CN104928348A - 肉制品中沙门氏菌的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种肉制品中沙门氏菌的检测方法，先取肉制品，放入含1wt%牛血清蛋白的PBS-T溶液中，搅拌后均质；再将均质后的样品液过滤，滤液浓缩；然后取所得滤液，依次加入75%乙醇水溶液、增长液和BCIP染色液，37℃反应30min后，最后送入微生物快速检测仪中检测。本发明的检测方法与国标方法进行比较不存在显著性差异，其相关性高，检测结果准确，检测时间短（2h），检出限为10～107cfu/mL，可以应用于实际检测。
Description
技术领域
本发明属于食品分析技术领域，具体涉及一种肉制品中沙门氏菌的检测方法。
背景技术
随着经济的发展和报道的透明，中国国内曝光的食品安全问题呈现明显上升趋势，据统计，我国2002～2011年食物中毒的事件一共有3373起，中毒人数11.47万人，死亡人数2088人。引发食物中毒的原因主要是微生物性食物中毒，中毒起数和人数均最多，分别占总起数的35.72％和总人数的57.04％。有效监控食品生产和流通领域的微生物污染，已经成为人们所面临的现实问题。
目前食品微生物卫生检测涉及的致病菌主要包括沙门氏菌、志贺氏菌、致泻大肠埃希式菌、副溶血性弧菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、空肠弯曲菌、金黄色葡萄球菌、溶血链球菌、肉毒梭菌、产气荚膜梭菌、蜡样芽孢杆菌、单核细胞增生李斯特氏菌等。食品中这些致病性微生物的检测，多数主要还是依靠传统的培养方法来确定，这些方法最大的问题是耗时长，不能满足快速检测的要求，无法做出快速判断和选择。如沙门氏菌的检测，传统培养方法沙门氏菌的检测时间是4～7d，很难满足食品安全快速检测的要求。
沙门氏菌(Salmonella)属于肠杆菌科，是一群寄生于人和动物肠道内的无芽孢革兰氏阴性杆菌。根据生化反应、DNA同源性等，沙门菌属分为肠道沙门菌(S.enterica)和邦戈沙门菌(S.bongori)两个种及7个亚种。肠道沙门菌又分为6个亚种，即肠道亚种(subsp.enterica)、萨拉姆亚种(subsp.Salamae)、亚利桑那亚种(subsp.enterica)双亚利桑那亚种(subsp.diarigonae)、豪顿亚种(subsp.houtenae)和英迪加亚种(subsp.indica)。从人类和温血动物中分离的沙门氏菌属于肠道沙门氏菌肠道亚种(Salmonellaenterica subspecies enterica)。食用污染细菌的蛋类、肉类、奶制品是引起人类沙门氏菌感染的重要原因。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足而提供一种肉制品中沙门氏菌的检测方法，该方法与国标方法进行比较不存在显著性差异，检测时间短，检出限为10～107cfu/mL。
肉制品中沙门氏菌的检测方法，包括以下步骤：
步骤1，取肉制品，放入含1wt％牛血清蛋白的PBS-T溶液中，搅拌后均质；
步骤2，将步骤1均质后的样品液过滤，滤液浓缩；
步骤3，取步骤2所得滤液，依次加入75％乙醇水溶液、增长液和BCIP染色液，37℃反应30min后，送入微生物快速检测仪中检测。
作为上述发明的进一步改进，步骤1中肉制品用量为15～30g，含1wt％牛血清蛋白的PBS-T溶液用量为30～50mL。
作为上述发明的进一步改进，步骤1中所述PBS-T溶液为含0.05v/v％吐温-20的PBS溶液，PBS溶液pH为6.8。
作为上述发明的进一步改进，步骤1中均质条件为8000～10000r/min，均质时间3～5min。
作为上述发明的进一步改进，步骤2中过滤采用滤纸过滤。
作为上述发明的进一步改进，步骤2中浓缩采用0.45μm的滤膜过滤浓缩。
