CN104928235A - 基于干细胞的组合物及其在制备用于冠心病的制剂中的应用 - Google Patents
基于干细胞的组合物及其在制备用于冠心病的制剂中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104928235A CN104928235A CN201510403088.6A CN201510403088A CN104928235A CN 104928235 A CN104928235 A CN 104928235A CN 201510403088 A CN201510403088 A CN 201510403088A CN 104928235 A CN104928235 A CN 104928235A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- stem cells
- stem cell
- cell
- coronary heart
- heart disease
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 118
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 74
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 title claims abstract description 42
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 63
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 41
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 claims abstract description 20
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 3
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 claims description 30
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 claims description 19
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 18
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 18
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 claims description 15
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 claims description 15
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 claims description 15
- 239000003761 preservation solution Substances 0.000 claims description 12
- 230000004217 heart function Effects 0.000 claims description 11
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 11
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims description 11
- 102000018832 Cytochromes Human genes 0.000 claims description 10
- 108010052832 Cytochromes Proteins 0.000 claims description 10
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 claims description 10
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 claims description 10
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 claims description 10
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 claims description 10
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 claims description 10
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 claims description 10
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 claims description 10
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 claims description 10
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims description 10
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000001802 infusion Methods 0.000 claims description 10
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims description 10
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 claims description 10
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 claims description 10
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 claims description 10
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 claims description 7
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 7
- 102000005862 Angiotensin II Human genes 0.000 claims description 6
- 101800000733 Angiotensin-2 Proteins 0.000 claims description 6
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 claims description 6
- 229950006323 angiotensin ii Drugs 0.000 claims description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 6
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 claims description 5
- CZGUSIXMZVURDU-JZXHSEFVSA-N Ile(5)-angiotensin II Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C([O-])=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=[NH2+])NC(=O)[C@@H]([NH3+])CC([O-])=O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 CZGUSIXMZVURDU-JZXHSEFVSA-N 0.000 claims description 5
