CN104824363A - 一种富含苏氨酸的高蛋白饲料生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种富含苏氨酸的高蛋白饲料生产方法，采用谷氨酸棒杆菌、热带假丝酵母、植物乳杆菌和纳豆芽孢杆菌进行液体发酵，将富含代谢产物和活菌体的发酵醪液混合，再将其按照一定比例与豆粕等混合，进行固态发酵，最后对产品干燥、包装，得到的终产品中粗蛋白含量高于50%，苏氨酸含量高于2.0%。本发明的优点在于工艺简单，将发酵醪液直接与固态物料混合发酵，既利用了微生物的代谢产物苏氨酸，又大大缩短了固态发酵时间，降低了生料固态发酵过程中染杂菌的几率；能耗低，发酵过程中无废弃物排放；制得的原料，既降低了植物粕类中抗营养因子的含量，又使苏氨酸含量高于2.0%，能减少或替代外源苏氨酸添加量，降低了饲料成本。
Description
技术领域
本发明涉及饲料生产领域，尤其是涉及一种富含苏氨酸的高蛋白饲料生产方法。
背景技术
养殖业是我国增加农业经济收入的重要支柱产业之一，每年需要消耗大量的饲料蛋白质原料。目前，饲料蛋白的主要来源是豆粕和鱼粉，这两种产品在使用过程中都存在一定问题。鱼粉成本偏高，质量良莠不齐，资源日益短缺；饼粕类饲料成本较低，但属于植物蛋白，含有大量抗营养因子，比如：大豆抗原蛋白、尿酸、植物凝集素、非淀粉类多糖等，影响动物对饲料的消化和吸收。为解决这一问题，近年出现了利用乳酸菌，芽孢杆菌，酵母菌和光合细菌等混菌发酵生产饲料蛋白原料的技术。此类技术可将饼粕等农副产品进行发酵，以达到消除抗营养因子，增加粗蛋白含量的目的，如国家专利（公布号：CN102488084A，好氧混合菌发酵秸秆饼粕制备蛋白饲料方法）；国家专利（公布号：CN101449739，一种微生态发酵蛋白饲料及其制备方法）。但是，常见的发酵饲料技术通常难以解决蛋白饲料中氨基酸平的衡问题，特别是必需氨基酸苏氨酸的含量和平衡问题。
试验表明，苏氨酸缺乏可导致动物采食量降低、生长受阻、饲料利用率下降、免疫机能受抑制等症状。在大多数植物性蛋白质饲料中，苏氨酸是第二限制性氨基酸。近年来，随着合成赖氨酸和蛋氨酸在饲料中应用，苏氨酸逐渐成为影响动物生产性能的限制性因素。
使用芽孢杆菌、酵母菌、乳酸菌等微生物直接发酵豆粕等农副产品，虽然可以消除豆粕抗营养因子、提高消化率，但很难提高其中苏氨酸的含量，所以现在的饲料市场上还没有富含苏氨酸的优质饲料蛋白原料产品。
发明内容
本发明的目的在于提供一种利用豆粕、棉粕、菜籽粕和花生粕中的一种或两种以上混合发酵制得富含苏氨酸的高蛋白饲料的方法。
为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：
本发明所述的富含苏氨酸的高蛋白饲料生产方法，包括下述步骤：
第一步，液体发酵
将编号为CICC 20903的谷氨酸棒杆菌先进行种子培养和液体发酵；将编号为CICC 1318的热带假丝酵母进行种子培养，然后接入到谷氨酸棒杆菌发酵液中混菌液体发酵，得到发酵液；将编号为CICC20022或CICC20038中的任意一株植物乳杆菌和编号为CICC23413或CICC20443中的任意一株纳豆芽孢杆菌分别进行种子培养和液体发酵，得到发酵液；
第二步，混合发酵醪液配制
将第一步得到的谷氨酸棒杆菌和热带假丝酵母混菌发酵液10~60份与植物乳杆菌0~30份或/和纳豆芽胞杆菌0~30份之比例混合均匀，用Ca(OH)2调节pH至中性，得到发酵醪液；
第三步，固态发酵
按重量比将100~150份豆粕、棉粕、菜籽粕和花生粕中的一种或两种以上与5~10份糖蜜混合，得到固态发酵原料；将第二步配制的发酵醪液按固态发酵原料重量的50~100%的比例与固态发酵原料混合，进行有氧固态发酵，发酵条件：起始温度20~30℃，过程控制温度30℃~45℃，发酵时间48~72h，得到发酵料；
第四步， 烘干、粉碎和包装
将发酵料传送到干燥器上， 60~70℃条件下烘干到含水量≤12%，粉碎后称量包装，即可得到富含苏氨酸的高蛋白饲料。