作为上述发明的进一步改进，步骤3中增长液的配置方法为：0.05mL浓度为0.002M的氯金酸溶液和10mL浓度为0.04M的CATB十六烷基三甲基溴化铵混匀，加热后冷却，加入浓度为0.04M的抗坏血酸。
作为上述发明的进一步改进，步骤3中滤液、75％乙醇水溶液、增长液和BCIP染色液的体积比为1～5：4～12：0.5～2.4：0.05～0.1。
本发明的检测方法与国标方法进行比较不存在显著性差异，其相关性高，检测结果准确，检测时间短(2h)，检出限为10～107cfu/mL，可以应用于实际检测。
具体实施方式
实施例1
肉制品中沙门氏菌的检测方法，包括以下步骤：
步骤1，取肉制品，放入含1wt％牛血清蛋白的PBS-T溶液中，搅拌后均质；
步骤2，将步骤1均质后的样品液过滤，滤液浓缩；
步骤3，取步骤2所得滤液，依次加入75％乙醇水溶液、增长液和BCIP染色液，37℃反应30min后，送入微生物快速检测仪中检测。
步骤1中肉制品用量为15g，含1wt％牛血清蛋白的PBS-T溶液用量为30mL。
步骤1中所述PBS-T溶液为含0.05v/v％吐温-20的PBS溶液，PBS溶液pH为6.8。
步骤1中均质条件为8000r/min，均质时间5min。
步骤2中过滤采用滤纸过滤。
步骤2中浓缩采用0.45μm的滤膜过滤浓缩。
步骤3中增长液的配置方法为：0.05mL浓度为0.002M的氯金酸溶液和10mL浓度为0.04M的CATB十六烷基三甲基溴化铵混匀，加热后冷却，加入浓度为0.04M的抗坏血酸。
步骤3中滤液、75％乙醇水溶液、增长液和BCIP染色液的体积比为1：4：0.5：0.05。
实施例2
肉制品中沙门氏菌的检测方法，包括以下步骤：
步骤1，取肉制品，放入含1wt％牛血清蛋白的PBS-T溶液中，搅拌后均质；
步骤2，将步骤1均质后的样品液过滤，滤液浓缩；
步骤3，取步骤2所得滤液，依次加入75％乙醇水溶液、增长液和BCIP染色液，37℃反应30min后，送入微生物快速检测仪中检测。
步骤1中肉制品用量为20g，含1wt％牛血清蛋白的PBS-T溶液用量为36mL。
步骤1中所述PBS-T溶液为含0.05v/v％吐温-20的PBS溶液，PBS溶液pH为6.8。
步骤1中均质条件为9000r/min，均质时间4min。
步骤2中过滤采用滤纸过滤。
步骤2中浓缩采用0.45μm的滤膜过滤浓缩。
步骤3中增长液的配置方法为：0.05mL浓度为0.002M的氯金酸溶液和10mL浓度为0.04M的CATB十六烷基三甲基溴化铵混匀，加热后冷却，加入浓度为0.04M的抗坏血酸。
步骤3中滤液、75％乙醇水溶液、增长液和BCIP染色液的体积比为2：7：1.2：0.06。
实施例3
肉制品中沙门氏菌的检测方法，包括以下步骤：
步骤1，取肉制品，放入含1wt％牛血清蛋白的PBS-T溶液中，搅拌后均质；
步骤2，将步骤1均质后的样品液过滤，滤液浓缩；
步骤3，取步骤2所得滤液，依次加入75％乙醇水溶液、增长液和BCIP染色液，37℃反应30min后，送入微生物快速检测仪中检测。
步骤1中肉制品用量为22g，含1wt％牛血清蛋白的PBS-T溶液用量为40mL。
步骤1中所述PBS-T溶液为含0.05v/v％吐温-20的PBS溶液，PBS溶液pH为6.8。
步骤1中均质条件为8000r/min，均质时间5min。
步骤2中过滤采用滤纸过滤。
步骤2中浓缩采用0.45μm的滤膜过滤浓缩。
步骤3中增长液的配置方法为：0.05mL浓度为0.002M的氯金酸溶液和10mL浓度为0.04M的CATB十六烷基三甲基溴化铵混匀，加热后冷却，加入浓度为0.04M的抗坏血酸。
步骤3中滤液、75％乙醇水溶液、增长液和BCIP染色液的体积比为4：11：1.9：0.07。
实施例4
肉制品中沙门氏菌的检测方法，包括以下步骤：
步骤1，取肉制品，放入含1wt％牛血清蛋白的PBS-T溶液中，搅拌后均质；
