CN104839511A - 茶皂素在提高奶牛免疫力中的用途 - Google Patents

茶皂素在提高奶牛免疫力中的用途 Download PDF

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蒋林树
郝媛华
杨红建
刘建新
王俊杰
严淑红
方洛云
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Abstract

本发明公开了茶皂素在提高奶牛免疫力中的用途，属于茶皂素的应用领域。本发明在奶牛日常饲粮基础上添加不同剂量的茶皂素，考察茶皂素对奶牛血清生化指标、免疫球蛋白及免疫因子的影响。结果表明，茶皂素的饲喂剂量为20-40g/d可以降低血清尿素氮水平，还能够提高血清中IgM含量、IFN-γ和TNF-a含量。以上结果表明，茶皂素具有增强奶牛机体的免疫功能，从而提高机体抗病能力的作用。

Description

茶皂素在提高奶牛免疫力中的用途
技术领域
本发明涉及茶皂素的新用途，尤其涉及茶皂素在提高奶牛免疫力中的用途，属于茶皂素的应用领域。
背景技术
奶牛免疫功能是维持奶牛健康的基础，奶牛免疫系统是机体自我保护的天然屏障，在其受到抑制时会产生多种疾病，这些疾病的发生会严重影响奶牛的生产性能和繁殖性能，导致乳产量及品质下降，从而给奶牛养殖业造成巨大的经济损失。
茶皂素(C57H90O16)为从山茶属植物中分离的酯皂甙。纯茶皂素为白色微细柱状结晶体，活性物含量大于60％时，为黄色或棕色粉末，pH 5.0～6.5，熔点为223～224℃，表面张力为47～51N。大量研究证明，在动物饲粮中添加适量茶皂素能够提高其生产性能、提高机体免疫力、改善动物产品品质。
目前为止，茶皂素在免疫方面的研究多集中在单胃动物上，而对奶牛等反刍动物的研究较少。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供茶皂素在提高奶牛免疫力中的新用途。
为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：
本发明公开了茶皂素在提高奶牛免疫力中的用途。其中，茶皂素的饲喂剂量为20-40g/d；优选的，所述茶皂素的饲喂剂量为20-30g/d；最优选为30g/d。饲喂方式为每天上料时将茶皂素一次性逐头奶牛添加饲喂。
本发明对奶牛品种没有特殊限制，优选为荷斯坦奶牛；所述提高奶牛免疫力包括：降低奶牛血清尿素氮含量，提高奶牛血清免疫球蛋白IgM含量，提高奶牛血清细胞因子IFN-γ或TNF-α含量中的一种或多种。
本发明通过在奶牛基础日粮基础上添加不同用量的茶皂素，考察茶皂素对奶牛血清生化指标、免疫球蛋白及免疫因子的影响。结果表明，30g剂量组能够显著降低血清尿素氮(BUN)水平(P<0.05)，在试验第14-42天时分别比对照组降低了25.7％、22.2％、26.7％、22.8％和22.0％(P<0.05)；其他茶皂素剂量组与对照组差异不显著。
不同茶皂素剂量组的IgM水平均高于对照组。其中，茶皂素用量30g/d在试验第14-42天显著提高血清中IgM含量，尤其第14天时IgM含量与对照组相比提高了71.0％(P<0.05)，差异显著，提高幅度最大；试验第21-42天时，与对照组相比分别提高了59.8％、58.6％、45.7％、26.2％(P<0.05)。茶皂素用量32-40g/d在试验第14天时IgM含量比对照组显著提高(P<0.05)；其它各试验组不同阶段的IgM含量与对照组差异不显著(P>0.05)。以上结果表明茶皂素通过增加血清中免疫球蛋白含量，增强机体的体液免疫功能，从而提高机体的抗病能力。
茶皂素30g剂量组在试验第14-28天时能够显著提供高奶牛血清中IFN-γ含量，其中，试验第14天时较对照组提高了33.6％(P<0.05)；试验第21天时较对照组提高了30.9％(P<0.05)；试验第28天时与对照组相比提高了20.2％(P<0.05)；其它试验阶段的IFN-γ含量与对照组差异不显著(P>0.05)。