所述第一步中谷氨酸棒杆菌和热带假丝酵母混菌发酵液的制备方法为：将使用牛肉膏蛋白胨培养基活化后的谷氨酸棒杆菌种用无菌生理盐水制成悬浮菌液，接种到液体发酵种子培养基中培养，培养基组成：葡萄糖100-120g/L、(NH4)2SO4 20-30g/L、KH2PO4 1-1.5g/L、MgSO4·7H2O 0.3-0.5 g/L、生物素5-8×10-5 g/L、CaCO3 10-30 g/L、硫胺素0.8-1mg/ L；pH7.0-7.2，0.12 MPa下灭菌20 min；培养条件：罐压0.03-0.1 Mpa，搅拌转速 170-230 r/min，通风量1:0.25-0.5，培养温度30-32℃，发酵时间24-48 h；将YPD培养基上的热带假丝酵母菌用无菌生理盐水制成悬浮菌液，当谷氨酸棒杆菌发酵液中的产酸率达到3.6%以上时，接入热带假丝酵母悬浮菌液，继续培养10h即可。
所述第一步中植物乳杆菌发酵液的制备方法为：使用固体MRS培养植物乳杆菌，将植物乳杆菌一级固体种子用无菌生理盐水制成悬浮菌液，接种到液体发酵培养基中，培养基组成：葡萄糖或糖蜜20-50g/L、玉米浆20-35 g/L，七水合硫酸镁0.25-0.35 g/L，四水合硫酸锰0.01-0.015 g/L，七水合硫酸铁0.01-0.015 g/L，乙酸钠16-21 g/L，Tween-80 l mL/L；培养条件：罐压0.03-0.1 Mpa，静置培养，培养温度30-32℃，发酵18-22 h即可。
所述第一步中纳豆芽孢杆菌发酵液的制备方法为：将使用牛肉膏蛋白胨培养基活化后的纳豆芽孢杆菌种用无菌生理盐水制成悬浮菌液，接种到液体发酵培养基中，培养基组成：豆粕粉1.0-3.0%，玉米粉1.0-3.0%，硫酸镁0.2-0.6%，硫酸锰0.02-0.06%，氯化钠0.5-1.0%；培养条件：罐压0.05-0.1 Mpa，搅拌转速170-230 r/min，通风量1:0. 5-1.2，培养温度32-35℃，发酵18-24 h即可。
本发明的优点在于工艺简单，将发酵醪液直接与固态物料混合发酵，既利用了微生物的代谢产物苏氨酸，又大大缩短了固态发酵时间，降低了生料固态发酵过程中染杂菌的几率；能耗低，发酵过程中无废弃物排放；制得的饲料原料，既降低了植物粕类中抗营养因子的含量，又使苏氨酸含量高于2.0%，能减少或替代外源苏氨酸添加量，降低了饲料成本。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步详细的说明。
以下实施例中的物料配比均为质量百分比。
本发明中所用的谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum，CICC 20903）、热带假丝酵母（Candida utilis，CICC1318）、植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum，CICC20022、CICC20038）和纳豆芽孢杆菌（Bacillus natto， CICC23413、CICC20443）均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心。
实施例1
本发明所述的富含苏氨酸的高蛋白饲料生产方法，包括下述步骤：
第一步，液体发酵
将牛肉膏蛋白胨上的编号为CICC 20903的谷氨酸棒杆菌用200ml无菌生理盐水制成悬浮菌液，接种到液体发酵培养基中（装液量60%），培养基组成：葡萄糖120g/L、(NH4)2SO4 30g/L、KH2PO4 1.5g/L、MgSO4·7H2O 0.5 g/L、生物素8×10-5 g/L、CaCO3 30 g/L；pH7.0，0.12 MPa下灭菌20 min。培养条件：罐压0.1 Mpa，搅拌转速 230 r/min，通风量1:0.25，培养温度30℃，发酵时间48 h；将YPD培养基上的编号为CICC1318的热带假丝酵母菌用200ml无菌生理盐水制成悬浮菌液，当谷氨酸棒杆菌发酵液中的产酸率达到3.6%以上时，接入热带假丝酵母悬浮菌液，，继续培养10h。
将斜面上的编号为CICC20022的植物乳杆菌种子在盛有MRS培养基的500mL茄形扁瓶接种：将植物乳杆菌一级固体种子用200mL无菌生理盐水制成悬浮菌液，到发酵罐中培养（装液量60%），培养基组成：葡萄糖或糖蜜20-50g/L、玉米浆35 g/L，七水合硫酸镁0.35 g/L，四水合硫酸锰0.015 g/L，七水合硫酸铁0.015 g/L，乙酸钠21 g/L，Tween-80 1mL/L；培养条件：罐压0.1 Mpa，静置培养，培养温度30℃，发酵时间22 h。