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 claims description 5
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 claims description 5
- 206010000891 acute myocardial infarction Diseases 0.000 claims description 5
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims description 5
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 claims description 5
- 208000031225 myocardial ischemia Diseases 0.000 claims description 5
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 claims description 5
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 claims description 5
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 claims description 5
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 claims description 4
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 claims description 4
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 4
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 4
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 102100022464 5'-nucleotidase Human genes 0.000 claims description 3
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 claims description 3
- 102100037241 Endoglin Human genes 0.000 claims description 3
- 102100037362 Fibronectin Human genes 0.000 claims description 3
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 claims description 3
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 claims description 3
- 101000678236 Homo sapiens 5'-nucleotidase Proteins 0.000 claims description 3
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 claims description 3
- 101000881679 Homo sapiens Endoglin Proteins 0.000 claims description 3
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 3
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 3
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 claims description 3
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 claims description 3
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 claims description 3
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 claims description 3
- 230000001146 hypoxic effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 3
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims description 3
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 claims description 3
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 claims description 3
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 claims description 3
- 102100022749 Aminopeptidase N Human genes 0.000 claims description 2
- 101000757160 Homo sapiens Aminopeptidase N Proteins 0.000 claims description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 claims description 2
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical group C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 claims description 2
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 claims description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 claims description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 2
- GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 6,7-dimethyl-3-[[methyl-[2-[methyl-[[1-[3-(trifluoromethyl)phenyl]indol-3-yl]methyl]amino]ethyl]amino]methyl]chromen-4-one;dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.C=1OC2=CC(C)=C(C)C=C2C(=O)C=1CN(C)CCN(C)CC(C1=CC=CC=C11)=CN1C1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 21
- 210000005240 left ventricle Anatomy 0.000 abstract description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 abstract 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 abstract 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 abstract 1
- 206010061216 Infarction Diseases 0.000 description 23
- 230000007574 infarction Effects 0.000 description 22
