CN104823856B - 铁皮石斛组培苗快速增殖培养基 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种铁皮石斛组培苗快速增殖培养基，该铁皮石斛组培苗快速增殖培养基的配方成分组成如下：花宝1号0.50～2.50g/L，花宝2号0.50～2.50g/L，蛋白胨1.00～4.00g/L，肌醇0.05～0.20g/L，磷酸三钙0.10～0.35g/L，香蕉70～145g/L，马铃薯30～80g/L，速大多0.55～1.50ml/L，爱多收0.05～0.25ml/L，萘乙酸0.05～0.25mg/L，活性炭(AC)1.00～2.00g/L，白砂糖10～30g/L；该铁皮石斛组培苗快速增殖培养基的配方，可以缩短培养周期，提高增殖系数，且组培苗移栽成活率高，种苗抗逆性强。
Description
技术领域
本发明涉及铁皮石斛组织培养技术领域，尤其是涉及一种铁皮石斛组培苗快速增殖培养基。
背景技术
铁皮石斛，又叫黑节草、铁皮兰，是兰科多年生附生草本植物，是一种珍贵的野生药用植物。石斛具有抗肿瘤、抗衰老、增强人体免疫力和扩张血管的作用。铁皮石斛种子自然条件下繁殖力低，仅靠分株繁殖速度慢，加上长期人为挖掘，使得铁皮石斛野生资源日益枯竭。上世纪八十年代，铁皮石斛被列为国家重点保护的珍稀濒危药用植物。
为了满足市场的需求，国内许多科研人员对铁皮石斛组织培养技术进行研究，但培养基和添加剂种类及其含量有所不同，扩繁速度和培养出的苗木质量也不同，组培苗繁殖率低、生根率低、苗木品质差、成本高，影响了铁皮石斛的产业化生产。本发明重点在于提高铁皮石斛继代增殖率、茎芽长势、生根率，为铁皮石斛规模化生产提供可靠的技术基础。
湖北林业科技第42卷第5期(2013年10月)公开了一种铁皮石斛组培快繁技术，其增殖培养基配方为1/2MS+BA2.0mg.L+NAA0.1mg.L+马铃薯100g.L，茎芽增殖倍数达到5.8。MS培养基总无机盐浓度偏大、含氮量高，导致继代茎芽下部叶片轻度黄化，生长迟缓，茎芽出现中毒症状；N6总无机盐浓度大、硝态氮与铵态氮比例不适合，下部叶片严重黄化，生长迟缓。所以MS和N6不适合作为铁皮石斛继代基本培养基。
因此，有必要开发一种培养基的成分来源普通、配制简单且生长周期短、增殖率高、存活率高的铁皮石斛组培苗快速增殖培养基。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明公开了一种培养基的成分来源普通、配制简单且生长周期短、增殖率高、存活率高的铁皮石斛组培苗快速增殖培养基。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：该铁皮石斛组培苗快速增殖培养基的配方成分组成如下：花宝1号0.50～2.50g/L，花宝2号0.50～2.50g/L，蛋白胨1.00～4.00g/L，肌醇0.05～0.20g/L，磷酸三钙0.10～0.35g/L，香蕉70～145g/L，马铃薯30～80g/L，速大多0.55～1.50ml/L，爱多收0.05～0.25ml/L，萘乙酸0.05～0.25mg/L，活性炭(AC)1.00～2.00g/L，白砂糖10～30g/L。
采用上述技术方案，该铁皮石斛组培苗快速增殖培养基的配方成分组成并不是在基础培养基，如MS、1/2MS、N6和N5等培养基上添加某些成分而获得的培养基，该铁皮石斛组培苗快速增殖培养基的配方放弃了使用基础培养基，通过花宝1号和花宝2号两种兰花专用肥上添加营养物质，经过大量实验，最终确定该配方的组成成分，该铁皮石斛组培苗快速增殖培养基的配方总无机盐浓度适量，相比在MS、1/2MS、N6和N5等基础培养基上添加某些成分制成的培养基，可以缩短培养周期，提高增殖系数，且组培苗移栽成活率高，种苗抗逆性强。