第二步，混合发酵醪液配制
将第一步得到的谷氨酸棒杆菌和热带假丝酵母混菌发酵液20份与植物乳杆菌发酵液10份混合均匀，用Ca(OH)2调节pH至7.0，得到发酵醪液；
第三步，固态发酵
按重量比，将去皮豆粕（棉粕或花生粕也可）100份、5份糖蜜混合均匀得到固态发酵物料；将第二步配制的发酵醪液按固态发酵原料重量的60%的比例与固态发酵原料混合均匀，在发酵塔中进行有氧固态发酵，发酵起始含水量40%，起始温度25℃，过程控制温度45℃，发酵时间60h；
第四步，烘干、粉碎和包装
发酵达到终点，将发酵料传送到干燥器上， 在65℃条件下烘干到含水量≤12%，粉碎后称量包装，即可得到富含苏氨酸的高蛋白饲料。
按照国家标准测定方法（GB/T 19541和GB/T 18296）将本发明生产的饲料与普通豆粕、按常规发酵豆粕的蛋白物料中所含的营养指标进行对比，见下表：
从上表中可以看出，本发明方法制得的饲料中，粗蛋白含量达到51.25%，苏氨酸含量达到2.25%。本发明方法有效提升了饲料中苏氨酸的含量，目前尚无同类技术出现，且饲料的适口性好，易于动物吸收和利用。
实施例2
本发明所述的富含苏氨酸的高蛋白饲料生产方法，包括下述步骤：
第一步，液体发酵
谷氨酸棒杆菌和热带假丝酵母菌混菌发酵同实施例1。
取编号为CICC23413的纳豆芽孢杆菌斜面种子在盛有蛋白胨牛肉膏培养基的500ml茄形瓶中接种，将纳豆芽孢杆菌一级固体种子用200ml无菌生理盐水制成悬浮菌液，接种到2m3发酵罐中（种子罐培养基装液量60%）发酵培养，培养基组成：豆粕粉2.0%，玉米粉1.5%，硫酸镁0.4%，硫酸锰0.05%，氯化钠1.0%。培养条件：罐压0.05 Mpa，搅拌转速190 r/min，通风量1:0.8，培养温度35℃，发酵时间20 h。
第二步，混合发酵醪液配制
将第一步得到的谷氨酸棒杆菌和热带假丝酵母混菌发酵液30份与纳豆芽孢杆菌发酵液10份混合均匀，用Ca(OH)2调节pH至7.0，得到发酵醪液；
第三步，固态发酵
按重量比，将去皮豆粕（棉粕或花生粕也可）120份、10份糖蜜混合均匀得到固态发酵物料；将第二步配制的发酵醪液按固态发酵原料重量的80%的比例与固态发酵原料混合均匀，在发酵塔中进行有氧固态发酵，发酵起始含水量40%，起始温度25℃，过程控制温度45℃，发酵时间60h；
第四步， 烘干、粉碎和包装
发酵达到终点，将发酵料传送到干燥器上， 在65℃条件下烘干到含水量≤12%，粉碎后称量包装，即可得到富含苏氨酸的高蛋白饲料。
按照国家标准测定方法（GB/T 19541和GB/T 18296）将本发明生产的饲料与普通豆粕、按常规发酵豆粕的蛋白物料中所含的营养指标进行对比，见下表：
从上表中可以看出，本发明方法制得的饲料中，粗蛋白含量达到51.65%，苏氨酸含量达到2.38%。本发明方法有效提升了饲料中苏氨酸的含量，目前尚无同类技术出现，且饲料的适口性好，易于动物吸收和利用。
实施例3
本发明所述的富含苏氨酸的高蛋白饲料生产方法，包括下述步骤：
第一步，液体发酵：
谷氨酸棒杆菌（CICC 20903）和热带假丝酵母混菌液的制备方法同实施例1；植物乳杆菌发酵醪液生产方法与实施例1相同；纳豆芽孢杆菌发酵醪液生产方法与实施例2相同；
第二步，混合发酵醪液配制：
取第一步得到的谷氨酸棒杆菌和产朊假丝酵母混菌发酵液30份，植物乳杆菌种子液10份，纳豆芽孢杆菌种子液10份混合均匀，用Ca(OH)2调节pH至7.0，得到发酵醪液；
第三步，固态发酵：
按重量比，将去皮豆粕150份、10份糖蜜混合均匀得到发酵物料。将第二步配制的发酵醪液按固态发酵原料重量的80%的比例与固态发酵原料混合均匀。固态发酵条件与实施例1相同。
第四步，烘干、粉碎和包装：
与实施例1相同。
应用本发明生产方法制得的发酵豆粕蛋白原料经测定与豆粕、常规发酵豆粕蛋白原料营养指标的对比结果如下表所示。
从上表中可以看出，本发明方法制得的饲料中，粗蛋白含量达到51.96%，苏氨酸含量达到2.39%。本发明方法有效提升了饲料中苏氨酸的含量，目前尚无同类技术出现，且饲料的适口性好，易于动物吸收和利用。