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 12
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 10
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 10
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 9
- 230000006870 function Effects 0.000 description 9
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 9
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 9
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 7
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 6
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 6
- 230000002861 ventricular Effects 0.000 description 6
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 230000000004 hemodynamic effect Effects 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 230000036770 blood supply Effects 0.000 description 4
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 4
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 4
- 230000035487 diastolic blood pressure Effects 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 210000004263 induced pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- 230000035488 systolic blood pressure Effects 0.000 description 4
- 206010048858 Ischaemic cardiomyopathy Diseases 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 206010049418 Sudden Cardiac Death Diseases 0.000 description 3
- 208000033774 Ventricular Remodeling Diseases 0.000 description 3
- 210000004504 adult stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 3
- 230000034994 death Effects 0.000 description 3
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000003098 myoblast Anatomy 0.000 description 3
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 3
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 2
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 2
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 206010042434 Sudden death Diseases 0.000 description 2
- 238000004115 adherent culture Methods 0.000 description 2
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 2
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 2
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 2
- 206010003119 arrhythmia Diseases 0.000 description 2
- 230000006793 arrhythmia Effects 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 2
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003859 lipid peroxidation Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003076 paracrine Effects 0.000 description 2
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000010410 reperfusion Effects 0.000 description 2
- 230000035806 respiratory chain Effects 0.000 description 2
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000002537 thrombolytic effect Effects 0.000 description 2
- 239000005541 ACE inhibitor Substances 0.000 description 1
- 208000004476 Acute Coronary Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 206010002198 Anaphylactic reaction Diseases 0.000 description 1
- 206010002383 Angina Pectoris Diseases 0.000 description 1
- 101710129690 Angiotensin-converting enzyme inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 208000037260 Atherosclerotic Plaque Diseases 0.000 description 1
- 101710086378 Bradykinin-potentiating and C-type natriuretic peptides Proteins 0.000 description 1
- 208000032544 Cicatrix Diseases 0.000 description 1
- 206010069729 Collateral circulation Diseases 0.000 description 1
- 201000000057 Coronary Stenosis Diseases 0.000 description 1
- 206010013012 Dilatation ventricular Diseases 0.000 description 1
- 108090000386 Fibroblast Growth Factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100031706 Fibroblast growth factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 102000006587 Glutathione peroxidase Human genes 0.000 description 1
- 108700016172 Glutathione peroxidases Proteins 0.000 description 1
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028594 Myocardial fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 1
- 206010029113 Neovascularisation Diseases 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 1
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 1
- 229940044094 angiotensin-converting-enzyme inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 229940127218 antiplatelet drug Drugs 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 1
- 238000010009 beating Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002876 beta blocker Substances 0.000 description 1
- 230000004791 biological behavior Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000001715 carotid artery Anatomy 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 102000003675 cytokine receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010057085 cytokine receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 1
- 230000037149 energy metabolism Effects 0.000 description 1
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 210000001308 heart ventricle Anatomy 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000007365 immunoregulation Effects 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000036723 left ventricular dilatation Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000001365 lymphatic vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000008065 myocardial cell damage Effects 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229960001412 pentobarbital Drugs 0.000 description 1
- 238000013146 percutaneous coronary intervention Methods 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000004537 potential cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000002468 redox effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000027756 respiratory electron transport chain Effects 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 208000037803 restenosis Diseases 0.000 description 1
- 230000000250 revascularization Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 1
- 230000036573 scar formation Effects 0.000 description 1
- 230000037387 scars Effects 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000011476 stem cell transplantation Methods 0.000 description 1
- 208000014221 sudden cardiac arrest Diseases 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000011277 treatment modality Methods 0.000 description 1
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008728 vascular permeability Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种基于干细胞的组合物及其在制备用于冠心病的制剂中的应用，其中基于干细胞的组合物，包含优选方法制备的干细胞和作为溶剂的细胞保存液。首先需要筛选合适的干细胞，然后采用优选方法进一步处理筛选的干细胞，最后收集并重悬于细胞保存液中。本发明基于干细胞的组合物在制备用于冠心病的制剂中的应用采用多种细胞植入方法，并结合术前、术中和术后的时间节点，在确保移植的干细胞可以发挥最大功能。本发明采用优选方法制备的干细胞及细胞保存液的干细胞组合物，可以极显著地增强细胞移植后的心室功能，抑制左室重构。为冠心病的治疗提供了一种最佳的细胞组合物，不仅来源广泛，制备简单，无毒副作用，并且移植效果好。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体的，涉及一种基于干细胞的组合物及其在制备用于冠心病的制剂中的应用。
背景技术
心血管疾病是严重威胁人类生命健康的主要疾病之一。冠心病是冠状动脉性心脏病（coronary artery heart disease，CHD）的简称，是一种最常见的心脏病，是指因冠状动脉狭窄、供血不足而引起的心肌机能障碍和(或)器质性病变，故又称缺血性心肌病。世界卫生组织将冠心病分为5大类：无症状心肌缺血（隐匿性冠心病）、心绞痛、心肌梗死、缺血性心力衰竭（缺血性心脏病）和猝死5种临床类型。临床中常常分为稳定性冠心病和急性冠状动脉综合征。
冠心病是全球死亡率最高的疾病之一，根据世界卫生组织2011年的报告，中国的冠心病死亡人数已列世界第二位。中国人群心脏性猝死发生率为41.8/10万人。男性高于女性（44.6/10万VS 39.0/10万），估计全国每年发生心脏性猝死54.4万例。在我国，无论城市、农村，男性或女性，急性心肌梗死死亡率均随年龄的增加而增加。特别是近年来，该病趋于年轻化，40岁开始显著上升，正处于年富力强的人生黄金阶段，给个人、家庭和社会带来很大的负面影响。
急性心肌梗死是在冠心病的基础上，由于冠状动脉绝对或相对供血不足和心肌对血氧需求的严重失衡而诱发的严重的缺血性心脏病。心梗发生后，梗死区心肌细胞发生坏死或凋亡，功能心肌细胞数量减少并可伴有心肌纤维化和瘢痕形成，室壁舒缩功能降低。若梗死面积广泛，可导致心律失常及心脏骤停，严重可导致患者猝死。
患者由于冠状动脉病变， 动脉内粥样斑块破裂， 使冠状动脉供血不足而导致心肌急性坏死。其治疗原则为及时、充分开通闭塞的血管， 以挽救存活及濒死心肌。目前常用的治疗方式有：（1）药物治疗：抗血小板药物治疗，抗凝血治疗，血脂干预治疗，应用血管紧张素转化酶抑制剂及β-受体阻滞剂治疗。（2）再灌注治疗：主要包括药物溶栓及经皮冠状动脉介入治疗两种方式；再灌注治疗的目的是为了使梗死的冠状动脉再通，恢复心肌供血以挽救存活及濒死心肌，缩小梗死面积，抑制左室扩张，保护心脏功能及改善预后。
药物、溶栓治疗及介入治疗只能延缓心室重构， 不能够彻底修复心肌组织及完全恢复心脏功能。干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的早期未分化细胞。它在促进血管新生、受损心肌细胞修复、心肌细胞收缩等方面效果显著，能够进一步改善心功能和減少心肌梗死。临床研究发现，自体骨髓单个核细胞、自体骨髓间充质干细胞、自体外周血干细胞以及内皮祖细胞、骨髓侧群细胞等成体干细胞，SM(骨骼肌成肌细胞)，脐血（脐带、胎盘）来源干细胞， BMSCs(骨髓干细胞)，iPSCs(诱导多能干细胞)，ESCs（胚胎干细胞）具有很好的临床治疗冠心病的效果，展示了其良好的前景，给这些冠心病甚至心肌梗死患者带来了新的希望。
但应用自体成体干细胞遇到诸多问题，如①骨骼肌成肌细胞移植存在严重致心律失常性；②骨髓单个核细胞移植成分复杂，所含具有多向分化潜能的干细胞数量低，分化潜能有限；③造血干细胞 CD34不能分化为心肌细胞表型；④CD133细胞移植可致冠脉支架再狭窄；⑤内皮祖细胞改善心功能作用有限；⑥自体骨髓间充质干细胞材料来源受限，细胞增殖分化潜能随年龄的增长而明显下降，尤其是冠心病患者骨髓间充质干细胞增殖分化能力明显低于同龄健康人，体外长时间扩增降低体内分化归巢潜能。
与自体成体干细胞相比，脐血（脐带、胎盘）来源干细胞、SM(骨骼肌成肌细胞)、BMSCs(骨髓干细胞)、iPSCs(诱导多能干细胞)、ESCs（胚胎干细胞）诸多优点，相对来说缺陷较少。目前，尚无一种理想的种子细胞满足对这些心血管疾病特别是冠心病患者实施细胞生物学治疗的临床需求，需要突破的诸多的技术瓶颈，还需要进一步探索和研究，以下问题有待明确：(1)最佳的细胞移植种类及其组合物；（2）如何确保移植的干细胞是在靶区域定植，融合以及进一步分化的，保证干细胞移植后存活率；（3）移植后干细胞功能具体情况，是否发挥最大功效；（4）最佳移植时间窗和移植细胞量是怎样的。如何更为有效的改善梗死区心肌血运和心肌细胞功能已经成为治疗冠心病造成的缺血及心肌梗死的热点。
发明内容
针对现有技术存在的问题和不足，本发明的目的是，提供一种基于干细胞的组合物及其在制备用于冠心病的制剂中的应用，解决最佳的细胞移植种类及其组合物，并达到最佳移植效果；满足心血管疾病特别是冠心病患者实施细胞生物学治疗的临床需求。进一步促进干细胞应用于冠心病及缺血性心肌病引起的中、重度心力衰竭患者，用以改善以上这些冠心病患者的生存质量，降低死亡率；并使采用干细胞的血管再生治疗方法在梗死部位修复或重新建立有效的侧支循环逐渐成为可能，为彻底根治疾病提供了理论依据。
基于干细胞的组合物及其在制备用于冠心病的制剂中的应用的机理是：干细胞具有自我更新及多向分化的潜能，在体内可以定向分化成心肌细胞，对心肌组织进行修复，从根本上改善心脏功能。具体是：（1）促进心肌组织的生成：移植细胞分化为心肌样细胞，作为修复心肌的原料，重建心肌组织，直接参与宿主心脏收缩，增加受损心肌的顺应性，使梗死区心肌舒缩功能改善。（2）促进新生血管的形成：移植的干细胞可分化为类内皮细胞和类平滑肌细胞，参与缺血区新生毛细血管形成，同时还可分泌一些促进毛细血管再生的生长因子及细胞因子，促进血管再生进而改善心脏功能或表达细胞因子受体，调节心脏功能。（3）抑制左室重构：移植后其分化新生的心肌细胞和/或肌样细胞可取代受损坏死心肌，以维持心肌组织的相对完整性，限制心肌疤痕组织扩张，抑制梗死后心室重构。
为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明通过以下技术方案实现：
基于干细胞的组合物，是由优选方法制备的干细胞和作为溶剂的细胞保存液组成。
其中，所述的优选方法制备的干细胞在生物学表型鉴定中，具有以下技术特征：细胞表型检测表达CD105、CD73、CD44和CD13，不表达CD34、CD45、HLA-I和HLA-II；在标准培养条件贴壁生长；然后在无血清低糖DMEM/F12培养基、低氧扩增培养48小时后制备形成，并在培养的过程中添加血管内皮生长因子(VEGF)50～100μg/L、血管紧张素Ⅱ（ANGⅡ）10-7mol/L、脑源性神经生长因子（BDNF）25～75μg/L、胰岛素样生长因子1（IGF-1）75～100μg/L、肿瘤坏死因子-α ( TNF-α) 75～100μg/L和维生素C(Vc)75～100μmol/L；
所述的细胞保存液以0.9%的生理盐水为基础液，并添加了细胞色素C、维生素C、维生素E组成，终浓度分别是10mg/ml、100mg/ml和50mg/ml。
进一步的，所述的优选方法制备的干细胞优选来源于人类胚胎、脐带、脐血、胎盘、骨髓的多潜能干细胞中的一种。
进一步的，所述的无血清DMEM/F12培养基含有HEPES 15mM/L、大豆胰酶抑制剂0.1%、胰岛素5～10μg/ml，转铁蛋白25～50μg/ml，纤粘连蛋白10～20μg/ml。
进一步的，所述的低氧条件的氧气(O2)浓度为1%～10%。
本发明基于干细胞的组合物在冠心病中的应用通过细胞移植，主要包括高危和临危型冠心病包括终末期缺血性心脏病和急性心肌梗死，其心功能为 级和级。
本发明基于干细胞的组合物在制备冠心病的制剂中的应用中细胞移植是通过以下途径中的一种或多种实现的：1.静脉输注法；2.心肌多点注射法；3.冠状动脉注射法；4.心内膜注射法；5.瓣膜注射法。
基于干细胞的组合物在制备冠心病的制剂中的应用实现的方法具体是：
（1）制备基于干细胞的组合物，其中每剂量包含优选制备的干细胞的数量为（2～5）×107个，0.9%的生理盐水、10mg/ml的细胞色素C、、100mg/ml维生素C和50mg/ml维生素E组成；
（2）将上述步骤（1）制备的干细胞的组合物在术前以静脉注射或输注法植入患者体内，静脉输注法首先用0.9%生理盐水开通静脉通道，并输注5单位地塞米松，然后用100ml 0.9%生理盐水稀释步骤（1）制备的干细胞组合物，通过静脉点滴的方法进行输注，30～40滴/分钟，每隔10～15分钟轻轻晃动并混匀稀释后的干细胞组合物；
（3）将上述步骤（1）制备的干细胞的组合物在术中根据手术部位不同，或以心肌多点注射法，或以冠状动脉注射法，或以心内膜注射法，或以瓣膜注射法植入患者体内；
（4）将上述步骤（1）制备的干细胞的组合物在术后以静脉输注法植入患者体内。
本发明的显著效果是：
1、本发明的基于干细胞的组合物是一种最佳的用于治疗冠心病的细胞移植种类及其组合物。首选干细胞经优选制备，确立了干细胞优选及入选的标准，创造性的扩增优化干细胞，最后制备形成干细胞组合物。其中：
（a）本发明的干细胞的表型检测标记物标准，及采用贴壁培养的方式是一种简便、易行的优良体外培养体系，纯化速度快，鉴定方法简单，为进一步研究及临床医学转化奠定了良好的基础。
（b）本发明采用无血清低糖培养基不仅能在很大程度上避免或改善含血清培养基所带来的潜在的细胞毒性作用、细胞培养的标准化和终产品纯化难度大、外源病毒和致病因子污染、异种血清残留的过敏反应等重大缺陷，也能取得较好的培养效果，并且由于其明确的成分组成，可避免血清的不同批次或不明组分对细胞培养及试验研究的影响，从而提高结果的可重复性。
（c）本发明优选制备干细胞时采用低氧培养方式，目的是在体外模拟细胞缺血微环境，因为细胞经低氧预处理后，可以增强细胞的缺氧耐受性。而且损伤的组织器官多处于低氧微环境中，干细胞移植后治疗效能的发挥与损伤部位的低氧环境密切相关。因此低氧培养细胞可以增强干细胞移植后的存活率，更好的适应移植后的微环境，发挥更好的治疗效能。
（d）本发明优选制备干细胞时使用了多种添加物，包括血管内皮生长因子(VEGF)、血管紧张素Ⅱ（ANGⅡ）、脑源性神经生长因子（BDNF）、胰岛素样生长因子1、肿瘤坏死因子-α ( TNF-α) 7和维生素C(Vc)，可以更好的促进细胞的增殖，并提高了细胞活性，激发干细胞更好的发挥功能，为干细胞组合物在冠心病发挥更好的效果奠定了基础。①血管内皮细胞生长因子(VEGF)是一种内皮细胞的特异性有丝分裂原，能够调节血管及淋巴管的生成，是目前已知作用最强、特异性最高的促血管生成因子；有促进内皮细胞增殖，加速新生血管形成，增加血管通透性，抗血栓，促进组织愈合等优点；在缺氧状态下能够保护干细胞存活度；②血管紧张素Ⅱ（ANGⅡ）促进细胞增殖、迁移、分化、炎症反应及免疫调节等多种生物学行为，增强细胞的耐受性；③脑源性神经生长因子（BDNF）可以促进早期内皮祖细胞的单克隆形成和旁分泌，并且能诱导晩期内皮祖细胞的增殖、迁移和分化，还能促进平滑肌细胞在材料上生长 ，并且能够通过促进干细胞归巢从而提高小口径组织工程血管的通畅率；④胰岛素样生长因子1（IGF-1）是一类具有促有丝分裂的蛋白质，对细胞的生长、发育和代谢具有重要的调节作用，可以促进干细胞的增殖以及定向分化和再生修复的作用；⑤肿瘤坏死因子-α ( TNF-α) 主要是由巨噬细胞和单核细胞产生的促炎细胞因子，并参与正常炎症反应和免疫反应，是重要的炎症因子，与一些因子协同作用下具有促进细胞增殖和分化的作用；⑥维生素C(Vc)是体内一种重要的辅酶和抗氧化剂，具有可逆的氧化还原作用，可参与细胞内呼吸链作用，维持组织细胞及器官的正常能量代谢，从而有利于细胞的完整存活和增殖发育。
2、本发明的优选制备的干细胞来源广泛，制备简单，应用效果好，为冠心病等心血管疾病提供丰富的细胞来源，在再生医学研究中具有极佳的应用前景，并将产生巨大的社会效益和经济效益。
3、本发明干细胞组合物的细胞保存液在0.9%的生理盐水的基础上添加了细胞色素C、维生素C和维生素E，其中细胞色素C是含铁卟啉的色蛋白质，是呼吸链的一个重要组成部分，促进氢和氧的结合，加强体内有机物的氧化供应能力，增加ATP的生成，促进细胞呼吸顺利进行；对线粒体活性氧产生的调节作用在缺氧的环境中增加细胞氧化、提高氧的利用，最终在一定程度上恢复损伤的电子传递链。维生素E是一种重要的脂溶性抗氧化剂，能抑制细胞内脂质过氧化作用，保护细胞免受自由基的损害，所以能够直接保护细胞膜。并结合维生素C联合使用，发挥协同作用，通过直接清除氧自由基，抑制脂质过化反应，提高超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶等抗氧化酶活性等几个途径，促进心肌细胞损伤的恢复，使本发明优选制备的干细胞组合物可以显著提高治疗效果。而且本发明的细胞保存液易于制备，无毒无害，成本小，实用。
4、本发明基于干细胞的组合物及其在制备用于冠心病的制剂中的应用采用多种细胞植入方法，并结合术前、术中和术后的时间节点，在确保移植的干细胞是在靶区域定植，添加的干细胞保存液，使干细胞在靶区融合并进一步分化，以保证干细胞移植后的存活率；同时移植后的干细胞可以发挥最大功能，进一步分化为心肌细胞，并取代受损坏死的心肌细胞，增加有功能心肌细胞的数量，建立新的血管来改善心功能。
5、本发明方法可以缩小手术范围，缩短手术时间，较少并发症，促进手术愈合，减少瘢痕造成的功能障碍，增加心脏的收缩能力，提高心脏搏动功能。
6、本发明优选制备得到的干细胞的其中一个重要优点在于免疫原性弱，不诱导免疫排斥反应；具有可抑制同种异体免疫反应的特性；抑制移植物抗宿主病，这对有效治疗心血管疾病例如缺血性心肌病具有重要意义；同时克服冠心病及老年患者自干细胞分化增殖及旁/自分泌功能減低不能达到有效的生物学效应的缺陷。
附图说明
此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本申请的一部分，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：
图1是本发明动物实验血流动力学检测结果对比分析，图注：与梗死组比较，*表示差异显著（P＜0.05），**表示差异极显著（P＜0.01）；实验组、A组、B组与正常组比较，△表示差异显著（P＜0.05），▲表示差异极显著（P＜0.01）；不标者表示差异不显著（P＞0.05）；
图2是发明动物实验左室重量及梗死面积测定，图注：与梗死组比较，*表示差异显著（P＜0.05），**表示差异极显著（P＜0.01）；实验组、A组、B组与正常组比较，△表示差异显著（P＜0.05），▲表示差异极显著（P＜0.01）；不标者表示差异不显著（P＞0.05）。
具体实施方式
下面将参考附图并结合实施例，来详细说明本发明。
具体实施例1：干细胞组合物的制备
1、干细胞的筛选：
收集扩增后并贴壁培养的骨髓源多潜能干细胞混悬液，进行流式细胞仪检测其表面标记物，其中检测PE-CD105、PE-CD73、PE-CD44和PE-CD13的表达结果分别是96.78%、90.03%、95.86%和90.69%，为阳性表达； FITC-CD34、FITC-CD45、FITC-HLA-ABC (HLA-I)和FITC-HLA-DR (HLA-II)的表达结果分别是2.24%、1.03%、0.08%和1.69%，为阳性表达；阴性对照结果显示1.63%，符合干细胞优选制备入选标准。
同样的检测方法还可用于人类胚胎、脐带、脐血、胎盘来源的多潜能干细胞，结果应符合表面标记物CD105、CD73、CD44和CD13的表达结果是阳性； CD34、CD45、HLA-I和HLA-II的表达结果是阴性。
2、干细胞组合物的优选制备
无血清培养基的制备：制备无血清低糖DMEM/F12培养基500ml，并添加HEPES 15mM/L、大豆胰酶抑制剂0.1%、胰岛素5～10μg/ml，转铁蛋白25～50μg/ml，纤粘连蛋白10～20μg/ml。
细胞保存液的制备：取适量0.9%的生理盐水，并分别加入细胞色素C、维生素C和维生素E，添加后的终浓度分别是10mg/ml、100mg/ml和50mg/ml。
将上述操作1中筛选合格的干细胞以5×105个/ml接种于加有无血清培养基的培养器皿中，并添加血管内皮生长因子(VEGF)50～100μg/L、血管紧张素Ⅱ（ANGⅡ）10-7mol/L、脑源性神经生长因子（BDNF）25～75μg/L、胰岛素样生长因子1（IGF-1）75～100μg/L、肿瘤坏死因子-α ( TNF-α) 75～100μg/L和维生素C(Vc)75～100μmol/L；然后置于三气培养箱中培养，培养条件为37℃，5%CO2，2%O2，95%湿度；培养24小时后补液，培养48小时后离心收集细胞并重悬于上述细胞保存液中。
具体实施例2：干细胞组合物在冠心病中的应用
1、制备大鼠心肌梗死模型及分组
Wistar大鼠雌雄不限，体重(BW，300±30g)，建立急性心肌梗死模型。随机分为5 组：每组10只， 分别为正常对照组（正常组）、梗死未治疗组(梗死组)、梗死移植实验组(实验组)、梗死移植A组(A组)、梗死移植B组(B组)。
2、基于干细胞的组合物在制备冠心病的制剂中的应用实现的方法具体是：
（1）制备基于干细胞的组合物，其中每剂量包含经优选制备操作的干细胞的数量为（2～5）×107个/ml，0.9%的生理盐水、10mg/ml的细胞色素C、100mg/ml维生素C和50mg/ml维生素E组成，为实验组干细胞组合物；
以具体实施例1中操作1筛选获得的未经优选制备操作的干细胞做对照组：
A组对照干细胞组合物：每剂量包含未经优选制备操作的干细胞（2～5）×107个和0.9%的生理盐水。
B组对照干细胞组合物：每剂量包含未经优选制备操作的干细胞（2～5）×107个和0.9%的生理盐水、10mg/ml的细胞色素C、100mg/ml维生素C和50mg/ml维生素E组成。
使A、B两对照组细胞数与实验组细胞数一致。
（2）将上述步骤（1）制备的干细胞的组合物在术前一天以静脉输注法植入实验动物体内，实验组、A组、B组分别每只动物注射100μl 2×107个/ml相应组别干细胞组合物。
（3）将上述步骤（1）制备的干细胞的组合物在以心肌多点注射法植入实验动物体内心肌梗死区和梗死周围（100μl，2×107个/ml，分4点注入）；
（4）将上述步骤（1）制备的干细胞的组合物在术后一天以静脉输注法植入实验动物体内，实验组、A组、B组分别每只动物注射100μl 2×107个/ml相应组别干细胞组合物。
3、实验室检测
心脏血流动力学检测：移植后4周在戊巴比妥全麻下经颈动脉插入特制导管至左心室，测定左室收缩压（LVSP）、舒张末期压（LVEDP）、收缩压最大上升（+dp/dtmax）和最大下降速率（-dp/dtmax）等血流动力学指标，以32导电生理记录仪记录压力曲线。
组织学检测：测定血流动力指标后处死大鼠，取出心脏，保留完整左室称重，得到左室质量（LVW）；将左室标本沿横切面切成2mm厚的连续断层，分别测量梗死区内膜及外膜周径，经图像分析仪计算梗死面积 (IS，梗死区面积/整个左室面积，%)。
4、实验结果
心脏血流动力学检测结论：与梗死组比较，正常组和实验组的左室收缩压及±dp/dtmax均显著减小(P <0.01)，左室舒张末期压显著上升(P <0.01)（如图1所示）。与梗死组相比，实验组、A组、B组移植细胞使左室收缩压及舒张压最大速率均显著增加，而左室舒张末期压则显著减小，表明细胞移植使梗死后心功能显著改善。由此证明，经优选制备操作的干细胞组合物实验组大鼠表现出左心室功能的极显著增强；A组和B组未经优选制备操作的干细胞组合物也可显著增强左心室功能，且使用了本发明细胞保存液的B组的效果优于A组；但A组、B组的效果均不如实验组经优选制备操作的干细胞组合物的。
组织学检测结论：实验组和正常组的左室重量及左室重量指数明显低于梗死组，差异极显著 (P<0.01)， B组的左室重量及左室重量指数明显低于梗死组，差异显著 (P<0.05) ，A组左室重量及左室重量指数低于梗死组，但差异不显著(P＞0.05)；与梗死组比较， 实验组梗死面积极显著减小(P <0.01)，A组和B组梗死面积显著减小(P<0.05)，但B组梗死面积更低于A组（如图2所示）。实验组、A组、B组移植细胞能显著减轻左室重量、减小梗死面积、使纤维化程度显著减轻，由此表明移植细胞能阻止左室重构。由此证明，优选制备操作的干细胞组合物能显著阻止左室重构，并且优于未经优选制备的组合物（A组和B组）；且使用本发明细胞保存液的干细胞组合物（B组）效果较未使用组（A组）更好。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.基于干细胞的组合物，其特征在于，是由优选方法制备的干细胞和作为溶剂的细胞保存液组成；其中，
所述的优选方法制备的干细胞在生物学表型鉴定中，首先具有以下技术特征：细胞表型检测表达CD105、CD73、CD44和CD13，不表达CD34、CD45、HLA-I和HLA-II；在标准培养条件贴壁生长；然后在无血清低糖DMEM/F12培养基、低氧扩增培养48小时后制备形成，并在培养的过程中添加血管内皮生长因子(VEGF)、血管紧张素Ⅱ（ANGⅡ）、脑源性神经生长因子（BDNF）、胰岛素样生长因子1（IGF-1）、肿瘤坏死因子-α ( TNF-α) 和维生素C(Vc)；
所述的细胞保存液以0.9%的生理盐水为基础液，并添加了细胞色素C、维生素C、维生素E组成。
2.根据权利要求1所述的基于干细胞的组合物，其特征在于，所述的在培养的过程中添加VEGF、ANGⅡ、BDNF、IGF-1、TNF-α和Vc的浓度分别是50～100μg/L、10-7mol/L、25～75μg/L、75～100μg/L、75～100μg/L和75～100μmol/L。
3.根据权利要求1所述的基于干细胞的组合物，其特征在于，所述的细胞保存液中添加的细胞色素C、维生素C、维生素E的终浓度分别是10mg/ml、100mg/ml和50mg/ml。
4.根据权利要求1所述的基于干细胞的组合物，其特征在于，所述的优选方法制备的干细胞优选来源于人类胚胎、脐带、脐血、胎盘、骨髓的多潜能干细胞中的一种。
5.根据权利要求1所述的基于干细胞的组合物，其特征在于，所述的无血清DMEM/F12培养基含有HEPES 15mM/L、大豆胰酶抑制剂0.1%、胰岛素5～10μg/ml，转铁蛋白25～50μg/ml，纤粘连蛋白10～20μg/ml。
6.根据权利要求1所述的基于干细胞的组合物，其特征在于，所述的低氧条件的氧气(O2)浓度为1%～10%。
7.权利要求1所述的基于干细胞的组合物在冠心病的制剂中的应用，其特征在于，通过细胞移植应用于包括高危和临危型冠心病包括终末期缺血性心脏病和急性心肌梗死，其心功能为 级和级。
8.根据权利要求7所述的基于干细胞的组合物在冠心病的制剂中的应用，其特征在于，所述的细胞移植是通过以下途径中的一种或多种实现的：1.静脉输注法；2.心肌多点注射法；3.冠状动脉注射法；4.心内膜注射法；5.瓣膜注射法。
9.权利要求1-8所述的基于干细胞的组合物在冠心病的制剂中的应用，其特征在于，实现的方法具体是：
（1）制备基于干细胞的组合物，其中每剂量包含优选制备的干细胞的数量为（2～5）×107个，0.9%的生理盐水、10mg/ml的细胞色素C、100mg/ml维生素C和50mg/ml维生素E组成；
（2）将上述步骤（1）制备的干细胞的组合物在术前以静脉注射或输注法植入患者体内，静脉输注法首先用0.9%生理盐水开通静脉通道，并输注5单位地塞米松，然后用100ml 0.9%生理盐水稀释步骤（1）制备的干细胞组合物，通过静脉点滴的方法进行输注，30～40滴/分钟，每隔10～15分钟轻轻晃动并混匀稀释后的干细胞组合物；
（3）将上述步骤（1）制备的干细胞的组合物在术中根据手术部位不同，或以心肌多点注射法，或以冠状动脉注射法，或以心内膜注射法，或以瓣膜注射法植入患者体内；
（4）将上述步骤（1）制备的干细胞的组合物在术后以静脉输注法植入患者体内。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510403088.6A CN104928235A (zh) | 2015-07-10 | 2015-07-10 | 基于干细胞的组合物及其在制备用于冠心病的制剂中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510403088.6A CN104928235A (zh) | 2015-07-10 | 2015-07-10 | 基于干细胞的组合物及其在制备用于冠心病的制剂中的应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104928235A true CN104928235A (zh) | 2015-09-23 |
Family
ID=54115663
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510403088.6A Pending CN104928235A (zh) | 2015-07-10 | 2015-07-10 | 基于干细胞的组合物及其在制备用于冠心病的制剂中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104928235A (zh) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107410288A (zh) * | 2017-08-26 | 2017-12-01 | 刘劼 | 一种人脐带间充质干细胞的储存液 |
| CN111838132A (zh) * | 2020-07-20 | 2020-10-30 | 江苏瑞思坦生物科技有限公司 | 一种干细胞冻存方法及其使用的细胞冻存液 |
| WO2022033570A1 (zh) * | 2020-08-14 | 2022-02-17 | 徐伟成 | 医药组合物治疗组织缺血状况的用途 |
| CN114600872A (zh) * | 2022-04-13 | 2022-06-10 | 西安北光医学生物技术有限公司 | 一种细胞、组织或器官的抗损伤保存的方法及保存系统 |
| WO2023217134A1 (zh) * | 2022-05-10 | 2023-11-16 | 上海赛立维生物科技有限公司 | 包含心肌前体样细胞的生物制剂及其制备方法和应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101642469A (zh) * | 2009-09-09 | 2010-02-10 | 中国人民解放军海军总医院 | 脐带华通胶来源的间充质干细胞在急性心肌梗死细胞移植治疗中的应用 |
| WO2014089121A2 (en) * | 2012-12-03 | 2014-06-12 | Thomas Ichim | Retrograde delivery of cells and nucleic acids for treatment of cardiovascular diseases |
| CN103889433A (zh) * | 2011-08-10 | 2014-06-25 | 德普伊新特斯产品有限责任公司 | 使用脐带组织来源的细胞治疗外周血管疾病 |
-
2015
- 2015-07-10 CN CN201510403088.6A patent/CN104928235A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101642469A (zh) * | 2009-09-09 | 2010-02-10 | 中国人民解放军海军总医院 | 脐带华通胶来源的间充质干细胞在急性心肌梗死细胞移植治疗中的应用 |
| CN103889433A (zh) * | 2011-08-10 | 2014-06-25 | 德普伊新特斯产品有限责任公司 | 使用脐带组织来源的细胞治疗外周血管疾病 |
| WO2014089121A2 (en) * | 2012-12-03 | 2014-06-12 | Thomas Ichim | Retrograde delivery of cells and nucleic acids for treatment of cardiovascular diseases |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| FENG WEI ET AL: "The subpopulation of mesenchymal stem cells that differentiate toward cardiomyocytes is cardiac progenitor cells", 《E X P E R I M E N T A L C E L L R E S E A R C H》 * |
| SANGA SADAT ET AL: "The cardioprotective effect of mesenchymal stem cells is mediated by IGF-I and VEGF", 《BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS》 * |
| TIMOTHY J. CASHMAN, ET AL: "Mesenchymal Stem Cells for Cardiac Therapy: Practical Challenges and Potential Mechanisms", 《STEM CELL REV AND REP》 * |
| YOHEI NUMASAWA ET AL: "Treatment of Human Mesenchymal Stem Cells with Angiotensin Receptor Blocker Improved Efficiency of Cardiomyogenic Transdifferentiation and Improved Cardiac Function via Angiogenesis", 《STEM CELL》 * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107410288A (zh) * | 2017-08-26 | 2017-12-01 | 刘劼 | 一种人脐带间充质干细胞的储存液 |
| CN107410288B (zh) * | 2017-08-26 | 2020-07-31 | 刘劼 | 一种人脐带间充质干细胞的储存液 |
| CN111838132A (zh) * | 2020-07-20 | 2020-10-30 | 江苏瑞思坦生物科技有限公司 | 一种干细胞冻存方法及其使用的细胞冻存液 |
| WO2022033570A1 (zh) * | 2020-08-14 | 2022-02-17 | 徐伟成 | 医药组合物治疗组织缺血状况的用途 |
| CN115379844A (zh) * | 2020-08-14 | 2022-11-22 | 徐伟成 | 医药组合物治疗组织缺血状况的用途 |
| CN114600872A (zh) * | 2022-04-13 | 2022-06-10 | 西安北光医学生物技术有限公司 | 一种细胞、组织或器官的抗损伤保存的方法及保存系统 |
| WO2023217134A1 (zh) * | 2022-05-10 | 2023-11-16 | 上海赛立维生物科技有限公司 | 包含心肌前体样细胞的生物制剂及其制备方法和应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Houlihan et al. | Critical review of clinical trials of bone marrow stem cells in liver disease | |
| Chacko et al. | Hypoxic preconditioning induces the expression of prosurvival and proangiogenic markers in mesenchymal stem cells | |
| Malliaras et al. | Cardiac cell therapy: where we've been, where we are, and where we should be headed | |
| Burdon et al. | Bone marrow stem cell derived paracrine factors for regenerative medicine: current perspectives and therapeutic potential | |
| Nakamura et al. | Function follows form―a review of cardiac cell therapy― | |
| Charwat et al. | Role of adult bone marrow stem cells in the repair of ischemic myocardium: current state of the art | |
| CN104928235A (zh) | 基于干细胞的组合物及其在制备用于冠心病的制剂中的应用 | |
| US20080050347A1 (en) | Stem cell therapy for cardiac valvular dysfunction | |
| US11660317B2 (en) | Compositions comprising cardiosphere-derived cells for use in cell therapy | |
| KR101467480B1 (ko) | 혈관 내 투여에 적합한 크기를 가지는 줄기세포의 제조방법 | |
| KR20140000945A (ko) | 고농도의 줄기세포 제조방법 | |
| CN101711160A (zh) | 包含来自脂肪组织干细胞的治疗缺血性肢体疾病的组合物 | |
| Beliën et al. | Combining stem cells in myocardial infarction: the road to superior repair? | |
| EP2662439A1 (en) | Treatment of ischemia using stem cells | |
| Alvarez-Viejo et al. | Mesenchymal stem cells: from identification and characterization to clinical applications | |
| Marbán et al. | Heart to heart: cardiospheres for myocardial regeneration | |
| Ballard | Stem cells for heart failure in the aging heart | |
| KR20130116213A (ko) | 줄기세포의 파쇄 및 응집 방지 방법 및 조성물 | |
| Balsam et al. | Haematopoietic stem cells and repair of the ischaemic heart | |
| Turner et al. | Clinical-based cell therapies for heart disease—current and future state | |
| CN110622956A (zh) | 一种脐带间充质干细胞保存液 | |
| CN105377275B (zh) | 用于静脉给药的干细胞组合物 | |
| Carvalho et al. | Cell transplantation after the coculture of skeletal myoblasts and mesenchymal stem cells in the regeneration of the myocardium scar: an experimental study in rats | |
| Mosna et al. | Cell therapy for cardiac regeneration after myocardial infarct: which cell is the best? | |
| Ott et al. | Cell therapy for heart failure—muscle, bone marrow, blood, and cardiac-derived stem cells |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20150923 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |