CN105008899B - 分析装置及自动分析装置 - Google Patents
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Abstract
本发明降低自动分析装置上的散射光测定中的气泡、灰尘的影响。从光源照射短波长侧的第1波长18a、长波长侧的第2波长18b,接收透射光19a、19b及散射光21a、21b。根据第1波长、第2波长的透射光强度比及第2波长的散射光的变化光量推算噪音,通过从第1波长的散射光的变化光量中减去从而降低因气泡、灰尘引起的噪音。
Description
技术领域
本发明涉及对利用抗原抗体反应的微粒凝集反应进行散射光测定的方法及装置,特别涉及自动分析装置上的散射光测定法。
背景技术
使来自光源的光照射试样和试剂混合形成的反应液,利用特定波长的透光量的变化算出吸光度,根据Lambert-Beer定律对试样中的被测物质的浓度进行定量的自动分析装置正在被广泛应用。在这些装置中,在反复进行旋转和停止的槽盘的圆周上排列多个保持反应液的槽,在槽盘旋转过程中通过规定位置的透射光测定部,以15秒左右的间隔用约10分钟测定从反应槽内的反应液中透过的光量的时间系列数据作为反应过程数据,根据光量的变化算出吸光度,对被测定物质的浓度进行定量。
用自动分析装置测定的反应主要有基质和酶的显色反应、抗原和抗体的免疫反应这2种。采用前者反应的分析被称为生物化学分析,作为检测项目有LDH(乳酸脱氢酶)、ALP(碱性磷酸酶)、AST(门冬氨酸氨基转移酶)等。采用后者反应的分析被称为免疫分析,作为检测项目有CRP(C反应性蛋白)、IgG(免疫球蛋白)、RF(类风湿因子)等。在后者测定的被测定物质中,存在在血中浓度低的低浓度区域要求定量的检测项目,在这样的项目中采用乳胶免疫分析,使用在表面与抗体偶联(结合)的乳胶粒子作为增感剂。在乳胶免疫分析中,试剂中含有的乳胶粒子表面的抗体将作为试样中含有的被测定物质的抗原识别并结合后的结果,乳胶粒子通过抗原发生凝集,形成乳胶粒子的凝集体。在以往的自动分析装置中,使光照射该凝集体分散形成的反应液,测定在乳胶粒子的凝集体上不发生散射而透过的透光量。抗原的浓度越高,一定时间后的凝集体的尺寸变得越大,由于更多的光发生散射,所以透光量减少。因此,根据作为反应过程数据测定的光量能够对抗原浓度进行定量。
近年来,乳胶免疫分析的更高灵敏度备受期待,不是测定透射光,而是尝试测定散射光。例如,专利文献1公开了使用光阑将透射光和散射光分离,同时测定透射光和散射光的系统。专利文献2公开了在自动分析装置中将2个波长的检测光强度的差值自动算出并算出分析结果的系统。此外,在自动分析装置以外,专利文献3公开了对于包含透射光和散射光的检测信号,获取在波长670nm和940nm的差,计量血中外源性大分子的系统。
现有技术文献
专利文献
专利文献1日本特开2001—141654号公报
专利文献2日本特开平03—065654号公报
专利文献3日本特开平06—038947号公报
发明内容
发明要解决的问题
在利用散射光的自动分析装置中,到目前为止还没有根据多个波长的反应过程数据进行运算,实现高灵敏度的方法。专利文献1虽然公开了通过同时进行透射光测定和散射光测定实现高灵敏度的结构,但并不是作为适合自动分析装置的结构而考虑的。在专利文献2中虽然通过运算多个波长的数据,在吸光度方面实现噪音的降低,但关于散射光的数据运算方法并没有公开。专利文献3,作为计量的对象是外源性大分子,并不是能够获得乳胶免疫分析中反应过程数据的方法。
为使乳胶免疫分析实现高灵敏度而测定散射光时,需要降低因气泡、灰尘等干扰物质引起的噪音。特别是,因为使用反应过程数据进行测定,由于气泡、灰尘在反应过程中长大或增加等原因引起信号变化成为问题。
此外,乳胶免疫分析的试剂中含有的乳胶粒子根据试剂种类的不同在反应液中的密度有一定范围,因气泡、灰尘等干扰物质引起的噪音影响根据试剂而不同。因此,期望使用相同的光学体系,不易受试剂的种类影响的噪音消除方法。