步骤2，将步骤1均质后的样品液过滤，滤液浓缩；
步骤3，取步骤2所得滤液，依次加入75％乙醇水溶液、增长液和BCIP染色液，37℃反应30min后，送入微生物快速检测仪中检测。
步骤1中肉制品用量为30g，含1wt％牛血清蛋白的PBS-T溶液用量为50mL。
步骤1中所述PBS-T溶液为含0.05v/v％吐温-20的PBS溶液，PBS溶液pH为6.8。
步骤1中均质条件为10000r/min，均质时间3min。
步骤2中过滤采用滤纸过滤。
步骤2中浓缩采用0.45μm的滤膜过滤浓缩。
步骤3中增长液的配置方法为：0.05mL浓度为0.002M的氯金酸溶液和10mL浓度为0.04M的CATB十六烷基三甲基溴化铵混匀，加热后冷却，加入浓度为0.04M的抗坏血酸。
步骤3中滤液、75％乙醇水溶液、增长液和BCIP染色液的体积比为5：12：2.4：0.1。
将实施例1至4所得结果与GB 4789.4―2010沙门氏菌的检验结果进行比较，结果如下：
| 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 实施例4 | |
| 本发明方法所测结果(cfu/mL) | 59 | 268 | 389 | 287 |
| 国标法所测结果(cfu/mL) | 64 | 259 | 395 | 275 |
由上表可知，本发明提供的肉制品中沙门氏菌的检测方法与国标GB 4789.4-2010的检测方法不存在显著差异。
Claims (8)
1.肉制品中沙门氏菌的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤1，取肉制品，放入含1wt%牛血清蛋白的PBS-T溶液中，搅拌后均质；
步骤2，将步骤1均质后的样品液过滤，滤液浓缩；
步骤3，取步骤2所得滤液，依次加入75%乙醇水溶液、增长液和BCIP染色液，37℃反应30min后，送入微生物快速检测仪中检测。
2.根据权利要求1所述的肉制品中沙门氏菌的检测方法，其特征在于：步骤1中肉制品用量为15～30g，含1wt%牛血清蛋白的PBS-T溶液用量为30～50 mL。
3.根据权利要求1所述的肉制品中沙门氏菌的检测方法，其特征在于：步骤1中所述PBS-T溶液为含0.05v/v%吐温-20的PBS溶液，PBS溶液pH为6.8。
4.根据权利要求1所述的肉制品中沙门氏菌的检测方法，其特征在于：步骤1中均质条件为8000～10000 r/min，均质时间3～5min。
5.根据权利要求1所述的肉制品中沙门氏菌的检测方法，其特征在于：步骤2中过滤采用滤纸过滤。
6.根据权利要求1所述的肉制品中沙门氏菌的检测方法，其特征在于：步骤2中浓缩采用0.45μm的滤膜过滤浓缩。
7.根据权利要求1所述的肉制品中沙门氏菌的检测方法，其特征在于：步骤3中增长液的配置方法为：0.05mL浓度为0.002M的氯金酸溶液和10mL浓度为0.04M的CATB十六烷基三甲基溴化铵混匀，加热后冷却，加入浓度为0.04M 的抗坏血酸。
8.根据权利要求1所述的肉制品中沙门氏菌的检测方法，其特征在于：步骤3中滤液、75%乙醇水溶液、增长液和BCIP染色液的体积比为1～5：4～12：0.5～2.4：0.05～0.1。
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Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 孔繁德: "沙门氏菌快速检测体系的建立与应用及其耐药性分析研究", 《中国博士学位论文全文数据库》 * |
| 杨正时、房海: "《人及动物病原细菌学》", 31 March 2003 * |
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