CN105079810A - 一种开发fus蛋白病药物新靶点 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种开发FUS蛋白病？(FUS？proteinopathies),包括FUS相关的额颞叶脑退行性病变（frontotemporal？lobar？degeneration/dementia,FTLD-FUS）（如痴呆）、运动神经元疾病如非肌萎缩侧索硬化症（Amyotrophic？Lateral？Sclerosis,ALS-FUS）、非典型FTLD-泛素病理（aFTLD-U）、神经元中间丝包涵体病（NIFID）和嗜碱性包涵体病（basophilic？inclusion？body？diseases）等疾病诊断及治疗药物的新靶点，具体包括FUS蛋白、HSP60蛋白及FUS蛋白和HSP60蛋白之间相互作用。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，特别是涉及一种用于开发FUS蛋白病（FUSproteinopathies）诊断手段及治疗药物的新靶点。
背景技术
FUS蛋白病(FUSproteinopathies),是一组致命性的、累及多种神经元包括运动神经元的神经退行性疾病。铜/锌超氧化物歧化酶1（Cu/ZnSOD1）基因在家族性ALS患者中发生突变，是第一个被鉴定出的ALS相关基因。接下来又发现了10多个与ALS有关联的基因，其中包括RNA/DNA结合蛋白TDP-43和FUS。FUS即肉瘤融合蛋白（fusedinsarcoma）。许多神经系统疾病检测到具有FUS免疫阳性的包涵体，因此从病理角度讲，这些疾病可以归类为FUS蛋白病。这些疾病在遗传上和临床上都是异质性的。根据累及的区域不同，FUS蛋白病可以表现为运动神经元疾病（如ALS-FUS）、额颞叶变性病(FTLD-FUS)、非典型FTLD-泛素病理（aFTLD-U）、神经元中间丝包涵体病（NIFID）和嗜碱性包涵体病。有意思的是，尽管在ALS-FUS患者中发现了30多个FUS基因突变，但是在绝大多数散发性或家族性FTLD-FUS病例中还没有检测到任何FUS本身的基因突变。最近，在ALS-FUS患者的FUS基因3’非翻译区鉴定出几个与FUS表达增加有关的突变，提示FUS表达的增加可能是FUS蛋白病的一种发病机制。
有几个模型被用来模拟FUS蛋白病，这些模型包括从单细胞的酵母到多细胞的果蝇及脊椎动物。包括Lanson及其同事和我们团队在内的几个研究组建立了表达人源FUS蛋白野生型和ALS突变型的转基因果蝇。在我们的果蝇模型中，野生型或ALS突变型的FUS蛋白在特定亚群神经元细胞中的表达导致年龄依赖的神经退化和功能缺失，表现出FUS蛋白病的典型特征。在大鼠转基因模型中，野生型FUS的过表达即可导致神经细胞的逐渐衰退。虽然FTLD-FUS患者FUS基因没有发生突变，但是却检测到FUS蛋白水平的上升，所以野生型FUS表达的上升有助于我们理解FTLD-FUS；而FUS的突变如P525L则与ALS-FUS密切相关。
为了弄清哺乳动物FUS蛋白在神经系统中的生物功能，我们研究了与FUS相互作用的蛋白。使用FUS特异性单克隆抗体，我们发展了一种免疫纯化与质谱技术联合使用的方法，在脑组织中鉴定出包括HSP60在内的几个线粒体蛋白是与FUS相互作用的候选蛋白。单纯用质谱方法也在纯化的线粒体中检测到了FUS蛋白，进一步支持FUS与线粒体可能存在相互作用的推测。这些结果促使我们利用FUS蛋白病模型详细检查线粒体的变化。
HSP60蛋白属于进化上保守并依赖于ATP的分子伴侣家族，在应激反应、蛋白质折叠和细胞信号转导中起重要作用。HSP60存在于细胞质和线粒体基质中，既组成型表达，也受胁迫信号诱导表达。据报道，HSP60与HSP10、HSP70等其他热激蛋白一起，促进蛋白质复合体的正确折叠和装配并运输至线粒体中。Type13痉挛性截瘫(SPG13)是一种晚发型常染色体显性遗传的神经退行性疾病，其特征是进行性衰弱和下肢痉挛，研究发现这种疾病患者的HSP60基因，即HSPD1，存在基因突变。