作为本发明的优选方案，该铁皮石斛组培苗快速增殖培养基的配方成分组成如下：花宝1号1.00～2.00g/L，花宝2号1.00～1.80g/L，蛋白胨1.50～3.00g/L，肌醇0.075～0.15g/L，磷酸三钙0.15～0.25g/L，香蕉80～110g/L，马铃薯40～60g/L，速大多0.75～1.25ml/L，爱多收0.10～0.20ml/L，萘乙酸0.10～0.18mg/L，活性炭(AC)1.25～1.50g/L，白砂糖15～25g/L。
作为本发明的优选方案，该铁皮石斛组培苗快速增殖培养基的配方成分组成如下：花宝1号1.50g/L，花宝2号1.50g/L，蛋白胨2.00g/L，肌醇0.10g/L，磷酸三钙0.20g/L，香蕉100g/L；马铃薯50g/L，速大多1.00ml/L，爱多收0.15ml/L，萘乙酸0.15mg/L，AC(活性炭)1.50g/L，白砂糖20g/L。
本发明的进一步改在于，该铁皮石斛组培苗快速增殖培养基的pH值为5.6～6.2。
作为本发明的优选方案，该铁皮石斛组培苗快速增殖培养基的pH值为5.8～6.0。pH是影响固体培养基凝固程度的主要因素之一。pH过高会导致培养基变硬，不利于养分的扩散和吸收，而且培养材料也不易插入，还会引起有害物质的沉积，引起培养物的褐化和死亡。pH过低则培养基不会凝固，起不到支撑培养物的作用，而且容易引起玻璃化现象的发生。通过大量的筛选试验最终确定，该pH范围适合铁皮石斛组培苗快速增殖。
本发明的进一步改在于，该铁皮石斛组培苗快速增殖培养基为固体培养基。固体培养基与液体培养基相比优点在于操作简便，能够更好的固定植株，通气问题易于解决，便于经常观察研究等。
作为本发明的优选方案，该铁皮石斛组培苗快速增殖培养基为利用琼脂为支撑物的固体培养基。琼脂相对于其他凝固剂，具有不易分解、形成凝胶后透明度高、保水性好、无毒以及不易被微生物液化等优点。因此，在固体培养时琼脂是最好的固化剂。
本发明的有益效果：利用本发明的配方培养铁皮石斛组培苗可以缩短培养周期，提高增殖系数，且组培苗移栽成活率高，种苗抗逆性强。
具体实施方式
实施例1：配制如下成分组成的配方的培养基：
花宝1号0.50g/L，花宝2号0.50g/L，蛋白胨1.00g/L，肌醇0.05g/L，磷酸三钙0.10g/L，香蕉70g/L，马铃薯30g/L，速大多0.55ml/L，爱多收0.05ml/L，萘乙酸0.05mg/L，活性炭(AC)1.00g/L，白砂糖10g/L；pH 5.6；并添加琼脂5g/L。
将铁皮石斛种苗接种到该培养基中进行培养，光照时间12h/d，光照强度1500～1800lux，培养室温度控制在25摄氏度左右，培养2个月后，记录铁皮石斛组培苗的生长情况。
实施例2：配制如下成分组成的配方的培养基：
花宝1号2.50g/L，花宝2号2.50g/L，蛋白胨4.00g/L，肌醇0.20g/L，磷酸三钙0.35g/L，香蕉145g/L，马铃薯80g/L，速大多1.50ml/L，爱多收0.25ml/L，萘乙酸0.25mg/L，活性炭(AC)2.00g/L，白砂糖30g/L；pH 5.8；并添加琼脂5g/L。
将铁皮石斛种苗接种到该培养基中进行培养，光照时间12h/d，光照强度1500～1800lux，培养室温度控制在25摄氏度左右，培养2个月后，记录铁皮石斛组培苗的生长情况。
实施例3：配制如下成分组成的配方的培养基：
花宝1号1.00g/L，花宝2号1.00g/L，蛋白胨1.50g/L，肌醇0.075g/L，磷酸三钙0.15g/L，香蕉80g/L，马铃薯40g/L，速大多0.75ml/L，爱多收0.10ml/L，萘乙酸0.10mg/L，活性炭(AC)1.25g/L，白砂糖15g/L；pH 6.2；并添加琼脂5g/L。
将铁皮石斛种苗接种到该培养基中进行培养，光照时间12h/d，光照强度1500～1800lux，培养室温度控制在25摄氏度左右，培养2个月后，记录铁皮石斛组培苗的生长情况。
