CN104975096B - 非小细胞肺癌的一种诊断标志物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生物技术领域，具体涉及人TGFβR2基因在制备非小细胞肺癌试剂中的应用。本发明首次揭示了TGFβR2基因与非小细胞肺癌的相关性，在90%以上的非小细胞肺癌病例中有高表达，非小细胞肺癌组织中的表达量：正常癌旁组织中的表达量≥2.0：1，本发明方法在检出的灵敏度，准确性都显著优于现有的诊断方法。

Description

非小细胞肺癌的一种诊断标志物

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及人TGFβR2基因在制备非小细胞肺癌检测试剂中的应用。

背景技术

非小细胞肺癌(Non-small-cell carcinoma NSCLC)是世界上癌症相关死亡的首要原因。每年大概有120万患者被诊断出非小细胞肺癌，同时，110万人死于该症。

虽然在过去的数据十年中对NSCLC进行大量的研究，NSCLC患者的五年存活期依然很低。肿瘤结节转移(TNM)分期系统在国际上广为认可，用于NSCLC的预后预测。尽管如此，早期的患者显示出变化范围较大的生存率，这就使得寻找能更好的预测结果的有效预后标志物成为必须。因此，人们在借鉴可改善NSCLC诊断的分子标志物方面做了大量的工作。适合的标志物不仅能提供预后信息，而且，也有助于预测患者是否可以受惠于新的治疗策略或额外的治疗措施。

因此，找寻对于NSCLC易感分析或NSCLC预后诊断有用的诊断标记物、提高NSCLC患者的生存率，改善NSCLC的生活质量，已成为NSCLC治疗的当务之急。

发明内容

为了克服现有技术中的缺陷，本发明的目的在于提供一种TGFβR2基因的用途，用于制备检测非小细胞肺癌的试剂。

本发明的另一目的在于提供一种特异识别TGFβR2基因的试剂的用途，用于制备检测非小细胞肺癌的试剂盒。

本发明的再一目的在于提供一种检测非小细胞肺癌的试剂盒。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明的第一方面，提供了一种TGFβR2基因在的用途，用于制备检测非小细胞肺癌的试剂。

优选地，所述检测非小细胞肺癌的试剂用于非小细胞肺癌的判断、治疗方案的选择、和/或预后评估。

在另一优选例中，基于所述的TGFβR2基因序列，制备特异性扩增TGFβR2基因或转录本的引物或特异识别TGFβR2基因或转录本的探针，从而作为检测NSCLC的试剂。

本发明的第二方面，提供一种特异性识别TGFβR2基因的试剂的用途，用于制备检测非小细胞肺癌的试剂盒。

优选地，所述检测非小细胞癌的试剂盒用于非小细胞肺癌的判断、治疗方案的选择、和/或预后评估。

在另一优选例中，所述的特异性识别TGFβR2基因的试剂选自下述任一种或多种：

(1)特异性扩增TGFβR2基因或转录本的引物；或

(2)特异性识别TGFβR2基因或转录本的探针。

在另一优选例中，所述的特异性扩增TGFβR2基因或转录本的引物是引物对。所述引物对具有SEQ ID:1和SEQ ID:2所示的序列。

在本发明的第三方面，提供一种检测非小细胞肺癌的试剂盒，所述的试剂盒中含有特异性识别TGFβR2基因的试剂。

在另一优选例中，所述的特异性识别TGFβR2基因的试剂选自下述任一种或多种：

(1)特异性扩增TGFβR2基因或转录本的引物；或

(2)特异性识别TGFβR2基因或转录本的探针。

在另一优选例中，所述的特异性扩增TGFβR2基因或转录本的引物是引物对。所述引物对具有SEQ ID:1和SEQ ID:2所示的序列。

在另一优选例中，所述的试剂盒中还含有选自下述任一种或多种：

DNA提取试剂、PCR试剂、阳性对照、阴性对照。

本发明的第四方面，提供一种体外(非治疗性地、非诊断性地)检测待测样本中TGFβR2基因表达情况的方法，包括：

(1)利用特异性扩增TGFβR2基因或转录本的引物对待测样品进行PCR扩增，获得扩增产物；其中，所述引物对具有SEQ ID:1和SEQ ID:2所示的序列；

(2)分析(1)获得的扩增产物中TGFβR2基因或转录本的量，如在统计学上(如高2倍以上，较佳地高3倍以上)高于正常肺组织样品在相同扩增条件下获得的TGFβR2基因或转录本的量，则表明待测样品中TGFβR2基因为高表达。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

本发明首次揭示了TGFβR2基因与非小细胞肺癌的相关性，在90％以上的非小细胞肺癌病例中有高表达，非小细胞肺癌组织中的表达量:正常癌旁组织中的表达量≥2.0：1，本发明方法在检出的灵敏度，准确性都显著优于现有的诊断方法。

附图说明

图1：TGFβR2的表达在NSCLC肿瘤组织较癌旁组织显著增加。

图2：临床数据单因素生存分析TGFβR2在NSCLC表达与OS的关系，TGFβR2的高表达明显使OS减少(P＝0.009)，上面一条曲线为TGFβR2的低表达与OS的关系曲线图，下面一条曲线为TGFβR2的高表达与OS的关系曲线图。

图3：临床数据单因素生存分析TGFβR2在NSCLC表达与DFS的关系，TGFβR2的高表达明显使DFS降低(P＝0.003)，上面一条曲线为TGFβR2的低表达与DFS的关系曲线图，下面一条曲线为TGFβR2的高表达与DFS的关系曲线图。

图4：临床数据单因素生存分析淋巴结转移在NSCLC与OS，在NSCLC患者中，淋巴结转移与OS(P＝0.026)有着显著负相关，上面一条曲线为淋巴结转移阴性，下面一条曲线为淋巴结转移阳性。

图5：临床数据单因素生存分析淋巴结转移在NSCLC与DFS的关系，在NSCLC患者中，淋巴结转移与DFS(P＝0.002)有着显著负相关，上面一条曲线为淋巴结转移阴性，下面一条曲线为淋巴结转移阳性。

图6：临床数据单因素生存分析肿瘤大小在NSCLC与OS的关系，在NSCLC患者中，肿瘤大小也与生存期有着显著负相关(P<0.001)，肿瘤大于5cm显著降低OS，上面一条曲线为肿瘤小于5cm，下面一条曲线为肿瘤大于等于5cm。

图7：临床数据单因素生存分析肿瘤大小在NSCLC与DFS的关系，在NSCLC患者中，肿瘤大小也与无病生存期有着显著负相关(P<0.001)，肿瘤大于5cm显著降低DFS，上面一条曲线为肿瘤小于5cm，下面一条曲线为肿瘤大于等于5cm。

图8：临床数据单因素生存分析在化疗NSCLC与OS的关系，化疗可显著增加NSCLC的OS，上面一条曲线为进行化疗，下面一条曲线为不进行化疗。

图9：临床数据单因素生存分析在化疗NSCLC与DFS的关系，化疗可显著增加NSCLC的DFS，上面一条曲线为进行化疗，下面一条曲线为不进行化疗。

图10：Cox回归风险模型多变量生存分析评估化疗和TGFβR2表达二者联合对NSCLCOS的关系，低表达和化疗延长OS，上面一条曲线代表低表达和化疗，下面一条曲线代表高表达和不进行化疗。

图11：Cox回归风险模型多变量生存分析评估化疗和TGFβR2表达二者联合对NSCLC对DFS的关系，低表达和化疗延长DFS，上面一条曲线代表低表达和化疗，下面一条曲线代表高表达和不进行化疗。

具体实施方式

本发明经过广泛而深入的研究，首次发现TGFβR2基因在NSCLC患者的NSCLC组织中高表达，从而提示TGFβR2在NSCLC的肿瘤发生和发展过程中起到较为重要的作用。TGFβR2可以作为NSCLC的一种诊断标志物，有助于NSCLC的易感性分析、预后诊断和治疗。根据人TGFβR2基因及其表达产物设计的药物和诊断技术，可用于诊断和治疗人类的NSCLC。在此基础上完成了本发明。

TGFβR2及其用途

TGFβ家族的组成在各种各样的人类肿瘤发生发展中有改变。TGFβ是一种多效性细胞因子，根据细胞的微环境，可作为肿瘤的抑制剂或者是肿瘤的促进剂。TGFβR2是家族所有成员配体结合的受体。TGFβ信号被介导的TGFβR1和TGFβR2络合物激活。TGFβ配体最初在细胞膜与TGFβ受体结合，导致生物信息在TGFβR1和TGFβR2传递，TGFβR2使TGFβR1磷酸化，激活TGFβR1并使下游的靶基因Smad2和Smad3磷酸化，磷酸化的Smad2和Smad3与Smad4形成复合物，转移到细胞核并且调节靶基因表达。因此，TGFβ族成员有任何的异常或者Smad家族成员的异常会扰乱TGFβ信号通路。

本发明人使用RT-qPCR的方法，检测了在NSCLC及其配对的正常肺组织中TGFβR2的mRNA表达水平，分析TGFβR2的表达和患者的临床特征的相关性表明，TGFβR2参与了NSCLC的肿瘤发生和发展过程。

在本发明人分析的NSCLC病例中，NSCLC患者组织中的TGFβR2的mRNA水平高于配对的正常肺组织。在对临床和病理特征进行控制(性别，年龄，转移，吸烟，家族史，组织学分型，血管侵犯、TNM阶段及肿瘤直径)，Kaplan-Meier生存分析，表明TGFβR2的mRNA表达，肿瘤分化、肺膜的侵袭和化疗是显著的独立危险因素。这些结果提示TGFβR2在NSCLC的发生和发展过程中扮演着重要的角色，而它可以作为NSCLC的一个预后标志物以及新的治疗靶标。

如本文所用，所述的高表达是指：在mRNA水平上，与正常的肺组织中的TGFβR2mRNA水平相比，提高2倍以上，较佳地，提高3倍以上。

基于本发明人的上述新发现，可将TGFβR2作为诊断NSCLC的标志物：(i)作为NSCLC的分型、鉴别诊断，和/或易感分析的标志；(ii)评估相关人群的NSCLC治疗药物、药物疗效、患者预后，以及选择合适的治疗方法；(iii)评估相关人群NSCLC患病风险、检测并进行早期防治。比如，可分离出由TGFβR2基因表达异常而易患NSCLC的人群，从而可进行更有针对地防治。

因此，本发明提供了TGFβR2基因的用途，用于制备诊断(或检测)NSCLC的试剂或试剂盒。

检测试剂

可采用各种本领域已知的技术来检测TGFβR2基因的存在与否及表达情况，这些技术均包含在发明中。例如，可用已有技术如Southern印迹法、Wester印迹法、DNA序列分析、PCR等，这些方法可结合使用。

本发明还提供用于在分析物中检测TGFβR2基因的存在与否以及表达情况的试剂。优选的，当进行基因水平的检测时，可采取特异性扩增TGFβR2的引物；或特异性识别TGFβR2的探针来确定TGFβR2基因的存在与否。

作为本发明的优选方式，所述的试剂是引物，其特异性扩增出TGFβR2基因或基因片段。更优选的，所述的引物具有SEQ ID:1和SEQ ID:2所示的序列。该引物扩增获得的扩增产物具有合适的长度，且特异性高，对复杂体系的扩增也具有良好的特异性，扩增结果稳定可靠。

针对TGFβR2基因的特异性探针的设计是本领域人员熟知的技术，例如，制备一种探针，其可与TGFβR2基因上特定位点发生特异性结合，而不与TGFβR2基因外的其它基因特异性结合，且所述探针带有可检测信号。

检测试剂盒

本发明还提供了用于在分析物中检测TGFβR2基因的存在与否以表达情况的试剂盒，该试剂盒包括：特异性扩增TGFβR2基因或转录本的引物；特异性识别TGFβR2基因或转录本的探针。

此外，所述的试剂盒中还可包括聚合酶链反应(PCR)试剂等；以及用于提取DNA、杂交等所需的各种试剂，包括但不限于：抽提液、扩增液、杂交液、酶、对照液、洗涤液等。

以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其它优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。

在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围；在本发明说明书和权利要求书中，除非文中另外明确指出，单数形式“一个”、“一”和“这个”包括复数形式。

当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。

除非另外说明，本发明中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本技术领域常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技术及相关领域的常规技术。这些技术在现有文献中已有完善说明，具体可参见Sambrook等MOLECμLAR CLONING：A LABORATORY MANUAL，Second edition，Cold Spring Harbor LaboratoryPress，1989and Third edition，2001；Ausubel等，CURRENT PROTOCOLS IN MOLECμLARBIOLOGY，John Wiley&Sons，New York，1987and periodic updates；the series METHODSIN ENZYMOLOGY，Academic Press，San Diego；Wolffe，CHROMATIN STRUCTURE ANDFUNCTION，Third edition，Academic Press，San Diego，1998；METHODS IN ENZYMOLOGY，Vol.304，Chromatin(P.M.Wassarman and A.P.Wolffe，eds.)，Academic Press，SanDiego，1999；和METHODS IN MOLECμLAR BIOLOGY，Vol.119，Chromatin Protocols(P.B.Becker，ed.)Humana Press，Totowa，1999等。

材料与方法

病人和样品

肿瘤和配对正常组织取自2008-2012年接受外科切除手术的NSCLC患者的新鲜组织样本，组织样本源于来自于吉林大学样本库和同济大学附属第十人民医院。样本包括了42组成对的癌组织及癌旁组织和266个癌组织样本，均通过病理明确诊断。所有NSCLC患者均根据第七版美国癌症联合会(NJCC)TNM分期系统进行分期，且所有患者的信息皆于2014年9月30日前收集完整。收集的信息包括了患者的基本信息(如年龄、性别)，肿瘤特征(如直径、淋巴结转移、组织亚型、血管侵袭及肿瘤分化水平)，总生存期(overall survival,OS)、无病生存期(disease-free survival,DFS)、TGFβR2表达水平以及化疗情况。

本研究遵循协议并且经吉林大学组织样本库伦理委员会批准。

本研究遵循协议并且经同济大学附属第十人民医院伦理委员会批准。

RNA抽提和cDNA合成

总RNA从新鲜冰冻的NSCLC标本和对应的正常组织中使用TRIzol试剂(购自Invitrogen公司)，按厂商提供的说明抽提出。使用微量分光光度计对上述RNA进行定量分析，检测其浓度及纯度。A260/A280比值是纯度检测的重要指标，一般在1.8-2.0，确定RNA样品的质量。按说明使用Prime Script TM RT-PCR试剂盒(Takara公司)将2μg总RNA逆转为cDNA。

Real-Time PCR

以循环中PCR产物的扩增被首次检测到作为Real-Time PCR的特征描述，而并非固定数目循环后得到的PCR产物的量。获取每次试验靶基因及内参的Ct值(C代表Cycle，T代表Threshold)，参数Ct被定义为当扩增反应产生的荧光超过一个固定的基线的循环数。样本中靶基因的表达水平表示为2^Ct，以GAPDH的表达水平为内参。每一个样品中基因的表达水平都基于GAPDH的含量进行校正，公式为：

校正后的靶基因表达水平＝靶基因表达水平/GAPDH表达水平＝2^{Ct(target)/2Ct(GAPDH)}＝2^{Ct(target)-2Ct(GAPDH)}＝2^△Ct

另外，肿瘤组织对于配对正常组织的靶基因表达的计算公式为：

靶基因相对水平＝靶基因校正后水平(肿瘤)/靶基因校正后水平(配对正常组织)＝2^{△Ct(target)}/2^{△Ct Ct(normal)}＝2^{[△Ct(target)/-△Ct(normal)]}＝2^△△Ct

因为校正后的靶基因表达水平和靶基因相对表达水平都以2^Ct表示，因此，本人发明分别使用△Ct和△△Ct代表校正后的靶基因表达水平和肿瘤相对于正常的靶基因表达水平，用于临床统计学分析。

Real-TimePCR中，所用的引物如下所示：

TGFβB2

F：5’-GAACTGGACTGTGGCATTGAGA-3’(SEQ ID NO：1)

R：5’-CACAAAGCGACTGGATGAACC-3’(SEQ ID NO：2)

GAPDH

F：5’-TGGGTGTGAACCATGAGAAGT-3’(SEQ ID NO：3)

R：5’-TGAGTCCTTCCACGATACCAA-3’(SEQ ID NO：4)

这些引物都是使用PRIMERR5软件进行设计，并进行了针对dbEST和nr的BLAST搜索，以确认选作引物的核苷酸序列的基因特异性，确保不存在DNA多态性。

反应体系20μl，包括：2×SYBR Premix Ex TaqⅡ10μl，Dye ROX 0.4μl，cDNA 2μl，Forward Primer(10μM)0.5μl，Reverse Primer(10μM)0.5μl，ddH2O 6.6ul。

所有的反应均为一式三份，在iCycleriQ system(Bio-Rad，Hercules，CA)上进行，反应程序为：起始变性95℃ 2min；接下去40个循环，每个循环；95℃变性30s，65℃退火15s，72℃延伸10s；最后一个延伸步骤95℃ 15s。为了确保扩增特异性，每一对引物所对应的PCR产物都经过了融链曲线和琼脂糖凝胶电泳检测。

统计学分析

所有的统计分析采用IBM SPSS statistics for Windows,版本为19.0(IBMCorp.；Armonk,NY,USA)统计软件包进行数据处理。TGFβR2的表达用平均±标准偏差呈现。独立样本t检验进行组间差异，和卡方检验进行组间率的差异。Kaplan-Meier曲线来确定各组的总生存率，结果与对数秩检验比较。单因素和多因素分析基于Cox回归模型，该模型被用来确定独立因素共同对生存期有显著的影响。P＜0.05被认为有统计学意义。

实施例1.TGFβR2在NSCLC和正常肺组织的表达

为了检测NSCLC中TGFβR2的mRNA表达模式，本发明人使用了RT-qPCR测定组织中mRNA水平，为了校正的mRNA的量的不一致，TGFβR2mRNA的水平表示为它和内参基因GAPDH的比值。

TGFβR2在NSCLC患者癌组织(n＝308)及癌旁组织的水平表示为它和内参(n＝42)的mRNA表达水平。采用IBM SPSS分析，结果表明TGFβR2的表达在NSCLC肿瘤组织(2.46±0.42)较癌旁组织(1.01±0.06)显著增加，且此差异有统计学意义(P＝0.001；表1和图1)。

表1.TGFβR2在NSCLC和癌旁组织mRNA的表达水平

实施例2.NSCLC中TGFβR2的mRNA水平表达与患者临床病理特征之间的关系

Univariate分析揭示了TGFβR2的mRAN水平与肿瘤分化、和肺膜的侵袭(P＝0.045)呈正相关以及化疗(P<0.001)呈负相关(P＝0.029；表3)。然而，TGFβR2的表达与患者的性别、年龄、吸烟史、淋巴结转移、组织学分型、血管侵犯、TNM阶段，及肿瘤直径的关系却没有显著意义(P>0.05)。NSCLC中TGFβR2的mRAN水平和个体临床病理特征之间的关系如表2所示。

表2.单变量生存分析TGFβR2表达和患者临床特征之间的关系

^#Log-rank test

为了评估这些临床/生物特征对于总生存期的预后意义，我们绘制了Kaplan-Meier生存曲线。平均随访为34.3个月(范围从14.3到79.3个月)。单变量分析的结果如表2所示。和我们预期的一致，总生存期与一般的预后因素如淋巴结转移(P＝0.026)，侵入肺膜(P＝0.034)，与肿瘤大小(≥5厘米；P＝0.033)有显著相关。此外，接受化疗的患者的总生存期有显著的增加(P<0.001)。因此，未经化疗或者有淋巴结转移，已侵袭肺膜，或肿瘤大小增大(≥5厘米)的患者，其生存期显著降低。然而，包括性别、年龄、吸烟史、淋巴结转移、组织学分型、血管侵犯、TNM阶段、及肿瘤直径的关系没有相关性。

实施例3.NSCLC中TGFβR2的表达临床预后

NSCLC中TGFβR2的表达和患者临床病理特征的单变量生存分析见图2～7所示。为确定其他临床因素是否会影响NSCLC的预后，我们将每一个临床因素分层(包括性别、年龄、血管侵犯、肿瘤大小、侵犯肺膜、淋巴结转移、TNM分期、肿瘤分化、吸烟史和TGFβR2表达)，通过Kaplan-Meier进行单变量生存分析。本研究收集了308NSCLC组织和42癌旁组织和相对应的所有临床信息，生存分析结果显示，高表达的TGFβR2的患者其预后较低表达者更差。在NSCLC患者中，TGFβR2的表达与OS及DFS有显著负相关。TGFβR2的高表达明显使OS减少(P＝0.009)；DFS降低(P＝0.003)(分别如图2和图3所示)。

为了评估淋巴结转移对NSCLC患者预后的影响，我们绘制了Kaplan-Meier生存曲线，且做了对数秩和检验。收集308NSCLC组织和42癌旁组织和相对应的所有临床信息，生存分析结果显示：在NSCLC患者中，淋巴结转移与OS(P＝0.026)及DFS(P＝0.002)有着显著负相关，淋巴结转移对NSCLC患者预后不良(图4和图5所示)。

为了评估肿瘤大小对NSCLC患者预后的影响，我们绘制了Kaplan-Meier生存曲线，且做了对数秩和检验。收集308NSCLC组织和42癌旁组织和相对应的所有临床信息，生存分析结果显示：在NSCLC患者中，肿瘤大小也与生存期(P<0.001)及无病生存期有着显著负相关(P<0.001)，肿瘤大于5cm显著降低OS和DFS(图6和图7)。

实施例4.化疗对生存期及无病生存期的影响

单变量分析和Cox比例风险回归模型显示侵犯肺膜(P＝0.04)，肿瘤大小(P<0.001)，与淋巴结转移(P＝0.02)也与不良预后存在正相关(如表4所示)。更为重要的是，我们发现化疗可增加OS(P＝0.033,HR＝1.489[1.032,2.418])和DFS(P＝0.048,HR＝1.444[1.004,2.078])(图8和图9)。

此外，经过化疗的患者中，TGFβR2的低表达是增加OS(P＝0.003,HR＝2.24[1.32,3.79])及DFS(P<0.001,HR＝9.40[4.92,17.98])的保护因子(图2和图3)。然而，性别、年龄、血管侵袭、TNM分期、肿瘤分化、吸烟史则与预后无关。总的来说，这些发现表明，TGFβR2表达在NSCLC的进展中可能发挥着潜在的作用，且与NSCLC患者预后相关。为了分析TGFβR2是否为NSCLC患者预后的标志物，我们建立了多变量Cox比例风险回归分析。单因素分析中预测的参数(年龄、性别、吸烟史、淋巴结转移、肿瘤分化、组织学、血管侵犯、直径和入侵肺膜，如表4所示)。接下来，Cox比例风险回归分析包括淋巴结转移、肿瘤直径、肺膜侵袭及TGFβR2的表达。根据多变量Cox回归模型分析，在NSCLC患者中，高表达的TGFβR2可认为是生存期缩短的一个预测标志物。

实施例5.化疗与低表达TGFβR2提高OS和DFS

化疗是NSCLC患者最主要的治疗方案，本研究基于治疗现状的基础上分析患者的OS和DFS。在队列研究中发现化疗可以明显延长患者的OS(33.5±1.05vs.24.37±1.22,P＝0.025)和DFS(32.47±0.84vs.24.37±1.22,P＝0.037)(如表3所示)。TGFβR2表达高低和化疗与否时显示：当TGFβR2低表达并且接受化疗相对于TGFβR2高表达并且未接受化疗患者的OS和DFS明显延长。(40.70±2.07vs.24.23±1.25,P＝0.002和36.53±2.97vs.21.33±1.34,P<0.001)(见表4)。

结果显示TGFβR2高表达时，显示患者的预后不良，甚至接受化疗时TGFβR2高表达也显示预后不良。Kaplan-Meier来评估单变量和多变量生存分析，进而决定是否化疗和/或TGFβR2的表达与OS和DFS相关。单变量的结果显示，OS和DFS的延长与化疗正相关。(图10；图11)。(HR＝1.489[1.032,2.418]，P＝0.033)和(HR＝1.444[1.004,2.078]，P＝0.048)。基于患者的数据进行进一步的分层TGFβR2的表达以及化疗现状，多变量Cox比例风险回归分析显示增加OS(HR＝2.24[1.32，3.79]，P＝0.003)、DFS(HR＝9.40[4.92，17.98]，P＜0.001)化学治疗的患者与TGFβR2肿瘤中低表达正相关。TGFβR2在NSCLC发展起到及其重要的作用，可以成为潜在的NSCLC化疗的分子标志物。

表3.NSCLC患者Cox回归模型多变量生存分析临床预后

表4.TGFβR2表达和化疗与NSCLC患者OS和DFS之间的关系

*P&L，化疗and TGFβR2低表达；N&H，未化疗and TGFβR2高表达。

以上的实施例是为了说明本发明公开的实施方案，并不能理解为对本发明的限制。此外，本文所列出的各种修改以及发明中方法、组合物的变化，在不脱离本发明的范围和精神的前提下对本领域内的技术人员来说是显而易见的。虽然已结合本发明的多种具体优选实施例对本发明进行了具体的描述，但应当理解，本发明不应仅限于这些具体实施例。事实上，各种如上所述的对本领域内的技术人员来说显而易见的修改来获取发明都应包括在本发明的范围内。

Claims (3)

1.一种特异性识别TGFβR2基因的试剂的用途，用于制备检测非小细胞肺癌的试剂盒，所述检测非小细胞肺癌的试剂盒用于非小细胞肺癌的治疗方案的选择、和/或预后评估，与正常癌旁组织相比，所述TGFβR2基因在非小细胞肺癌组织中高表达。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的特异性识别TGFβR2基因的试剂选自下述任一种或多种：

(1)特异性扩增TGFβR2基因或转录本的引物；或

(2)特异性识别TGFβR2基因或转录本的探针。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的特异性扩增TGFβR2基因或转录本的引物是引物对，所述引物对包括正向引物和反向引物，所述正向引物的核苷酸序列如SEQID:1所示，所述反向引物的核苷酸序列如SEQ ID:2所示。