CN104918618A - 抗病毒化合物 - Google Patents
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Abstract
本文描述用于治疗包括RNA病毒感染的化合物和相关组合物,和可调节脊椎动物细胞中的RIG-I路径的化合物,包括可活化RIG-I路径的化合物。
Description
相关申请案的交叉参考
本申请案主张2013年1月15日申请的美国临时专利申请案第61/752,846号的优先权和权益,所述申请案的全部内容是以引用的方式并入文中。
联邦资助科研的相关声明
本发明是由美国政府支持在国家健康研究院(National Institutes of Health)授予的授权号AI90035下进行。美国政府对本发明具有某些权利。
技术领域
本文所公开的化合物和方法适用于治疗脊椎动物中的病毒感染,包括RNA病毒感染。
背景技术
作为一个组别,RNA病毒代表一种美国和全球普遍的公共健康问题。众所周知的RNA病毒包括流行性感冒病毒(包括禽类和猪分离株)、C型肝炎病毒(HCV)、西尼罗河病毒(West Nile virus)、重度急性呼吸道症候群(SARS)-冠状病毒、呼吸道融合病毒(RSV)和人类免疫缺陷症病毒(HIV)。
全球超过17000万人感染HCV,且其中的130百万为有发展出慢性肝脏疾病(肝硬化、肝癌和肝衰竭)风险的慢性带菌者。因此,HCV造成发达国家中所有肝脏移植的三分之二。最新研究显示源自于HCV感染的死亡率的增加是归因于慢性感染患者年龄的增长。同样地,季节性流感感染人口的5到20%,导致每年200,000例住院治疗和36,000例死亡。
与流行性感冒和HCV相比,西尼罗河病毒导致的感染数目最小,2010年美国为981例。20%受感染患者发展出疾病的重度形式,导致4.5%死亡率。与流行性感冒和HCV不同,不存在已核准用于治疗西尼罗河病毒感染的疗法,且因其有作为生物恐怖战剂的潜力而成为用于药物开发的高优先级病原体。
在所列的RNA病毒当中,仅存在针对流行性感冒病毒的疫苗。据此,必需药物治疗以减轻与此等病毒相关联的显著致病率与死亡率。不幸的是,抗病毒药物数量有限,许多抗病毒药物的有效性差,且几乎所有抗病毒药物均受病毒抗性的快速演变和有限作用范围的困扰。此外,针对急性流行性感冒和HCV感染的治疗仅中等有效。针对HCV感染的照护标准聚乙二醇化干扰素与病毒唑仅对50%的患者有效,且存在许多种与组合疗法相关联的剂量限制性副作用。急性流行性感冒抗病毒剂的两种类别金刚烷和神经氨酸酶抑制剂仅在感染后的最初48小时内有效,从而限制治疗机会窗。对金刚烷的高抗性已经限制它们的用途,且神经氨酸酶抑制剂的大量积存最终将会导致过度使用和出现抗流行性感冒株。
大多数针对这些病毒的药物开发努力靶向病毒蛋白质。此乃目前药物范围狭窄和经受出现病毒抗性的大部分原因。大多数RNA病毒具有小基因组且许多RNA病毒编码少于十二种蛋白质。病毒标靶因此受到限制。基于前述基础,对抗病毒感染的有效治疗存在极大的且尚未满足的需求。
发明内容
文中所公开的化合物和方法将对病毒药物开发的焦点从靶向病毒蛋白质转移到开发靶向且增强宿主先天抗病毒反应的药物。这类化合物和方法极有可能更有效,较不易出现病毒抗性,会导致较少副作用和抗一系列不同病毒有效。
视黄酸诱导基因1(RIG-I)路径密切参与调节对RNA病毒感染的先天免疫反应。预期RIG-I激动剂适用于治疗许多种病毒,包括(但不限于)HCV、流行性感冒和西尼罗河病毒。据此,本发明涉及用于治疗包括RNA病毒感染的病毒感染的化合物和方法,其中所述化合物可调节RIG-I路径。
本发明的一个实施例包括一种由下式表示的化合物,
其中虚线指示存在或不存在π键;A与B各自独立为将L基团分别连接到环和R1的共价单键或共价双键,A-L-B为具有结构A-C(=Rx)-NR5-B、A-SO2-NR5-B、A-NR5-SO2-B、A-CH(CF3)-NR5-B、A-NR5-CH(CF3)-B、
A-NR5-C(=Ry)-NR5-B、A-CR2R3-Rx-B、A-O-CR2R3-B、A-S-CR2R3-B、A-C(R2)=C(R3)-B、
的连接基团;
m与n可独立为0到5的整数,使得m+n≥1;R1可为Ra、OR2或NR2R3;各Ra可独立为H、任选地经取代的烃基、任选地经取代的芳基、或任选地经取代的杂芳基;R2与R3可各自独立为Ra、CORa、C(=O)ORa、或SO2Ra;Y1、Y2、Y3和Y4可各自独立为CR4或N;Y5、Y6、Y7和Y8可各自独立为CR4、N、或Rx;各R4可独立为R2、ORa、NR2R3、SRa、SORa、SO2Ra、SO2NHRa、N(R5)CORa、卤素、三卤代甲基、CN、S=O、或硝基;R5可为Ra、CORa、SO2Ra、或不存在;W与X可各自独立为N、NRa、O、S、CR2R4或CR4;各Rx可独立为O、S、CR2R3、或NR5;Ry可为S、N-CN、或CHR4;和Z1与Z2可各自独立为C、CR2、或N。
其它实施例包括一种由下式表示的化合物,
其中R10、R13、R14、R16、R17、R18、R19、R20、R21和R22独立地为Rb、ORb、SRb、CORb、CO2Rb、OCORb、NRbRc、CONRbRc、NRbCORc、SO2NRbRc、CF3、CN、NO2、F、Cl、Br、I、或C2-5杂环基;各Rb独立地为H或C1-3烃基,和各Rc独立地为H或C1-3烷基。本发明的一些实施例包括由下式表示的化合物:
本发明的某些实施例包括由下式表示的化合物:
其中R10、R11、R12、R13、R14、R16、R17和R18独立地为Rb、ORb、CORb、CO2Rb、OCORb、NRbRc、CF3、CN、NO2、F、Cl、Br、或I,其中Rb与Rc独立地为H或C1-3烷基;和R5为H或C1-3烷基。
本发明的其它实施例包括一种由下式表示的化合物:
本发明的一些实施例包括一种包含如本文所述任何化合物的医药组合物。
本发明的一些实施例包括治疗或预防脊椎动物中病毒感染的方法,所述方法包括投与所述脊椎动物如本文所述的医药组合物。在一些实施例中,病毒感染是因选自以下科中的一或多者的病毒引起:沙粒病毒科(Arenaviridae)、星状病毒科(Astroviridae)、双核糖核酸病毒科(Birnaviridae)、雀麦花叶病毒科(Bromoviridae)、本扬病毒科(Bunyaviridae)、杯状病毒科(Caliciviridae)、修道院病毒科(Closteroviridae)、豇豆镶嵌病毒科(Comoviridae)、囊状噬菌体科(Cystoviridae)、黄热病毒科(Flaviviridae)、弯曲病毒科(Flexiviridae)、肝炎病毒科(Hepevirus)、光滑病毒科(Leviviridae)、黄症病毒科(Luteoviridae)、单股反链病毒目(Mononegavirales)、镶嵌病毒(Mosaic Viruses)、网巢病毒目(Nidovirales)、野田病毒科(Nodaviridae)、正粘液病毒科(Orthomyxoviridae)、小双节核糖核酸病毒科(Picobirnavirus)、小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)、马铃薯Y病毒科(Potyviridae)、呼肠孤病毒科(Reoviridae)、逆转录病毒科(Retroviridae)、随伴病毒科(Sequiviridae)、纤细病毒科(Tenuivirus)、披衣病毒科(Togaviridae)、西红柿丛矮病毒科(Tombusviridae)、全病毒科(Totiviridae)、芜菁发黄镶嵌病毒科(Tymoviridae)、肝病毒科(Hepadnaviridae)、疱疹病毒科(Herpesviridae)、副粘液病毒科(Paramyxoviridae)或乳头瘤病毒科(Papillomaviridae)。在一些实施例中,病毒感染为流行性感冒病毒、C型肝炎病毒、西尼罗河病毒、SARS-冠状病毒、脊髓灰质炎病毒、麻疹病毒、登革热病毒、黄热病病毒、蜱传脑炎病毒、日本脑炎病毒、圣刘易斯脑炎病毒、马勒谷病毒(Murray Valleyvirus)、布氏病毒(Powassan virus)、罗西奥病毒(Rocio virus)、跳跃病病毒(louping-ill virus)、班奇病毒(Banzi virus)、伊利乌斯病毒(Ilheus virus)、科科贝拉病毒(Kokobera virus)、昆津病毒(Kunjin virus)、阿尔弗病毒(Alfuy virus)、牛腹泻病毒、西泽诺尔森林病病毒(Kyasanur forest disease virus)、呼吸道融合病毒或HIV。
本发明方法的一些实施例包括投与本文所述的任何医药组合物作为用于预防性或治疗性疫苗的佐剂。在一些实施例中,所述方法包括通过投与具有抗以下病毒的疫苗的组合物使脊椎动物免疫:流行性感冒病毒、C型肝炎病毒、西尼罗河病毒、SARS-冠状病毒、脊髓灰质炎病毒、麻疹病毒、登革热病毒、黄热病病毒、蜱传脑炎病毒、日本脑炎病毒、圣刘易斯脑炎病毒、马勒谷病毒、布氏病毒、罗西奥病毒、跳跃病病毒、班奇病毒、伊利乌斯病毒、科科贝拉病毒、昆津病毒、阿尔弗病毒、牛腹泻病毒、西泽诺尔森林病病毒或HIV。
本发明的一些实施例包括调节真核细胞中先天免疫反应的方法,所述方法包括投与所述细胞如本文所述的任何化合物。在一些实施例中,所述细胞为活体内。在其它实施例中,所述细胞为活体外。
附图说明
当结合以下图式阅读时可更佳地明白本发明的各种实施例,其中:
图1显示化合物KIN1000的验证和特征分析(“RLU”=相对荧光素酶单位)。在图1A中,初始“命中(hit)”化合物是通过证实IFNβ-荧光素酶(IFNβ-LUC,左侧)、ISG56-荧光素酶(ISG56-LUC,中间)和ISG54-荧光素酶(ISG54-LUC,右侧)报导子基因的剂量依赖性诱导得以验证。图1B证实KIN1000的特异性,其不诱导非特异性β-肌动蛋白启动子(“0.5%DMSO”=溶媒对照组;“10μM KIN1000”=KIN1000存在下的β-肌动蛋白-荧光素酶报导子;“10μM化合物X”=阳性对照组β-肌动蛋白诱导)。在图1C中,MTS试验证实KIN1000对利用所述化合物处理48小时的人类细胞不显示明显的细胞毒性。表示50%细胞死亡率的OD值由水平线显示,还证实KIN1000的CC50大于20μM。
图2显示通过KIN1000活化转录因子。在图2A中,经增加量的KIN1000处理的海拉细胞(HeLa cell)显示易位达细胞核的IRF-3易位的剂量依赖性增加,以细胞核强度减去细胞质强度(“正规化细胞核强度”)量化。在图2B中,经增加量的KIN1000处理的海拉细胞显示NFκB易位的剂量依赖性增加,以细胞核强度减去细胞质强度量化。“SeV”是指仙台病毒(Sendai virus)感染,为阳性对照组。
图3显示KIN1000的抗病毒活性。经增加量的KIN1000处理的MRC5细胞显示流行性感冒病毒感染的剂量依赖性减少。
图4显示由KIN1000诱导的细胞激素表达的(路明克斯公司(LuminexCorp.))量化水平。经增加量的KIN1000处理的人类树突细胞(dendritic cell)显示细胞激素的剂量依赖性表达,所述细胞激素包括IL-8(图4A)、MCP-1/CCL2(图4B)、MIP-1α/CCL3(图4C)和MIP-1β/CCL4(图4D)。
图5显示通过KIN1000和其衍生化合物KIN1148诱导的基因表达。图5A显示在海拉细胞中于利用10μM KIN1000(灰色)或KIN1148(黑色)处理4到24小时后的时间内的IFIT2(左侧)和OAS1(右侧)的基因表达水平。图5B显示在经KIN1000(实心灰条)或KIN1148(实心黑条)处理的PH5CH8细胞(左侧)中和在经KIN1000(灰条带花纹条)或KIN1148(黑格子花纹条)处理的海拉细胞(右侧)中的IFIT2的基因表达水平。在各测试组中,三个垂直条分别表示5、10和20μM化合物(KIN1000或KIN1148)。图5C显示在经1μM KIN1000(灰色)或1μM KIN1148(黑色)处理的初级HUVEC细胞中的IFIT2(左侧)、OAS1(中间)和MxA(右侧)的基因表达水平。
图6显示KIN1000和KIN1148抗呼吸道融合病毒的抗病毒活性。图6A显示经增加量的KIN1000和KIN1148处理的海拉细胞显示RSV感染的剂量依赖性减少。图6B显示KIN1148在感染之前长达24小时添加药物时显示抗RSV的抗病毒活性。
图7显示KIN1148抗A型流行性感冒病毒乌隆(Udorn)/72的抗病毒活性。经2μM(H292)或10μM(HEK293)KIN1148处理的H292细胞(左侧)和HEK293细胞(右侧)显示病毒感染有所减少。
图8显示KIN1148抗2型登革热病毒的抗病毒活性。经增加量的KIN1148处理的Huh 7细胞显示病毒感染的剂量依赖性减少。
图9显示KIN1311和KIN1054抗2型登革热病毒的抗病毒活性。经增加量的KIN1311(左侧,格子条纹条)或KIN1054(右侧,条带条纹条)处理的Huh 7细胞显示病毒感染的剂量依赖性减少。
图10显示当在感染24小时后投与化合物时KIN1148和KIN1160抗2型登革热病毒的抗病毒活性。利用2型登革热病毒感染培养的THP-1细胞并且在感染24小时后利用增加量的化合物处理。图10A证实KIN1148和KIN1160显示病毒感染有所减少。图10B证实KIN1148和KIN1160显示THP-1细胞中的抗病毒基因IFIT2和OASL的诱导。
图11显示KIN1148抗B型肝炎病毒的抗病毒活性。经增加量的KIN1148处理的HepAD38细胞显示病毒上清液浓度的剂量依赖性减小。表示上清液中无HBV的OD值由标记为“无HBV的细胞”的水平线所显示。
图12显示KIN1160抗人类冠状病毒OC43的抗病毒活性。利用人类冠状病毒OC43感染培养的MRC5细胞并且利用增加量的KIN1160处理。经处理的细胞显示病毒感染的剂量依赖性减少。
图13显示SARS冠状病毒感染的活体内模型中KIN1160的抗病毒活性。经MHV-1病毒感染并且利用KIN1160处理的小鼠(实线)与仅经媒剂处理的小鼠(正方形的虚线)相比显示更低的体重损失水平。经处理的动物的体重与未受感染的动物(圆形的虚线)的体重可相比拟。
图14显示通过KIN1000和KIN1148活体内诱导的IgG抗体产生。动物(刘易斯雌大鼠(Lewis female rat),10到12周龄)通过在脚垫和尾基中经皮下投与(每个位点0.025mL注射体积)含OVA的PBS、OVA+polyI:C、OVA+KIN1000或OVA+KIN1148的悬浮液进行疫苗接种。在初给疫苗(priming)2和8周后使所述动物同等地增强。在指定的时间点将动物放血,制备血清并且通过ELISA检测抗体水平。将含有KIN1000(大格子花纹条)和KIN1148(水平条带花纹条)的疫苗制剂的OD450值正规化为从仅接受在PBS中的OVA作为疫苗的动物得到的值。使用Poly I:C(小格子花纹条)作为对照佐剂。
图15显示依据如图14的相同免疫方案通过KIN化合物疫苗接种引起的细胞反应。测量在第一次增强(在初给疫苗4周后)2周后引起的迟发型过敏反应。通过在指定时间点注射0.02mL PBS(左耳耳廓)或0.02mL的含于PBS中的OVA(1mg/mL)(右耳耳廓)对所述动物进行攻击。在24小时后,用卡规测量耳朵厚度。显示右耳与左耳间的差计算值。“OVA+K1148”(垂直条带花纹条)=注射含有KIN1148的疫苗的动物中耳朵厚度差。使用Poly I:C(“OVA+pI:C”;水平条带花纹条)作为对照佐剂。
图16显示KIN1148佐剂在单次初给疫苗疫苗接种后提供抗致死性流行性感冒攻击的免疫保护。利用皮下单剂量的1μg非活性PR8病毒(灰色正方形)或PR8加上100μgKIN1148(黑色正方形)疫苗接种小鼠且稍后利用活小鼠适应的PR8病毒以10X LD50进行攻击3周。图16A显示攻击后存活率百分比。图16B显示感染期间的体重损失。图16C和16D显示对同源和异种病毒的中和抗体。仅以PR8(PR8;三角形)或PR8+KIN1148(PR8+1148;圆形)疫苗接种3周后所收集的血清是经热减活化并且测试其中和MDCK细胞活体外受PR8病毒(图16C)或A/布里斯班(Brisbane)/59/2007(图16D)感染的能力。N=5只小鼠/组。
图17显示在初给疫苗/增强疫苗接种策略中KIN1148佐剂导致显著IgG反应和保护性血清抗体。在第0和第3周时利用含于PBS中的1μg非活性PR8病毒(灰色正方形)或PR8加上KIN1148(黑色正方形)(100μg/小鼠初给疫苗,25μg/小鼠增强)经皮下投与进行小鼠的疫苗接种并且在增强2周后利用活小鼠适应的PR8病毒以75X LD50进行攻击。图17A显示感染期间的体重损失。图17B显示在增强2周后由ELISA测得的总抗原结合IgG抗体。图17C和17D说明在初给疫苗2周后(图17C)或在增强2周后(图17D)所收集到的血清样本是经热不活化且通过分析其阻断MDCK细胞受同源PR8株活体外感染的能力来测定其中和抗体效价。N=5只小鼠/组。
图18显示KIN1148佐剂在单次初给疫苗疫苗接种后增强抗致死性流行性感冒攻击的保护。利用皮下单剂量的0.2μg、0.6μg、1.8μg、或5.4μg非活性裂解CA09病毒或CA09加上100μg KIN1148疫苗接种小鼠且随后利用活小鼠适应的CA07病毒以5XLD50进行攻击3周。图18A显示经1.8μg CA09(灰色正方形)或CA09与KIN1148(黑色正方形)疫苗接种的组在感染期间的体重损失。图18B显示经1.8μg CA09(灰色正方形)或CA09与KIN1148(黑色正方形)疫苗接种的组在攻击后的存活率。N=6只小鼠/组。
图19显示KIN1148佐剂在单次初给疫苗疫苗接种后增强抗致死性流行性感冒攻击的保护。小鼠利用肌肉内单剂量的0.26μg、0.78μg、或2.35μg非活性裂解CA09病毒或CA09加上50μg KIN1148进行疫苗接种且随后利用活小鼠适应的CA07病毒以5XLD50进行攻击3周。图19A显示经2.35μg CA09(灰色正方形)或CA09与KIN1148(黑色正方形)疫苗接种的组在感染期间的体积损失。图19B显示经2.35μg CA09(灰色正方形)或CA09与KIN1148(黑色正方形)疫苗接种的组在攻击后的存活率。图19C显示来自未经处理(白色)、未佐剂化(实心灰色)和KIN1148佐剂化(黑色/白色交叉图)组的样本中的血清IgG水平。N=6只小鼠/组。
图20显示KIN1148佐剂(黑色正方形)增强注射位点处趋化激素MIP-1α(图20A)、MIP-1β(图20B)、MIP-2(图20C)、MCP-1(图20D)和MDC(图20E)的分泌。在注射后长达48小时时检测水平。
具体实施方式
本发明提供将病毒处理的焦点从靶向病毒蛋白质转移到开发靶向且增强宿主(患者)的先天抗病毒反应的药物的化合物和方法。这类化合物和方法极有可能更有效,较不易出现病毒抗性,会导致较少副作用和抗一系列不同病毒有效。
RIG-I路径密切参与调节对RNA病毒感染的先天免疫反应。RIG-I为可触发对宽广范围RNA病毒的免疫性所必需的细胞溶质病原体识别受体。RIG-I为结合到在特征是尿苷或聚合U/A基元的均聚延伸的RNA病毒基因组中的基元的双股RNA解螺旋酶。与RNA的结合引起解除通过自体阻遏域的RIG-I信号阻遏的构形改变,借此允许RIG-I经由其串联卡斯蛋白酶(caspase)活化并且募集域(CARD)在下游发信号。RIG-I信号是取决于其NTP酶活性,但不需要解螺旋酶结构域。RIG-I信号在休眠细胞(resting cell)中是沉默的,且阻遏域充作控制对病毒感染响应的信号的通断开关。
RIG-I信号是经由干扰素β启动子刺激因子1(IPS-1,也称为卡迪福(Cardif)、MAV和VISA)转导,所述IPS-1为常驻于粒线体外膜中的必需转接子蛋白质。IPS-1募集会刺激干扰素调节因子-3(IRF-3)的下游活化的大分子信号复合物,所述IRF-3为一种引起控制感染的I型干扰素(IFN)和病毒响应性基因的表达的转录因子。直接或经由调节包括IRF-3的RIG-I路径组分来触发RIG-I信号的化合物呈现作为抗病毒剂或免疫调节剂的有吸引力的治疗应用。
利用高通量筛选方法来识别可调节RIG-I路径的化合物,其为对RNA病毒感染的细胞先天免疫反应的关键调节物。在特定实施例中,证实经验证的RIG-I激动剂前驱化合物特异性地活化IRF-3。在其它实施例中,其展现以下一或多者:其引起干扰素刺激基因(ISG)的表达,在基于细胞基础上的试验中具有低细胞毒性,适用于类似物开发和结构活性关系(SAR)研究,具有类药物生理化学性质,和具有抗各种病毒的抗病毒活性。
如下所述,这类化合物代表一种新颖类别的强力抗病毒治疗剂。虽然本发明不受所述化合物活体内的特定作用机制约束,但所述化合物是基于其对RIG-I路径的调节基础上进行选择。在某些实施例中,所述调节为RIG-I路径的活化。文中所公开的化合物和方法发挥作用以减少以下一或多者:在受包括流行性感冒、登革热病毒和/或HCV的病毒感染的细胞培养物和/或活体内模型中的病毒蛋白、病毒RNA和感染性病毒。
抗病毒化合物和由其制得的医药配方的实例详细地描述于2011年9月30日申请的美国临时申请案序列号61/542,049和2012年9月27日申请的PCT国际申请案第PCT/US2012/057646号中,各案的公开内容是以其全文引用的方式并入文中。
根据某些实施例,本发明涉及具有由下式表示的结构的化合物:
其中虚线指示存在或不存在π键;R1可为Ra、OR2或NR2R3;R2与R3可各自独立为Ra、CORa、C(=O)ORa、或SO2Ra;Y1、Y2、Y3和Y4可各自独立为CR4或N;各R4可独立为R2、ORa、NR2R3、SRa、SORa、SO2Ra、SO2NHRa、N(R5)CORa、卤素、三卤代甲基、CN、S=O、或硝基;R5可为Ra、CORa、SO2Ra、或不存在;V可为CR2、CR2R3、C=O、COCR2R3、或C=NR2;并且W与X可各自独立为N、NRa、O、S、CR2R4或CR4。各Ra可独立为H;任选地经取代的烃基;任选地经取代的芳基,如任选地经取代的苯基或任选地经取代的芳基;任选地经取代的杂芳基,如任选地经取代的吡啶基、任选地经取代的呋喃基、任选地经取代的噻吩基等等。在一些实施例中,各Ra可独立地为H、或C1-12烷基,包括:具有化学式CaHa+1的直链或分支链烷基、或具有化学式CaHa-1的环烷基,其中a为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、或12,如化学式:CH3、C2H5、C3H7、C4H9、C5H11、C6H13、C7H15、C8H17、C9H19、C10H21等等的直链或分支链烷基、或化学式:C3H5、C4H7、C5H9、C6H11、C7H13、C8H15、C9H17、C10H19等等的环烷基。
根据某些实施例,具有式I的有效化合物可具有在式I的环结构与基团R1之间的酰胺连接体。根据这些实施例,V可包括C=O并且R5可为H。然而,存在于此等类型的结构中的中心酰胺连接体可能易于发生蛋白酶水解,这可能会减低化合物的效能。如(但不限于)酰胺电子等排体或其它小的稳定连接结构的交替连接基团可能呈现较低的水解程度和在某些实施例中较不易被蛋白酶水解。例如,在本发明的某些实施例中,具有根据式I结构的化合物,但不包括酰胺由如亚甲基醚(-CH2O-)和亚甲基胺(-CH2NH-)的酰胺电子等排体连接体替代的情况,可保留分子的IRF-3活性同时更具水解稳定性。此外,由式I表示的抗病毒化合物的实施例具有应适于制备具有不同连接结构的类似物的模块化性质的骨架结构。
根据文中的任何结构式,虚线指示结构中所指示原子之间存在或不存在π键。也就是说,当结构中的两个原子是由实线与虚线连接时,所述原子可由共价单键(即,西格玛键,在虚线表示不存在π键的情况下)、共价双键(即,西格玛与π键,在虚线代表存在π键且所述键不为芳族结构的部分的情况下)、或离域“双键”(即,为离域芳族结构或其它离域系统的部分的西格玛键与π键)连接。任何结构式中任何原子上键的数量将受限于原子最高价数;并且可包括如以离子电荷确定的原子价数。根据文中所表示的各种式子,A与B可各自独立表示在由A或B连接的两个结构特征之间的单键或共价双键。例如,显示为C1-A-C2或C1-B-C2的子结构可指示C1-C2(即,在原子C1与C2之间为共价单键)或C1=C2(即,在原子C1与C2之间为共价双键)中任一者。同样地,当两个(或两个以上)结构元素是指示为不同元素(例如,C1-A和A-C2或C1-B和B-C2)时,A或B指示在这两个结构元素之间存在键,使得可以C1-C2表示总体结构,其中A或B指示在这两个元素之间的共价键。例如,可采用由Ra-A、A-L-B和B-Rb表示的结构元素指示总体结构Ra-L-Rb,其中此三个结构元素由共价键A和B(如由虚线所指示)连接。在某些实施例中,A或B可表示离域双键。在其中A或B位于结构的原子与连接基团之间的实施例(即,连接化合物中两个或两个以上子结构的两个或两个以上原子的分组)中,如C-A-L、或L-B-R1,其中L具有显示为A-连接体-B(其中“连接体”表示连接基团“L”的原子结构)的一般结构,所述A或B基团指示如由C-连接体-B、C=连接体-B、C-连接体=B、或C=连接体=B表示的共价单或双键(或离域双键),其中所述单或双键是附接到附接有A和/或B到它的连接体中的原子。
根据文中所述的抗病毒化合物的各种实施例,基团L可为具有由以下表示的结构的连接体:A-C(=Rx)-NR5-B、A-SO2-NR5-B、A-NR5-SO2-B、A-CH(CF3)-NR5-B、A-NR5-CH(CF3)-B、
A-NR5-C(=Ry)-NR5-B、A-CR2R3-Rx-B、A-O-CR2R3-B、A-S-CR2R3-B、A-C(R2)=C(R3)-B、
其中m与n可各自独立为0到5的整数并且是经选择使得m+n≥1,Y5、Y6、Y7和Y8可各自独立为CR4、N、或Rx;各Rx可独立为O、S、CR2R3、或NR5;Ry可为S、N-CN、或CHR4;并且Z1与Z2可各自独立为C、CR2、或N。
根据一个实施例,基团L可具有酰胺、硫代酰胺、烯胺、或脒的结构,其中sp2碳与式I的环碳(经A)形成键和氮原子与R1基团(经B)形成键。根据这些实施例,L可为具有结构A-C(=Rx)-NR5-B的连接体,其中Rx可为O(酰胺)、S(硫代酰胺)、CR2R3(烯胺)、或NR5(脒);并且R2、R3和R5为如文中所定义。
根据其它实施例,基团L可具有磺酰胺的结构,其中硫原子与式I的环碳(经A)形成键和氮原子与R1基团(经B)形成键,或者氮原子与式I的环碳(经A)形成键和硫原子与R1基团(经B)形成键。根据这些实施例,L可为具有结构A-SO2-NR5-B或A-NR5-SO2-B的磺酰胺连接体,其中R5为如文中所定义。
根据其它实施例,基团L可具有2,2,2-三氟乙胺的结构,其中2,2,2-三氟乙基的C1碳原子与式I的环碳(经A)形成键和氮原子与R1基团(经B)形成键,或者氮原子与式I的环碳(经A)形成键和2,2,2-三氟乙基的C1碳原子与R1基团(经B)形成键。根据这些实施例,L可为具有结构A-CH(CF3)-NR5-B或A-NR5-CH(CF3)-B的2,2,2-三氟乙胺连接体,其中R5为如文中所定义。
根据其它实施例,基团L可具有3,3-氧杂环丁胺的结构,其中氧杂环丁烷的C2碳原子与式I的环碳(经A)形成键和氮原子与R1基团(经B)形成键,或者氮原子与式I的环碳(经A)形成键和氧杂环丁烷的C2碳原子与R1基团(经B)形成键。根据这些实施例,L可为具有以下结构的3,3-氧杂环丁胺连接体:
其中R5为如文中所定义。
根据其它实施例,基团L可具有1,1-环丙胺的结构,其中环丙烷的C1碳原子与式I的环碳(经A)形成键和氮原子与R1基团(经B)形成键,或者氮原子与式I的环碳(经A)形成键和环丙烷的C1碳原子与R1基团(经B)形成键。根据这些实施例,L可为具有以下结构的1,1-环丙胺连接体:
其中R5是如文中所定义。
根据其它实施例,基团L可具有1-氟-2-氨基乙烯的结构,其中乙烯的C1碳原子与式I的环碳(经A)形成键和乙烯的C2碳原子与R1基团(经B)形成键,或者乙烯的C1碳原子与式I的环碳(经A)形成键和乙烯的C1碳原子与R1基团(经B)形成键。根据这些实施例,L可为具有以下结构的1-氟-2-氨基乙烯连接体:
根据其它实施例,基团L可具有饱和、不饱和、或芳族5元1,3-碳环或1,3-杂环的结构,其中5元碳环或杂环的C1碳原子或N1氮原子与式I的环碳(经A)形成键和5元碳环或杂环的C3碳原子或N3氮原子与R1基团(经B)形成键,或者5元碳环或杂环的C3碳原子或N3氮原子与式I的环碳(经A)形成键和5元碳环或杂环的C1碳原子或N1原子与R1基团(经B)形成键。在另一个实施例中,基团L可为饱和、不饱和或芳族5元1,2-碳环或1,2-杂环,其中5元碳环状环或杂环状环的C1碳原子或N1氮原子与式I的环碳(经A)形成键和5元碳环状环或杂环状环的C2碳原子或N2氮原子与R1基团(经B)形成键,或者,5元碳环状环或杂环状环的C2碳原子或N2氮原子与式I的环碳(经A)形成键和5元碳环状环或杂环状环的C1碳原子或N1氮原子与R1基团(经B)形成键。所述5元环可包含碳、氮、氧和/或硫原子作为环原子。所述5元环可为饱和(即,所有键均为单键),具有一个双键,具有两个双键,或为芳族(即,包含6个π电子的离域π系统)。根据这些实施例,L可为具有以下结构的5元碳环状环或杂环状环连接体:
其中Z1、Z2、Y5、Y6和Y7是如文中所定义。在具体实施例中,连接体可为包括环戊烷环或环戊烯环的碳环状环。在其它实施例中,连接体可为具有一或多个如N、O和/或S的杂原子的五元环。在其中连接体为芳族5元环的实施例中,至少一个环原子为杂原子。芳族环结构的非限制性实例可包括呋喃、硫代呋喃、吡咯、咪唑、吡唑、噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、氮杂噁唑、三唑、四唑等等,其中所述杂原子可位于5元环的各种位置之处。五元环的其它非限制性实例可包括二氢-和四氢呋喃、二氢-和四氢硫代呋喃、吡咯啉、吡咯烷、咪唑啶、咪唑啉、吡唑啶、吡唑啉等等,其中所述杂原子可位于5元环的各种位置之处。在其中Z1和Z2各自表示sp3杂合碳原子的某些实施例中,键A和B可在环的同一个面上(即,顺式)或在环的相反面上(即,反式)。
在其它实施例中,连接体L可具有饱和、不饱和或芳族5元1,3-碳环或1,3-杂环的结构,如文中所述,具有键结到环的1或3位置的胺取代基,其中5元碳环状环或杂环状环的C1碳原子或N1氮原子与式I的环碳(经A)形成键和胺取代基的氮原子与R1基团(经B)形成键,或者胺取代基的氮原子与式I的环碳(经A)形成键和5元碳环状环或杂环状环的C1碳原子或N1氮原子与R1基团(经B)形成键。根据这些实施例,L可为具有以下结构的经胺取代的5元碳环状或杂环状环连接体:
其中R5、Z1、Z2、Y5、Y6和Y7是如文中所定义。在其中Z1与Z2各自表示sp3杂合碳原子的某些实施例中,取代基是键结到A和B或NR5基团可在环的同一个面上(即,顺式)或在环的相反面上(即,反式)。
在其它实施例中,连接体L可具有饱和、不饱和或芳族5元1,2-碳环或1,2-杂环的结构,如文中所述,具有键结到环的1或2位置的胺取代基,其中5元碳环状环或杂环状环的C1碳原子或N1氮原子与式I的环碳(经A)形成键和胺取代基的氮原子与R1基团(经B)形成键,或者胺取代基的氮原子与式I的环碳(经A)形成键和5元碳环状环或杂环状环的C1碳原子或N1氮原子与R1基团(经B)形成键。根据这些实施例,L可为具有以下结构的经胺取代的5元碳环状或杂环状环连接体:
其中R5、Z1、Z2、Y5、Y6和Y7为如文中所定义。在其中Z1与Z2各自表示sp3杂合碳原子的某些实施例中,取代基键结到A和B或NR5基团可在环的同一个面上(即,顺式)或在环的相反面上(即,反式)。
根据其它实施例,基团L可具有饱和、不饱和或芳族6元1,3-碳环或1,3-杂环的结构,其中6元碳环状环或杂环状环的C1碳原子或N1氮原子与式I的环碳(经A)形成键和6元碳环状环或杂环状环的C3碳原子或N3氮原子与R1基团(经B)形成键,或者6元碳环状环或杂环状环的C3碳原子或N3氮原子与式I的环碳(经A)形成键和6元碳环状环或杂环状环的C1碳原子或N1氮原子与R1基团(经B)形成键。在另一个实施例中,基团L可为饱和、不饱和或芳族6元1,2-碳环或1,2-杂环,其中6元碳环状环或杂环状环的C1碳原子或N1氮原子与式I的环碳(经A)形成键和6元碳环状环或杂环状环的C2碳原子或N2氮原子与R1基团(经B)形成键,或者6元碳环状环或杂环状环的C2碳原子或N2氮原子与式I的环碳(经A)形成键和6元碳环状环或杂环状环的C1碳原子或N1氮原子与R1基团(经B)形成键。在另一个实施例中,基团L可为饱和、不饱和或芳族6元1,4-碳环或1,4-杂环,其中6元碳环状环或杂环状环的C1碳原子或N1氮原子与式I(经A)的环碳形成键和6元碳环状或杂环状环的C4碳原子或N4氮原子与R1基团(经B)形成键,或者6元碳环状环或杂环状环的C4碳原子或N4氮原子与式I的环碳(经A)形成键和6元碳环状环或杂环状环的C1碳原子或N1氮原子与R1基团(经B)形成键。6元环可包含碳、氮、氧和/或硫原子作为环原子。6元环可为饱和(即,所有键均为单键),具有一个双键,具有两个双键,或为芳族(即,包含6个π电子的离域π系统)。根据这些实施例,L可为具有以下结构的6元碳环状或杂环状环连接体:
其中Z1、Z2、Y5、Y6、Y7和Y8为如文中所定义。六元环中的原子可经取代或未经取代。在具体实施例中,连接体可为包括环己烷环、环己烯环或环己二烯环的碳环状环。在其它实施例中,连接体可为具有一或多个如N、O和/或S的杂原子的六元环。在其中连接体为芳族6元环的实施例中,环可为苯环(即,所有环原子为碳)或至少一个环原子可为杂原子。芳族环结构的非限制性实例可包括苯基、吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪、三嗪、四嗪等等,其中所述杂原子可位于6元环的各种位置之处。六元环的其它非限制性实例可包括哌喃、二氢-和四氢哌喃、硫代哌喃、二氢-和四氢硫代哌喃、哌啶、哌嗪、六氢-、四氢-和二氢嘧啶、吗啉、硫代吗啉、二噁烷、氧代噻烷、噻烷、二噻烷等等,其中所述杂原子可位于6元环的各种位置。在其中Z1与Z2各自表示sp3杂合碳原子的某些实施例中,键A与B可在环的同一个面上(即,顺式)或在环的相反面上(即,反式)。
在其它实施例中,连接体L可具有饱和、不饱和或芳族6元1,3-碳环或1,3-杂环的结构,如文中所述,具有键结到环的1或3位置的胺取代基,其中6元碳环状环或杂环状环的C1碳原子或N1氮原子与式I的环碳(经A)形成键和胺取代基的氮原子与R1基团(经B)形成键,或者胺取代基的氮原子与式I的环碳(经A)形成键和6元碳环状环或杂环状环的C1碳原子或N1氮原子与R1基团(经B)形成键。根据这些实施例,L可为具有以下结构的经胺取代的6元碳环状或杂环状环连接体:
其中R5、Z1、Z2、Y5、Y6、Y7和Y8是如文中所定义。在其中Z1与Z2各自表示sp3杂合碳原子的某些实施例中,取代基键结到A和B或NR5基团可在环的同一个面上(即,顺式)或在环的相反面上(即,反式)。
在其它实施例中,连接体L可具有饱和、不饱和或芳族6元1,2-碳环或1,2-杂环的结构,如文中所述,具有键结到环的1或2位置的胺取代基,其中6元碳环状或杂环状环的C1碳原子或N1氮原子与式I的环碳(经A)形成键和胺取代基的氮原子与R1基团(经B)形成键,或者胺取代基的氮原子与式I的环碳(经A)形成键和6元碳环状或杂环状环的C1碳原子或N1氮原子与R1基团(经B)形成键。根据这些实施例,L可为具有以下结构的经胺取代的6元碳环状或杂环状环连接体:
其中R5、Z1、Z2、Y5、Y6、Y7和Y8是如文中所定义。在其中Z1与Z2各自表示sp3杂合碳原子的某些实施例中,取代基键结到A和B或NR5基团可在环的同一个面上(即,顺式)或在环的相反面上(即,反式)。
在其它实施例中,连接体L可具有饱和、不饱和或芳族6元1,4-碳环或1,4-杂环的结构,如文中所述,具有键结到环的1或4位置的胺取代基,其中6元碳环状或杂环状环的C1碳原子或N1氮原子与式I的环碳(经A)形成键和在4-位置处的胺取代基的氮原子与R1基团(经B)形成键,或者在4-位置处的胺取代基的氮原子与式I的环碳(经A)形成键和6元碳环状或杂环状环的C1碳原子或N1氮原子与R1基团(经B)形成键。根据这些实施例,L可为具有以下结构的经胺取代的6元碳环状或杂环状环连接体:
其中R5、Z1、Z2、Y5、Y6、Y7和Y8是如文中所定义。在其中Z1与Z2各自表示sp3杂合碳原子的某些实施例中,取代基键结到A和B或NR5基团可在环的同一个面上(即,顺式)或在环的相反面上(即,反式)。
在其它实施例中,连接体L可具有5元经3,4-二氨基取代的1,1-二侧氧基硫代-2,5-咪唑环的结构,具有键结到环的3或4位置的胺取代基,其中在环3位置处的胺取代基的氮原子与式I的环碳(经A)形成键和在环4位置处的胺取代基的氮原子与R1基团(经B)形成键。根据这些实施例,根据这些实施例,L可为具有以下结构的经3,4-二氨基取代的1,1-二侧氧基硫代-2,5-咪唑环连接体:
其中R5是如文中所定义。
在其它实施例中,连接体L可具有硫脲、N-氰基胍、或1,1-二氨基烯烃的结构,其中一个氨基的氮原子与式I的环碳(经A)形成键和其它氨基的氮原子与R1基团(经B)形成键。根据这些实施例,L可为具有结构:A-NR5-C(=Ry)-NR5-B的硫脲、N-氰基胍、或1,1-二氨基烯烃连接体,其中Ry可为S、N-CN、或CHR4,并且R4和R5是如文中所定义。
在其它实施例中,连接体L可具有在式I的环碳与R1之间具有两原子的连接链的结构,其中所述原子中的一者为经取代或未经取代的碳原子并且另一原子可为经取代或未经取代的碳或氮原子或硫或氧原子(即,两碳烷基连接体、胺连接体、醚连接体或硫醚连接体),其中所述碳原子与式I的环碳(经A)形成键和所述连接体的另一碳原子、氮原子、氧原子或硫原子与R1基团(经B)形成键,或者所述连接体的另一碳原子、氮原子、氧原子或硫原子与式I的环碳(经A)形成键和所述碳原子与R1基团(经B)形成键。根据这些实施例,L可为具有结构:A-CR2R3-Rx-B、A-O-CR2R3-B、或A-S-CR2R3-B的两碳烷基连接体、胺连接体、醚连接体或硫醚连接体,其中Rx、R2和R3为如文中所定义。
在其它实施例中,连接体L可具有经二取代-、经单取代-或未经取代的乙烯单元(即,经双键连接的两碳单元)的结构,其中所述乙烯基的一个碳原子与式I的环碳(经A)形成键和乙烯基的另一碳原子与R1基团(经B)形成键。根据这些实施例,L可为具有结构:A-C(R2)=C(R3)-B的两碳乙烯连接体,其中R2与R3为如文中所定义和键A和B可在双键的同一侧(即,顺式)或在双键的相反侧(即,反式)。
在其它实施例中,连接体L可包括1,2-环丙烷、1,2-环氧、1,2-硫代环氧、或1,2-氮丙啶,其中所述环的一个碳原子与式I(经A)的环碳形成键和所述环的另一碳原子与R1基团(经B)形成键。根据这些实施例,L可为具有以下结构的1,2-环丙烷、1,2-环氧、1,2-硫代环氧、或1,2-氮丙啶连接体:
其中Rx可如文中所定义并且键A和B可在环的同一个面上(即,顺式)或在环的相反面上(即,反式)。
又在其它实施例中,连接体L可包括1,2-环丁烷、1,2-氧杂环丁烷、1,2-硫代氧杂环丁烷、或1,2-氮杂环丁烷,其中所述环的一个碳原子与式I的环碳(经A)形成键和所述环的另一个碳原子与R1基团(经B)形成键。根据这些实施例,L可为具有以下结构的1,2-环丁烷、1,2-氧杂环丁烷、1,2-硫代氧杂环丁烷、或1,2-氮杂环丁烷连接体:
其中各Rx可独立地为O、S、CR2CR3、或NR5,和键A和B可在环的同一个面上(即,顺式)或在环的相反面上(即,反式)。
又在其它实施例中,连接体L可包括经氨基取代的1,2-环丁烷、经氨基取代的1,2-氧杂环丁烷、经氨基取代的1,2-硫代氧杂环丁烷、或经氨基取代的1,2-氮杂环丁烷,其中环的C1碳原子上的氨基取代基与式I的环碳(经A)形成键和环的C2碳原子与R1基团(经B)形成键,或者环的C1碳原子与式I的环碳(经A)形成键和环的C2碳原子上的氨基取代基与R1基团(经B)形成键。根据这些实施例,L可为具有以下结构的经氨基取代的1,2-环丁烷、经氨基取代的1,2-氧杂环丁烷、经氨基取代的1,2-硫代氧杂环丁烷、或经氨基取代的1,2-氮杂环丁烷连接体:
其中各Rx可独立地为O、S、CR2CR3、或NR5,各R5独立地如文中所定义,和键A和B可在环的同一个面上(即,顺式)或在环的相反面上(即,反式)。
又在其它实施例中,连接体L可包括1,1-环烷基或1,1-杂环,其中所述环的碳原子与式I的环碳(经A)形成键且所述环的所述同一碳原子与R1基团(经B)形成键。根据某些实施例,1,1-环烷基可为饱和或含有一或多个双键的3-、4-、5-、6-、或7-元环烷基环。在其它实施例中,1,1-杂环烷基可为饱和或包含一或多个双键的3-、4-、5-、6-、或7-元杂环烷基环。根据这些实施例,L可为具有以下结构的1,1-环烷基或1,1-杂环烷基连接体:
其中m与n可各自独立为0到5的整数,使得m+n≥1,各Rx可独立为O、S、CR2CR3、或NR5。在其中环碳与键A和B可为立体异构体的那些实施例中,两种立体异构体均可被视为本发明的一部分。
又在其它实施例中,连接体L可包括经氨基取代的1,1-环烷基或经氨基取代的1,1-杂环,其中环的C1碳原子上的氨基取代基与式I的环碳(经A)形成键且环的C1碳原子与R1基团(经B)形成键,或者环的C1碳原子与式I的环碳(经A)形成键且环的C1碳原子上的氨基取代基与R1基团(经B)形成键。根据这些实施例,L可为具有以下结构的经氨基取代的1,1-螺环或经氨基取代的1,1-螺杂环连接体:
其中m与n可各自独立为0到5的整数,使得m+n≥1,各Rx可独立为O、S、CR2CR3、或NR5。在其中环碳与键A和B可为立体异构体的那些实施例中,两种立体异构体均可被视为本发明的一部分。
基团L的可能结构的列表是非详述的且所属领域的一般技术人员阅读本发明将会明白包括其它可能酰胺电子等排体连接体的其它可能的连接体也将在文中所述结构的范围内。
关于式I,Y1可为CR4或N。在一些实施例中,Y1为CR4。
关于式I,Y2可为CR4或N。在一些实施例中,Y2为CR4。
在由式I表示的化合物的一些实施例中,Y1和Y2均为CR4,且一起形成任选地经R4或R18取代的额外杂环。在一些实施例中,Y1与Y2可一起形成杂环状环,如芳族或杂芳族环,包括(但不限于)具有以下结构的噻唑环:
关于式I,Y3可为CR4或N。在一些实施例中,Y3为CR4。
关于式I,Y4可为CR4或N。在一些实施例中,Y4为CR4。
在一些实施例中,Y1、Y2、Y3和Y4为CR4。在一些实施例中,Y1、Y2、Y3和Y4为CH。在一些实施例中,Y1与Y2为并且Y3与Y4为CH。
在本发明化合物的某些实施例中,W可为S。在本发明的某些实施例中,X可为N。在具体实施例中,W可为S和X可为N,使得包含W和X的环可为噻唑环。在文中所述化合物的各种实施例中,各R5可独立地为H或C1-3烷基。
在文中所述化合物的各种实施例中,Y3为CR4,其中R4为Rb、ORb、CORb、CO2Rb、OCORb、NRbRc、CF3、CN、NO2、F、Cl、Br、或I,其中Rb与Rc独立地为H或C1-3烷基。在文中所述化合物的各种实施例中,Y4为CR4,其中R4为Rb、ORb、CORb、CO2Rb、OCORb、NRbRc、CF3、CN、NO2、F、Cl、Br、或I,其中Rb和Rc独立地为H或C1-3烷基。
在具体实施例中,R1可为任选地经取代的萘环。在本发明的某些实施例中,抗病毒化合物可为具有由下式表示的结构的化合物:
其中A和B可独立地表示共价单键或共价双键,L可为包含如文中所述结构的连接基团,R10、R13、R14、R16、R17、R18、R19、R20、R21和R22独立地为Rb、ORb、SRb、CORb、CO2Rb、OCORb、NRbRc、CONRbRc、NRbCORc、SO2NRbRc、CF3、CN、NO2、F、Cl、Br、I、C2-5环基或C2-5杂环基和C1-6芳基或C1-6杂芳基,包括两个相邻R基团一起形成稠合环基、杂环基、芳基或杂芳基环结构的情况;各Rb独立地为H或C1-3烃基,并且每个Rc独立地为H或C1-3烷基。在具体实施例中,R18可为H或C1-3烷基和在特定实施例中,R18可为H。
在某些实施例中,R1可为萘基,其中R19、R20、R21和R22各自为H,Y1和Y2可形成如文中所示的噻唑环,其中R18可为H,和Y3和Y4可各自为CH。根据这些实施例,抗病毒化合物可由以下结构表示:
其中A和B可独立地表示共价单键或共价双键,L可为包含如文中所述结构的连接基团。
在具体实施例中,R1可为任选地经取代的苯环。在本发明的某些实施例,抗病毒化合物可为具有由下式表示的结构的化合物:
其中A和B独立地表示共价单键或共价双键,L为包含如文中所述结构的连接基团,R10、R11、R12、R13、R14、R16、R17和R18独立地为Rb、ORb、CORb、CO2Rb、OCORb、NRbRc、CF3、CN、NO2、F、Cl、Br、或I,其中Rb与Rc独立地为H或C1-3烷基;并且R5为H或C1-3烷基。在具体实施例中,R18可为H或C1-3烷基并且在特定实施例中,R18可为CH3。在具体实施例中,R13可为卤素,和在特定实施例中,R13可为Br。
在某些实施例中,R1可为苯基,其中R10、R11、R12和R14各自为H,R13为Br,Y1和Y2可形成如文中所示的噻唑环,其中R18可为CH3,并且Y3与Y4可各自为CH。根据这些实施例,抗病毒化合物可由以下结构表示:
其中A和B可独立地表示共价单键或共价双键,L可为包含如文中所述结构的连接基团。
一些实施例包括由式VI到XIII中的任一式表示的化合物。
关于文中的任何相关结构特征,各Ra可独立地为H;任选地经取代的烃基,如C1-12或C1-6烃基;任选地经取代的芳基,如任选地经取代的C6-12芳基,包括任选地经取代的苯基;任选地经取代的杂芳基,包括任选地经取代的C2-12杂芳基,如任选地经取代的吡啶基、任选地经取代的呋喃基、任选地经取代的噻吩基等等。在一些实施例中,各Ra可独立地为H、或C1-12烷基,包括:具有式CaHa+1的直链或分支链烷基、或具有式CaHa-1的环烷基,其中a为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、或12,如式:CH3、C2H5、C3H7、C4H9、C5H11、C6H13、C7H15、C8H17、C9H19、C10H21等等的直链或分支链烷基、或式:C3H5、C4H7、C5H9、C6H11、C7H13、C8H15、C9H17、C10H19等等的环烷基。
关于Ra,在一些实施例中,芳基是经卤素、三卤代甲基、烷氧基、烷氨基、OH、CN、烷硫基、芳硫基、亚砜、芳基磺酰基、烷基磺酰基、羧酸、硝基或酰胺基取代。
关于Ra,在一些实施例中,杂芳基为单一或稠合的。在一些实施例中,单一杂芳基为咪唑。在一些实施例中,稠合杂芳基为苯并咪唑。在一些实施例中,杂芳基是经卤素、三卤代甲基、烷氧基、烷氨基、OH、CN、烷硫基、芳硫基、亚砜、芳基磺酰基、烷基磺酰基、羧酸、硝基或酰胺基取代。在一些实施例中,烷基为分支化、环状或多环状。
关于Ra,烃基可为烷基、烯基、或炔基。在一些实施例中,烷基是经卤素、三卤代甲基、烷氧基、烷氨基、OH、CN、杂芳基、烷硫基、芳硫基、亚砜、芳基磺酰基、烷基磺酰基、羧酸、硝基、或酰胺基取代。在一些实施例中,杂芳基为单一或稠合的。在一些实施例中,单一杂芳基为咪唑。在一些实施例中,稠合杂芳基为苯并咪唑。在一些实施例中,烯基为分支化、环状或多环状。在一些实施例中,烯基是经卤素、三卤代甲基、烷氧基、烷氨基、OH、CN、杂芳基、烷硫基、芳硫基、亚砜、芳基磺酰基、烷基磺酰基、羧酸、硝基、或酰胺基取代。
关于文中的任何相关结构特征,Rb可为H、或C1-3烃基,如CH3、C2H5、C3H7、环丙基、CH=CH2、CH2CH=CH2、C≡CH、CH2C≡CH等等。
关于文中的任何相关结构特征,Rc可为H、或C1-3烷基,如CH3、C2H5、C3H7、环丙基等等。在一些实施例中,Rc为H。
关于文中的任何相关化学式或结构式描绘,R1可为Ra、OR2或NR2R3。在一些实施例中,R1可为任选地经取代的苯基。在一些实施例中,R1可为未经取代的苯基。在一些实施例中,R1可为经取代或未经取代的吡啶基或嘧啶基。在一些实施例中,R1可为任选地经取代的萘基。在一些实施例中,R1可为未经取代的萘基。在一些实施例中,R1可为经取代或未经取代的喹啉基、异喹啉基、或偶氮喹啉基。
在一些实施例中,R1可为
在一些实施例中,R1可为
在一些实施例中,R1可为
在一些实施例中,R1可为
在一些实施例中,R1可为
在一些实施例中,R1可为
在一些实施例中,R1可为
关于文中的任何相关结构特征,R2可为Ra、CORa、或SO2Ra。在一些实施例中,R2可为H、甲基、乙基、丙基(例如正丙基、异丙基等等)、环丙基、丁基、环丁基或其异构体、戊基、环戊基或其异构体、己基、环己基或其异构体等等。在一些实施例中,R2可为H。
关于文中的任何相关结构特征,R3可为Ra、CORa、或SO2Ra。在一些实施例中,R3可为H、甲基、乙基、丙基(例如正丙基、异丙基等等)、环丙基、丁基、环丁基或其异构体、戊基、环戊基或其异构体、己基、环己基或其异构体等等。在一些实施例中,R3可为H。
关于文中的任何相关结构特征,各R4可独立地为R2、ORa、CORa、CO2Ra、OCORa、CONR2R3、NR2R3、NRbCORa、SRa、SORa、SO2Ra、SO2NRaRb、NCORa、卤素、三卤代甲基、CN、S=O、硝基、或C2-5杂芳基。在一些实施例中,R4可为H。
一般来说,R5和R8到R32可为H或任何取代基,如,具有0到6个碳原子和0到5个独立选自:O、N、S、F、Cl、Br和I的杂原子、且/或具有15g/mol到300g/mol的分子量的取代基。R5和R8到R32中的任一者可包含:a)一或多个任选地经b)取代、或任选地由b)连接的烷基部分、b)一或多个如C=C、C≡C、CO、CO2、CON、NCO2、OH、SH、O、S、N、N=C、F、Cl、Br、I、CN、NO2、CO2H、NH2等等的官能团;或可为不具有烷基部分的取代基,如F、Cl、Br、I、NO2、CN、NH2、OH、COH、CO2H等等。
关于文中的任何相关结构特征,在一些实施例中,R5可为Ra、CORa、SO2Ra,或可不存在。R5的一些非限制性实例可包括H或C1-3烷基,如CH3、C2H5、C7、环丙基等等。在一些实施例中,R5可为CH3。在一些实施例中,R5可为H。
关于上述任何相关化学式或结构描绘,R8的一些非限制性实例可包括Rb、ORb、SRb、CORb、CO2Rb、OCORb、NRbRc、CONRbRc、NRbCORc、SO2NRbRc、CF3、CN、NO2、F、Cl、Br、I、或C2-5杂环基。在一些实施例中,R8可为H、CH3、CH2CH3、Cl、Br、OH、OCH3、SCH3、NH2、NHCH3、N(CH3)2、SO2NH2、吗啉基、CH2C≡CH、或NO2。在一些实施例中,R8可为H。
吗啉基
关于上述任何相关化学式或结构描绘,R9的一些非限制性实例可包括Rb、CORb、CO2Rb、CONRbRc、NRbCORc、SO2NRbRc、CF3、CN、或C2-5杂环基。在一些实施例中,R9可为H、CH3、CH2CH3、SO2NH2、或CH2C≡CH。在一些实施例中,R9可为H、CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH2CH=CH2、或CH2C≡CH。在一些实施例中,R9可为CH2C≡CH。在一些实施例中,R9可为H。
关于上述任何相关化学式或结构描绘,R10的一些非限制性实例可包括Rb、ORb、SRb、CORb、CO2Rb、OCORb、NRbRc、CONRbRc、NRbCORc、SO2NRbRc、CF3、CN、NO2、F、Cl、Br、I、或C2-5杂环基。在一些实施例中,R10可为H、CH3、CH2CH3、Cl、Br、OH、OCH3、SCH3、NH2、NHCH3、N(CH3)2、SO2NH2、吗啉基、CH2C≡CH、或NO2。在一些实施例中,R10可为H。
关于上述任何相关化学式或结构描绘,R11的一些非限制性实例可包括Rb、ORb、SRb、CORb、CO2Rb、OCORb、NRbRc、CONRbRc、NRbCORc、SO2NRbRc、CF3、CN、NO2、F、Cl、Br、I、或C2-5杂环基。在一些实施例中,R11可为H、CH3、CH2CH3、Cl、Br、OH、OCH3、SCH3、NH2、NHCH3、N(CH3)2、SO2NH2、吗啉基、CH2C≡CH、或NO2。在一些实施例中,R11可为H、Cl或Br。在一些实施例中,R11可为Cl。在一些实施例中,R11可为Br。在一些实施例中,R11可为H。
关于上述任何相关化学式或结构描绘,R12的一些非限制性实例可包括Rb、ORb、SRb、CORb、CO2Rb、OCORb、NRbRc、CONRbRc、NRbCORc、SO2NRbRc、CF3、CN、NO2、F、Cl、Br、I、或C2-5杂环基。在一些实施例中,R12可为H、CH3、CH2CH3、Cl、Br、OH、OCH3、SCH3、NH2、NHCH3、N(CH3)2、SO2NH2、吗啉基、CH2C≡CH、或NO2。在一些实施例中,R12可为H、Cl、或SO2NH2。在一些实施例中,R12可为H。在一些实施例中,R12可为Cl。在一些实施例中,R12可为SO2NH2。在一些实施例中,R12可为H。
在一些实施例中,R11与R12可一起形成稠合环状、杂环状、芳基、或杂芳基结构,如(但不限于)结构
关于上述任何相关化学式或结构描绘,R13的一些非限制性实例可包括Rb、ORb、SRb、CORb、CO2Rb、OCORb、NRbRc、CONRbRc、NRbCORc、SO2NRbRc、CF3、CN、NO2、F、Cl、Br、I、或C2-5杂环基。在一些实施例中,R13可为H、CH3、CH2CH3、Cl、Br、OH、OCH3、SCH3、NH2、NHCH3、N(CH3)2、SO2NH2、吗啉基、CH2C≡CH、或NO2。在一些实施例中,R13可为H或Cl。在一些实施例中,R13可为H。在一些实施例中,R13可为Cl。在一些实施例中,R11与R13可各自为Cl。
关于上述任何相关化学式或结构描绘,R14的一些非限制性实例可包括Rb、ORb、SRb、CORb、CO2Rb、OCORb、NRbRc、CONRbRc、NRbCORc、CF3、CN、NO2、F、Cl、Br、或I。在一些实施例中,R14可为H、CH3、CH2CH3、Cl、Br、OH、OCH3、SCH3、NH2、NHCH3、N(CH3)2、CH2C≡CH、或NO2。在一些实施例中,R14可为H。
在一些实施例中,R10和R14可为H。在一些实施例中,R10、R12和R14可为H。在一些实施例中,R10、R13和R14可为H。在一些实施例中,R10、R11、R13和R14可为H。在一些实施例中,R10、R11、R12和R14可为H。在一些实施例中,R10、R11、R12、R13和R14可为H。
关于上述任何相关化学式或结构描绘,R16的一些非限制性实例可包括Rb、ORb、SRb、CORb、CO2Rb、OCORb、NRbRc、CONRbRc、NRbCORc、SO2NRbRc、CF3、CN、NO2、F、Cl、Br、或C2-5杂环基。在一些实施例中,R16可为H、CH3、CH2CH3、Cl、Br、OH、OCH3、SCH3、NH2、NHCH3、N(CH3)2、SO2NH2、吗啉基、CH2C≡CH、或NO2。在一些实施例中,R16可为H。
关于上述任何相关化学式或结构描绘,R17的一些非限制性实例可包括Rb、ORb、SRb、CORb、CO2Rb、OCORb、NRbRc、CONRbRc、NRbCORc、SO2NRbRc、CF3、CN、NO2、F、Cl、Br、I、或C2-5杂环基。在一些实施例中,R17可为H、CH3、CH2CH3、Cl、Br、OH、OCH3、SCH3、NH2、NHCH3、N(CH3)2、SO2NH2、吗啉基、CH2C≡CH、或NO2。在一些实施例中,R17可为H。
关于上述任何相关化学式或结构描绘,R18的一些非限制性实例可包括Rb、ORb、SRb、CORb、CO2Rb、OCORb、NRbRc、CONRbRc、NRbCORc、SO2NRbRc、CF3、CN、NO2、F、Cl、Br、I、或C2-5杂环基。在一些实施例中,R18可为H、CH3、CH2CH3、Cl、Br、OH、OCH3、SCH3、NH2、NHCH3、N(CH3)2、SO2NH2、吗啉基、CH2C≡CH、或NO2。在一些实施例中,R18可为H或CH3。在一些实施例中,R18可为H。在一些实施例中,R18可为CH3。
关于上述任何相关化学式或结构描绘,R19的一些非限制性实例可包括Rb、ORb、SRb、CORb、CO2Rb、OCORb、NRbRc、CONRbRc、NRbCORc、SO2NRbRc、CF3、CN、NO2、F、Cl、Br、或C2-5杂环基。在一些实施例中,R19可为H、CH3、CH2CH3、Cl、Br、OH、OCH3、SCH3、NH2、NHCH3、N(CH3)2、SO2NH2、吗啉基、CH2C≡CH、或NO2。在一些实施例中,R19可为H。
关于上述任何相关化学式或结构描绘,R20的一些非限制性实例可包括Rb、ORb、SRb、CORb、CO2Rb、OCORb、NRbRc、CONRbRc、NRbCORc、SO2NRbRc、CF3、CN、NO2、F、Cl、Br、I、或C2-5杂环基。在一些实施例中,R20可为H、CH3、CH2CH3、Cl、Br、OH、OCH3、SCH3、NH2、NHCH3、N(CH3)2、SO2NH2、CH2C≡CH、或NO2。在一些实施例中,R20可为H。
关于上述任何相关化学式或结构描绘,R21的一些非限制性实例可包括Rb、ORb、SRb、CORb、CO2Rb、OCORb、NRbRc、CONRbRc、NRbCORc、SO2NRbRc、CF3、CN、NO2、F、Cl、Br、I、或C2-5杂环基。在一些实施例中,R21可为H、CH3、Cl、Br、OH、OCH3、SCH3、NH2、NHCH3、N(CH3)2、SO2NH2、吗啉基、CH2C≡CH、或NO2。在一些实施例中,R21可为H。
关于上述任何相关化学式或结构描绘,R22的一些非限制性实例可包括Rb、ORb、SRb、CORb、CO2Rb、OCORb、NRbRc、CONRbRc、NRbCORc、SO2NRbRc、CF3、CN、NO2、F、Cl、Br、I、或C2-5杂环基。在一些实施例中,R22可为H、CH3、CH2CH3、Cl、Br、OH、OCH3、SCH3、NH2、NHCH3、N(CH3)2、SO2NH2、吗啉基、或NO2。在一些实施例中,R22可为H。
在一些实施例中,R19、R20、R21和R22可为H。
关于上述任何相关化学式或结构描绘,R23的一些非限制性实例可包括Rb、ORb、SRb、CORb、CO2Rb、OCORb、NRbRc、CONRbRc、NRbCORc、SO2NRbRc、CF3、CN、NO2、F、Cl、Br、I、或C2-5杂环基。在一些实施例中,R23可为H、CH3、CH2CH3、Cl、Br、OH、OCH3、SCH3、NH2、NHCH3、N(CH3)2、SO2NH2、CH2C≡CH、或NO2。在一些实施例中,R23可为H或SO2NH2。在一些实施例中,R23可为H。在一些实施例中,R23可为SO2NH2。
关于上述任何相关化学式或结构描绘,R24的一些非限制性实例可包括Rb、ORb、SRb、CORb、CO2Rb、OCORb、NRbRc、CONRbRc、NRbCORc、SO2NRbRc、CF3、CN、NO2、F、Cl、Br、I、或C2-5杂环基。在一些实施例中,R24可为H、CH3、CH2CH3、Cl、Br、OH、OCH3、SCH3、NH2、NHCH3、N(CH3)2、SO2NH2、吗啉基、或NO2。在一些实施例中,R24可为H。
在一些实施例中,R23和R24可为H。
关于上述任何相关化学式或结构描绘,R25的一些非限制性实例可包括Rb、ORb、SRb、CORb、CO2Rb、OCORb、NRbRc、CONRbRc、NRbCORc、SO2NRbRc、CF3、CN、NO2、F、或C2-5杂环基。在一些实施例中,R25可为H、CH3、CH2CH3、N(CH3)2、SO2NH2、吗啉基、CH2C≡CH、或NO2。在一些实施例中,R25可为CH3或H。在一些实施例中,R25可为H。
关于上述任何相关化学式或结构描绘,R26的一些非限制性实例可包括Rb、CF3、CN、或NO2。在一些实施例中,R26为H、CH3、或CH2CH3。在一些实施例中,R26可为H。
关于上述任何相关化学式或结构描绘,R27的一些非限制性实例可包括Rb、ORb、SRb、CORb、CO2Rb、CONRbRc、SO2NRbRc、CF3、CN、NO2、F、Cl、Br、I、或C2-5杂环基。在一些实施例中,R27可为H、CH3、CH2CH3、Cl、Br、OH、OCH3、SCH3、SO2NH2、CH2C≡CH、或NO2。在一些实施例中,R27可为H、(CH2)3CH3、CH2CH2OCH3、CH2CH2N(CH3)2、CH2CH2-吗啉基、或CH2CH2SCH3。在一些实施例中,R27可为H。在一些实施例中,R27可为(CH2)3CH3。在一些实施例中,R27可为CH2CH2OCH3。在一些实施例中,R27可为CH2CH2N(CH3)2。在一些实施例中,R27可为CH2CH2-吗啉基。在一些实施例中,R27可为CH2CH2SCH3。
关于上述任何相关化学式或结构描绘,R28的一些非限制性实例可包括Rb、ORb、SRb、CORb、CO2Rb、OCORb、NRbRc、CONRbRc、NRbCORc、SO2NRbRc、CF3、CN、NO2、F、Cl、Br、I、或C2-5杂环基。在一些实施例中,R28可为H、CH3、CH2CH3、Cl、Br、OH、OCH3、SCH3、NH2、NHCH3、N(CH3)2、SO2NH2、吗啉基、CH2C≡CH、或NO2。在一些实施例中,R28可为H、CH2CH3、OCH3、N(CH3)2、吗啉基、或SCH3。在一些实施例中,R28可为H。在一些实施例中,R28可为CH2CH3。在一些实施例中,R28可为OCH3。在一些实施例中,R28可为CN(CH3)2。在一些实施例中,R28可为吗啉基。在一些实施例中,R28可为SCH3。
关于上述任何相关化学式或结构描绘,R29的一些非限制性实例可包括Rb、ORb、SRb、CF3、CN、NO2、F、Cl、Br、I、或C2-5杂环基。在一些实施例中,R29可为H、CH3、或CH2CH3。在一些实施例中,R29可为H。
在一些实施例中,R28与R29可为H。
关于上述任何相关化学式或结构描绘,R30的一些非限制性实例可包括Rb、ORb、SRb、CORb、CO2Rb、OCORb、NRbRc、CONRbRc、NRbCORc、SO2NRbRc、CF3、CN、NO2、F、Cl、Br、或I。在一些实施例中,R30可为H、CH3、CH2CH3、Cl、Br、OH、OCH3、SCH3、NH2、NHCH3、N(CH3)2、SO2NH2、CH2C≡CH、或NO2。在一些实施例中,R30可为H。
关于上述任何相关化学式或结构描绘,R31的一些非限制性实例可包括Rb、ORb、SRb、CORb、CO2Rb、OCORb、NRbRc、CONRbRc、NRbCORc、SO2NRbRc、CF3、CN、NO2、F、Cl、Br、I、或C2-5杂环基。在一些实施例中,R31可为H、CH3、CH2CH3、Cl、Br、OH、OCH3、SCH3、NH2、NHCH3、N(CH3)2、SO2NH2、吗啉基、CH2C≡CH、或NO2。在一些实施例中,R31可为H。
关于上述任何相关化学式或结构描绘,R32的一些非限制性实例可包括Rb、ORb、SRb、CORb、CO2Rb、OCORb、NRbRc、CONRbRc、NRbCORc、SO2NRbRc、CF3、CN、NO2、F、Cl、Br、I、或C2-5杂环基。在一些实施例中,R32可为H、CH3、CH2CH3、Cl、Br、OH、OCH3、SCH3、NH2、NHCH3、N(CH3)2、SO2NH2、吗啉基、CH2C≡CH、或NO2。在一些实施例中,R32可为H或NO2。在一些实施例中,R32可为H。在一些实施例中,R32可为NO2。
在一些实施例中,R30、R31和R32可为H。在一些实施例中,R31与R32可为H。
关于上述任何相关化学式或结构描绘,R33的一些非限制性实例可包括Rb、ORb、SRb、CORb、CO2Rb、OCORb、NRbRc、CONRbRc、NRbCORc、SO2NRbRc、CF3、CN、NO2、F、Cl、Br、I、或C2-5杂环基。在一些实施例中,R32可为H、CH3、CH2CH3、Cl、Br、OH、OCH3、SCH3、NH2、NHCH3、N(CH3)2、SO2NH2、吗啉基、CH2C≡CH、或NO2。在一些实施例中,R33可为H。
除非另作指明,否则关于文中通过结构、化学式、名称或任何其它方法所任何提及的化合物包括医药上可接受的盐,如钠、钾和铵盐;前药,如酯前药;可选固体形式,如多晶型物、溶剂合物、水合物等等;互变异构体;或可在如本文所述使用化合物的条件下快速转化成文中所述化合物的任何其它化学物质。
除非明确地描绘立体化学,否则针对于化合物的任何结构、化学式或名称可是指任何立体异构体或所述化合物的立体异构体的任何混合物。
如文中所使用,术语“官能团”是指原子或每当其在不同化合物中出现时具有类似化学性质的原子的群组,和因此官能团界定有机化合物家族的特征性物理和化学性质。
除非另作指明,否则当提到如(例如)烷基、芳基等等的任何化合物或化学结构特征(文中统称为“化合物”)为“任选地经取代”时,所述化合物可不具有取代基(在此情况中,其为“未经取代”),或所述化合物可包含一或多个取代基(在此情况中,其为“经取代”)。术语“取代基”具有为熟练技术者已知的普通含义。在一些实施例中,取代基可为相关领域中已知的普通有机部分,其可具有15g/mol到50g/mol、15g/mol到100g/mol、15g/mol到150g/mol、15g/mol到200g/mol、15g/mol到300g/mol、或15g/mol到500g/mol的分子量(例如,取代基原子的原子质量总和)。在一些实施例中,取代基包含:0到30个、0到20个、0到10个、或0到5个碳(C)原子;和/或0到30个、0到20个、0到10个、或0到5个包括N、O、S、Si、F、Cl、Br、或I的杂原子;其限制条件为在经取代的化合物中取代基包含至少一个包括C、N、O、S、Si、F、Cl、Br、或I的原子。取代基的实例包括(但不限于)烷基、烯基、炔基、杂烷基、杂烯基、杂炔基、芳基、杂芳基、羟基、烷氧基、芳氧基、酰基、酰氧基、烷基羧酸酯、硫醇基、烷硫基、氰基、卤素、硫代羰基、O-胺甲酰基、N-胺甲酰基、O-硫代胺甲酰基、N-硫代胺甲酰基、C-氨基、酰胺基、N-酰胺基、S-磺基酰胺基、N-磺基酰胺基、异氰酸基、氰硫基、异氰硫基、硝基、硅基、硫基、亚磺酰基、磺酰基、卤烷基、卤代烷氧基、三卤代甲烷磺酰基、三卤代甲烷磺基酰胺基、氨基等等。例如,针对于分子的一部分所使用的术语“分子量”指示分子的所述部分中的原子的原子质量总和,甚至其可不为完整分子。
如文中所使用,术语“烃基”具有相关领域中一般明白的最宽广含义,和可包括由碳和氢所构成的部分。一些实例可包括烷基、烯基、炔基、芳基等等和其组合,和可为直链、分支链、环状、或其组合。烃基可经键结到所述结构可能具有的任何其它数目的部分(例如,可键结到一个其它基团,如-CH3、-CH=CH2等等;两个其它基团,如-苯基-、-C≡C-等等;或任何数目的其它基团),和在一些实施例中,可包含1到35个碳原子。烃基的实例包括(但不限于)C1烷基、C2烷基、C2烯基、C2炔基、C3烷基、C3烯基、C3炔基、C4烷基、C4烯基、C4炔基、C5烷基、C5烯基、C5炔基、C6烷基、C6烯基、C6炔基、苯基等等。
如文中所使用,术语“烷基”具有相关领域中一般明白的最宽广含义,和可包括不包含双键或三键且不具有任何环状结构的由碳和氢所构成的部分。烷基可为直链烷基、分支链烷基、环烷基、或其组合,和在一些实施例中,可包含1到35个碳原子。在一些实施例中,烷基可包括C1-10直链烷基,如甲基(-CH3)、乙基(-CH2CH3)、正丙基(-CH2CH2CH3)、正丁基(-CH2CH2CH2CH3)、正戊基(-CH2CH2CH2CH2CH3)、正己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH3)等等;C3-10分支链烷基,如C3H7(例如,异丙基)、C4H9(例如,分支链丁基异构体)、C5H11(例如,分支链戊基异构体)、C6H13(例如,分支链己基异构体)、C7H15(例如,分支链庚基异构体)等等;C3-10环烷基,如C3H5(例如,环丙基)、C4H7(例如,环丁基异构体,如环丁基、甲基环丙基等等)、C5H9(例如,环戊基异构体,如环戊基、甲基环丁基、二甲基环丙基等等)、C6H11(例如,环己基异构体)、C7H13(例如,环庚基异构体)等等;和类似者。
术语“烷基”、“烯基”和“炔基”分别是指经取代和未经取代的烷基、烯基和炔基。如文中所定义,烷基可任选地经取代。
经取代的烷基、烯基和炔基是指经一到五个包括以下的取代基取代的烷基、烯基和炔基:H、低碳数烷基、芳基、烯基、炔基、芳基烷基、烷氧基、芳氧基、芳基烷氧基、烷氧基烷基芳基、烷氨基、芳基氨基、NH2、OH、CN、NO2、OCF3、CF3、F、1-脒、2-脒、烷基羰基、吗啉基、哌啶基、二氧杂环己烷基、吡喃基、杂芳基、呋喃基、硫代苯基、四唑基、噻唑基、异噻唑基、咪唑基、噻二唑基、噻二唑S-氧化物、噻二唑S,S-二氧化物、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、吡啶基、嘧啶基、喹啉基、异喹啉基、SR、SOR、SO2R、CO2R、COR、CONR'R”、CSNR'R”和SOnNR'R”。
文中单独地或以组合方式使用的术语“炔基”是指包括包含2到20个碳原子且具有一或多个碳-碳三键但不具有任何环状结构的直链或分支链烃的官能团。如文中所定义,炔基可任选地经取代。炔基的实例包括(不限于)乙炔基、丙炔基、羟基丙炔基、丁炔基、丁炔-1-基、丁炔-2-基、3-甲基丁炔-1-基、戊炔基、戊炔-1-基、己炔基、己炔-2-基、庚炔基、辛炔基、壬炔基、癸炔基、十一炔基、十二炔基、十三炔基、十四炔基、十五炔基、十六炔基、十七炔基、十八炔基、十九炔基、二十炔基和类似者。
文中单独地或以组合方式使用的术语“亚烷基”是指衍生自在两个或两个以上位置处连接的直链或分支链饱和烃的饱和脂族基,如亚甲基(-CH2-)。除非另作指明,否则术语“烷基”可包括“亚烷基”。
文中单独地或以组合方式使用的术语“烷基羰基”或“烷酰基”是指包含经羰基连接到母分子部分的烷基的官能团。烷基羰基的实例包括(不限于)甲基羰基、乙基羰基和类似者。
文中单独地或以组合方式使用的术语“杂烷基”是指包括包含1到20个仅由单键连接的原子的直链或分支链烃的官能团,其中链中至少一个原子为碳和链中至少一个原子为O、S、N、或其任何组合。杂烷基可为完全饱和或包含1到3个不饱和度。非碳原子可在杂烷基的任何内部位置之处,和至多两个非碳原子可是连续,如(例如)-CH2-NH-OCH3。此外,非碳原子可任选地经氧化和氮可任选地经四级铵化。
文中单独地或以组合方式使用的术语“烷基氧基”或“烷氧基”是指包含烷基醚基的官能团。烷氧基的实例包括(不限于)甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基和类似者。
文中单独地或以组合方式使用的术语“羟基”是指官能团羟基(-OH)。
文中单独地或以组合方式使用的术语“羧基”是指官能团-C(=O)OH或对应“羧酸根”阴离子-C(=O)O-。实例包括(不限于)甲酸、乙酸、草酸、苯甲酸。“O-羧基”是指具有通式RCOO的羧基,其中R为有机部分或基团。“C-羧基”是指具有通式COOR的羧基,其中R为有机部分或基团。
文中单独地或以组合方式使用的术语“侧氧基”是指官能团=O。
如文中所使用,术语“碳环状”具有相关领域中一般明白的最宽广含义,和包括其中环原子均为碳的环或环系统。实例包括(但不限于)苯基、萘基、蒽基、环烷基、环烯基、环炔基等等和其组合。
如文中所使用,术语“杂环状”具有相关领域中一般明白的最宽广含义,和包括其中至少一个环原子为非碳,为如N、O、S等等的环或环系统。实例包括(但不限于)杂芳基、环杂烷基、环杂烯基、环杂炔基等等和其组合。
文中单独地或以组合方式使用的术语“环烷基”、“碳环状烷基”和“碳环烷基”是指包括在碳环结构中具有3到12个仅由碳-碳单键连接的碳原子的非共轭环状分子环结构的经取代或未经取代的非芳香烃的官能团。环烷基可为单环、二环或多环,和可任选地包括一到三个额外环结构,如(例如)芳基、杂芳基、环烯基、杂环烷基、或杂环烯基。
文中单独地或以组合方式使用的术语“低碳数环烷基”是指包括在碳环结构中具有3到6个仅由碳-碳单键连接的碳原子的非共轭环状分子环结构的单环经取代或未经取代的非芳香烃的官能团。低碳数环烷基的实例包括(不限于)环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
如文中所使用,术语“芳基”具有相关领域中一般明白的最宽广含义,和可包括芳族环或芳族环系统。芳基可为单环、二环或多环,和可任选地包括一到三个额外环结构;如(例如)环烷基、环烯基、杂环烷基、杂环烯基、或杂芳基。术语“芳基”包括(不限于)苯基(benzenyl)、硫代苯基、吲哚基、萘基、甲苯基、二甲苯基、蒽基、菲基(phenanthryl)、薁基、联苯基、萘基、1-甲基萘基、二氢苊基、苊基、蒽基、芴基、萉基、菲基(phenanthrenyl)、苯并[a]蒽基、苯并[c]菲基、屈基(chrysenyl)、萤蒽基、芘基、并四苯基(稠四苯基)、苯并菲基、蒽嵌蒽基、苯并芘基、苯并[a]芘基、苯并[e]萤蒽基、苯并[ghi]苝基、苯并[j]萤蒽基、苯并[k]萤蒽基、碗烯基、蔻基、联二蘧基(dicoronylenyl)、螺烯基(helicenyl)、稠七苯基、稠六苯基、莪基(ovalenyl)、稠五苯基、苉基(picenyl)、苝基、联四苯基等等。
另外,文中单独地或以组合方式使用的术语“芳基”、“烃基芳基”或“芳基烃”可指包括具有3到12个碳原子的共轭环状分子环结构的经取代或未经取代的芳香烃的官能团。经取代的芳基是指具有一到五个包括以下的取代基的芳基:H、低碳数烷基、芳基、烯基、炔基、芳基烷基、烷氧基、芳氧基、芳基烷氧基、烷氧基烷基芳基、烷氨基、芳基氨基、NH2、OH、CN、NO2、OCF3、CF3、Br、Cl、F、1-甲脒基、2-甲脒基、烷基羰基、吗啉基、哌啶基、二氧杂环己烷基、吡喃基、杂芳基、呋喃基、硫代苯基、四唑并、噻唑、异噻唑并、咪唑并、噻二唑、噻二唑S-氧化物、噻二唑S,S-二氧化物、吡唑并、噁唑、异噁唑、吡啶基、嘧啶基、喹啉、异喹啉、SR、SOR、SO2R、CO2R、COR、CONR'R”、CSNR'R”、SOnNR'R”等等。
文中单独地或以组合方式使用的术语“低碳数芳基”是指包括具有3到6个碳原子的共轭环状分子环结构的经取代或未经取代的芳香烃的官能团。低碳数芳基的实例包括(不限于)苯基和萘基。
文中单独地或以组合方式使用的术语“杂芳基”是指包括具有3到12个原子的共轭环状分子环结构的经取代或未经取代的芳香烃的官能团,其中所述环结构中的至少一个原子为碳和所述环结构中的至少一个原子为O、S、N、或其任何组合。杂芳基可为单环、二环或多环,和可任选地包含一到三个额外环结构,如(例如)芳基、环烷基、环烯基、杂环烷基、或杂环烯基。杂芳基的实例包括(不限于)吖啶基、苯并吲哚基、苯并咪唑基、苯并异噁唑基、苯并二氧芑基、二氢苯并二氧芑基、苯并二氧杂环戊烯基、1,3-苯并二氧杂环戊烯基、苯并呋喃基、苯并异噁唑基、苯并吡喃基、苯并噻吩基、苯并[c]硫代苯基、苯并三唑基、苯并噁二唑基、苯并噁唑基、苯并噻二唑基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、咔唑基、色酮基(chromonyl)、噌啉基(cinnolinyl)、二氢噌啉基、香豆素基、二苯并呋喃基、呋喃并吡啶基、呋喃基、吲嗪基、吲哚基、二氢吲哚基、咪唑基、吲唑基、异苯并呋喃基、异吲哚基、异吲哚啉基、二氢异吲哚基、异喹啉基、二氢异喹啉基、异噁唑基、异噻唑基、噁唑基、噁二唑基、菲咯啉基、菲啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡咯啉基、吡咯基、吡咯并吡啶基、喹啉基、喹噁啉基、喹唑啉基、四氢喹啉基、四唑并哒嗪基、四氢异喹啉基、噻吩基(thiophenyl)、噻唑基、噻二唑基、噻吩并吡啶基、噻吩基(thienyl)、噻吩基(thiophenyl)、三唑基、夹氧蒽基(xanthenyl)和类似者。
文中单独地或以组合方式使用的术语“低碳数杂芳基”是指包括具有3到6个原子的共轭环状分子环结构的单环或二环,经取代或未经取代的芳香烃的官能团,其中所述环结构中的至少一个原子为碳和所述环结构中的至少一个原子为O、S、N、或其任何组合。
与文中所述实施例的一些实施例相关联的苯基结构是如下方所描绘。此结构可为未经取代,如下方所显示,或可为经取代,使得取代基可独立地处在当结构为未经取代时通常由氢原子占据的任何位置。除非连接点指示为连接到特定碳原子,否则连接可发生在通常由氢原子占据的任何位置之处。
苯基
术语“处理”包括人或其它动物的疾病的诊断、治疗、减轻、疫苗接种、或疗法的增补或预防中的一或多者。
如文中所使用,术语“脊椎动物”包括所有活脊椎动物,如(不限于)哺乳动物、人类、鸟类、狗、猫、家畜、农场动物、自由放养的族群等等。
许多RNA病毒共享生化、调节和信号路径。这些病毒包括(但不限于)流行性感冒病毒(包括禽类和猪分离株)、呼吸道融合病毒(RSV)、C型肝炎病毒(HCV)、西尼罗河病毒(WNV)、严重急性呼吸道症候群(SARS)-冠状病毒、人类免疫缺陷症病毒(HIV)、脊髓灰质炎病毒、麻疹病毒、登革热病毒、黄热病病毒、蜱传脑炎病毒、日本脑炎病毒、圣刘易斯脑炎病毒、马勒谷病毒、布氏病毒、罗西奥病毒、跳跃病病毒、班奇病毒、伊利乌斯病毒、科科贝拉病毒、昆津病毒、阿尔弗病毒、牛腹泻病毒和西泽诺尔森林病病毒。文中所公开的化合物和方法可用于处理这些病毒。
RNA病毒的相关分类科包括(不限于)沙粒病毒科、星状病毒科、双核糖核酸病毒科、雀麦花叶病毒科、本扬病毒科、杯状病毒科、修道院病毒科、豇豆镶嵌病毒科、囊状噬菌体科、黄热病毒科、弯曲病毒科、肝炎病毒科、光滑病毒科、黄症病毒科、单股反链病毒目、镶嵌病毒、网巢病毒目、野田病毒科、正粘液病毒科、副粘液病毒科、小双节核糖核酸病毒科、小核糖核酸病毒科、马铃薯Y病毒科、呼肠孤病毒科、逆转录病毒科、随伴病毒科、纤细病毒科、披衣病毒科、西红柿丛矮病毒科、全病毒科和芜菁发黄镶嵌病毒科。文中所公开的化合物和方法可作为医药上可接受的药物配方的部分用于处理于这些病毒科中的病毒。其它相关病毒科包括(不限于)肝病毒科、疱疹病毒科和乳头瘤病毒科。
特定实施例提供为达治疗和/或预防包括脊椎动物的动物中疾病的目的而单独地或以与抗原组合的方式包含化合物的医药组合物。因此,在一些实施例中,医药组合物可用为疫苗。
本发明还提供一种以化合物用为佐剂的用途。如文中所使用,术语“佐剂”是指改善其它药剂对免疫系统的效果的化合物。佐剂为可增强对抗原的免疫反应的无机或有机化学品、大分子或某些灭活细菌的整个细胞。其可包含于疫苗中以增强接受者对所供应抗原的免疫反应。
文中所公开的化合物和方法可是与目前在开发或使用中的其它疗法的加成或协同。例如,病毒唑和干扰素-α当以组合方式使用时可提供针对HCV感染的有效治疗。其呈组合方式的效能可超过任一种药物产品在单独使用时的效能。本发明的组合物可单独地或以与干扰素、病毒唑和/或针对于病毒标靶(病毒蛋白酶、病毒聚合酶、病毒复制复合物的组装)和宿主标靶(病毒处理时所需的宿主蛋白酶、病毒标靶的磷酸化时所需的宿主激酶(如C型肝炎病毒的非结构5A蛋白(NS5A))、和有效利用病毒内部核糖体进入位点所需的宿主因子或IRES的抑制剂)开发的各种小分子组合或结合方式投与。
文中所公开的化合物和方法可以与(不限于)以下组合或结合方式使用:金刚烷抑制剂、神经氨酸酶抑制剂、α干扰素、非核苷或核苷聚合酶抑制剂、NS5A抑制剂、抗组胺药、蛋白酶抑制剂、解螺旋酶抑制剂、P7抑制剂、进入抑制剂、IRES抑制剂、免疫刺激因子、HCV复制抑制剂、亲环素A抑制剂、A3腺苷激动剂和微型核糖核酸抑制剂。
可以与文中所公开的化合物和方法组合或结合方式投与的细胞激素包括(不限于)IL-2、IL-12、IL-23、IL-27、或IFN-γ。可用于或将用于与文中所公开的化合物和方法组合或结合的潜在投与的新颖HCV药物包括(不限于)ACH-1625(安琪琳(Achillion));醣基化干扰素(阿利奥斯生物制药(Alios Biopharma));ANA598、ANA773(阿那地斯制药(Anadys Pharm));ATI-0810(安瑞生医疗(Arisyn Therapeutics));AVL-181(阿维拉医疗(Avila Therapeutics));(比洛克西(Biolex));CTS-1027(珂尼蒂斯(Conatus));SD-101(戴那伐克斯技术(Dynavax Technologies));克立咪唑(clemizole)(艾格尔峰生物制造(Eiger Biopharmaceuticals));GS-9190(吉利德科学(Gilead Sciences));GI-5005(全球免疫生物制药(GlobalImmune BioPharma));雷西莫特(resiquimod)/R-848(格蕾丝道制药(Graceway Pharmaceuticals));Alb干扰素(Albinterferon)α-2b(人类基因组科学(HumanGenome Sciences));IDX-184、IDX-320、IDX-375(艾德尼克斯(Idenix));IMO-2125(爱德拉制药(Idera Pharmaceuticals);INX-189(伊亥比特斯(Inhibitex));ITCA-638(印塔尔加西亚医疗(Intarcia Therapeutics));ITMN-191/RG7227(因特穆内(Intermune));ITX-5061、ITX-4520(艾瑟克斯制药(iTherx Pharmaceuticals));MB11362(美达贝斯医疗(MetabasisTherapeutics));巴维昔单抗(bavituximab)(游隼制造(Peregrine Pharmaceuticals));PSI-7977、RG7128、PSI-938(法马塞特(Pharmasset));PHX1766(弗尼米克斯(Phenomix));硝唑尼特(nitazoxanide)/(勒马克实验室(Romark Laboratories));SP-30(撒马利亚制药(Samaritan Pharmaceuticals));SCV-07(赛生(SciClone));SCY-635(西尼克斯(Scynexis));TT-033(塔西尔医疗(Tacere Therapeutics));伟拉咪定(viramidine)/塔利韦林(taribavirin)(威朗制药(Valeant Pharmaceuticals));特拉匹韦(特拉普韦(Telaprevir))、VCH-759、VCH-916、VCH-222、VX-500、VX-813(福泰制药(Vertex Pharmaceuticals));和PEG-INFλ(津莫吉尼蒂克斯(Zymogenetics))。
可用于或将用于与文中所公开的化合物和方法组合或结合的潜在投与的新颖流行性感冒和西尼罗河病毒药物包括(不限于)神经氨酸抑制剂(帕拉米韦(Peramivir)、拉尼米韦(Laninamivir));三合一疗法—神经氨酸酶抑制剂病毒唑、金刚烷(ADS-8902);聚合酶抑制剂(法匹拉韦(Favipiravir));逆转录酶抑制剂(ANX-201);吸入甲壳素(ANX-211);进入/结合抑制剂(结合位点模拟剂,FLUCIDETM(纳米杀病毒剂(NanoViricide));进入抑制剂((纳克斯生物(NexBio));融合抑制剂(针对于西尼罗河的MGAWN1);宿主细胞抑制剂(羊毛硫抗生素(lantibiotics));RNA基因组的裂解(RNAi、RNA酶L);免疫刺激因子(干扰素,-LDO[赫米斯弗克斯生物制药(Hemispherx Biopharma))]、神经激肽1(Neurokinin 1)激动剂[免疫雷根生物科学(ImmuneRegenBioSciences)]、针对于西尼罗河的干扰素阿尔费隆N);和TG21。
可用于与文中所公开的化合物和方法组合或结合的潜在投与的用于治疗流行性感冒和/或肝炎的其它药物包括(不限于)下列:
表1.肝炎和流行性感冒药物
这些药剂可并入作为与本发明的化合物的相同医药组合物的一部分投与或可与本发明的化合物同时或依照另一治疗时程分开投与。
给药可是单剂量或累积(连续给药),和可容易由所属领域的一般技术人员确定。作为一非限制性实例,有效剂量的文中所公开的化合物或组合物可一次性投与给个体。或者,治疗可包括有效剂量的文中所公开的化合物或组合物历时一系列时间段进行的多次投与,如(例如)一天数次、每天一次、每隔数天一次、每周一次、或每月一次。投与的时序可根据个体改变,取决于如个体症状的严重度的所述因素。所属领域的一般技术人员将认识到可在整个治疗过程中监测个体病况和可相应地调整投与的有效量的文中所公开的化合物或组合物。
文中所公开的化合物和方法可与其它化合物和方法的加成或协同作为疫苗佐剂。借助其抗病毒和免疫增强性质,所述化合物可用于强化预防性或治疗性疫苗接种。所述化合物不需要同时地或以与其它疫苗组分组合方式投与使实现有效。化合物的佐剂应用不限于预防或治疗病毒感染,但可包括所有治疗性和预防性疫苗佐剂应用,这是因为由所述化合物引起的免疫反应的一般性质。
如由所属领域的一般技术人员所可明白,疫苗可是抗病毒、细菌感染、癌症等等,和可包括(不限于)以下中的一或多者:活减毒疫苗(LAIV)、非活性疫苗(IIV;灭活病毒疫苗)、子单元(裂解疫苗);子病毒粒子疫苗;纯化蛋白质疫苗;或DNA疫苗。适合的佐剂包括(不限于)以下中的一或多者:水/油乳液、非离子共聚物佐剂,例如CRL 1005(欧皮特伐克斯(OPTIVAX)TM;维科塞尔公司(Vaxcel Inc.))、磷酸铝、氢氧化铝、氢氧化铝和氢氧化镁的水性悬浮液、细菌内毒素、多核苷酸、聚电解质、亲油性佐剂和合成胞壁酰二肽(norMDP)类似物,如N-乙酰基-降-胞壁酰基-L-丙胺酰基-D-异谷氨酰胺、N-乙酰基-胞壁酰基-(6-O-硬脂酰基)-L-丙胺酰基-D-异谷氨酰胺或N-乙二醇-胞壁酰基-LαAbu-D-异谷氨酰胺(汽巴-嘉基有限公司(Ciba-Geigy Ltd.))。
包含本发明的化合物的医药组合物可经调配呈各种形式;例如,呈液体、凝胶、冻干,或呈压缩固体。优选的形式将取决于进行治疗的特定适应症和可由所属领域的一般技术人员识别。在一个实施例中,所公开的RIG-I激动剂包括用于经口递送的配方,其可为利用直接医药化学方法的小分子药物。
本发明配方的投与可以各种方法进行,包括(但不限于)口服、皮下、静脉内、脑内、鼻内、穿皮、腹膜内、肌肉内、肺内、鞘内、阴道、直肠、眼内,或可以任何其它可接受的方式进行。所述配方可持续地通过注射来投与,然而,大量注射是可接受的,其利用相关领域中已知的技术,如泵(例如,皮下渗透泵)或植入。于一些实例中,所述配方可呈溶液或喷雾形式直接施用。
医药组合物的一个实例为设计用于非经肠式投与的溶液。虽然于许多情况中医药溶液配方是呈适用于立即使用的液体形式提供,但这类非经肠式配方还可呈冷冻或呈冻干形式提供。在前项情况中,组合物必须在使用前进行解冻。冻干形式通常是用于增强包含于组合物中的活性化合物于各种储存条件下的稳定性,正如所属领域的一般技术人员明白冻干制剂一般比其液体对应物更为稳定。这类冻干制剂是在使用前通过添加一或多种如(不限于)无菌注射用水或无菌生理盐水溶液的适合的医药上可接受的稀释剂复水。
可通过将具有所期望纯度的化合物与一或多种相关领域中通常使用的医药上可接受的载剂、赋形剂或稳定剂(它们均称为“赋形剂”),例如缓冲剂、稳定剂、防腐剂、等渗剂(isotonifier)、非离子清洁剂、抗氧化剂和/或其它杂项添加剂按适当混合,制得用于呈冻干配方或水溶液形式贮藏的注射剂(parenteral)。
缓冲剂有助于维持pH值在近似生理条件的范围。其通常是以范围从2mM到50mM的浓度存在。并与本发明使用的适合的缓冲剂包括有机和无机酸和其盐,如柠檬酸盐缓冲液(例如,柠檬酸单钠-柠檬酸二钠混合物、柠檬酸-柠檬酸三钠混合物、柠檬酸-柠檬酸单钠混合物等等)、琥珀酸盐缓冲液(例如,琥珀酸-琥珀酸单钠混合物、琥珀酸-氢氧化钠混合物、琥珀酸-琥珀酸二钠混合物等等)、酒石酸盐缓冲液(例如,酒石酸-酒石酸钠混合物、酒石酸-酒石酸钾混合物、酒石酸-氢氧化钠混合物等等)、富马酸盐缓冲液(例如,富马酸-富马酸单钠混合物、富马酸-富马酸二钠混合物、富马酸单钠-富马酸二胺混合物等等)、葡萄糖酸盐缓冲液(例如,葡萄糖酸-糖酸钠混合物、葡萄糖酸-氢氧化钠混合物、葡萄糖酸-糖酸钾混合物等等)、草酸盐缓冲液(例如,草酸-草酸钠混合物、草酸-氢氧化钠混合物、草酸-草酸钾混合物等等)、乳酸盐缓冲液(例如,乳酸-乳酸钠混合物、乳酸-氢氧化钠混合物、乳酸-乳酸钾混合物等等)和乙酸盐缓冲液(例如,乙酸-乙酸钠混合物、乙酸-氢氧化钠混合物等等)。其它可能为磷酸盐缓冲液、组氨酸缓冲液和如Tris的三甲胺盐。
可添加防腐剂以阻滞微生物生长,和防腐剂通常是以0.2%到1%(w/v)的量添加。并与本发明使用的适合的防腐剂包括(不限于)苯酚、苄醇、间-甲酚、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、氯化十八烷基二甲基苄铵、卤化苯甲烷铵(例如,氯化苯甲烷铵、溴化苯甲烷铵或碘化苯甲烷铵)、氯化己烷双胺、对羟基苯甲酸烷酯(如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯)、儿茶酚、间苯二酚、环己醇和3-戊醇。
可添加等渗剂以确保液体组合物的等渗压,和等渗剂包括(不限于)多元糖醇,优选的是三元或更多元糖醇,如甘油、赤藓糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、山梨糖醇和甘露醇。考虑其它成分的相对量,多元醇可以在0.1重量%与25重量%之间的量存在,通常是1%到5%。
稳定剂是指功能上可从增积剂到添加剂改变的宽广类别的赋形剂,其可使治疗剂增溶或有助于防止变性或附着到容器壁。典型的稳定剂可为多元糖醇(以上所列举);氨基酸,如精氨酸、离氨酸、甘氨酸、谷酰氨酸、天冬酰氨酸、组氨酸、丙氨酸、鸟氨酸、L-白氨酸、2-苯丙氨酸、谷氨酸、苏氨酸等等,有机糖或糖醇,如乳糖、海藻糖、菜豆糖、甘露糖、山梨糖醇、木糖醇、核糖醇、内消旋肌醇、半乳糖醇、甘油和类似者,包括如肌醇的环多醇;聚乙二醇;氨基酸聚合物;含硫还原剂,如脲、谷胱甘肽、硫辛酸、硫代乙醇酸钠、硫代甘油、α-单硫代甘油和硫代硫酸钠;低分子量多肽(也就是说,<10个残基);蛋白质,如人类血清白蛋白、牛血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白;亲水性聚合物,如聚乙烯吡咯烷酮;单醣,如木糖、甘露糖、果糖和葡萄糖;二醣,如乳糖、麦芽糖和蔗糖;三醣如棉籽糖(raffinose)和多醣如聚葡萄糖。稳定剂通常是以占活性化合物重量0.1到10,000重量份的范围存在。
其它杂项赋形剂包括填料(例如,淀粉)、螯合剂(例如,EDTA)、抗氧化剂(例如,抗坏血酸、甲硫氨酸、维他命E)和共溶剂。
活性成分还可包埋于例如通过凝聚(coascervation)技术或通过界面聚合制得的微胶囊(例如羟甲基纤维素、明胶或聚-(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊)中、包埋于胶态药物递送系统(例如脂质体、白蛋白微球体、微乳液、奈米颗粒和奈米胶囊)中或包埋于粗乳液中。这类技术在雷明顿(Remington),医药科学与实践(The Science and Practice ofPharmacy)(第21版,由利平科特威廉斯威尔金斯(Lippincott Williams&Wilkins)出版,威科克鲁维尔公司(Wolters Kluwer Company),2005)中公开,其教示是以引用的方式并入文中。
打算用于活体内投与的非经肠配方一般是无菌。此可例如通过透过无菌过滤膜过滤来容易地实现。
持续释放制剂的适合的实例包括包含化合物或组合物的固体疏水性聚合物的半渗透基质,所述基质具有如膜或微胶囊的适合的形式。持续释放基质的实例包括聚酯、水凝胶(例如,聚(甲基丙烯酸2-羟乙酯)或聚(乙烯醇))、聚乳酸交酯、L-谷氨酸和乙基-L-谷氨酸的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯、可降解乳酸-乙醇酸共聚物(如技术(阿尔克姆斯(Alkermes))或醋酸亮丙瑞林微球注射剂(由乳酸-乙醇酸共聚物和乙酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)所构成的可注射微球体;艾布特(Abbott)实验室))和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。尽管如乙烯-乙酸乙烯酯和乳酸-乙醇酸的聚合物可在长时间期内释放分子,如长达或超过100天,但某些水凝胶在较短时间期内释放化合物。
化合物和组合物的口服为本发明的一种预期实务。就口服来说,医药组合物可呈固体或液体形式,例如,呈胶囊、锭剂、粉剂、颗粒剂、悬浮液、乳液或溶液的形式。医药组合物优选的是呈包含指定量的活性成分的剂量单位的形式制得。针对于人类或其它脊椎动物的适合的日剂量可广泛地改变,取决于患者的病况和其它因素,但可由所属领域的一般技术人员利用例程方法来确定。
在固体剂型中,可将活性化合物与至少一种如蔗糖、乳糖、或淀粉的惰性稀释剂混合。这类剂型还可包括如一般实务的额外物质,例如,润滑剂,如硬脂酸镁。就胶囊、锭剂和丸剂来说,这些剂型还可包含缓冲剂。锭剂和丸剂可另外制成具有肠衣。
可将化合物或组合物与如以下的佐剂混合:乳糖、蔗糖、淀粉粉末、烷酸的纤维素酯、硬脂酸、滑石、硬脂酸镁、氧化镁、磷酸和硫酸的钠盐和钙盐、阿拉伯胶、明胶、藻酸钠、聚乙烯-吡咯烷酮和/或聚乙烯醇,和经压锭或囊封供常用投与。或者,可将其溶解于盐水、水、聚乙二醇、丙二醇、乙醇、油(如玉米油、落花生油、棉籽油或芝麻油)、黄蓍胶和/或各种缓冲剂中。医药技术中已知其它佐剂和投药方式。载剂或稀释剂可包括时间延迟物质,如单独或与蜡或相关领域中已知的其它物质一起的单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
本发明进一步包括一种以文中的化合物、组合物和方法于活体外许多应用中的用途和应用,所述应用包括(但不限于)开发抗病毒感染的疗法和疫苗、关于调节真核细胞中先天免疫反应的研究等等。本发明的化合物、组合物和方法还可用于动物模型中。本发明的化合物、组合物和方法的所述活体外和动物活体内用途的结果可例如告知其于人类中的活体内用途,或其可是有价值地而无关任何人类治疗性或预防性用途。
实例
以下实例描述示范性化合物的抗病毒和药理学性质。包括所述实例以证实本发明的特定实施例。所属领域的一般技术人员应了解实例中所公开的技术代表发明者发现在本发明的实务中可很好地发挥作用的技术和组合物,且借此可被视为是构成针对于其实务的优选的模式。然而,根据本发明,所属领域的一般技术人员应明白可对公开的具体实施例做出许多改变但仍可在不脱离本发明的精神和范围下实现类似或相似结果。例如,下述实例提供用于测试本发明的化合物的活体外方法。其它活体外病毒感染模型包括(但不限于)黄病毒属(flaviviruse)(如牛腹泻病毒、西尼罗河病毒和GBV-C病毒)、其它RNA病毒(如呼吸道融合病毒)和HCV复制系统。另外,胜任于病毒复制的任何适合的培养细胞可用于抗病毒试验中。
实例1.KIN1000的生物活性
鉴别活性化合物的荧光素酶试验。接种经与RIG-I回应性启动子(IFNβ、ISG56、或ISG54启动子)偶联的荧光素酶报导子基因稳定转染的培养人类细胞并且允许生长过夜。接着添加化合物“KIN1000”并且在KIN1000的存在下使所述细胞生长18到20小时。添加荧光素酶受质(派美雅(Promega))并且在照度计(伯托(Berthold))上读取发光。
图1A显示如文中所描述的KIN1000通过证实与针对于IFNβ(“IFNβ-LUC”,左侧)、ISG56(“ISG56-LUC”,中心)和ISG54(“ISG54-LUC”,右侧)的启动子偶联的荧光素酶报导子基因的剂量依赖性诱导得以验证。另外,KIN1000不诱导非特异性启动子(β-肌动蛋白-LUC,图1B)。
测定细胞毒性的MTS试验。利用于培养基中稀释的增加量的化合物或相当量的二甲亚砜(DMSO)处理培养的人类海拉细胞48小时以观测其对细胞存活率的效应。利用测定活细胞中四唑鎓化合物[3-(4,5-二甲基-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺基苯基)-2H-四唑鎓,内盐;或MTS]转化成着色甲臜化合物的转化率的细胞存活率试验,计算活细胞的比例。
在96-孔微量滴定盘读取器中检测MTS转化成甲臜的转化率,且所得光学密度经直接绘成曲线以估计细胞存活率。如制造商方案所提议,CELLTITER水性单溶液细胞增生检测(派美雅)为所使用的一步法试剂,和于进行光学密度(OD)读取之前在试剂的存在下培养所述细胞三小时。在包含0.5%DMSO的培养基中将化合物稀释达0、1、5、10和20μM的最终浓度。阴性对照组孔不含化合物,且使用10%DMSO检查针对于细胞毒性的阳性对照组。在重复三份的孔中进行各KIN1000浓度和对照组。KIN1000显示对多种细胞类型无细胞毒性(MTS试验,图1C)。
测定IRF-3活化和相对细胞核易位的免疫荧光细胞化学试验。由RIG-I所介导的干扰素刺激基因(ISG)表达的诱导是通过IRF-3转绿因子的磷酸化、二聚化和细胞核易位赋予。利用于培养基中稀释的增加量的化合物或相当量的DMSO处理培养的人类海拉细胞20小时。利用100HA/mL仙台病毒感染阳性对照组孔达一段相当时间。使用对IRF-3具特异性的多株兔血清和共轭到曙光488(皮尔斯生物技术公司(PierceBiotechnology,Inc))的二级抗体检测IRF-3。KIN1000显示IRF-3的细胞核-细胞质差剂量依赖性增加(图2A)。
测定NFκB活化的免疫荧光细胞化学试验。取决于RIG-I的先天免疫反应还活化NFκB转绿因子且借此增加细胞核水平。通过于培养基中稀释的增加量的化合物或相当量的DMSO处理培养人类海拉细胞20小时。利用100HA/mL仙台病毒感染阳性对照组孔达一段相当时间。使用对NFκB的p65子单元具特异性的单株小鼠抗体和共轭到488的二级抗体检测NFκB。
免疫荧光量化试验。使用阵列扫描(ARRAYSCAN)TM仪器和软件(赛罗米公司(Cellomics,Inc.))扫描并且量化包含经化合物处理并且经针对IRF-3或NFκB中任一者染色的培养人类细胞的96-孔盘。转录因子的活化通过针对细胞质强度正规化的细胞核强度、或细胞核-细胞质差的增加得到证实。KIN1000显示NFκB的细胞核-细胞质差剂量依赖性增加(图2B)。
还可由本实例中所述的方法来评估如文中所述的其它化合物,和还可使用其它细胞类型。
实例2.KIN1000抗流行性感冒WSN株的抗病毒活性
在受流行性感冒病毒感染之前,利用增加量的KIN1000处理MRC5细胞12到24小时。接着通过细胞中病毒蛋白质的免疫荧光试验量化于引入病毒24小时后的受感染细胞的数量。文中所公开的KIN1000化合物证实抗流行性感冒病毒株WSN的有效活性。图3显示经增加量的KIN1000处理的MRC5细胞显示流行性感冒病毒的感染剂量依赖性减少。
实例3.KIN1000之间接活体内免疫刺激因子活性
检测初级免疫细胞中KIN1000的活性以确定KIN1000是否刺激免疫反应。利用0、1、或10μM KIN1000处理培养的人类初级树突细胞24小时。从经处理的孔分离上清液且测试细胞激素蛋白质水平。使用共轭到磁性珠粒的特异性抗体和与链霉亲和素(Streptavidin)/藻红素(Phycoerythrin)反应二级抗体来检测细胞激素以产生荧光信号。使用麦格皮克斯(路明克斯公司(Luminex Corp.))仪器检测并且量化结合珠粒,然而,可使用相关领域中已知的如例如ELISA的类似技术来测量蛋白质生成。
证实KIN1000诱导由树突细胞表达趋化激素IL-8、MCP-1、MIP-1α和MIP-1β(图4A到D)。
从其可测定细胞激素分泌的其它细胞包括例如(但不限于)人类周边血液单核细胞、人类巨噬细胞、小鼠巨噬细胞、小鼠脾细胞、大鼠胸腺细胞和大鼠脾细胞。
实例4.使用结构-活性相关性(SAR)研究的抗病毒活性和药理学性质
本实例描述针对于效力和无毒性优化化合物。首先,使用小类似物衍生物组以界定结构类别。于此第一阶段中识别的活性类似物接着用于界定受关注结构类别的子组以实现进一步优化(阶段2)。
阶段2聚焦于建立结构多样性和评估核变化形式。于包括一或多种细胞系或周边血液单核细胞中的IRF-3易位、抗病毒活性和细胞毒性的试验中测试结构衍生物的生物活性。显示经改进的效力和低细胞毒性的优化分子进一步由包括毒理学、作用机制、佐剂活性和抗病毒活性的宽度的其它量度进行特征分析。这些特征分析试验述于文中。
为设计类似物结构,分析前驱化合物的通过里宾斯基五规则(Lipinski's Rule of Five)测得的类药物性质、代谢不稳定性和毒性可能性。类似物设计成可提高效力,可最小化毒性,和可提高生物可利用性。化学反应性或容易代谢的结构特征可能指示会导致受限制的稳定性、缩短的半衰期、反应性中间物、或特异体质性毒性的代谢和毒理学责任且因此将被移除。
进行活体外药理学研究以测定最具前景的类似物于肠通透性、代谢稳定性和毒性的一或多个试验中的性能。重要活体外特征研究包括通过利用平衡透析的分割分析(partition analysis)评估的血浆蛋白质结合;人类和模型生物体中的血清、血浆和全血稳定性;通过使用人类TC7上皮细胞系的活体外模型测得的肠通透性;内在清除率;肝微粒体存在下的稳定性;人类Ether-à-go-go(hERG)通道抑制;且包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中的微核形成和鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)株中的致突变性的遗传毒性分析。
就各类似物来说,基于HPLC-和/或HPLC质谱基础上的分析方法用于评估各种测试系统中的药物和代谢产物浓度。虽然具体分析方法是针对各分子优化,但逆相色谱法可单独地或与四极质谱法组合使用以表征若干前驱分子的同一性和纯度。在开始时,通过HPLC评估在取自哺乳动物物种(如小鼠、食蟹猕猴(cynomolgus macaque)和人类)的血清、血浆和全血的增加浓度中的药物经时稳定性,并且测定半衰期。
实例5.通过KIN1000和衍生化合物活化基因表达
利用化合物或化合物的DMSO对照组(20μM、10μM、5μM的海拉细胞;10μM、5μM或1μM的PH5CH8细胞;10μM或1μM的HUVEC细胞)或DMSO对照组处理培养的细胞并且培养长达24小时。解冻HUVEC(人类脐带血内皮细胞)初级细胞并且以2.4×104个细胞/孔接种于6-孔盘中然后允许生长实现80%汇合度,通常使用前需培养5天,每隔48小时更换新制培养基。收获所述细胞并且使用QIA施莱德(QIAshredder)管柱和迷你套组(凯杰(Qiagen))依照制造商使用说明单离RNA。进行逆转录并且将cDNA模板用于定量实时PCR。利用市售经验证的塔蒙基因表达检测(应用生物系统/生命科技(Applied Biosystems/Life Technologies))依照制造商使用说明进行PCR反应。利用相对表达分析(ΔΔCt)测量基因的表达水平。
图5显示通过KIN1000和其衍生化合物KIN1148诱导的基因表达。图5A显示经10μM KIN1000(灰色)或10μM KIN1148(黑色)处理4到24小时后海拉细胞中的IFIT2(左侧)和OAS1(右侧)基因的表达水平。图5B显示经KIN1000(实心灰色条)或KIN1148(实心黑色条)处理的PH5CH8细胞(左侧)中和经KIN1000(灰条带花纹条)或KIN1148(黑格子花纹条)处理的海拉细胞(右侧)中的IFIT2基因的表达水平。于各测试组中,三个垂直条分别代表5、10和20μM化合物(KIN1000或KIN1148)。图5C显示经1μM KIN1000(灰色)或1μM KIN1148(黑色)处理的初级HUVEC细胞中IFIT2(左侧)、OAS1(中间)和MxA(右侧)基因的表达水平。轴标度的差证实化合物显示初级细胞类型中的效力的增加。所述资料证明化合物通过诱导响应性基因于细胞中呈现活性。
可类似地在包括(不限于)以下的细胞类型中检测基因表达:初级血液单核细胞、人类巨噬细胞、THP-1细胞、Huh 7细胞、A549细胞、MRC5细胞、大鼠脾细胞、大鼠胸腺细胞、小鼠巨噬细胞、小鼠脾细胞和小鼠胸腺细胞。其它基因的表达可如文中所述进行检测。
实例6.KIN1000抗各种病毒的抗病毒活性
为进一步表征优化分子的抗病毒活性的宽度,使用细胞培养感染模型以分析不同病毒,包括(但不限于)流行性感冒病毒、HCV、登革热病毒、RSV和WNV的不同株。所述研究包括在感染前2到24小时利用化合物处理细胞或在感染长达8小时后处理细胞。评估病毒产生和细胞的ISG表达一段时程以分析前驱结构类别的代表性化合物的抗病毒效应。使用IFNβ处理作为阳性对照组。
通过病灶形成(focus-forming)或斑点(plaque)试验测量病毒产生。于平行实验中,通过qPCR和免疫墨点(immunoblot)分析法测量病毒RNA和细胞ISG表达。这些实验设计成可验证病毒感染期间的化合物信号作用,和可评估引导抗各种病毒株的先天免疫抗病毒程序和在设定病毒反制措施(countermeasure)中的化合物的作用。在各病毒感染系统中进行各化合物的具体剂量-反应分析以测定处理前和处理后感染模型二者的相对于对照组细胞抑制病毒产生50%(IC50)和90%(IC90)的有效剂量。
表2.针对于前驱化合物的抗病毒分析的病毒系统和研究设计
实例7.KIN1000和衍生化合物抗呼吸道融合病毒的活性
在前一天于6-孔盘中以4×105个细胞/孔接种海拉细胞。第二天,改由以0.1的感染倍率(MOI)含RSV不含FBS的培养基更换培养基。于37℃下发生病毒结合历时2小时。于2小时后,利用温热的完全培养基洗涤所述细胞并且改由含10μM、5μM、1μM的不同浓度的化合物或DMSO对照组的培养基更换。将所述细胞置于37℃培养箱中达48小时。
关于病毒检测和滴定,在收集病毒上清液前24小时以8×103个细胞/孔将海拉细胞接种于96-孔盘中。于48小时培养时段后,收获取自受感染盘的病毒上清液并且以1/10最终稀释度用于感染这些细胞。将所述细胞置于37℃培养箱中达24小时。
在感染后24小时,利用PBS洗涤所述细胞两次并且利用甲醇/丙酮溶液固定。在固定之后,利用PBS洗涤所述细胞两次并且改由阻断缓冲液(10%马血清、1g/mL BSA和0.1%Triton-100X含于PBS中)更换,持续1小时。于室温下阻断缓冲液改由包含1/2000稀释度的初级抗体的结合缓冲液更换,持续2小时。初级抗体为抗RSV的小鼠单株抗体。利用PBS洗涤所述细胞两次并且于室温下改由包含1/3000稀释度的亚莉克莎荧石-488(Alexa Fluor-488)山羊抗小鼠二级抗体和赫斯特(Hoechst)核染色的结合缓冲液更换,持续1小时。利用PBS洗涤所述细胞两次并且添加PBS到所有孔。密封96-孔盘并且使用阵列扫描(ARRAYSCAN)TM仪器通过免疫荧光试验确定与病毒感染力相关联的荧光活性。
图6显示使用本实例的方案进行的实验,证实KIN1000和KIN1148抗呼吸道融合病毒的抗病毒活性。图6A显示经增加量的KIN1000和KIN1148处理的海拉细胞呈现受RSV感染的剂量依赖性减少。图6B显示在感染长达24小时前添加药物的情况下,KIN1148呈现抗RSV的抗病毒活性。
为评估感染前利用化合物的处理,在感染病毒前于不同时间点添加所述化合物。病毒检测和滴定是如所述进行。
抗RSV的抗病毒活性是用为测量K-1000的结构衍生物的活性的标准。表3显示呈现抗RSV的抗病毒活性的所选KIN1000的结构衍生物。与KIN1000母体化合物相比,所述类似物显示抗RSV的抗病毒活性的不同水平。+++=大于70%感染抑制,++=大于50%抑制,+=大于30%抑制,-=小于30%抑制。
表3.
实例8.KIN1000和衍生化合物抗A型流行性感冒/乌隆/72病毒的活性
H292细胞的A型流行性感冒/乌隆/72感染。利用含于0.5%DMSO最终浓度中的2μM KIN1148处理含于RPMI1640+10%FCS中的2×106个H292细胞6小时。抽出含化合物培养基并且改由以0.1的MOI包含A型/乌隆/72的1×MEM更换然后于37℃下置于CO2培养箱中。于感染后两小时,抽出含病毒培养基并且改由包含1μg/mL经TPCK处理的胰蛋白酶、2μM KIN1148、0.5%DMSO的1×MEM更换。将所述细胞置于37℃CO2培养箱中维持18小时。于后感染20小时后,收集病毒上清液并且针对于MDCK细胞效价化。
HEK293细胞的A型流行性感冒/乌隆/72感染。通过以0.2的MOI含于1×MEM中的A/乌隆/72感染5×105个HEK293细胞。于后感染2小时后,抽出含病毒培养基并且改由包含1μg/mL的经TPCK处理的胰蛋白酶、10μM KIN1148、0.5%DMSO的1×MEM更换。将所述细胞返送到37℃CO2培养箱中维持18小时。于后感染20小时后,收集病毒上清液并且针对于MDCK细胞效价化。
在MDCK细胞中的效价。在2μg/mL TPCK-胰蛋白酶的存在下将10μL受感染上清液添加到2×106个MDCK细胞且置于37℃CO2培养箱中。于8小时后,移去上清液并且利用对流行性感冒核蛋白(NP)具特异性的FITC共轭抗体固定并染色所述细胞。使用阵列扫描(ARRAYSCAN)TM仪器和软件定量变异区(foci)的数量。
图7显示KIN1148抗A型流行性感冒病毒乌隆/72的抗病毒活性。经2uM(H292)或10uM(HEK293)KIN1148处理的H292细胞(左侧)和HEK293细胞(右侧)显示受病毒感染有所减少。
实例9.KIN1000和衍生化合物抗登革热病毒的活性
在Huh 7细胞中的效价。以4×105个细胞/孔将Huh 7细胞接种于6-孔盘中。第二天,改由以0.25的MOI含2型登革热病毒不含FBS的培养基更换。于37℃下发生病毒结合历时1小时。于1小时后,利用温热的完全培养基洗涤所述细胞并且改由包含10μM、5μM、1μM的不同浓度的KIN1148或DMSO对照组的培养基更换。将所述细胞置于37℃培养箱中维持48小时。
在Vero细胞中的效价。在收集病毒上清液前24小时以8×103个细胞/孔将Vero细胞接种于96-孔盘中。于48小时后,收获病毒上清液并且以1/100最总稀释度用于感染Vero细胞。
在感染后24小时,利用PBS洗涤Vero细胞两次并且利用甲醇/丙酮固定15分钟。在固定之后,利用PBS洗涤所述细胞两次并且用阻断缓冲液更换,持续30到45分钟。阻断缓冲液用包含1/2000稀释度的靶向包膜蛋白的初级单株抗体的结合缓冲液更换,持续2小时。2小时后,利用PBS洗涤所述细胞两次并且用包含1/3000稀释度的亚莉克莎荧石-488山羊抗小鼠二级抗体和赫斯特细胞核染色的结合缓冲液更换,持续45分钟。在45分钟后,利用PBS洗涤所述细胞两次并且将PBS添加到所有孔。密封96-孔盘并且使用ARRAYSCANTM仪器和软件通过基于免疫荧光的试验来测定定与病毒感染力相关联的荧光活性。
图8显示利用本实例的方案进行的实验的结果,证实KIN1148抗2型登革热病毒的抗病毒活性。经增加量的KIN1148处理的Huh 7细胞显示病毒感染的剂量依赖性减少。
在单独实验中,在前一天以4×105个细胞/孔将Huh 7细胞接种于6-孔盘中。第二天,培养基用以0.1的MOI不含FBS的存于培养基中的2型登革热病毒更换。于37℃下发生病毒结合持续2小时。于2小时后,利用温热的完全培养基洗涤所述细胞并且用包含5μM、2.5μM、1.2μM、0.6μM不同浓度的化合物、或DMSO对照组的培养基更换。将所述细胞置于37℃培养箱中维持48小时。如前面所述分析效价。
图9显示如所述进行的本实验的结果,证实化合物KIN1311和KIN1054均具有抗2型登革热病毒的剂量依赖性抗病毒活性。
在一评估添加时间对抗病毒活性的效应的实验中,类似于Huh 7细胞感染THP-1细胞。在感染后24小时时,添加5μM、1μM、0.5μM、0.25μM浓度的化合物、或DMSO对照组。
图10显示使用THP-1细胞进行的本实验的结果。图10A显示在感染后24小时投与给细胞的情况下,KIN1148和KIN1160呈现抗登革热病毒的抗病毒活性。KIN1160显示于0.25μM到5μM下剂量依赖性抑制登革热病毒。图10B显示KIN1148和KIN1160均会诱导THP-1细胞中抗病毒基因IFIT2和OASL的表达。
实例10.KIN1000和衍生化合物抗B型肝炎病毒的活性
在化合物(1μM到10μM的浓度含于0.5%DMSO培养基中)的存在下使HepAD38细胞(表达经调节的HBV基因组的Hep 2细胞)生长72小时。不表达HBV的HepAD38细胞用为阴性对照组。在处理72小时后,在ELISA中使用100μL培养基以测量HBV表面抗原。通过ELISA市售HBV sAg ELISA(创新诊断学(Creative Diagnostics))测量上清液中由细胞产生的HBV表面抗原的量。
图11显示利用本实例的方案进行的实验的结果,证实KIN1148抗B型肝炎病毒的抗病毒活性。经增加量的KIN1148处理的HepAD38细胞显示上清液中病毒水平剂量依赖性减低。
实例11.KIN1000和衍生化合物抗人类冠状病毒的活性
使HCoV-OC43人类冠状病毒结合到培养的MRC5细胞,持续3小时。于3小时后,利用温热的完全培养基洗涤所述细胞并且改由包含5μM、1μM、0.5μM不同浓度的化合物、或DMSO对照组的培养基更换。将所述细胞置于37℃培养箱中维持5天。于5天后,收集病毒上清液并且于感染后48小时的Huh 7细胞中效价化。如上述分析病毒效价。
图12显示利用本实例的方案进行的实验的结果,证实KIN1160抗人类冠状病毒的抗病毒活性。KIN1160显示抗人类冠状病毒的剂量依赖性抗病毒活性。
实例12.相关临床前动物模型中优化前驱药物的活体内药物动力学、毒理学和抗病毒性质
评估KIN1000和相关化合物的活体内药物动力学(PK)概况和耐受性/毒性以进行其病毒感染的动物模型中的抗病毒活性的进一步表征。利用逆相HPLC-MS/MS检测方法来测定小鼠血浆中各化合物的浓度。在PK概况分析之前,使用主要聚焦于跨小数目的贮藏条件最大化水溶解性和稳定性的受限制配方组分筛选,得到各化合物的初始口服且可注射配方。相关领域中已知的任何分析方法可用于测量配方性能。遵循三层策略(threetiered strategy),形成各化合物的配方:
层1:pH值(pH 3到9),缓冲液,和渗透压调整
层2:添加乙醇(<10%)、丙二醇(<40%)、或聚乙二醇(PEG)300或400(<60%)共溶剂以提高溶解度
层3:任选地添加N-N-二甲基乙酰胺(DMA,<30%)、N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP,<20%)和/或二甲亚砜(DMSO,<20%)共溶剂或环糊精(<40%)以进一步提高溶解度。
关于在如文中所述的活体外试验中呈现适当性能的化合物,进行初步小鼠PK研究。参见表4。在饥饿过夜之后,各化合物通过口腔强饲(<10mL/kg)或静脉内大量注射(<5mL/kg)呈单剂量投与给动物。对各给药组的多只动物给药,使得可在各时间点取得3只动物样本。在给药前和给药后5、15和30分钟和1、2、4、8和24小时时,通过后眼窝窦采集血样。依照先前开发的生物分析方法测定药物浓度。使用维诺林软件(法赛特(Pharsyght))评估药物动力学参数。
表4
基于探索性PK研究中的性能基础上,于抗病毒模型中化合物的特征分析之前,进一步评估小鼠中化合物的初步耐受性和毒性。分两阶段进行耐受性研究:初始剂量递增阶段(多达5次给药,各次间间隔为期5天的清除期),以确定最大耐受剂量(MTD,1期),接着的七天每天投与MTD一次以评估急性毒性(阶段2)。参见表4。所有给药是通过口腔强饲投与。于一个示范性实验中,每种性别各取五只动物用于阶段1中的研究和每个给药组每种性别各15只动物用于阶段2。研究终点(endpoint)包括MTD、体检、临床观察、血液学、血清化学性和动物体重的测定。大体病理学是针对于不论发现死亡、于极端情况下安乐死、或处在实验的所预期结论的所有动物进行。毒理学研究主要是性质的探索和打算识别早期毒理学终点,和驱动针对于抗病毒动物模型之前驱候选物的选择。
表5.化合物抗病毒作用的活体内研究
*数值反映各实验至少重复两次的平均
使用小鼠感染模型,评估抗病毒性质和免疫保护。基于化合物药物动力学、抗病毒和先天免疫作用的基础上来选择优化化合物以供在临床前小鼠感染模型中的进一步评估。参见表5。
一般研究设计。病毒感染的攻击剂量是从1×测定LD50(中位致死剂量)到50×LD50改变。在整个感染过程(长达2周)内以2种或2种以上剂量水平加上安慰剂对照组每天投与选自KIN1000化合物家族的化合物一次。在病毒感染前长达24小时或在感染后0到24小时之间的时间点开始化合物处理。化合物是以范围从1mg/kg到50mg/kg的剂量投与。化合物是通过包括(但不限于)以下的途径投与:口腔强饲;腹膜内注射、皮下注射、静脉内注射、或肌肉内注射;鼻内或其它粘膜途径。日剂量受化合物的测定的血浆半衰期制约。每种性别和每个处理组取至少5只动物进行终点的评估,包括(但不限于)每日临床观察、死亡率、体重和体温。每种性别取三只动物用于测量血清和包括心脏、肺、肾脏、肝脏和脑的目标器官中的病毒效价。检测在经化合物处理组相对对照组动物中于感染期间多个时间点的细胞激素和先天免疫基因的表达。通过包括病毒或细胞RNA的qPCR、免疫墨点分析和ELISA的试验,在化合物处理后以24小时时间间隔测定病毒负载量、细胞激素水平和先天免疫基因表达水平。进行化合物剂量-反应分析和感染时程研究来评估化合物针对以下的效能:1)限制血清病毒负载量,2)于目标器官中限制病毒复制和扩散,和3)保护免受病毒病理影响。在这些实验的设计中并入在标准病毒攻击之后通过各化合物50%和90%抑制血清病毒负载量的有效剂量(ED50和ED90)的测定。病毒攻击模型包括(但不限于)述于下文的所选择病毒模型。
小鼠WNV模型。进行利用WNV的有毒谱系1株(WNV-TX)皮下注射脚垫感染野生型C57Bl/6小鼠。在攻击剂量的范围内(如,10到1,000pfu病毒)单独地或组合如上所述的化合物处理地监测小鼠的致病率和死亡率。在血清、淋巴结、脾脏和脑中评估病毒负担。使用WNV神经入侵感染模型,测试于ED50和ED90下的化合物针对于限制大脑神经系统中WNV病理的作用。在单独地或组合在感染后24小时开始的化合物处理的1pfu WNV-MAD的标准颅内攻击之后,监测小鼠的致病率和死亡率。
小鼠流行性感冒模型。针对于流行性感冒病毒株A/PR/8/34、A/WSN/33和A/乌隆/72,进行非外科手术气管滴入。用于某些实验的流行性感冒病毒株具有两种不同亚型(H1N1和H3N2)和在C57Bl/6小鼠中呈现不同的病原性性质和临床呈现。如上文所述进行化合物处理。除了血清之外,在目标器官心脏、肺、肾脏、肝脏和脑中评估病毒负担。
小鼠RSV模型。进行呼吸道融合病毒A2长菌株的非外科手术器官滴入。于不会导致细胞病变效应的RSV A2病毒剂量下感染BALB-c小鼠。如上所述进行化合物处理。
小鼠SARS冠状病毒模型。进行小鼠肝炎病毒株2(MHV-1)的非外科手术气管滴入。利用以攻击剂量的MHV-1病毒感染A/J小鼠。如上所述进行化合物处理。
在一测试抗SARS冠状病毒的化合物活性的实验中,在感染MHV-1(500PFU)前24小时开始进行媒剂和化合物的给药并且每天投与一次直到第5天。以50mg/kg/天的剂量经口投与KIN1160。每天称小鼠体重持续10天。体重减轻是测得作为感染的指示。图13显示如所述进行的一个实验的结果。经KIN1160处理的小鼠显示其体重损失与未受感染的小鼠的体重损失和仅经媒剂处理的小鼠相比较小。
实例13.KIN1000、KIN1148和衍生化合物在活体内的佐剂活性
为表征KIN1000和相关化合物的佐剂活性的宽度,使用疫苗接种和疫苗接种加上保护的活体内动物模型。研究包括利用单独或结合抗原的化合物对包括(但不限于)大鼠和小鼠的动物初给疫苗且接着评估佐剂效应。
通过针对于改性、增强的免疫体液和细胞反应的试验,测量佐剂效应。在疫苗接种且/或通过采集血液得到血清并且测定抗体类别(IgM、IgG、IgA或IgE)和/或包括针对于IgG抗体的IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c、IgG3的同型物的相对浓度增强后的离散时间点评估经时体液反应。此外,还测定所产生抗体的亲和性和结合性。于其中疫苗制剂包括化合物和抗原的组合的情况中,还测定所产生抗体的中和活性。
通过在本领域中所建立的方法,包括利用抗原间接活体内刺激周边血液单核细胞、淋巴结、脾细胞或其它二级淋巴器官并且在此后的若干时间点测量上清液中的细胞激素或趋化激素生成,来测定由所述化合物诱导的细胞介导免疫反应。测得的细胞激素包括:包括(但不限于)IFNγ和TNFα的Th1型细胞激素、包括(但不限于)IL-4、IL-10、IL-5和IL-13的Th2型细胞激素和包括(但不限于)IL-17、IL-21和IL-23的Th17细胞激素。还测得因所述化合物引起的趋化激素,包括(但不限于)RANTES、IP-10、MIP1a、MIP1b和IL-8。还可利用经荧光标记的特异性抗体的细胞内细胞激素染色和流式细胞仪或通过ELISPOT,测定细胞激素的T细胞抗原特异性产生。研究CD4+和CD8+T细胞群体二者。
还可通过由流式细胞仪活化的表面标记物的免疫表型,确定于细胞层级的佐剂活性的量度。还可通过穿孔蛋白(perforin)的细胞内细胞激素染色、细胞表面标记物表达或包括胸苷并入的增生试验,评估CD8T细胞抗原-特异性反应。
这些实验设计成可验证在初给疫苗-增强方案的不同组合中的化合物佐剂活性和可评估KIN1000或相关化合物对先天免疫抗病毒程序的效应如何形成配合于疫苗制剂中的抗原的适应免疫反应。
利用各所选抗原进行如上所述各化合物的具体免疫反应分析以确定特定抗原和化合物配方的免疫相关联。这些结果指导其中经疫苗接种且经由所选优化化合物和选自所选感染剂的所期望抗原配方的组合增强的动物稍后利用已知会导致动物的患病或死亡的感染剂剂量进行攻击的保护研究。由疫苗接种所提供的保护通常是通过监测临床症状和存活率来测量。
进行概念实验的证实。在第0天,利用含抗原(卵白蛋白,0.2mg/Kg)和KIN1000(1mg/kg)或KIN1148(1mg/mL)的磷酸盐生理盐水缓冲液(PBS)悬浮液初对10到12周龄LEWIS雌大鼠给疫苗。对照组动物接受含于PBS中的卵白蛋白(OVA,维尔根公司(InvivoGen Inc.))或具有poly I:C的OVA(0.1mg/kg,维尔根公司)。在第2和第8周使动物增强。在脚垫和尾基中经皮下注射递送注射液实现初给疫苗和在脚垫和侧部(flank)经皮下注射递送注射液实现增强(0.025mL/位点)。在初给疫苗后第0周、第1周、第2周、第4周、第6周和第9周通过断尾采血(tail bleed)采集血样并且经处理成血清。使用抗-IgM、抗-IgG和抗-IgG同型物特异性抗体通过ELISA测定OVA特异性抗体的效价。图14显示OVA+KIN1000和OVA+KIN1148疫苗接种的动物中的IgG抗体水平相对仅OVA疫苗接种的对照组。
还可通过测定对抗原(OVA)的迟发型过敏反应(DTH)来测定细胞介导的佐剂活性的量度。于概念实验的相同证实中,通过测定对在第一次增强2周后的利用OVA攻击的迟发型过敏反应来评估细胞反应。通过异氟烷使动物镇静并且分别在左耳和右耳耳廓中注射PBS或OVA(0.02mL含于PBS中的OVA的1mg/mL溶液)。经过24小时后,计算耳厚度的差。图15显示测得的右耳和左耳厚度差。
非活性流行性感冒病毒疫苗模型。利用单剂量(初给疫苗)的1μg非活性全病毒粒子流行性感冒A/波多黎各(Puerto Rico)/8/1934(PR8)或在PBS中的PR8加上100μgKIN1148疫苗接种8到12周龄C57Bl/6小鼠。于初给疫苗3周后利用活小鼠适应的PR8病毒以10×LD50(在30μL PBS中的10,000pfu/小鼠)经鼻内滴入来对经疫苗接种的小鼠和未经处理的对照组进行攻击。到第10天时,安慰剂组的存活率为20%,仅PR8的组的存活率为40%,并且KIN1148/PR8组的存活率为75%,表明经KIN1148/PR8疫苗接种的动物显示较高的保护(图16A)。经KIN1148疫苗接种的动物与仅经抗原或经安慰剂疫苗接种的动物相比在PR8攻击后其体重损失明显更少。佐剂组早于其它组恢复体重(图16B)。在攻击前2天时从经疫苗接种的动物采集得的血清样本的微量中和试验证实在KIN1148佐剂动物中相对在非佐剂对照组中它们的中和对PR8的抗体的效价恒定更高(图16C)。所述相同血清样本还可中和异种H1N1A/布里斯班(Brisbane)/59/2007株(图16D)。
为进一步表征KIN1148的佐剂性质,研究针对于流行性感冒疫苗接种的初给疫苗/增强策略。利用非活性全病毒粒子PR8+/-KIN1148对动物初给疫苗且随后利用额外剂量的含或不含佐剂的PR8增强两周。在增强3周后利用活小鼠适应的PR8病毒以10×LD50(10,000pfu/小鼠含于30μL PBS)经鼻内滴入对所有小鼠进行攻击。经疫苗接种的动物的血清中的总IgG和中和抗体、体重损失和临床评分的量度充当疫苗效能的终点。一般来说,初给疫苗/增强策略会导致所有研究组的保护有所增强。接受非佐剂化疫苗的动物呈现与经疫苗接种的动物相比其体重损失更少;然而,就接受KIN1148佐剂化疫苗的动物来说,体重损失和临床评分均显著改进(图17A)。接受KIN1148的小鼠具有与致死性攻击后增强的保护相关的血清IgG水平的显著增加(图17B)。在初给疫苗2周后所采集的佐剂化动物的血清呈现中和抗体抗PR8的高效价(图17C)和在增强2周后所采集的血清中效价增加(图17D)。
非活性裂解流行性感冒病毒疫苗模型。利用皮下注射单剂量(初给疫苗)的含或不含100μg KIN1148的非活性裂解病毒粒子A型流行性感冒/加州(California)/07/2009(NMYCX-179A)疫苗接种小鼠。于所述研究中,抗原剂量为0.2μg、0.6μg、1.8μg、或5.4μg。在初给疫苗3周后利用活小鼠适应的A型流行性感冒/加州/04/07以5X LD50(1,250pfu/小鼠)经鼻内滴入来对所有小鼠进行攻击。经KIN1148和至少0.6μg抗原疫苗接种的动物与仅经抗原或经安慰剂疫苗接种的动物相比呈现在病毒攻击后其体重损失程度更低。佐剂化组早于其它组恢复体重(图18A)。到攻击后第15天时,经KIN1148疫苗接种的组于所有抗原剂量下的存活率更高,表明经KIN1148/PR8疫苗接种的动物呈现较高的保护(图18B)。
为了表征疫苗投与的替代途径,通过肌肉内注射单剂量(初给疫苗)的含或不含50μgKIN1148的非活性裂解病毒粒子A型流行性感冒/加州/07/2009(CA09)疫苗接种小鼠。于所述研究中,抗原剂量为0.26μg、0.78μg、或2.35μg。在初给疫苗3周后利用活小鼠适应的流行性感冒A/加州/04/07以5X LD50(1,250pfu/1只小鼠)经鼻内滴入对所有小鼠进行攻击。经KIN1148/CA09疫苗接种的动物与仅经抗原或经安慰剂疫苗接种的动物相比显示在病毒攻击后其体重损失程度更低(图19A)。到攻击后第15天时,KIN1148疫苗接种组中于所有抗原剂量下的存活率更高和在经KIN1148和2.35μg抗原疫苗接种的动物中为100%,表明经KIN1148/CA09疫苗接种的动物显示较高的保护(图19B)。接受KIN1148的小鼠具有血清IgG含量的显著增加,其与在致死性攻击后增强的保护相关(图19C)。
佐剂和抗原剂量优化。针对于经KIN1148和/或选自KIN1000化合物家族的其它佐剂化合物调配的各疫苗优化初给疫苗和/或初给疫苗-增强策略。另外,针对各佐剂-疫苗组合确定佐剂化合物的有效剂量;所述剂量可从0.1到100μg/剂量疫苗改变。还将评估经由投与佐剂化疫苗的抗原减量(antigen sparing)的效应。
在投与KIN1148后的注射位点分析。我们检测KIN1000化合物家族的投与是否将在注射位点具有局部效应。取100微克的各化合物经皮下注射到各处理组的4只小鼠中。于注射后第4小时、第24小时和第48小时收获注射位点组织并且均质化。测得与发炎相关的七十种不同细胞激素。包括IL-6、TNFα和IFNγ的促发炎细胞激素的水平与接受注射磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)的媒剂对照组样本相比没有增加。另外,未检测到C反应性蛋白质水平与媒剂对照组样本相比增加。图20显示KIN1148引起趋化激素MIP-1α(图20A)、MIP-1β(图20B)、MIP-2(图20C)、MCP-1(图20D)和MDC(图20E)水平于注射位点处增加。KIN1000还显示趋化激素水平较小效力的增加。这些数据显示KIN1148和相关化合物引起在注射位点处的局部免疫刺激。
测试KIN1148和/或类似物化合物在其它疫苗模型(如抗包括日本脑炎病毒、登革热病毒和西尼罗河病毒的病毒的疫苗)中的佐剂活性。例如,利用含或不含25到100μgKIN1148的全非活性西尼罗河病毒株WNV-TX02疫苗接种小鼠。于初给疫苗两周或三周后,利用至少1,000pfu WNV-TX02对小鼠进行攻击。类似于上述研究评估保护,包括存活率、临床观察和抗体效价。
实例14.具有酰胺电子等排体连接基团的结构的IRF-3活性
合成具有酰胺电子等排体连接结构的式III的抗病毒化合物并且利用如文中所记录的方法测试IRF-3活性。制备具有以下结构的连接基团L的抗病毒化合物并且分析IRF-3活性。结构和活性记录于表6(相对单位)中。所制得的所有结构呈现IRF-3的活性。
表6.连接体类似物的IRF-3活性。
实例15.KIN1148的合成
典型酰胺键形成程序
羰基二咪唑偶合
将0.135g羰基二咪唑添加到含0.15g[1,3]噻唑并[5,4-e][1,3]苯并噻唑-2-胺的10mL无水二噁烷溶液。于60℃下搅拌所述混合物2小时。接着添加0.135g 2-萘胺并且使所述混合物回流5小时。过滤出分离得的固形物,利用水洗涤然后干燥,可得到0.29g粗产物。色谱纯化得到0.025g纯1-萘-2-基-3-[1,3]噻唑并[5,4-e][1,3]苯并咪唑-2-基脲。
酰基氯偶合
将0.078mL噻吩-2-碳酰氯添加到含0.15g 7-甲基[1,3]噻唑并[5,4-g][1,3]苯并噁唑-2-胺的2.5mL无水吡啶悬浮液。于80℃下搅拌所述反应5小时接着冷却到室温。添加4mL水然后过滤出沉淀,利用水洗涤然后干燥,可得到0.154g N-(7-甲基[1,3]噻唑并[5,4-g][1,3]苯并噁唑-2-基)噻吩-2-甲酰胺。
HATU偶合
在50℃下,搅拌含于9mL无水THF中的0.1g[1,3]噻唑并[5,4-e][1,3]苯并噻唑-2-胺、0.094g吡唑并[1,5-a]吡啶-2-羧酸、0.275g HATU和0.156g DIEA的混合物8小时。利用水稀释所述混合物并且从甲醇/DMF再结晶沉淀,可得到0.07g N-([1,3]噻唑并[5,4-e][1,3]苯并噻唑-2-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-2-甲酰胺。
三环骨架的实例
骨架的合成
骨架A
[1,3]噻唑并[5,4-e][1,3]苯并噻唑-2-胺
使含1g(0.00665mol)市售6-氨基苯并噻唑、1.52g(0.02mol)硫氰酸铵的30mL冰乙酸悬浮液冷却到15℃并且逐滴添加0.33mL(0.00665mol)溴。使所述混合物于室温下搅拌过夜。过滤出沉淀,利用乙酸和水洗涤,接着溶解于50mL热水中并且经过滤以移除不溶性杂质。利用乙酸钠中和滤液,冷却然后过滤沉淀,利用水洗涤,然后干燥,可得到0.89g(65%)[1,3]噻唑并[5,4-e][1,3]苯并噻唑-2-胺。MH+208。
7-甲基[1,3]噻唑并[5,4-e][1,3]苯并噻唑-2-胺
将3g(0.0183mol)市售胺溶解于70ml乙酸中,伴随搅拌下添加4.17g(0.0548mol)硫氰酸铵。接着,于低于15℃的温度下,逐滴添加2.9g(0.0183mol)溴。于室温下持续搅拌直到工作日结束,然后放置过夜。
1-甲基-3-(2-甲基-1,3-苯并噻唑-5-基)硫脲
逐滴地利用异硫氰酸甲酯(1.07g,0.0146mol)处理含于30ml乙醇中的2-甲基-1,3-苯并噻唑-5-胺(2g,0.012mol)和2滴三乙胺并回流2小时。于冷却之后,过滤出沉淀,利用乙醇洗涤,然后干燥,可得到2.1g产物。
N,7-二甲基[1,3]噻唑并[5,4-e][1,3]苯并噻唑-2-胺
在20到25℃下,将0.34g(0.0021mol)溴逐滴添加到经搅拌的含0.5g(0.0021mol)硫脲的15ml无水氯仿悬浮液。于强力搅拌下加热所述反应6小时。过滤沉淀,利用氯仿洗涤并干燥。将固形物溶解于20ml热水中然后过滤出不溶性杂质。通过氨水处理热滤液,使得所述溶液达到pH 9。在冷却到室温之后,过滤沉淀,利用水洗涤,然后干燥,可得到0.3g产物。
骨架B
将0.6g市售5-叠氮基-2-甲基-1,3-苯并噻唑和5g乙酸加热达100℃维持20分钟。蒸发并且管柱色谱纯化残余物,可得到0.43g N-(4-羟基-2-甲基-1,3-苯并噻唑-5-基)乙酰胺。
取0.4g乙酰胺以2mL浓HCl处理。进行蒸发,可提供0.38g呈二-HCl盐的5-氨基-2-甲基-1,3-苯并噻唑-4-醇。
将0.08mL溴接着0.12g KCN分小份添加到已冷却到0℃的5mL 3:4甲醇:水溶液的溶液。当溴颜色褪去时,将溴化氰溶液添加到含于20mL水和0.252g碳酸氢钠中的0.38g胺二盐酸盐并且让反应过夜。过滤所述反应并且利用碳酸氢钠处理滤液然后在真空下浓缩。将残余物溶解于乙醇中然后过滤溶液。将滤液浓缩为残余物,所述残余物通过色谱法纯化,可得到0.14g 7-甲基[1,3]噻唑并[5,4-g][1,3]苯并噁唑-2-胺。
骨架C
遵循用于制备骨架A的一般程序,利用1.55g(0.02mol)硫氰酸铵处理已溶于30ml乙酸中的1g(0.0067mol)市售胺。在低于15℃的温度下,添加1.07g(0.0067mol)溴然后在室温下搅拌所述反应物。进行处理,可提供7-甲基-6H-咪唑并[4,5-g][1,3]苯并噻唑-2-胺。NMR 2.73(s,3H),7.53(d,1H),7.46(s,1H),MH+205。
骨架D
2-甲基-1,3-苯并噁唑-5-胺
利用0.8g Pd/C催化剂,在室温和3大气压的氢压力下还原含于100ml无水甲醇中的7.5g(0.042mol)硝基化合物。过滤出催化剂且将滤液蒸发为干燥,从己烷:醚(4:1)使残余物结晶,可得到5.1g 2-甲基-1,3-苯并噁唑-5-胺。
2-甲基[1,3]噻唑并[5,4-e][1,3]苯并噁唑-7-胺
遵循制备骨架A的一般程序,利用2.31g(0.03mol)硫氰酸铵处理含1.5g(0.01mol)胺的30mL冰乙酸溶液,接着在低于15℃的温度下逐滴添加1.62g溴,形成1.0g环化产物。
骨架E
N-(2,1,3-苯并噻二唑-4-基)乙酰胺
将3.38g(0.033mol)乙酸酐添加到含5g(0.033mol)市售2,1,3-苯并噻二唑-4-胺的50ml无水甲苯溶液。使所述混合物回流两小时,蒸发为干燥,然后利用醚洗涤沉淀然后干燥,可得到5.5g产物。
N-(2,1,3-苯并噻二唑-4-基)乙硫酰胺
将0.7g(0.0016mol)五硫化磷添加到含1.9g(0.0098mol)酰胺的20ml无水甲苯溶液且在110℃下加热1.5小时。从油性残余物倾析反应溶液且在真空中蒸发为干燥。将20ml10%NaOH溶液添加到所述残余物。沉淀溶解,然后过滤所得溶液。伴随搅拌下将乙酸添加到滤液。过滤出沉淀,利用水洗涤并干燥,得到1.2g产物。
7-甲基[1,3]噻唑并[4,5-e][2,1,3]苯并噻二唑
将含3g(0.0143mol)硫代乙酰胺的66ml 4%氢氧化钠溶液的溶液逐滴添加到5℃已冷却的含4.72g(0.0143mol)氰铁酸钾的60ml水溶液。于室温下搅拌所述混合物1小时。过滤出沉淀,利用水洗涤,然后干燥,可得到1.4g产物。
2-甲基-1,3-苯并噻唑-4,5-二胺
利用4.8g SnCl2·H2O,在HCl水溶液中还原0.7g起始物质,得到0.95g产物。MH+253。
利用从0.28g溴和0.13g KCN生成的BrCN处理0.5g二胺。得到0.17g产物。MH+205。
骨架F
以7-甲基[1,3]噻唑并[4,5-g][1,3]苯并噻唑-2-胺市售。
骨架G
使25g市售N-(2-甲基-1,3-苯并噻唑-5-基)乙酰胺和14.4mL乙酸酐的溶液在50mL无水吡啶中沸腾2小时。使所述混合物冷却且添加水以沉淀产物,过滤出所述产物,利用水洗涤,然后干燥,可提供28.9g N-(2-甲基-1,3-苯并噻唑-5-基)乙酰胺。
利用69.6g硝酸钾历时0.5小时处理含于200mL硫酸中的28.4g酰胺,维持反应温度在0与5℃之间。再搅拌所述反应0.5小时接着倾入到冰上且利用氢氧化铵中和为pH 7。过滤固形物,利用水洗涤,然后干燥,可得到23g呈异构体混合物形式的产物,通过管柱色谱分离所述产物,可提供N-(2-甲基-4-硝基-1,3-苯并噻唑-5-基)乙酰胺。
在39mL浓HCl中水解7.8g N-(2-甲基-4-硝基-1,3-苯并噻唑-5-基)乙酰胺以得到6.35g 2-甲基-4-硝基-1,3-苯并噻唑-5-胺。
使5.5g 2-甲基-4-硝基-1,3-苯并噻唑-5-胺溶解于32mL硫酸中并且利用1.87gNaNO2处理。添加含4.23g FeSO4*7H2O的10mL水溶液。进行处理可提供1.3g 2-甲基-4-硝基-1,3-苯并噻唑。
于0.13g Pd/C催化剂上,在150mL甲醇中氢化1.27g 2-甲基-4-硝基-1,3-苯并噻唑。进行过滤并且蒸发可提供0.94g 2-甲基-1,3-苯并噻唑-4-胺。
利用0.7g硫氰酸铵处理含于9mL乙酸中的0.5g胺中间物,接着维持温度低于15℃,逐滴添加9.5g液体溴。让所述反应混合物搅拌过夜。利用乙酸洗涤沉淀接着溶解于水中然后过滤。中和滤液可得到呈沉淀(0.35g)的7-甲基[1,3]噻唑并[4,5-e][1,3]苯并噻唑-2-胺。
骨架H
使19.8g市售3-硝基苯胺与13.6mL乙酸酐在甲苯中一起沸腾2小时。于冷却所述反应混合物之后,过滤出固形物,利用甲苯洗涤然后干燥,可得到17.1g N-(3-硝基苯基)乙酰胺。
使12.5g酰胺和5.14g P4S10的混合物在125mL甲苯中加热2小时,接着蒸发为任何油性产物。利用NaOH处理所述物质然后过滤,得到7.2g N-(3-硝基苯基)乙硫酰胺。
利用20.8g氰铁酸钾处理含于158mL 4%NaOH溶液中的6.2g硫代酰胺的混合物。固形物消失并且形成新的沉淀。再搅拌所述反应1小时。进行处理可提供4.9g 2-甲基-7-硝基-1,3-苯并噻唑。
于5atm氢气在30℃下,利用0.11g Pd/C在150mL甲醇中还原1.1g硝基化合物,可得到1.0g 2-甲基-1,3-苯并噻唑-7-胺。
遵循制备骨架G中最后一个步骤的程序,将0.5g 2-甲基-1,3-苯并噻唑-7-胺转化成0.17g 2-甲基[1,3]噻唑并[5,4-e][1,3]苯并噻唑-7-胺。
骨架I
6-氯-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-胺
将7.16g(0.054mol)N-氯琥珀酰亚胺添加到含7g(0.051mol)市售1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-胺的80mL乙腈溶液。使所述混合物回流1小时。在冷却之后,过滤出沉淀,利用水洗涤,然后干燥,得到2.3g产物。NMR 400MHz,DMSO-d6:6.81(s,1)),6.46(s,1),5.87(s,2)
骨架J
1,6-二氢咪唑并[4,5-e]苯并咪唑-2-胺
将0.24ml溴添加到水-甲醇混合物(6mL甲醇和8mL水)且冷却到0℃。小份添加0.32g KCN并且搅拌所述反应物1小时直到溴颜色消褪。使二胺(二-HCl盐)溶解于包含0.76g碳酸氢钠的40mL水中且冷却到0℃。逐滴添加溴化氰的溶液接着留置所述反应过夜。进行过滤以移除固体杂质且利用碳酸氢钠处理滤液然后于真空下浓缩。将50mL乙醇添加到残余物且过滤出无机盐。于真空下浓缩滤液,可得到1.2g粗产物,通过管柱色谱纯化所述粗产物,可得到0.35g产物。MH+174/
骨架K
碘化2-氨基-3,7-二甲基[1,3]噻唑并[5,4-e][1,3]苯并噻唑-3-鎓
使0.5g 7-甲基[1,3]噻唑并[5,4-e][1,3]苯并噻唑-2-胺和0.5mL碘甲烷在50mL乙醇中混合并且维持在25到30℃。通过LCMS监测所述反应且在6天后再添加0.5mL碘甲烷。76天后所述反应完成98%。于减压下蒸发所述混合物为几近干燥。过滤出分离得的固形物,利用乙醇和醚洗涤接着进行干燥,可得到0.75g碘化2-氨基-3,7-二甲基[1,3]噻唑并[5,4-e][1,3]苯并噻唑-3-鎓。
表7.式4的A-L-B连接体的实例
a | -NHCH2- | f | -CH2O- |
b | -C(=O)NH- | g | -CH2S- |
c | -CH2CH2- | h | -SCH2- |
d | -OCH2- | i | -NHSO2- |
e | -CH2NH- | j | -NHC(=O)- |
实例连接体的合成
连接体a
N-(3-溴苄基)[1,3]噻唑并[5,4-e][1,3]苯并噻唑-2-胺
将含于DMF中的市售2-溴-7-甲基[1,3]噻唑并[5,4-e][1,3]苯并噻唑(0.1g)和1-(3-溴苯基)甲胺(0.26g)加热达150℃维持3小时。蒸发所述反应混合物且通过色谱纯化,可提供0.08g胺。
连接体b
N-(萘-2-基)[1,3]噻唑并[5,4-e][1,3]苯并噻唑-2-甲酰胺
于35℃下,使含于乙腈中的酸(0.2g)、2-萘胺(0.09g)、TBTU(0.31g)和二异丙基乙胺(0.18mL)的混合物静置3.5小时。利用碳酸钾水溶液洗涤反应混合物并且浓缩。通过色谱纯化残余物可得到0.052g酰胺产物。
连接体c
N-(1,3-苯并噻唑-5-基)-3-(萘-2-基)丙酰胺
使市售氨基苯并噻唑(0.75g)溶解于包含0.63mL N-甲基吗啉的35mL二氯甲烷中。逐滴添加亚硫酰氯(0.42mL)。于30分钟后,添加1.05g市售3-(萘-2-基)丙酸。于1小时后,蒸发反应混合物并且通过色谱纯化残余物,可提供1.21g酰胺。
N-(1,3-苯并噻唑-5-基)-3-(萘-2-基)丙烷硫代酰胺
使酰胺(1.45g)与劳氏试剂(Lawesson's reagent)(1.06g)在甲苯中于110℃下加热1.5小时。移除溶剂并且通过色谱纯化残余物可提供1.28g硫代酰胺。
2-[2-(萘-2-基)乙基][1,3]噻唑并[5,4-e][1,3]苯并噻唑
使硫代酰胺(0.1g)和AIBN(0.06g)溶解于10mL硝基苯中且加热到180℃维持10小时。通过真空移除溶剂和通过色谱纯化残留混合物,可得到0.082g产物。
连接体d
2-(萘-2-基甲氧基)[1,3]噻唑并[5,4-e][1,3]苯并噻唑
小份将市售萘-2-基甲醇(0.146g)添加到含0.04g氢化钠的25mL无水THF悬浮液以使维持温度低于50℃。添加溴苯并双噻唑(0.25g)且在室温下搅拌所述反应96小时。蒸发溶剂并且通过色谱纯化残余物,可得到0.22g产物。
连接体e
N-([1,3]噻唑并[5,4-e][1,3]苯并噻唑-2-基甲基)萘-2-胺
使市售2-(溴甲基)[1,3]噻唑并[5,4-e][1,3]苯并噻唑(0.142g)和2-萘胺(0.143g)在10mL乙腈中回流2小时。蒸发溶剂并且通过色谱纯化,可提供0.125g产物。
连接体f
2-[(萘-2-基氧基)甲基][1,3]噻唑并[5,4-e][1,3]苯并噻唑
在具有0.051g碳酸钾的15mL乙腈中,将市售2-(溴甲基)[1,3]噻唑并[5,4-e][1,3]苯并噻唑(0.1g)和市售萘-2-醇(0.053g)加热为回流维持2小时。蒸发固形物并且通过色谱纯化,得到0.027g醚产物。
连接体g
2-[(萘-2-基硫基)甲基][1,3]噻唑并[5,4-e][1,3]苯并噻唑
在含0.51mL 2N氢氧化钠溶液的乙醇中将市售2-(溴甲基)[1,3]噻唑并[5,4-e][1,3]苯并噻唑(0.29g)和萘-2-硫醇(0.163g)混合10小时。蒸发所述混合物并且通过色谱纯化,可提供0.14g硫醚产物。
连接体h
2-溴[1,3]噻唑并[5,4-e][1,3]苯并噻唑
使含于无水DMF中的[1,3]噻唑并[5,4-e][1,3]苯并噻唑-2-胺(0.8g)和溴化铜(II)(1.73g)的混合物冷却到-5℃并且添加亚硝酸异戊酯(0.874mL)。于24小时后,利用水稀释所述反应混合物且通过二氯甲烷萃取。蒸发溶剂并且进行纯化得到0.53g产物。
2-[(萘-2-基甲基)硫基][1,3]噻唑并[5,4-e][1,3]苯并噻唑
将萘-2-基甲烷硫醇(0.28g)添加到含0.071g氢化钠的35mL无水THF悬浮液,维持温度在50到60℃之间。添加2-溴[1,3]噻唑并[5,4-e][1,3]苯并噻唑(0.39g含于5mL THF中)并且搅拌所述反应混合物24小时。蒸发溶剂并且纯化残余物可提供0.4g硫醚。
连接体I
N-([1,3]噻唑并[5,4-e][1,3]苯并噻唑-2-基)萘-2-磺酰胺
在2mL无水吡啶中将[1,3]噻唑并[5,4-e][1,3]苯并噻唑-2-胺(0.02g)和市售萘-2-磺酰氯(0.024g)的溶液加热2小时。于真空下使所述混合物实现干燥并且通过色谱纯化,可提供0.007g磺酰胺。
3-溴-N-([1,3]噻唑并[5,4-e][1,3]苯并噻唑-2-基)苯甲酰胺(KIN1062)
遵循使用酰基氯的酰胺形成的一般程序,使0.1g(0.00048mol)胺和0.106g(0.00048mol)3-溴苯甲酰氯反应,可提供1.5g产物。MH+391。
化合物的其它实例
N-([1,3]噻唑并[5,4-e][1,3]苯并噻唑-2-基)萘-2-甲酰胺(KIN1148)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.3(bs,NH),8.87(s,1H),8.22(d,2H),8.10(t,2H),8.04(d,1H),7.92(d,1H),7.67(m,2H)。MH+362
3-溴-N-(7-甲基-6H-咪唑并[4,5-g][1,3]苯并噻唑-2-基)苯甲酰胺(KIN1080)
将0.097g(0.00044mol)氯化物添加到已溶于3ml无水吡啶中的0.1g(0.00049mol)胺并且回流2小时。冷却到室温并且添加4ml水。过滤出沉淀,利用水洗涤然后干燥。产量:0.105g(55%)MS MH+双峰387、389。
3,4-二氯-N-([1,3]噻唑并[5,4-e][1,3]苯并噻唑-2-基)苯甲酰胺
将0.193g(0.0006mol)TBTU和0.09g(0.00068mol)DIPEA添加到含于10ml无水乙腈中的0.1g(0.00052mol)酸,并且在50℃下加热0.5小时。接着添加0.109g(0.00052mol)胺并且沸腾5小时。过滤出沉淀,利用乙腈洗涤然后干燥。产量:0.115g。(58%)。
2-甲基-5-硝基-1,3-苯并噁唑
将7.3g(0.071mol)乙酸酐添加到含于200ml无水甲苯中的11g(0.071mol)2-氨基-4-硝基苯酚并且回流1小时。接着添加2.72g(0.0143mol)对甲苯磺酸并且利用迪恩-斯达克分离器(Dean-Stark trap)沸腾5小时。过滤所述热溶液。允许滤液冷却过夜。过滤出物质,利用无水甲苯洗涤,并且在水泵真空中于25℃下干燥4小时。产量:8g
3-溴-N-(2-甲基[1,3]噻唑并[5,4-e][1,3]苯并噁唑-7-基)苯甲酰胺
将0.107g(0.00049mol)3-溴苯甲酰氯添加到含0.1g(0.00049mol)胺的3ml无水吡啶溶液并且回流2小时。冷却到室温,并且添加4ml水。过滤所得沉淀,利用水、醚洗涤并且在水泵真空中于30到35℃的温度下干燥。产量:0.1g酰胺。
N-[(6-氯-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)胺甲酰硫基]苯甲酰胺
将3.2g(0.023mol)苯甲酰氯逐滴添加到含于40ml丙酮中的1.88g(0.025mol)无水硫氰酸铵。将所得混合物加热为回流。移去加热并且以一定速率添加含3.8g(0.022mol)胺的15ml无水丙酮溶液以维持所述混合物沸腾。又在15分钟回流之后,使所述反应冷却并且过滤出沉淀。利用丙酮洗涤沉淀然后干燥,可得到5.5g产物。
1-(6-氯-1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)硫脲
将20ml 10%氢氧化钠溶液加热达90到95℃。添加硫脲(5.4g,0.017mol)并且维持所述反应物在此温度达10分钟。在冷却之后,过滤出沉淀并且通过乙酸酸化滤液达到pH 7。过滤出沉淀,利用水洗涤然后干燥得到2.3g产物。
5-氯[1,3]二氧杂环戊烯[4,5-g][1,3]苯并噻唑-7-胺
将1.53g(0.00095mol)溴逐滴添加到经搅拌的含2.2g(0.00075mol)硫脲的30ml无水氯仿悬浮液(20到25℃)。将所述混合物加热为沸腾且逐渐形成沉淀。过滤出沉淀,利用氯仿洗涤,干燥,然后溶解于热水中然后搅拌并过滤。将沉淀放入氨的稀溶液中,搅拌10分钟,然后过滤,利用水洗涤然后干燥,可得到1.35g产物。
N-[(2E)-3,7-二甲基[1,3]噻唑并[5,4-e][1,3]苯并亚噻唑-2(3H)-基]萘-2-甲酰胺
使骨架K(0.15g)溶解于5mL无水吡啶中然后添加2-萘酰氯(0.083g)。使所述混合物回流3小时并且过滤出分离得的固形物,利用吡啶、水洗涤,然后干燥得到0.025g产物。
表8.包含骨架A的化合物
表9.包含骨架B的化合物
表10.文中所公开的其它化合物
除非另作指明,否则于本说明书和权利要求书中使用的所有表示成分、性质的量,如分子量、反应条件等等的数值于所有情况中应理解为由术语“约”修饰。因此,除非有相反指示,否则述于本说明书和附随权利要求书中的数值参数为可根据本发明寻求得到的期望特性改变的近似值。至少而非尝试限制应用均等论到权利要求书的范围,各数值参数应至少按照所记录的有效数字的个数和通过应用普通舍入法被理解。
尽管描述本发明的宽广范围的数值范围和参数为近似值,然而,述于具体实例中的数值是尽可能精确地记录。然而,任何数值固有地包含由其各次测试测量中存在的标准偏差所必然导致的特定误差。
除非另外于文中指明或内容明显矛盾,否则于描述本发明的上下文中(尤其是在以下权利要求书的上下文中)使用的术语“一”、“一个”、“所述”和类似指示物应被理解为包括单数和复数形式。文中数值范围的引述仅打算用作个别提及落在所述范围中的各别数值的速记方法。除非另外于文中指明,否则各个别数值是并入本说明书中如同其于文中个别地引用般。除非另外于文中指明或者内容明显矛盾,否则述于文中的所有方法可以任何适合的顺序进行。提供于文中的任何和所有实例、或示范性语言(例如,“如”)的使用仅打算更佳地阐述本发明而不会对另作要求保护的本发明范围构成限制。本说明书中的语言不应被理解为表示实施本发明所必需的任何非主张要素。
在文中公开的本发明的替代要素或实施例的分组不应被理解为限制。各组成元可个别地或以与所述组的其它成元或文中出现的其它要素的任何组合方式被提及和要求保护。预期某一组中的一或多个成元可基于方便性和/或专利性原因基础上而包含于所述组、或从所述组删去。当在任何所述并入或删去发生时,认为本说明书包含如经修改的组,借此满足用于附随权利要求书中的所有马库西群组(Markush group)的书面论述。
文中描述本发明的某些实施例,包括发明者已知可用于进行本发明的最优的模式。当然,所属领域的一般技术人员在阅读前述陈述时当可明白基于这些所述实施例基础上的变化形式。发明者预期所属领域的一般技术人员会适合地利用所述所述变化形式,且发明者打算不同于文中明确所述来实施本发明。因此,本发明包括适用法则允许的在本发明附随的权利要求书中所列举主题的所有修改和等效物。除此之外,除非另外于文中指明或者内容明显矛盾,否则本发明包含呈其所有可能变化形式的上述要素的任何组合。
在权利要求书中,利用由……组成或/和基本上由……组成语言,于文中公开的具体实施例可进一步受限。当无论作为申请或每次修正新增地用于权利要求书中时,过渡术语“由……组成”不包含权利要求书中未指明的任何要素、步骤、或成分。过渡术语“基本上由……组成”限制权利要求书的范围到特定材料或步骤然不显著影响基本和新颖特征的那些。文中固有地或明确地描述且可实现如此要求保护的本发明实施例。
应明白在文中公开的本发明实施例是本发明的原理的示范。可使用的其它修改是属于本发明的范围。因此,举例来说,然非限制地,可依照文中的教示使用本发明的替代组态。因此,本发明不限于所精确显示并描述者。
Claims (22)
1.一种由下式表示的化合物
其中虚线指示存在或不存在π键;A与B各自独立为共价单键或共价双键;A-L-B为A-C(=Rx)-NR5-B、A-SO2-NR5-B、A-NR5-SO2-B、A-CH(CF3)-NR5-B、A-NR5-CH(CF3)-B、 A-NR5-C(=Ry)-NR5-B、A-CR2R3-Rx-B、A-O-CR2R3-B、A-S-CR2R3-B、A-C(R2)=C(R3)-B、
其中m与n独立地为0到5的整数使得m+n≥1,
R1为Ra、OR2或NR2R3;
Ra各自独立为H、任选地经取代的烃基、任选地经取代的芳基、或任选地经取代的杂芳基;
R2与R3各自独立为Ra、CORa、C(=O)ORa、或SO2Ra;
Y1、Y2、Y3和Y4各自独立为CR4或N;
Y5、Y6、Y7和Y8各自独立为CR4、N、或Rx;
R4各自独立为R2、ORa、NR2R3、SRa、SORa、SO2Ra、SO2NHRa、N(R5)CORa、卤素、三卤代甲基、CN、S=O、或硝基;
R5各自独立为Ra、CORa、SO2Ra,或不存在;
W与X各自独立为N、NRa、O、S、CR2R4或CR4;
Rx各自独立为O、S、CR2R3、或NR5;
Ry为S、N-CN、或CHR4;和
Z1与Z2各自独立为C、CR2、或N。
2.根据权利要求1所述的化合物,其进一步由下式表示
其中R10、R13、R14、R16、R17、R18、R19、R20、R21和R22独立地为Rb、ORb、SRb、CORb、CO2Rb、OCORb、NRbRc、CONRbRc、NRbCORc、SO2NRbRc、CF3、CN、NO2、F、Cl、Br、I、或C2-5杂环基;Rb各自独立为H或C1-3烃基,和Rc各自独立为H或C1-3烷基。
3.根据权利要求1所述的化合物,其中W为S和X为N。
4.根据权利要求1所述的化合物,其中:
Y1与Y2同时为CR4,且一起形成任选地经R4取代的额外杂环状环;
Y3为CR4;和
Y4为CR4。
5.根据权利要求1所述的化合物,其中R1为任选地经取代的萘基或任选地经取代的苯基。
6.根据权利要求1所述的化合物,其进一步由下式表示:
7.根据权利要求1所述的化合物,其中R5为H或C1-3烷基。
8.根据权利要求1所述的化合物,其中Y3为CR4,其中R4为Rb、ORb、CORb、CO2Rb、OCORb、NRbRc、CF3、CN、NO2、F、Cl、Br、或I,其中Rb与Rc独立地为H或C1-3烷基。
9.根据权利要求1所述的化合物,其中Y4为CR4,其中R4为Rb、ORb、CORb、CO2Rb、OCORb、NRbRc、CF3、CN、NO2、F、Cl、Br、或I,其中Rb与Rc独立地为H或C1-3烷基。
10.根据权利要求1所述的化合物,其进一步由下式表示
其中R10、R11、R12、R13、R14、R16、R17和R18独立地为Rb、ORb、CORb、CO2Rb、OCORb、NRbRc、CF3、CN、NO2、F、Cl、Br、或I,其中Rb与Rc独立地为H或C1-3烷基;和,R5为H或C1-3烷基。
11.根据权利要求10所述的化合物,其中R18为CH3。
12.根据权利要求10所述的化合物,其中R13为Br。
13.根据权利要求1所述的化合物,其进一步由下式表示
14.根据权利要求1所述的化合物,其中所述化合物由下式表示:
15.一种医药组合物,其包含根据权利要求2所述的化合物。
16.一种医药组合物,其包含根据权利要求11所述的化合物。
17.一种治疗或预防脊椎动物中病毒感染的方法,其包含向所述脊椎动物投与包含根据权利要求1所述的化合物的医药组合物。
18.根据权利要求17所述的方法,其中所述病毒感染是因选自以下科中的一或多者的病毒引起:沙粒病毒科(Arenaviridae)、星状病毒科(Astroviridae)、双核糖核酸病毒科(Birnaviridae)、雀麦花叶病毒科(Bromoviridae)、本扬病毒科(Bunyaviridae)、杯状病毒科(Caliciviridae)、修道院病毒科(Closteroviridae)、豇豆镶嵌病毒科(Comoviridae)、囊状噬菌体科(Cystoviridae)、黄热病毒科(Flaviviridae)、弯曲病毒科(Flexiviridae)、肝炎病毒科(Hepevirus)、光滑病毒科(Leviviridae)、黄症病毒科(Luteoviridae)、单股反链病毒目(Mononegavirales)、镶嵌病毒(Mosaic Viruses)、网巢病毒目(Nidovirales)、野田病毒科(Nodaviridae)、正粘液病毒科(Orthomyxoviridae)、小双节核糖核酸病毒科(Picobirnavirus)、小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)、马铃薯Y病毒科(Potyviridae)、呼肠孤病毒科(Reoviridae)、逆转录病毒科(Retroviridae)、随伴病毒科(Sequiviridae)、纤细病毒科(Tenuivirus)、披衣病毒科(Togaviridae)、西红柿丛矮病毒科(Tombusviridae)、全病毒科(Totiviridae)、芜菁发黄镶嵌病毒科(Tymoviridae)、肝病毒科(Hepadnaviridae)、疱疹病毒科(Herpesviridae)、副粘液病毒科(Paramyxoviridae)、或乳头瘤病毒科(Papillomaviridae)。
19.根据权利要求16所述的方法,其中所述病毒感染为流行性感冒病毒、C型肝炎病毒、西尼罗河病毒(West Nile virus)、SARS-冠状病毒、脊髓灰质炎病毒、麻疹病毒、登革热病毒、黄热病病毒、蜱传脑炎病毒、日本脑炎病毒、圣刘易斯脑炎病毒(St.Louis encephalitis virus)、马勒谷病毒(Murray Valley virus)、布氏病毒(Powassanvirus)、罗西奥病毒(Rocio virus)、跳跃病病毒(louping-ill virus)、班奇病毒(Banzivirus)、伊利乌斯病毒(Ilheus virus)、科科贝拉病毒(Kokobera virus)、昆津病毒(Kunjinvirus)、阿尔弗病毒(Alfuy virus)、牛腹泻病毒、西泽诺尔森林病病毒(Kyasanur forestdisease virus)、呼吸道融合病毒、或人类免疫缺陷症病毒HIV。
19.根据权利要求17所述的方法,其中所述医药组合物是作为预防性或治疗性疫苗的佐剂投与。
20.根据权利要求19所述的方法,其中所述疫苗是针对流行性感冒病毒、C型肝炎病毒、西尼罗河病毒、SARS-冠状病毒、脊髓灰质炎病毒、麻疹病毒、登革热病毒、黄热病病毒、蜱传脑炎病毒、日本脑炎病毒、圣刘易斯脑炎病毒、马勒谷病毒、布氏病毒、罗西奥病毒、跳跃病病毒、班奇病毒、伊利乌斯病毒、科科贝拉病毒、昆津病毒、阿尔弗病毒、牛腹泻病毒、西泽诺尔森林病病毒、呼吸道融合病毒、或HIV。
21.一种调节真核细胞的先天免疫反应的方法,所述方法包含投与所述细胞根据权利要求1所述的化合物,其中所述细胞为活体内或活体外。
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