上述实施例中，固态发酵原料也可以用豆粕、棉粕、菜籽粕和花生粕中的一种或两种以上混合物替换。
Claims (4)
1.一种富含苏氨酸的高蛋白饲料生产方法，其特征在于：包括下述步骤：
第一步，液体发酵
将编号为CICC 20903的谷氨酸棒杆菌先进行种子培养和液体发酵；将编号为CICC 1318的热带假丝酵母进行种子培养，然后接入到谷氨酸棒杆菌发酵液中混菌液体发酵，得到发酵液；将编号为CICC20022或CICC20038中的任意一株植物乳杆菌和编号为CICC23413或CICC20443中的任意一株纳豆芽孢杆菌分别进行种子培养和液体发酵，得到发酵液；
第二步，混合发酵醪液配制
将第一步得到的谷氨酸棒杆菌和热带假丝酵母混菌发酵液10~60份与植物乳杆菌0~30份或/和纳豆芽胞杆菌0~30份之比例混合均匀，用Ca(OH)2调节pH至中性，得到发酵醪液；
第三步，固态发酵
按重量比将100~150份豆粕、棉粕、菜籽粕和花生粕中的一种或两种以上混合物与5~10份糖蜜混合，得到固态发酵原料；将第二步配制的发酵醪液按固态发酵原料重量的50~100%的比例与固态发酵原料混合，进行有氧固态发酵，发酵条件：起始温度20~30℃，过程控制温度30℃~45℃，发酵时间48~72h，得到发酵料；
第四步， 烘干、粉碎和包装
将发酵料传送到干燥器上， 60~70℃条件下烘干到含水量≤12%，粉碎后称量包装，即可得到富含苏氨酸的高蛋白饲料。
2.根据权利要求1所述的富含苏氨酸的高蛋白饲料生产方法，其特征在于：所述第一步中谷氨酸棒杆菌和热带假丝酵母混菌发酵液的制备方法为：将使用牛肉膏蛋白胨培养基活化后的谷氨酸棒杆菌种用无菌生理盐水制成悬浮菌液，接种到液体发酵种子培养基中培养，培养基组成：葡萄糖100-120g/L、(NH4)2SO4 20-30g/L、KH2PO4 1-1.5g/L、MgSO4·7H2O 0.3-0.5 g/L、生物素5-8×10-5 g/L、CaCO3 10-30 g/L、硫胺素0.8-1mg/ L；pH7.0-7.2，0.12 MPa下灭菌20 min；培养条件：罐压0.03-0.1 Mpa，搅拌转速 170-230 r/min，通风量1:0.25-0.5，培养温度30-32℃，发酵时间24-48 h；将YPD培养基上的热带假丝酵母菌用无菌生理盐水制成悬浮菌液，当谷氨酸棒杆菌发酵液中的产酸率达到3.6%以上时，接入热带假丝酵母悬浮菌液，继续培养10h即可。
3.根据权利要求1所述的富含苏氨酸的高蛋白饲料生产方法，其特征在于：所述第一步中植物乳杆菌发酵液的制备方法为：使用固体MRS培养植物乳杆菌，将植物乳杆菌一级固体种子用无菌生理盐水制成悬浮菌液，接种到液体发酵培养基中，培养基组成：葡萄糖或糖蜜20-50g/L、玉米浆20-35 g/L，七水合硫酸镁0.25-0.35 g/L，四水合硫酸锰0.01-0.015 g/L，七水合硫酸铁0.01-0.015 g/L，乙酸钠16-21 g/L，Tween-80 l mL/L；培养条件：罐压0.03-0.1 Mpa，静置培养，培养温度30-32℃，发酵18-22 h即可。
4.根据权利要求1所述的富含苏氨酸的高蛋白饲料生产方法，其特征在于：所述第一步中纳豆芽孢杆菌发酵液的制备方法为：将使用牛肉膏蛋白胨培养基活化后的纳豆芽孢杆菌种用无菌生理盐水制成悬浮菌液，接种到液体发酵培养基中，培养基组成：豆粕粉1.0-3.0%，玉米粉1.0-3.0%，硫酸镁0.2-0.6%，硫酸锰0.02-0.06%，氯化钠0.5-1.0%；培养条件：罐压0.05-0.1 Mpa，搅拌转速170-230 r/min，通风量1:0. 5-1.2，培养温度32-35℃，发酵18-24 h即可。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| EXSB | Decision made by sipo to initiate substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20150812 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |