CN104962513A - 狐狸x精子分离方法 - Google Patents
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Abstract
一种狐狸X精子分离方法，方法步骤如下：1)采精前的准备；2)采精方法；3)精液品质检查；4)密度梯度离心柱准备；5)X精子分离；6)输精前的准备工作；7)输精方法；8)输精量和输精次数；9)输精时间；用本发明规定的X精子分离方法分离出来的精子，给10只母狐人工授精后，产出72只后代，其中雌性后代61只，占总后代数的84.7％；对照组雌性后代占51.6％；数理统计分析结果显示差异显著，结果表明本发明规定的性控方法可以将雌性后代数量提高33％左右。
Description
技术领域
本发明涉及人工繁殖技术领域，具体涉及一种狐狸X精子分离方法。
背景技术
狐狸属于脊椎动物门、哺乳纲、食肉目、犬科的食肉动物。人工饲养的狐狸主要是狐属和北极狐属的狐种。狐属的代表品种为银黑狐，北极狐属的为蓝狐。
养狐是经济效益较高的行业，特别目前更是一条农村致富很好的门路。狐狸的全身是宝。它的皮是畜产品的高档商品，出口创汇率较高，但是现在这种珍贵毛皮动物饲养与管理上存在很多的难题，特别是在如何提高雌性后代的繁殖上。所以人们目前需要有一种成熟的新方法，提高雌性后代产出率，以提升狐群的扩繁速度，在狐狸养殖上获得更大的经济效益。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种方法简单，能够提高狐狸后代雌性产出率的狐狸X精子分离方法。
本发明所要解决的技术问题采用以下技术方案来实现：
一种狐狸X精子分离方法，方法步骤如下：
1)采精
1.1采精前的准备
将集精杯、稀释液、显微镜等事先准备好，要有专用的采精液配种室；室内要清洁、卫生、用紫外线灯照射灭菌，室温要保持20-25℃，操作人员要穿专用的服装，将手洗净消毒，所用的采精器皿均经灭菌处理；选择优良的种公狐进行采精，采精前，将公狐的包皮处用温开水洗净；
1.2采精方法
采精时将公狐绑定好，采精人员用手先按摩阴茎及睾丸，促使阴茎勃起，掳开包皮把阴茎转向后侧，用无名指和掌心握住集精杯，然后用大拇指和食指快速有规则地按摩阴茎及睾丸，待要排精时挤压龟头尖端部位，刺激排精；集精杯收集精液，然后将集精杯放入水浴箱内，水温保持在32-35℃，公狐采精每日1次，连续采精2-3d后休息1-2d；
1.3精液品质检查
用显微镜检查精子的密度、活力及形态，排除活力低于0.7、畸形精子占10％以上的精液；
2)X精子分离
2.1密度梯度离心柱准备
在离心管中由下至上依次加入0.7ml按5％递减的Percoll液，浓度分别为80％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％、35％、30％和25％；
2.2X精子分离
取狐狸精液1.0ml加入到含4ml的25％Percoll液的离心管中，按250r/min离心30min后弃上清，将底部1ml混合液加入到步骤2.1)中准备好的密度梯度的Percoll液柱中，按1200r/min离心8min后，取下层1ml混合液，用稀释液调整精子密度为5000万/ml，加入少量抗生素，检查活力和密度达到要求后开始人工授精；
3)输精
3.1输精前的准备工作
提前准备好绑定架，做到卫生清洁，输精器材要煮沸消毒，连同注射器一同放在消毒容器备用；输精针应每只母狐使用一次后再进行消毒；输精人员要把手洗净消毒，用消毒毛巾擦干，并用温肥皂水来清洗母狐的外阴部；
3.2输精方法
采用针式输精方法，用扩张管插人阴道至宫颈口处，扩开阴道；再把输精针插入扩张管内，然后用一只手握住装有精液的输精针，另一只手从母狐的后腹部由下向上把握住子宫颈，将输精针轻轻送至子宫颈口处，由下慢慢向上找到子宫口，将针通过宫口1cm处，用注射器将精液注人子宫内；注完后慢慢拔出输精针及扩张管；
3.3输精量和输精次数
把步骤2.2)中准备好的精液吸到注射器中，每只输入0.5毫升，连续输精3天，每天1次；
3.4输精时间
准确掌握给母狐输精时间的方法有3种，一是观察法，指外阴部的变化特征来判断母狐是否发情；二是阴道内容物涂片检查法，此法是用器械取母狐的阴道内容物，制作涂片，观察无核角化细胞和有核角化细胞所占的比例来判断母狐是否发情；三是试情法，是将发情母狐放进公狐笼内，如母狐表现静立翘尾等待交配，表明已是发情期，采用此法来确定母狐的最佳输精时间；
X精子分离效果分析：
用本发明规定的X精子分离方法分离出来的精子，给10只母狐人工授精后，产出72只后代，其中雌性后代61只，占总后代数的84.7％；对照组雌性后代占51.6％；数理统计分析结果显示差异显著，结果表明本发明规定的性控方法可以将雌性后代数量提高33％左右。
上述步骤2.2)中的稀释液是由以下重量的组分配制而成：
配制方法如下：
1)准确称量2.13克三羟甲基氨基甲烷、1.24克柠檬酸和0.71克D-果糖加30毫升双蒸水溶解，再加50毫升双蒸水混匀；
2)用双层定性滤纸将步骤1)中的溶液过滤后高压消毒，完全冷却后依次加入10毫升卵黄液、10毫升Ham's F-10和7万U青霉素；
3)于4℃环境下储藏。
本发明的有益效果是：
用本发明规定的X精子分离方法分离出来的精子，给10只母狐人工授精后，产出72只后代，其中雌性后代61只，占总后代数的84.7％。对照组雌性后代占51.6％。数理统计分析结果显示差异显著。结果表明本发明规定的性控方法可以将雌性后代数量提高33％左右。
具体实施方式
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。
实施例1
一种狐狸X精子分离方法，方法步骤如下：
1)采精
1.1采精前的准备
将集精杯、稀释液、显微镜等事先准备好，要有专用的采精液配种室；室内要清洁、卫生、用紫外线灯照射灭菌，室温要保持20-25℃，操作人员要穿专用的服装，将手洗净消毒，所用的采精器皿均经灭菌处理；选择优良的种公狐进行采精，采精前，将公狐的包皮处用温开水洗净；
1.2采精方法
采精时将公狐绑定好，采精人员用手先按摩阴茎及睾丸，促使阴茎勃起，掳开包皮把阴茎转向后侧，用无名指和掌心握住集精杯，然后用大拇指和食指快速有规则地按摩阴茎及睾丸，待要排精时挤压龟头尖端部位，刺激排精；集精杯收集精液，然后将集精杯放入水浴箱内，水温保持在32-35℃，公狐采精每日1次，连续采精2-3d后休息1-2d；
1.3精液品质检查
用显微镜检查精子的密度、活力及形态，排除活力低于0.7、畸形精子占10％以上的精液；
2)X精子分离
2.1密度梯度离心柱准备
在离心管中由下至上依次加入0.7ml按5％递减的Percoll液，浓度分别为80％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％、35％、30％和25％；
2.2X精子分离
取狐狸精液1.0ml加入到含4ml的25％Percoll液的离心管中，按250r/min离心30min后弃上清，将底部1ml混合液加入到步骤2.1)中准备好的密度梯度的Percoll液柱中，按1200r/min离心8min后，取下层1ml混合液，用稀释液调整精子密度为5000万/ml，加入少量抗生素，检查活力和密度达到要求后开始人工授精；
3)输精
3.1输精前的准备工作
提前准备好绑定架，做到卫生清洁，输精器材要煮沸消毒，连同注射器一同放在消毒容器备用；输精针应每只母狐使用一次后再进行消毒；输精人员要把手洗净消毒，用消毒毛巾擦干，并用温肥皂水来清洗母狐的外阴部；
3.2输精方法
采用针式输精方法，用扩张管插人阴道至宫颈口处，扩开阴道；再把输精针插入扩张管内，然后用一只手握住装有精液的输精针，另一只手从母狐的后腹部由下向上把握住子宫颈，将输精针轻轻送至子宫颈口处，由下慢慢向上找到子宫口，将针通过宫口1cm处，用注射器将精液注人子宫内；注完后慢慢拔出输精针及扩张管；
3.3输精量和输精次数
把步骤2.2)中准备好的精液吸到注射器中，每只输入0.5毫升，连续输精3天，每天1次；
3.4输精时间
准确掌握给母狐输精时间的方法有3种，一是观察法，指外阴部的变化特征来判断母狐是否发情；二是阴道内容物涂片检查法，此法是用器械取母狐的阴道内容物，制作涂片，观察无核角化细胞和有核角化细胞所占的比例来判断母狐是否发情；三是试情法，是将发情母狐放进公狐笼内，如母狐表现静立翘尾等待交配，表明已是发情期，采用此法来确定母狐的最佳输精时间；
X精子分离效果分析：
用本发明规定的X精子分离方法分离出来的精子，给10只母狐人工授精后，产出72只后代，其中雌性后代61只，占总后代数的84.7％；对照组雌性后代占51.6％；数理统计分析结果显示差异显著，结果表明本发明规定的性控方法可以将雌性后代数量提高33％左右。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (1)
1.一种狐狸X精子分离方法，其特征在于，方法步骤如下：
1)采精
1.1采精前的准备
将集精杯、稀释液、显微镜等事先准备好，要有专用的采精液配种室；室内要清洁、卫生、用紫外线灯照射灭菌，室温要保持20-25℃，操作人员穿专用的服装，将手洗净消毒，所用的采精器皿均经灭菌处理；选择优良的种公狐进行采精，采精前，将公狐的包皮处用温开水洗净；
1.2采精方法
采精时将公狐绑定好，采精人员用手先按摩阴茎及睾丸，促使阴茎勃起，掳开包皮把阴茎转向后侧，用无名指和掌心握住集精杯，然后用大拇指和食指快速有规则地按摩阴茎及睾丸，待要排精时挤压龟头尖端部位，刺激排精；集精杯收集精液，然后将集精杯放入水浴箱内，水温保持在32-35℃，公狐采精每日1次，连续采精2-3d后休息1-2d；
1.3精液品质检查
用显微镜检查精子的密度、活力及形态，排除活力低于0.7、畸形精子占10％以上的精液；
2)X精子分离
2.1密度梯度离心柱准备
在离心管中由下至上依次加入0.7ml按5％递减的Percoll液，浓度分别为80％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％、35％、30％和25％；
2.2X精子分离
取狐狸精液1.0ml加入到含4ml的25％Percoll液的离心管中，按250r/min离心30min后弃上清，将底部1ml混合液加入到步骤2.1)中准备好的密度梯度的Percoll液柱中，按1200r/min离心8min后，取下层1ml混合液，用稀释液调整精子密度为5000万/ml，加入少量抗生素，检查活力和密度达到要求后开始人工授精；
3)输精
3.1输精前的准备工作
提前准备好绑定架，做到卫生清洁，输精器材要煮沸消毒，连同注射器一同放在消毒容器备用；输精针应每只母狐使用一次后再进行消毒；输精人员要把手洗净消毒，用消毒毛巾擦干，并用温肥皂水来清洗母狐的外阴部；
3.2输精方法
采用针式输精方法，用扩张管插人阴道至宫颈口处，扩开阴道；再把输精针插入扩张管内，然后用一只手握住装有精液的输精针，另一只手从母狐的后腹部由下向上把握住子宫颈，将输精针轻轻送至子宫颈口处，由下慢慢向上找到子宫口，将针通过宫口1cm处，用注射器将精液注人子宫内；注完后慢慢拔出输精针及扩张管；
3.3输精量和输精次数
把步骤2.2)中准备好的精液吸到注射器中，每只输入0.5毫升，连续输精3天，每天1次；
3.4输精时间
准确掌握给母狐输精时间的方法有3种，一是观察法，指外阴部的变化特征来判断母狐是否发情；二是阴道内容物涂片检查法，此法是用器械取母狐的阴道内容物，制作涂片，观察无核角化细胞和有核角化细胞所占的比例来判断母狐是否发情；三是试情法，是将发情母狐放进公狐笼内，如母狐表现静立翘尾等待交配，表明已是发情期，采用此法来确定母狐的最佳输精时间。
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|---|---|---|---|
| CN201510388072.2A CN104962513A (zh) | 2015-06-30 | 2015-06-30 | 狐狸x精子分离方法 |
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107771705A (zh) * | 2017-09-08 | 2018-03-09 | 东北林业大学 | 一种狐狸排卵时间监测新方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004072220A2 (en) * | 2003-02-17 | 2004-08-26 | Fundacão De Amparo A Pesquisa Do Estado De São Paulo | Process of sex selection of mammal spermatozoa and method to control quality of frozen sexed semen doses |
| CN1563359A (zh) * | 2004-04-22 | 2005-01-12 | 上海交通大学 | 蓝狐精液稀释液 |
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2015
- 2015-06-30 CN CN201510388072.2A patent/CN104962513A/zh active Pending
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| WO2004072220A2 (en) * | 2003-02-17 | 2004-08-26 | Fundacão De Amparo A Pesquisa Do Estado De São Paulo | Process of sex selection of mammal spermatozoa and method to control quality of frozen sexed semen doses |
| CN1563359A (zh) * | 2004-04-22 | 2005-01-12 | 上海交通大学 | 蓝狐精液稀释液 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| RIHACHI IIZUKA,ET AL.: "Sexing of human sperm by discontinuous Percoll density gradient and its clinical application", 《HUMAN REPRODUCTION》 * |
| 张光毅 等: "狐的人工授精及其应用", 《黑龙江动物繁殖》 * |
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| CN107771705A (zh) * | 2017-09-08 | 2018-03-09 | 东北林业大学 | 一种狐狸排卵时间监测新方法 |
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