测方法 |
| CN107449834A (zh) * | 2016-05-31 | 2017-12-08 | 江苏正大丰海制药有限公司 | 一种氯维地平及其脂肪乳注射液中有关物质的检测方法 |
| CN107449834B (zh) * | 2016-05-31 | 2020-04-07 | 江苏正大丰海制药有限公司 | 一种氯维地平及其脂肪乳注射液中有关物质的检测方法 |
| CN107525875A (zh) * | 2017-09-15 | 2017-12-29 | 华北制药集团动物保健品有限责任公司 | 一种加米霉素有关物质的检测方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Ranjbari et al. | Preconcentration of trace amounts of methadone in human urine, plasma, saliva and sweat samples using dispersive liquid–liquid microextraction followed by high performance liquid chromatography | |
| Matar | Quantification of levetiracetam in human plasma by liquid chromatography–tandem mass spectrometry: application to therapeutic drug monitoring | |
| Hanff et al. | Simultaneous GC-ECNICI-MS measurement of nitrite, nitrate and creatinine in human urine and plasma in clinical settings | |
| Liu et al. | High performance liquid chromatography-electrospray ionization mass spectrometry (HPLC-MS/ESI) method for simultaneous determination of venlafaxine and its three metabolites in human plasma | |
| Tutunji et al. | Simultaneous determination of bisoprolol and hydrochlorothiazide in human plasma by HPLC coupled with tandem mass spectrometry | |
| CN105092769A (zh) | 一种同时检测丁酸氯维地平以及有关物质的方法 | |
| Gumustas et al. | A validated stability-indicating RP-LC method for the simultaneous determination of amlodipine and perindopril in tablet dosage form and their stress degradation behavior under ICH-recommended stress conditions | |
| CN110031568B (zh) | 一种测定人血浆中沙库巴曲、去乙基沙库巴曲和缬沙坦浓度的方法 | |
| Wanare et al. | Simultaneous estimation of dorzolamide hydrochloride and timolol maleate in eye drops by a RP-HPLC method | |
| Huang et al. | Reverse-phase high performance liquid chromatography for the determination of tiopronin in human plasma after derivatization with p-bromophenacyl bromide | |
| Ntale et al. | A field-adapted sampling and HPLC quantification method for lumefantrine and its desbutyl metabolite in whole blood spotted on filter paper | |
| Tarning et al. | Development and validation of an automated solid phase extraction and liquid chromatographic method for the determination of piperaquine in urine | |
| Carlucci et al. | Simultaneous determination of benzydamine hydrochloride and five impurities in an oral collutory as a pharmaceutical formulation by high-performance liquid chromatography | |
| CN103134891A (zh) | 一种丁酸氯维地平含量和有关物质的测定方法 | |
| Sreekanth et al. | Development and method validation of RP-HPLC for simultaneous determination of pregabalin and methylcobalamin in pure and pharmaceutical dosage form | |
| Sripalakit et al. | Validation and pharmacokinetic application of a method for determination of doxazosin in human plasma by high‐performance liquid chromatography | |
| CN102636582B (zh) | 测定三氮脒颗粒中三氮脒和安替比林含量的方法 | |
| CN105004803A (zh) | 一种分离测定托伐普坦中多个杂质的液相色谱方法 | |
| CN104965031B (zh) | 复方酮洛芬奥美拉唑缓释胶囊的含量测定方法 | |
| Gao et al. | High-performance liquid chromatography assay with programmed flow elution for cisatracurium in human plasma: application to pharmacokinetics in infants and children | |
| CN109655535B (zh) | 七味通痹口服液的检测方法 | |
| Kadioglu et al. | Development and validation of gas chromatography–mass spectroscopy method for determination of prilocaine HCl in human plasma using internal standard methodology | |
| Danh et al. | Development and validation of a liquid chromatography-mass spectrometry method for the simultaneous quantification of artesunate and dihydroartemisinin in human plasma | |
| Sahoo et al. | Development and validation of a high performance liquid chromatographic method for bioanalytical application with Ranitidine HCl | |
| Park et al. | Development and validation of LC-MS/MS for bioanalysis of hydroxychloroquine in human whole blood |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20151125 |