在本发明中,将第1波长的光和比第1波长的波长长的第2波长的光由同一光路照射装入有试样和试剂混合形成的反应液的槽,接收各个波长的散射光。接着,求出从表示由反应液中的凝集反应引起变化的第1波长的散射光的变化光量的信号中减去第2波长的散射光的变化光量乘以依赖于试剂的试剂系数的信号所得的信号,以该求出的信号为基础对试样中的成分量进行定量。
典型的是,试剂含有在直径50nm~500nm的表面上结合了抗体的乳胶粒子,作为第1波长使用0.65μm~0.75μm范围的光。作为试剂系数能够使用透射槽的第1波长的光和第2波长的光的强度比,但也可以将每种试剂的试剂系数预先存储在存储部,将其适当读取并利用。
发明的效果
根据本发明,在乳胶免疫分析中,可以将由干扰物质引起的噪音消除。
上述以外的课题、结构以及效果,通过以下实施方式的说明而明确。
附图说明
图1为说明在抗原抗体反应中测定出的散射光随时间变化的概略图。
图2为表示自动分析装置的一个实施例的整体结构例的概略图。
图3为散射光测定部的概略图。
图4为光源单元的概略图。
图5为散射光接收部的概略图。
图6为表示由气泡产生的噪音影响和运算结果的图。
具体实施方式
以下,参照附图对本发明的实施方式进行说明。
图1为说明在抗原抗体反应中测定的散射光随时间变化的概略图。在具有散射光测定部的自动分析装置上,首先在添加了第一试剂的试样中混合直径为50nm~500nm的乳胶粒子分散形成的第二试剂(基准状态),检测经过一定时间后的(凝集状态)的散射光或透射光的变化光量。另外,准备使用已知浓度的抗原测定的变化光量的校准数据,通过与该数据比较,算出试样中的抗原浓度。在本发明中,根据散射光的第1波长、第2波长各自的信号,使用下述的运算后的信号准备校准数据。因为变化光量也与照射光的强度成比例,所以预先调整第1波长和第2波长的光源强度差在20%以内。或者预先测定第1波长和第2波长的光源强度比,用该强度比除散射光强度,抑制因光源强度的不均匀引起的散射光强度的不均匀。或者在槽内加入纯水,测定透射槽的第1波长和第2波长的透射光强度比,通过用该强度比除散射光强度,也可以对于因光源强度的不均匀引起的散射光强度的不均匀进行修正。
图2为表示自动分析装置的一实施例的整体结构例的概略图。本实施例的自动分析装置能够同时测定透射光和散射光。本实施例的自动分析装置具有:试样盘3、试剂盘6、槽盘9这3种盘,在这些盘之间转移试样、试剂的分注机构,控制这些分注机构的控制回路23,透射光测定回路24,散射光测定回路25,对测定的数据进行处理的PC(计算机)等数据处理部26,作为对数据处理部26输入数据的界面的输入部27,输出部28。数据处理部26具备分析数据的分析部、以及将控制数据、测定数据、分析时使用的数据、分析结果数据等存储的数据存储部。
在试样盘3的圆周上配置了多个收纳试样1的试样杯2。在试剂盘6上配置了多个收纳试剂4的试剂瓶5。在槽盘9的圆周上配置了多个在内部使试样1和试剂4混合形成反应液7的槽8。试样分注机构10将固定量的试样1从试样杯2转移至槽8。试剂分注机构11将固定量的试剂4从试剂瓶5转移至槽8。搅拌部12在槽8内将试样1和试剂4搅拌混合。洗净部14从分析结束后的槽8中将反应液7排出洗净。在被洗净的槽8内再次由分注机构10分注下一个试样1,由试剂分注机构11分注新的试剂4,在其他反应中使用。槽8浸入在温度、流量被控制的恒温槽内的恒温流体15中,槽8及其中的反应液7在保持一定温度的状态下被转移。恒温流体15例如使用水,恒温流体温度通过控制回路23调温至37±0.1℃。槽盘圆周上的一部分设置有透射光测定部13和散射光测定部16。
透射光测定部13,例如能够形成使来自卤素灯光源的光照射槽8,通过衍射光栅将透射光分光后,通过光电二极管阵列接收光的结构。接收的波长,例如为340nm、405nm、450nm、480nm、505nm、546nm、570nm、600nm、660nm、700nm、750nm、800nm。通过光电二极管阵列接收的透射光量数据,通过透射光测定回路24被输送至PC内的数据存储部。
图3为散射光测定部16的概略图。作为光源例如能够使用LED光源等。使来自LED光源单元17的照射光18a、18b照射移动中的槽8,透射光接收部20接收透射光19a、19b,散射光接收部22接收散射光21a、21b。照射光18a、18b、透射光19a、19b、散射光21a、21b分别是不同波长的光且通过同一的空间区域。散射光测定用的波长为650nm~750nm内包含的波长和比该波长长的波长,优选为900nm以上即可。
图4为LED光源单元17的概略图。从LED光源单元17照射的光至少有2个波长的光,例如将来自LED31a的波长700nm的光和来自LED31b的波长950nm的光,如图4所示通过半反射镜32合波并调整在相同的光轴后,作为照射光18射出。在本实施例中作为光源使用单一波长的LED31a、31b,但也可以为白色LED、激光、氙灯、卤素灯。也可以使用下述光源,即:使用荧光物质,从一个LED光源射出第1波长和进一步由第1波长通过荧光物质射出第2波长的光源。例如将产生白色光的卤素灯作为光源使用时,也可以在接收部进行分光,测定波长700nm的光量和波长950nm的光量。
散射光接收部22测定相对于光轴在空气中仅偏离角度θ方向的散射光21a、21b。角度θ为15~35°范围的角度即可,但在本实施例中使θ=20°。该散射光接收部22配置于相对于由槽盘9旋转带动槽8移动的方向大致垂直的面内。在此,作为角度θ的基准位置,以光通过槽8内的长度的中间部为起点。
图5为散射光接收部22的概略图。散射光接收部22具有将光进行分光的功能,例如使用二向色镜34将散射光分离为第1波长700nm和第2波长950nm的光。分别用光电二极管33a、33b接收。
在本实施例中,通过散射光接收部22将光分离成2个波长,但作为照射光使用卤素灯等白色光,作为散射光接收部22也可以使用组装了衍射光栅等的分光单元。
试样1中被测定物质的浓度定量根据以下顺序进行。首先,通过试样分注机构10将试样杯2内的试样1定量分注于槽8内。接着,通过试剂分注机构11将试剂瓶5内的试剂4定量分注于槽8内。进行这些分注时,试样盘3、试剂盘6、槽盘9在控制回路23的控制下,分别被驱动部旋转驱动,使试样杯2、试剂瓶5、槽8配合分注机构10、11的分注时间进行移动。接着通过搅拌部12将分注于槽8内的试样1和试剂4搅拌,形成反应液7。来自反应液7的透射光及散射光在槽盘9的旋转过程中每次通过透射光测定部13及散射光测定部16的测定位置时被测定,通过透射光测定回路24、散射光测定回路25作为反应过程数据依次被存储在数据处理部26的数据存储部。在固定时间例如10分钟测定后,通过洗净部14将槽8内洗净,进行接下来的检查项目的分析。在此期间,如果需要可以将其他试剂4通过试剂分注机构11追加分注于槽8内,通过搅拌部12搅拌,进而在固定时间进行测定。通过这样,持有固定时间间隔的反应液7的反应过程数据被存储于数据存储部。
根据存储的散射光测定部的反应过程数据,在分析部求出固定时间反应引起的光量的变化,根据预先在数据存储部保存的标准曲线数据,算出定量结果,通过输出部显示。各部的控制、分析所需要的数据从输入部27输入到数据处理部26的存储部。各种存储部的数据、结果以及警报通过输出部28显示等输出。
在本实施例中,将至少2个波长的光以同一光路照射反应液,接收从反应液发出的散射光,通过使用由每种试剂决定的试剂系数对2个波长间的散射光信号进行运算,降低因干扰物质引起的变化光量(噪音)。特别是通过从短波长侧的光的散射光信号中减去将2个波长的光中的长波长侧的光的散射光信号乘以试剂系数的值来降低噪音。
以下,进行更加具体地说明。进行调整使得第1波长和第2波长的各自照射槽的照射光强度相等。在此基础上,根据来自反应刚开始后的反应液的第1波长、第2波长各自的透射光强度It1、It2,如下决定试剂系数k。
k=It1/It2
接着,利用第1波长、第2波长的各自通过反应而变化的散射光的光量Is1(t),Is2(t)和试剂系数k,得到运算后的反应过程数据,
Is-cal(t)=Is1(t)-k×Is2(t)
使用该运算后的反应过程数据,对试样中的成分量进行定量。
在此,表示了根据来自反应刚开始后的反应液的透射光强度求出试剂系数k的方法,但也可以对使用的每种试剂在测定前进行设定。
图6表示因气泡产生的噪音影响和运算结果。图(6-a1)、(6-b1)是作为干扰物质的气泡附着于槽壁上,将气泡成长时的第1波长700nm、第2波长950nm的散射光强度模拟的图。模拟是在含有反应液的光路长5mm的槽内壁上,在照射光轴中心配置气泡,计算偏离照射光θ=20°方向的散射光。
在该模拟中气泡的位置假定为接收部侧的槽壁,但气泡附着于照射光侧的槽壁时也是同样的结果。即气泡附着于接收部侧槽壁时透射反应液衰减的照射光被气泡散射,气泡附着于照射光侧槽壁时照射光被气泡散射后透过反应液衰减。在此,由于碰到气泡的光散射的比例和透射反应液衰减的比例不依赖于附着的壁,因此作为结果因进入接收部的气泡引起的散射光的强度不依赖于气泡附着的槽壁几乎相等。
反应液中的气泡、灰尘相对于计量使用的波长足够大,包含在图6所示的气泡直径范围内的比例大。在此,图(6-a1)及(6-b1)为含有相当于在各波长700nm处的吸光度0.08(abs)、0.30(abs)的(950nm波长处的吸光度,0.03(abs)、0.13(abs))直径300nm的胶粒的反应液的数据。此外,图(6-a2)及(6-b2)为气泡成长直径逐渐变大时,由各直径的气泡产生的散射光以气泡直径为0μm时即无气泡时的散射光强度为基准表示的变化光量的图。
以下根据来自反应刚开始后的反应液的透射光强度It(700nm)、It(950nm)之比求出试剂系数k。将各波长的照射光强度I0调整为同一时,图(6-a1)(波长700nm处0.08(abs))的情况下,光路长5mm时为:
It(700nm)=10-(0.08/2)×I0,It(950nm)=10-(0.03/2)×I0
试剂系数k为:
k=It(700nm)/It(950nm)=10-(0.08/2)/10-(0.03/2)≌0.95
同样,图(6-b1)(波长700nm处0.30(abs))的情况下,试剂系数k为0.82。
使用的来自反应刚开始后的反应液的透射光强度,也可以使用在透射光测定部测定的值。此外,试剂系数也可以在测定前根据每种试剂设定,预先存储在数据存储部,将其读取并利用。
使用波长700nm、950nm各自的散射光的变化光量Is(700nm),Is(950nm)和试剂系数k的减法运算结果{Is-cal=Is(700nm)-k×Is(950nm)},单纯的减法运算结果{Is(700nm)-Is(950nm)},试剂系数固定为k=0.97的减法运算结果的例子如图(6-a3)(6-b3)所示。
根据图(6-a2)、(6-b2),因气泡引起的散射光的变化光量,波长950nm的光比波长700nm的大,且试剂的吸光度越高,其差也越大。这是因为试剂的粒子直径一般在50nm~500nm的范围,在短波长和长波长处试剂的吸光度不同,照射在气泡、灰尘等干扰物质上的透射光波长越短就越小,所以干扰物质引起的变化光量波长越短就越小。
因此,在2个波长间的单纯的减法运算、使试剂系数固定的减法运算中,2个波长间的减法运算范围因试剂而变大,但通过使用反映来自反应刚开始后的反应液的透射光强度的试剂系数,与单纯的减法运算比较,因干扰物质引起的变化光量可以抑制到1/4以下(参照图(6-a3)(6-b3))。
另一方面,与相对于干扰物质的波长依赖性相反,由反应引起的变化光量在可见光以上的波长范围,短波长一侧变大。因此,通过使用上述减法运算结果,可以抑制干扰物质引起的影响,获得由反应引起的变化光量。
在本实施例的自动分析装置中,在数据处理部26中,如上所述,以波长700nm和波长950nm处的散射光的变化光量Is(700nm)、Is(950nm)为基础,使用试剂系数k进行运算{Is-cal=Is(700nm)-k×Is(950nm)},将运算结果Is-cal与数据存储部保存的标准曲线数据进行对照从而对试样中的成分量进行定量。通过这样,能够降低附着于槽壁的气泡、灰尘的影响,进行高精度的定量分析。
此外,本发明并不限定于上述实施例,而包括各种变形例。例如上述实施例是为了易于理解本发明而进行了详细说明,但并不限定于必须具备说明的全部结构。此外,可以将某实施例的结构的一部分换成其他实施例的结构,而且也可以在某实施例的结构上加入其他实施例的结构。此外,对于各实施例的结构的一部分,可以进行其他的结构的追加、消除、置换。此外,图上表示了认为有必要说明的内容,但并没有必要表示制品上全部的结构、功能。
符号说明
1…试样、2…试样杯、3…试样盘、4…试剂、5…试剂瓶、6…试剂盘、7…反应液、8…槽、9…槽盘、10…试样分注机构、11…试剂分注机构、12…搅拌部、13…透射光测定部、14…洗净部、15…恒温流体、16…散射光测定部、17…LED光源单元、18a,18b…照射光、19a,19b…透射光、20…透射光接收部、21a,21b…散射光、22…散射光接收部、23…控制回路、24…透射光测定回路、25…散射光测定回路、26…数据处理部、27…输入部、28…输出部、31a,31b…LED、32…半反射镜、33a,33b…光电二极管、34…二向色镜。
Claims (10)
1.一种分析装置,其用于乳胶免疫分析,其特征在于,具有:
槽,装入有试样和试剂混合形成的反应液,
光源部,将第1波长的光和比上述第1波长的波长长的第2波长的光由同一光路照射上述槽,
光接收部,接收与上述槽内的反应液相互作用的上述第1波长的散射光和上述第2波长的散射光,以及
数据处理部,
上述数据处理部求出从表示由上述反应液中的凝集反应引起变化的上述第1波长的散射光的变化光量的信号中减去上述第2波长的散射光的变化光量乘以依赖于上述试剂的试剂系数的信号所得的信号,以该求出的信号为基础对上述试样中的成分量进行定量,
根据来自上述反应刚开始后的反应液的上述第1波长、上述第2波长各自的透射光强度比来决定上述试剂系数。
2.根据权利要求1所述的分析装置,其特征在于,
上述试剂含有直径50nm~500nm的粒子,作为上述第1波长使用0.65μm~0.75μm范围的光。
3.根据权利要求1所述的分析装置,其特征在于,
照射上述槽的上述第1波长的光和上述第2波长的光的强度比调整在规定的误差范围内。
4.根据权利要求1所述的分析装置,其特征在于,
具有将上述试剂系数按照每种试剂进行存储的存储部,上述数据处理部读取并使用上述存储部中存储的试剂系数。
5.根据权利要求1所述的分析装置,其特征在于,
使用上述槽内含有纯水时的透射光强度,对上述第1波长的光和上述第2波长的光的强度进行归一化。
6.一种自动分析装置,其用于乳胶免疫分析,其特征在于,具有:
试样盘,配置有多个装入了试样的试样杯且被旋转驱动,
试剂盘,配置有多个装入了试剂的试剂瓶且被旋转驱动,
槽盘,配置有多个收纳反应液的槽且被旋转驱动,
试样分注机构,从上述试样盘的试样杯中向上述槽盘的槽内分注试样,
试剂分注机构,从上述试剂盘的试剂瓶中向上述槽盘的槽内分注试剂,
测定部,对于正在进行旋转驱动的上述槽盘的装入有试样和试剂混合形成的反应液的槽进行光学测定,以及
数据处理部,对由上述测定部测定了的数据进行处理,
上述测定部具备光源部和光接收部,上述光源部将第1波长的光和比上述第1波长的波长长的第2波长的光由同一光路照射上述槽,上述光接收部接收与上述槽内的反应液相互作用的上述第1波长的散射光和上述第2波长的散射光,
上述数据处理部求出从表示由上述反应液中的凝集反应引起变化的上述第1波长的散射光的变化光量的信号中减去上述第2波长的散射光的变化光量乘以依赖于上述试剂的试剂系数的信号所得的信号,以该求出的信号为基础对上述试样中的成分量进行定量,
根据来自上述反应刚开始后的反应液的上述第1波长、上述第2波长各自的透射光强度比来决定上述试剂系数。
7.根据权利要求6所述的自动分析装置,其特征在于,
上述试剂含有直径50nm~500nm的粒子,作为上述第1波长使用0.65μm~0.75μm范围的光。
8.根据权利要求6所述的自动分析装置,其特征在于,
照射上述槽的上述第1波长的光和上述第2波长的光的强度比调整在规定的误差范围内。
9.根据权利要求6所述的自动分析装置,其特征在于,
具有将上述试剂系数按照每种试剂进行存储的存储部,上述数据处理部读取并使用上述存储部中存储的试剂系数。
10.根据权利要求6所述的自动分析装置,其特征在于,
使用上述槽内含有纯水时的透射光强度,对上述第1波长的光和上述第2波长的光的强度进行归一化。
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