ALS中的线粒体损伤已有广泛研究，特别是在SOD1动物模型中。过表达TDP-43的转基因小鼠，在其运动神经元中观察到线粒体发生聚集。两例ALS-FUS患者的脊髓样本（其中一例携带P525L突变）切片的电子显微镜研究显示，细胞内的线粒体和内质网变得杂乱不规则。另外两个与ALS有关的FUS突变体（R521G或R521H）在胞质中异常定位，研究发现与体外培养的运动神经元的线粒体发生缩短有关。这些研究说明线粒体损伤可能是ALS-FUS的共同特征。但是，有关FUS的线粒体定位和FTLD-FUS患者神经细胞线粒体损伤仍然没有报道。尽管FUS的表达直接造成线粒体损伤有待进一步确定，但是我们的研究数据显示，线粒体的片段化不仅在体外培养的神经元细胞中发生，在FUS转基因果蝇的运动神经元中也存在。野生型FUS(Wt-FUS)和ALS突变型FUS（P525L-FUS）都与HSP60相互作用。我们在FTLD-FUS患者的脑组织样本中检测到线粒体损伤，且FUS的蛋白水平上升。出乎意料的是，在其中两个样本中检测到HSP60表达上升。使用RNAi技术沉默培养细胞中的HSP60，则导致线粒体中FUS的水平下降。有意思的是，RNAi调节的HSP60同源物的下调，在一定程度上缓解FUS转基因果蝇的神经退行性表型。因此，FUS表达的增加和线粒体的损伤可能是FTLD-FUS的显著病理特征。我们的实验数据还揭示了一种以前未被发现的FUS调节方式，即分子伴侣蛋白HSP60调节FUS的亚细胞定位。我们的研究结果说明，通过调节FUS的线粒体定位是治疗FUS蛋白病、防止FUS诱发线粒体损伤的一条途径。
发明内容
本发明主要解决的技术问题是提供一种用于开发FUS蛋白病(FUSproteinopathies)诊断手段及治疗药物的新靶点。
为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供一种用于开发FUS蛋白病(FUSproteinopathies)诊断手段及治疗药物的新靶点，包括FUS蛋白、HSP60蛋白及FUS蛋白和HSP60蛋白之间的相互作用。
在本发明一个较佳实施例中，所述FUS蛋白野生型和突变型的序列分别为SeqNo.1及2，所述HSP60蛋白的序列为SeqNo.3。
在本发明一个较佳实施例中，在FUS蛋白病(FUSproteinopathies)中表现为FUS免疫信号增加，FUS表达量上升，线粒体出现损伤或损伤加重；在体内过表达Wt-或P525L-突变型FUS蛋白，导致线粒体缺陷。
在本发明一个较佳实施例中，所述FUS蛋白和所述HSP60蛋白之间的相互作用是在胞质中和线粒体上发生的；所述FUS蛋白和所述HSP60蛋白之间的相互作用为直接相互作用；所述HSP60蛋白对所述FUS蛋白在线粒体上的定位有调节作用。
在本发明一个较佳实施例中，所述HSP60蛋白与所述FUS蛋白之间的相互作用使得FUS富集和定位到线粒体上，引发线粒体膜电位降低和活性氧升高，神经细胞的线粒体出现碎片化并引发神经退行性疾病的发生。
在本发明一个较佳实施例中，以所述新靶点开发的诊断手段及治疗药物能用于诊断、预防和治疗FUS蛋白病(FUSproteinopathies)。
在本发明一个较佳实施例中，所述药物为小分子化合物、FUS蛋白抗体、HSP60蛋白抗体、融合蛋白或基因药物。
在本发明一个较佳实施例中，所述药物能与FUS蛋白或HSP60蛋白结合、降低或阻断FUS蛋白与HSP60蛋白之间的相互作用，或者降低FUS基因和HSP60基因的表达。
在本发明一个较佳实施例中，所述药物包括siHSP60，所述siHSP60是以HSP60蛋白为对象，合成抑制HSP60基因表达的小RNA片段RNAi：siHSP60。
在本发明一个较佳实施例中，所述siHSP60的序列为SeqNo.4。
本发明的有益效果是：本发明发现在多种FUS蛋白病(FUSproteinopathies)患者脑组织中FUS蛋白高表达，HSP60蛋白可以和FUS蛋白相互作用，从而可以调节FUS的线粒体定位，引发线粒体碎片化或损伤，进而发生神经退行性疾病，如非肌萎缩侧索硬化症（AmyotrophicLateralSclerosis,ALS-FUS）及FTLD-FUS等FUS蛋白病（FUSproteinopathies）。
本发明提供的数据显示，在FUS蛋白病(FUSproteinopathies)患者中FUS表达量上升和线粒体出现损伤；并且FUS基因突变易导致FUS蛋白表达量升高，该蛋白与HSP60蛋白相互作用后定位于线粒体，导致线粒体损伤，进而导致FUS蛋白病(FUSproteinopathies)的发生。以该FUS蛋白或HSP60蛋白为靶点可以开发FUS蛋白病(FUSproteinopathies)的诊断手段及治疗药物。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图，其中：
图1是本发明中在三例FUS蛋白病(FUSproteinopathies)患者样本组织中发现FUS蛋白表达升高和线粒体损伤；
图2是本发明中HSP60蛋白可以与FUS蛋白相互作用，调节FUS蛋白在线粒体上的定位；
图3是本发明中提高野生型或突变型（P525L）FUS基因在细胞中的表达，导致线粒体膜电位降低和线粒体活性氧增加；
图4是本发明中在小鼠原代皮层神经元细胞中和果蝇运动神经元细胞中表达野生型或突变型（P525L）FUS基因，导致细胞线粒体碎片化(mitochondrialfragmentation)等线粒体损伤表型；
图5是本发明中在哺乳动物细胞中表达野生型或突变型（P525L）FUS基因，观察到FUS蛋白在线粒体上的定位并且导致细胞线粒体损伤；
图6是本发明中FUS蛋白参与FUS蛋白病(FUSproteinopathies)发生的原理示意图；
图7是本发明中在FUS蛋白过表达的果蝇中，利用RNAi降低HSP60同源基因的表达，可以延缓或阻断神经退行性病变。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
一、实验材料来源
HSP60A-RNAi、HSP60B-RNAi、HSP60C-RNAi和HSP60D-RNAi等转基因果蝇品系来自Vienna果蝇中心，rabbit-anti-GFP购自Millipore公司，rabbit-anti-HSP60购自BD公司；monoclonalmurineanti-myc购自Covance公司，monoclonalmurineanti-FUS，anti-CoxIV、anti-HistoneH3、anti-TOMM20、anti-MFN2、anti-GAPDH、anti-Actin和anti-PCNA购自ProteinTechGroup公司。Anti-RhoA来自SantaCruz。
二、实验方法
免疫电镜（Immuno-electronmicroscopy(IEM)orEM）方法：收集稳定表达GFP、表达野生型FUS-GFP、表达P525L突变型FUS-GFP的HEK293细胞，以含有4%PFA和0.2%戊二醛的PBS（pH为7.2）室温固定3小时。清洗和固定之后，在4℃，用2.3M蔗糖制备明胶包埋块。在-120℃，用干石英刀片切70nm超薄切片。封闭样品之后，切片用FUS单克隆抗体和偶联有胶体金颗粒的抗小鼠IgG抗体进行免疫染色。
人脑组织的免疫电镜样品制备：对健康人的和FUS蛋白病患者的尸检额叶皮质样本，首先用4%PFA和0.2%戊二醛室温固定3小时，然后用6%明胶包埋。免疫染色程序同上。
果蝇眼睛的电镜样品制备和观察：对成年果蝇的头部进行切片并用含2.5%戊二醛的PBS（pH为7.4）在4℃固定12小时，然后在含1%四氧化锇的PBS（pH为7.4）中室温浸泡2小时。以10、25、40、55、70、85和100%的乙醇溶液对样品依次脱水，每次30分钟，再用spurr树脂包埋。制备70nm超薄切片并用透射电镜检查。
免疫沉淀（Immunoprecipitation）：使用HEK293T细胞进行转染和蛋白质-蛋白质相互作用分析。转染48小时之后收集细胞并用PBS洗涤。冰上裂解30分钟后，收集可溶性细胞裂解组分，用特异性抗体和蛋白A-琼脂糖在4℃进行免疫共沉淀。免疫共沉淀产物用Westernblotting检测。
交联pull-down实验：含有Myc-His标记的P525L-FUS突变体细胞以四环素（0.5ug/ml）诱导表达16小时，用含有1mM氯化镁的磷酸缓冲液洗涤细胞，然后含1%PFA的氯化镁-磷酸缓冲液处理10分钟。用含有120mM氯化钠和1mM氯化镁的Tris-盐酸缓冲液（50mM）洗涤两次，并再处理10分钟。细胞再用氯化镁-磷酸缓冲液洗一次，用含1%NP-40、200mM氯化铵和1mMPMSF的磷酸缓冲液（pH为8.0）裂解。2500g离心获得可溶性组分，加入两倍体积的含6M盐酸胍的磷酸缓冲液（pH为8.0）。FUS蛋白用Ni-NTA琼脂糖收集，用含6M盐酸胍的磷酸缓冲液（pH为8.0）洗涤，然后用含0.1%SDS和5mMEDTA的100mMPIPES（pH为6.6）洗脱。所获得的洗脱产物用含有0.5%TritonX-100、0.05%脱氧胆酸、100mM氯化铵、5%甘油和0.5mMPMSF的HEPES(100mM,pH为7.4)稀释10倍。
三、结果分析
1、FUS蛋白病(FUSproteinopathies)患者样本中FUS蛋白表达情况和线粒体损伤情况分析。
为了分析FUS蛋白病(FUSproteinopathies)患者样本中相关细胞和分子的损伤情况，我们从美国西北大学的认知神经学和阿尔茨海默症研究中心收集了三例FUS蛋白病(FUSproteinopathies)患者和6例正常对照的大脑样本，该样本适合进行生化检测和电镜检测。利用FUS抗体检测各样本中FUS蛋白的表达水平。结果显示，疾病样本中FUS蛋白水平明显高于正常对照组织样本的蛋白水平，如图1。
同时，我们利用免疫电镜检测样本，其中一抗为FUS抗体，二抗带有金标记。在对照样品中，大多数线粒体由健康有条理包装成堆的膜片作为嵴（见图1的C1至C6、图1C），只有少数线粒体检测到FUS免疫信号。然而，在所有三例FTLD-FUS患者脑样品中，FUS免疫阳性信号频繁地在线粒体中被检测到（图1中框图C9和C13中的箭头指示，图1C和图1D）。在这些FUS蛋白病(FUSproteinopathies)样本中，线粒体表现出“嵴”的明显损伤，或被频繁检测到"环状"的中断变形的“嵴”（如图1的框图C7、C13中箭头指示）。EM定量化数据表明，三个FUS蛋白病(FUSproteinopathies)病例都表现为FUS免疫信号增加，而且细胞内线粒体损伤加重（图1D-1E）。
2、HSP60蛋白与FUS蛋白相互作用
在HEK293细胞中，我们利用免疫共沉淀方法检测HSP60蛋白是否与FUS蛋白相互作用。首先将带有GFP标签的Wt-或P525L-突变型FUS质粒转染细胞，只含有GFP的质粒作为对照。利用HSP60特异性抗体进行免疫共沉淀的结果表明，Wt-或P525L-突变型FUS蛋白均与HSP60蛋白相互作用，见图2。为了检测FUS蛋白和HSP60蛋白相互作用是发生在胞质中还是线粒体上，将转有带His标签的Wt-或P525L-突变型FUS质粒的HEK293细胞破碎和离心，得到胞质和线粒体，免疫共沉淀检测证明，FUS蛋白和HSP60蛋白相互作用在胞质中和线粒体上均可以发生。为了分析FUS蛋白和HSP60蛋白是否直接相互作用，我们利用交联pull-down实验方法检测，结果证明FUS蛋白和HSP60蛋白的相互作用是直接的而不是间接的，见图2。为了检测HSP60蛋白是否可以调节FUS蛋白在线粒体上的定位，在HEK293细胞中，利用siRNA下调HSP60的表达量，然后检测线粒体上FUS的蛋白水平。实验结果显示，与对照相比，细胞中总体的FUS蛋白表达量没有改变，但是定位在线粒体上的FUS蛋白的量明显降低，而在细胞核中的FUS蛋白量上调。这些结果说明，HSP60蛋白对FUS蛋白在线粒体上的定位有重要的调节作用。
3、FUS基因在细胞中的表达对线粒体的影响
为了检测FUS蛋白过表达是否影响哺乳动物细胞的线粒体，我们在哺乳动物的神经元样细胞HT-22和体外分离培养的鼠神经元细胞中过表达FUS蛋白。为了检测线粒体形态的变化，将融合有RFP的线粒体特异性标签蛋白（mito-RED）和融合有GFP的FUS蛋白的质粒载体共同转染细胞，只带有GFP的载体作为对照。转染GFP对照质粒的细胞，其线粒体呈现出正常的管状形态。但是转染FUS基因的细胞，其线粒体碎片化明显增加。为了进行在体实验，检测过表达FUS蛋白是否影响线粒体，我们检测了FUS转基因果蝇的运动神经元，使用线粒体特异性标记mito-GFP进行检测，结果显示与正常果蝇相比FUS转基因果蝇运动神经元的线粒体明显变小。以上这些结果说明，在神经细胞内和模型动物体内过表达Wt-或P525L-突变型FUS蛋白，均会导致线粒体缺陷，见图4。
为了检测FUS蛋白与线粒体的关系，将过表达Wt-或P525L-突变型FUS蛋白的HEK293细胞破碎离心获得线粒体，Westernblotting检测FUS蛋白在线粒体富集并定位于线粒体。以anti-FUS的抗体为探针，免疫电镜（Immuno-electronmicroscopyIEM）方法检测也进一步证明过表达野生型（Wt-）或P525L-突变型FUS蛋白定位在线粒体上，且这些细胞的线粒体与对照组相比明显缩小，见图5。
四甲基甲基酯（Tetramethylrhodaminemethylester）是一种用于标记线粒体的荧光染料，其标记程度与线粒体膜电位呈正相关性。我们用这种染料染色HEK293细胞，结果显示，过表达Wt-或P525L-突变型FUS蛋白的HEK293细胞的信号值明显降低，表明线粒体膜电位降低，说明线粒体发生损伤，见图3A-C。接下来，我们检测这些细胞的活性氧水平，利用MitoSOX检测，发现过表达P525L-突变型FUS蛋白的HEK293细胞的活性氧明显升高，而活性氧是一种可以造成线粒体碎片化和线粒体损伤的主要成分。这与前期的结果相一致，见图3D-4F。
4、FUS蛋白参与FUS蛋白病(FUSproteinopathies)发生的机理
上述实验结果说明，在FUS蛋白病(FUSproteinopathies)发生过程中，FUS蛋白参与该过程。HSP60蛋白与FUS蛋白相互作用，使得FUS富集和定位到线粒体上，进而引发线粒体膜电位降低和活性氧升高，神经细胞的线粒体出现碎片化并最终导致FUS蛋白病(FUSproteinopathies)等神经退行性疾病的发生，见图6。
5、以此发明的新靶点开发FUS蛋白病(FUSproteinopathies)诊断手段及治疗药物的示例
利用果蝇为模式动物，在其体内过表达FUS蛋白，建立FUS蛋白病(FUSproteinopathies)疾病模型。扫描电镜显示，果蝇出现小眼损失、小眼融合、异位刚毛形成和小眼组织异常等病变表现。以HSP60蛋白为对象，合成可以抑制果蝇中其同源基因HSP60B表达的小RNA片段RNAi：siHSP60B。利用siHSP60B抑制HSP60B蛋白表达后，在FUS蛋白过表达的果蝇疾病模型组中，可以部分逆转FUS诱导的小眼损失或融合、并部分恢复小眼的正常结构。在对照果蝇中，给予siHSP60B后，神经元中的线粒体没有发生变化。但是，在过表达FUS蛋白的果蝇中，给予siHSP60B的果蝇其神经元中的线粒体变大，而且可以缓解线粒体的碎片化程度，见图7。这些结果说明，沉默HSP60基因在果蝇模型中的同源基因HSP60B可以在该动物模型中表现出较好效果，进一步证明以该发明专利所述的靶点开发出针对人源HSP60的小RNA片段siHSP60用于FUS蛋白病(FUSproteinopathies)诊断手段及治疗药物的可行性。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其它相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
序列表
<110>
Seq.1
1masndytqqatqsygayptqpgqgysqqsnqpygqqsysgygqsadtsgygqssygssyg
61qtqntgygaqsapqgygstggygsgqgsqssygqqssypgygqqpapsstsgsygtssqs
121sgygqpqsggygqqsgyggqqqsygqqqsynppqgygqqnqynsssgggggggggsygqd
181qpsmsggggggygnqdqsggygggqqdrggrgrgggsgggggynrssggyeprgrgggrg
241grggmggsdrggfnkfggprdqgsrhdseqdnsdnntifvqglgenvtiesvadyfkqig
301iiktnkktgqpminlytdretgklkgeatvsfddppsakaaidwfdgkefsgnpikvsfa
361trradfnrgggngrggrgrggpmgrggyggggsggggrggfpsgggggggqqragdwkcp
421nptcenmnfswrnecnqckapkpdgpgggpggshmggsygddrrggrggydrggyrgrgg
481drggfrggrgggdrggfgpgkmdsrgehrqdrrerpy
Seq.2
1masndytqqatqsygayptqpgqgysqqsnqpygqqsysgygqsadtsgygqssygssyg
61qtqntgygaqsapqgygstggygsgqgsqssygqqssypgygqqpapsstsgsygtssqs
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241grggmggsdrggfnkfggprdqgsrhdseqdnsdnntifvqglgenvtiesvadyfkqig
301iiktnkktgqpminlytdretgklkgeatvsfddppsakaaidwfdgkefsgnpikvsfa
361trradfnrgggngrggrgrggpmgrggyggggsggggrggfpsgggggggqqragdwkcp
421nptcenmnfswrnecnqckapkpdgpgggpggshmggsygddrrggrggydrggyrgrgg
481drggfrggrgggdrggfgpgkmdsrgehrqdrrerLy
Seq.3
MLRLPTVFRQMRPVSRVLAPHLTRAYAKDVKFGADARALMLQGVDLLADAVAVTMGPKGR
TVIIEQSWGSPKVTKDGVTVAKSIDLKDKYKNIGAKLVQDVANNTNEEAGDGTTTATVLA
RSIAKEGFEKISKGANPVEIRRGVMLAVDAVIAELKKQSKPVTTPEEIAQVATISANGDK
EIGNIISDAMKKVGRKGVITVKDGKTLNDELEIIEGMKFDRGYISPYFINTSKGQKCEFQ
DAYVLLSEKKISSIQSIVPALEIANAHRKPLVIIAEDVDGEALSTLVLNRLKVGLQVVAV
KAPGFGDNRKNQLKDMAIATGGAVFGEEGLTLNLEDVQPHDLGKVGEVIVTKDDAMLLKG
KGDKAQIEKRIQEIIEQLDVTTSEYEKEKLNERLAKLSDGVAVLKVGGTSDVEVNEKKDR
VTDALNATRAAVEEGIVLGGGCALLRCIPALDSLTPANEDQKIGIEIIKRTLKIPAMTIA
KNAGVEGSLIVEKIMQSSSEVGYDAMAGDFVNMVEKGIIDPTKVVRTALLDAAGVASLLT
TAEVVVTEIPKEEKDPGMGAMGGMGGGMGGGMF
Seq.45'-GTGACAAGGCTCAAATTGA-3'
Claims (10)
1.一种用于开发FUS蛋白病(FUSproteinopathies)诊断手段及治疗药物的新靶点，其特征在于，包括FUS蛋白、HSP60蛋白及FUS蛋白和HSP60蛋白之间的相互作用。
2.根据权利要求1所述的用于开发诊断手段及治疗药物的新靶点，其特征在于，所述FUS蛋白野生型(Wt-)及ALS突变型的序列分别是SeqNo.1及No.2，所述HSP60蛋白的序列为SeqNo.3。
3.根据权利要求1所述的用于开发诊断手段及治疗药物的新靶点，其特征在于，FUS蛋白病中表现为FUS免疫信号增加，FUS表达量上升，线粒体出现损伤或损伤加重；在体内过表达Wt-或P525L-突变型FUS蛋白，导致线粒体缺陷。
4.根据权利要求1所述的用于开发诊断手段及治疗药物的新靶点，其特征在于，所述FUS蛋白和所述HSP60蛋白之间的相互作用是在胞质中和线粒体上发生的；所述FUS蛋白和所述HSP60蛋白之间的相互作用为直接相互作用；所述HSP60蛋白对所述FUS蛋白在线粒体上的定位有调节作用。
5.根据权利要求1所述的用于开发诊断手段及治疗药物的新靶点，其特征在于，所述HSP60蛋白与所述FUS蛋白之间的相互作用使得FUS富集和定位到线粒体上，引发线粒体膜电位降低和活性氧升高，神经细胞的线粒体出现碎片化并引发神经退行性疾病的发生。
6.根据权利要求1所述的用于开发药物的新靶点，其特征在于，以所述新靶点开发的药物能用于预防和治疗FUS蛋白病(FUSproteinopathies)。
7.根据权利要求1所述的用于开发诊断手段及治疗药物的新靶点，其特征在于，所述药物为小分子化合物、FUS蛋白抗体、HSP60蛋白抗体、融合蛋白或基因药物。
8.根据权利要求1所述的用于开发诊断手段及治疗药物的新靶点，其特征在于，所述药物能与FUS蛋白或HSP60蛋白结合、降低或阻断FUS蛋白与HSP60蛋白之间的相互作用，或者降低FUS基因和HSP60基因的表达。
9.根据权利要求1所述的用于开发诊断手段及治疗药物的新靶点，其特征在于，所述药物包括siHSP60，所述siHSP60是以HSP60蛋白为对象，合成抑制HSP60基因表达的小RNA片段RNAi：siHSP60。
10.根据权利要求9所述的用于开发诊断手段及治疗药物的新靶点，其特征在于，所述siHSP60的序列为SeqNo.4。
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2018170796A1 (en) * | 2017-03-22 | 2018-09-27 | Tsinghua University | Trim72 as potential therapeutic target for als through ubiquitinating mutant fus protein |
| CN114605501A (zh) * | 2022-04-07 | 2022-06-10 | 华中科技大学同济医学院附属协和医院 | 一种可拮抗fus蛋白rna结合活性的多肽fip-21及其应用 |