不同茶皂素剂量组奶牛血清中TNF-α含量均高于对照组。其中，茶皂素30g剂量组的TNF-α含量显著高于对照组及其他实验组；第14-42天TNF-α含量较对照组分别提高了30.2％、21.7％、42.0％、27.5％、24.0％(P<0.05)。以上试验结果表明，茶皂素用量为30g/d可以显著提高奶牛血清中IFN-γ含量和TNF-α含量，具有提高机体免疫力的作用。
血液是动物机体实现体液调节的途径，也是运输机体营养物质和代谢废弃物的载体，部分血液代谢产物是反映组织正常生理功能和机体局部或全身代谢变化的较为敏感的指标。血清尿素氮(BUN)是动物体内蛋白质或氨基酸代谢的终产物，其水平可反映动物蛋白质代谢状况，因此可作为机体蛋白沉积的一个指标。IgM是血清中最重要的免疫球蛋白，其含量的高低直接反映动物机体免疫水平。细胞因子(TNF-a、IFN-γ)是免疫系统中活性细胞间相互作用的介质，对免疫应答启动、炎症反应、信号调节等免疫过程均起重要作用。
本发明在奶牛日粮基础上添加试验所用剂量的茶皂素对奶牛机体没有不良的影响，添加适宜剂量的茶皂素具有提高奶牛免疫力的作用。其中茶皂素的添加量30g/d可以显著降低血清BUN水平，提高血清中IgM含量、IFN-γ和TNF-a含量(P<0.05)。因此，茶皂素能够应用于提高奶牛的免疫力。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但是应理解所述实施例仅是范例性的，不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改或替换均落入本发明的保护范围。
1、材料
茶皂素购自浙江东方茶业有限公司常山分公司，皂苷含量≥56％；
荷斯坦奶牛由北京三元绿荷奶牛养殖中心南口二场提供。
实施例1奶牛饲料添加剂的制备
按照以下重量称取各原料(单位：kg)：茶皂素0.5，载体无水葡萄糖8，混合均匀，即得。
实施例2奶牛饲料添加剂的制备
按照以下重量称取各原料(单位：kg)：茶皂素1，载体糊精6，混合均匀，即得。
实施例3奶牛饲料添加剂的制备
按照以下重量称取各原料(单位：kg)：茶皂素2，载体淀粉7.5，混合均匀，即得。
试验例1不同水平茶皂素对奶牛产奶性能的影响
1、试验方法
1.1 试验时间与地点
试验于2014年7月至9月在北京三元绿荷奶牛养殖中心南口二场。
1.2 试验材料和试验动物
茶皂素，皂苷含量≥56％；荷斯坦奶牛。
IgM的ELISA定量测定试剂盒：南京森贝伽生物科技有限公司；
IFN-γ、TNF-α的ELISA定量测定试剂盒：南京森贝伽生物科技有限公司。
1.3 试验设计与饲养管理方法
根据奶牛产奶量、泌乳日龄、胎次相近的原则，选择健康、无疾病的泌乳前期荷斯坦奶牛，随机分为7组，每组5头，分别为对照组、试验1-6组。正式试验前经过7天预试验，预试验结束后开始正式试验，正试期35天，整个试验期共42天。
试验奶牛饲养模式为自由采食、饮水，自由运动，散放式管理。对照组和各试验组分别饲喂添加0g/d、8g/d、20g/d、28g/d、30g/d、32g/d和40g/d的茶皂素于全混合日粮(TMR)中，各组基础日粮相同。饲喂时间及方式为每天早晨上料时将茶皂素一次性逐头奶牛添加饲喂，每天早晨(8:00)、下午(14:00)、晚上(21:00)共挤奶3次。试验日粮的组成及营养成分详见表1。
表1 TMR组成及营养水平(干物质基础)
1.4 样品采集
试验开始后，每隔7天于清晨空腹尾静脉采血约15ml置入一次性采血管，静置30min，3500r/min下离心l0min分离出血清，然后保存在-20℃以待测定和分析。
2、测定指标及方法
2.1 血清生化指标的测定
奶牛血清生化指标检测于北京农学院宠物医院进行，采用全自动生化分析仪分析，指标为：血清尿素氮(BUN)。
2.2 血清免疫球蛋白测定
奶牛血清中免疫球蛋白IgM的测定采用ELISA定量测定试剂盒，严格按照试剂盒说明书的操作步骤进行，每个样进行三个平行样测定。
2.3 血清细胞因子的测定
奶牛血清中IFN-γ和TNF-α的测定采用ELISA定量测定试剂盒，严格按照试剂盒说明书的操作步骤进行，每个样进行三个平行样测定。
2.4 数据处理与统计分析
试验基础数据经Excel 2007初步整理后，用SPSS17.0进行统计分析。试验各组之间的差异采用单因子方差(One-way ANOVA)分析，多重比较采用最小显著差数法(LSD)，结果用平均值±标准误(Mean±SE)表示，显著水平为P<0.05。
3、试验结果
3.1 茶皂素对奶牛血清尿素氮的影响
茶皂素对奶牛血清尿素氮的影响见表2。
表2 茶皂素对奶牛血清尿素氮的影响
注：表中同行肩标含相同小写字母表示差异不显著(P>0.05)；同行肩标不含相同小写字母表示差异显著(P<0.05)。
表2结果表明，试验4组的BUN含量在整个试验期内均低于对照组，在试验第14-42天时，试验4组的BUN含量显著低于对照组。在试验第14、21天时，试验4组的BUN含量显著低于对照组，分别降低了25.7％和22.2％(P<0.05)；在试验第28、35、42天时，试验4组的BUN含量较对照组分别降低了26.7％、22.8％和22.0％(P<0.05)。
试验1-3组除在试验第7、21天外，其余各试验阶段的BUN含量也低于对照组，但未达到显著水平(P>0.05)；试验5和6组，除在试验第7天外，其余各试验阶段的BUN含量也低于对照组，但未达到显著水平(P>0.05)。
以上结果表明，茶皂素能够降低血清BUN含量，以30g剂量组效果最为显著。
3.2 奶牛血清免疫球蛋白的测定
茶皂素对奶牛血清免疫球蛋白的影响见表3。
表3 茶皂素对奶牛血清免疫球蛋白IgM的影响
注：表中同行肩标含相同小写字母表示差异不显著(P>0.05)；同行肩标不含相同小写字母表示差异显著(P<0.05)。
由表3可知，各试验组IgM水平均高于对照组；其中，茶皂素用量30g/d显著提高血清中IgM含量。试验第14天时，试验4组的IgM含量与对照组相比提高了71.0％(P<0.05)，差异显著，提高幅度最大；试验第21天时，与对照组相比提高了59.8％(P<0.05)；第28天时，与对照组相比提高了58.6％(P<0.05)；试验第35天，与对照组相比提高了45.7％(P<0.05)；试验第42天，与对照组相比提高了26.2％(P<0.05)。试验5、6组试验第14天时，IgM含量与对照组相比显著提高(P<0.05)；其它各试验组不同阶段的IgM含量均高于对照组，但差异不显著(P>0.05)。
3.3 茶皂素对奶牛血清IFN-γ和TNF-α水平的影响
茶皂素对奶牛血清IFN-γ和TNF-α水平的影响见表4。
表4 茶皂素对奶牛血清IFN-γ和TNF-α指标的影响
注：表中同行肩标含相同小写字母表示差异不显著(P>0.05)；同行肩标不含相同小写字母表示差异显著(P<0.05)。
表4结果表明，试验1-3组的IFN-γ含量在试验第21天时略低于对照组，但差异不显著(P>0.05)。试验第14-28天时，试验4组的IFN-γ含量较对照组显著升高，其中，试验第14天时较对照组提高了33.6％(P<0.05)；试验第21天时较对照组提高了30.9％(P<0.05)；试验第28天时与对照组相比提高了20.2％(P<0.05)；其它试验阶段的IFN-γ含量与对照组差异不显著(P>0.05)。
各试验组TNF-α含量均高于对照组；其中，试验4组的TNF-α含量显著高于对照组及其他实验组。第14天时，试验4组的TNF-α含量较对照组提高了30.2％(P<0.05)；试验第21天时，较对照组提高了21.7％(P<0.05)；试验第28天时，较对照组提高了42.0％(P<0.05)；试验第35天时，较对照组提高了27.5％(P<0.05)；试验第42天时，较对照组提高了24.0％(P<0.05)。
以上试验结果表明，茶皂素用量为30g/d可以显著提高奶牛血清中IFN-γ含量和TNF-α含量，具有提高机体免疫力的作用。

Claims (6)

1.茶皂素在提高奶牛免疫力中的用途。
2.按照权利要求1所述的用途，其特征在于：所述茶皂素的饲喂剂量为20-40g/d。
3.按照权利要求2所述的用途，其特征在于：所述茶皂素的饲喂剂量为20-30g/d。
4.按照权利要求3所述的用途，其特征在于：所述茶皂素的饲喂剂量为30g/d。
5.按照权利要求1所述的用途，其特征在于：所述奶牛为荷斯坦奶牛。
6.按照权利要求1所述的用途，其特征在于，所述提高奶牛免疫力包括：降低奶牛血清尿素氮含量，提高奶牛血清免疫球蛋白IgM含量，提高奶牛血清细胞因子IFN-γ或TNF-α含量中的一种或多种。
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