CN104997771B - 化合物p7c3‑a20在制备治疗脑缺血疾病药物中的应用 - Google Patents
化合物p7c3‑a20在制备治疗脑缺血疾病药物中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及化合物P7C3‑A20在制备治疗脑缺血疾病药物中的应用。本发明通过细胞实验证实P7C3‑A20可以提高缺氧缺糖模型中离体培养的小鼠大脑皮层神经元的生存率，通过动物实验证实P7C3‑A20可以明显降低大鼠大脑中动脉阻塞导致的脑梗死面积，这些结果表明P7C3‑A20具有脑缺血保护作用，能够防治脑缺血造成的脑损伤，在制备脑缺血损伤和/或脑梗死相关药物方面具有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及化合物的新用途，具体地说，涉及化合物P7C3-A20在制备治疗脑缺血疾病药物中的应用。
背景技术
P7C3-A20属于P7C3系列化合物的一种，CAS号为1235481-90-9，化学结构式为：
它是一种氯丙基咔唑类化合物，口服生物利用度高，可通过血脑屏障，且在有效剂量和高剂量下均未表现出毒性。已有国外报道发现P7C3这一类化合物在抑郁症、老年性疾病如帕金森(PD)、肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)、认知退行性疾病、视网膜变性等疾病中有保护作用。目前，尚无P7C3-A20对脑缺血损伤的保护作用的报道。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供化合物P7C3-A20的新用途。
在本发明的第一方面，提供了化合物P7C3-A20在制备防治脑缺血损伤的药物中的应用。
作为本发明的一种具体实施方式，所述的防治脑缺血损伤是指提高大脑皮层神经元的生存率或减少脑梗死面积。
在本发明的第二方面，提供了化合物P7C3-A20在制备药物中的应用，所述的药物用于：
a)提高缺血大脑皮层神经元的生存率，或
b)减少脑缺血的脑梗死面积。
在本发明的第三方面，提供了化合物P7C3-A20在制备防治脑梗死的药物中的应用。
本文中，所述的化合物P7C3-A20结构式为：
本文中，所述的“脑缺血”是指包括TIA、脑梗塞和烟雾病(但不仅限于此)在内的颅内血管病变，其引起的主要病理变化为脑缺血损害。总的来说，所述的“脑缺血”可能由以下原因引起：①颅内、外动脉狭窄或闭塞；②脑动脉栓塞；③血流动力学因素；④血液学因素等。造成脑动脉狭窄或闭塞的主要原因是动脉粥样硬化。造成脑动脉栓塞的主要原因包括动脉粥样硬化，以及因患有风湿性心瓣膜病、亚急性细菌性心内膜炎、先天性心脏病、人工瓣膜和心脏手术等形成的栓子随血流进入脑内造成的栓塞。血流动力学因素包括短暂的低血压引发的脑缺血，例如心肌梗死、严重心律失常、休克、颈动脉窦过敏、直立性低血压、锁骨下动脉盗血综合征等。血液学因素包括口服避孕药物、妊娠、产妇、手术后和血小板增多症引起的血液高凝状态，红细胞增多症、镰状细胞贫血、巨球蛋白血症引起的黏稠度增高所引起的脑缺血。
本发明优点在于：本发明通过细胞实验证实P7C3-A20可以提高缺氧缺糖模型(OGD模型)中离体培养的小鼠大脑皮层神经元的生存率，通过动物实验证实P7C3-A20可以明显降低大鼠大脑中动脉阻塞导致的脑梗死面积，这些结果表明P7C3-A20具有脑缺血保护作用，能够防治脑缺血造成的脑损伤，在制备脑缺血损伤和/或脑梗死相关药物方面具有广阔的应用前景。本发明为脑缺血提供了新的药物研发方向。
附图说明
图1.神经元生存率检测结果。*P<0.05vs无P7C3-A20处理组，N＝6。
具体实施方式
下面结合附图对本发明提供的具体实施方式作详细说明。
实施例1
一、方法
1、小鼠大脑皮层神经元的培养
(1)取孕鼠，E15-18天，脱颈椎处死，75％酒精擦拭腹部，剖腹，切取子宫。
(2)将子宫放置于含双抗的无菌去离子水的培养皿中，转移至细胞房内。
(3)将子宫迅速转移至冰冷的高糖DMEM中，用眼科剪从子宫角处撕开子宫，取出胎鼠，剪刀断头，仔细剥离，取大脑；显微镜下分离出大脑皮层，仔细剥除脑膜和血管。
(4)将脑组织转入新鲜冰冷的高糖DMEM中，漂洗2次后转移至1.5mL EP管中，放置冰上，用弯剪尽量剪碎脑组织。
(6)将剪碎的脑组织转移至小锥形瓶中，加入Accutase酶，锡箔纸封口，37℃摇床消化10min。
(7)消化结束后，加入1mL FBS终止消化，混匀，1000rpm离心5min，舍弃上清液。
(8)加入5mL接种培养基，1000rpm离心5min，舍弃上清液。
(9)加入少量接种培养基，混匀，200目细胞筛过筛，并用细胞计数板计数。
(10)加入接种培养基调整细胞密度，接种。
(11)接种后4-6h，根据细胞贴壁情况更换成Neurobasal生长培养基。
(12)接种36h后，半量换液，加入阿糖胞苷(终浓度为2.5μg/mL)。
(13)第5天，全量换液。
(14)第7天，全量换液，加药处理或进行其他操作。
其中，接种培养基：含10％FBS+10％马血清的高糖DMEM；Neurobasal生长培养基：2％B27添加物，1％双抗，25μM L-谷氨酸。
2、OGD模型在体外模拟脑缺血
待原代培养的小鼠大脑皮层神经元生长至第7天，弃细胞培养基，用PBS清洗两次。加入无糖DMEM培养基，给药组加入溶于二甲基亚砜(DMSO)的P7C3-A20(购于上海技毅生物科技有限公司，CAS号为1235481-90-9)。P7C3-A20的终浓度为10mM、30mM及100mM，并将溶剂DMSO的浓度控制在0.1％。对照组则加入0.1％的DMSO。将神经元放置于三气培养箱(含1％O2、5％CO2、94％N2)中培养12小时，通过制造低氧低糖环境，模拟脑缺血。培养12小时后，用CCK-8方法测神经元生存率。CCK-8细胞活力试剂盒购于日本Dojindo公司，是一种广泛运用的细胞活力及生存率的检测试剂盒。
二、结果
结果见图1，可以看到OGD大幅度降低了神经元的生存率，而P7C3-A20化合物的处理可显著减轻OGD导致的神经元的生存率下降(P<0.05)。
实施例2
一、方法
用大鼠(Sprague-Dawley大鼠，体重250g左右，上海斯莱克实验动物有限公司)制备永久性脑缺血损伤模型。过程如下：将大鼠麻醉，打开颅骨，直接在目视下将大脑中动脉电凝，导致左侧大脑中动脉堵塞。30分钟后给予大鼠腹腔注射P7C3-A20(30mg/kg)。复位颅骨，缝合皮肤，即成功制备大鼠大脑中动脉堵塞导致的永久性脑缺血模型。大脑中动脉堵塞后24小时，给予检测脑梗死面积。脑梗死体积检测采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(购自Amersco公司)染色法，即TTC染色法。
二、结果
结果见表1，可以看到：化合物P7C3-A20明显降低了脑梗死面积。
表1对照组与P7C3-A20治疗组的脑梗死面积对比
注：***P<0.001vs对照组，N＝9-10。表格中的数字为脑梗死占全脑体积的百分比。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。
Claims (1)
1.化合物P7C3-A20在制备防治脑梗死的药物中的应用，所述的化合物P7C3-A20结构式为：
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