| CN116042619A (zh) * | 2022-12-19 | 2023-05-02 | 神济昌华(北京)生物科技有限公司 | 用于构建人源FUS基因敲入的ALS果蝇模型的gRNA组合及其应用 |
-
2015
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Non-Patent Citations (8)
| Title |
|---|
| JENNY BLECHINGBERG等: "Characterization and expression analysis in the developing embryonic brain of the porcine FET family: FUS, EWS, and TAF15", 《GENE》 * |
| KAZUO FUSHIMI等: "Expression of human FUS/TLS in yeast leads to protein aggregation and cytotoxicity, recapitulating key features of FUS proteinopathy", 《PROTEIN CELL》 * |
| MAGDALENA GORSKA等: "Geldanamycin-Induced Osteosarcoma Cell Death Is Associated with Hyperacetylation and Loss of Mitochondrial Pool of Heat Shock Protein 60 (Hsp60)", 《PLOS ONE》 * |
| YANBO CHEN等: "Expression of human FUS protein in Drosophila leads to progressive neurodegeneration", 《PROTEIN CELL》 * |
| 刘文娟等: "《药物化学》", 28 February 2013, 中国医药科技出版社 * |
| 曹智等: "热休克蛋白60与细胞凋亡", 《生理科学进展》 * |
| 李学军等: "《药理学》", 30 November 2012, 第四军医大学出版社 * |
| 陈彦博: "FUS蛋白病发病机制探究", 《万方数据》 * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2018170796A1 (en) * | 2017-03-22 | 2018-09-27 | Tsinghua University | Trim72 as potential therapeutic target for als through ubiquitinating mutant fus protein |
| CN110753557A (zh) * | 2017-03-22 | 2020-02-04 | 清华大学 | Trim72通过泛素化fus蛋白突变体作为als的潜在治疗性靶标 |
| CN110753557B (zh) * | 2017-03-22 | 2024-03-22 | 神济昌华(北京)生物科技有限公司 | Trim72通过泛素化fus蛋白突变体作为als的潜在治疗性靶标 |
| CN114605501A (zh) * | 2022-04-07 | 2022-06-10 | 华中科技大学同济医学院附属协和医院 | 一种可拮抗fus蛋白rna结合活性的多肽fip-21及其应用 |
| CN114605501B (zh) * | 2022-04-07 | 2023-06-30 | 华中科技大学同济医学院附属协和医院 | 一种可拮抗fus蛋白rna结合活性的多肽fip-21及其应用 |
| CN116042619A (zh) * | 2022-12-19 | 2023-05-02 | 神济昌华(北京)生物科技有限公司 | 用于构建人源FUS基因敲入的ALS果蝇模型的gRNA组合及其应用 |
| CN116042619B (zh) * | 2022-12-19 | 2023-09-08 | 神济昌华(北京)生物科技有限公司 | 用于构建人源FUS基因敲入的ALS果蝇模型的gRNA组合及其应用 |
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