实施例4：配制如下成分组成的配方的培养基：
花宝1号2.00g/L，花宝2号1.80g/L，蛋白胨3.00g/L，肌醇0.15g/L，磷酸三钙0.25g/L，香蕉110g/L，马铃薯60g/L，速大多1.25ml/L，爱多收0.20ml/L，萘乙酸0.18mg/L，活性炭(AC)1.50g/L，白砂糖25g/L；pH 6.0；并添加琼脂5g/L。
将铁皮石斛种苗接种到该培养基中进行培养，光照时间12h/d，光照强度1500～1800lux，培养室温度控制在25摄氏度左右，培养2个月后，记录铁皮石斛组培苗的生长情况。
实施例5：配制如下成分组成的配方的培养基：
花宝1号1.50g/L，花宝2号1.50g/L，蛋白胨2.00g/L，肌醇0.10g/L，磷酸三钙0.20g/L，香蕉100g/L；马铃薯50g/L，速大多1.00ml/L，爱多收0.15ml/L，萘乙酸0.15mg/L，活性炭(AC)1.50/L，白砂糖20g/L；pH 6.0；并添加琼脂5g/L。
将铁皮石斛种苗接种到该培养基中进行培养，光照时间12h/d，光照强度1500～1800lux，培养室温度控制在25摄氏度左右，培养2个月后，记录铁皮石斛组培苗的生长情况。
培养基对比实验：
使用MS+激素的培养基作为对照培养基，与实施例1～5进行对比，对比的结果如下表所示：
| 培养基 | 增殖比例 | 叶片长(cm) | 株高(cm) | 茎粗(mm) | 枯萎率(％) |
| 实施1 | 2.5 | 2.4 | 3.3 | 1.0 | 9 |
| 实施2 | 2.5 | 2.5 | 3.7 | 1.1 | 8 |
| 实施3 | 3.0 | 2.9 | 2.8 | 1.1 | 6 |
| 实施4 | 3.0 | 2.8 | 4.5 | 1.2 | 4 |
| 实施5 | 4.0 | 3.0 | 5.0 | 1.2 | 0 |
| MS培养基 | 2.0 | 2.1 | 2.3 | 0.9 | 13 |
从对比结果，可以发现：实施例1～5的组培苗的增殖比例均比对照实验高，且苗相对较粗壮，整齐度较为一致，黄化苗、枯萎苗较少，苗与苗之间很容易分开。对照实验中的组培苗生长整齐度不一致，总体较瘦高，黄化苗、枯萎苗较多，苗与苗之间生长盘绕成簇，不容易分开。
最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。
Claims (6)
1.一种铁皮石斛组培苗快速增殖培养基，该铁皮石斛组培苗快速增殖培养基的配方成分组成如下：
花宝1号0.50～2.50g/L，花宝2号0.50～2.50g/L，蛋白胨1.00～4.00g/L，肌醇0.05～0.20g/L，磷酸三钙0.10～0.35g/L，香蕉70～145g/L，马铃薯30～80g/L，速大多0.55～1.50ml/L，爱多收0.05～0.25ml/L，萘乙酸0.05～0.25mg/L，活性炭(AC)1.00～2.00g/L，白砂糖10～30g/L；该铁皮石斛组培苗快速增殖培养基的pH值为5.6～6.2。
2.根据权利要求1所述的铁皮石斛组培苗快速增殖培养基，其特征在于，该铁皮石斛组培苗快速增殖培养基的配方成分组成如下：
花宝1号1.00～2.00g/L，花宝2号1.00～1.80g/L，蛋白胨1.50～3.00g/L，肌醇0.075～0.15g/L，磷酸三钙0.15～0.25g/L，香蕉80～110g/L，马铃薯40～60g/L，速大多0.75～1.25ml/L，爱多收0.10～0.20ml/L，萘乙酸0.10～0.18mg/L，活性炭(AC)1.25～1.50g/L，白砂糖15～25g/L。
3.根据权利要求1或2所述的铁皮石斛组培苗快速增殖培养基，其特征在于，该铁皮石斛组培苗快速增殖培养基的配方成分组成如下：
花宝1号1.50g/L，花宝2号1.50g/L，蛋白胨2.00g/L，肌醇0.10g/L，磷酸三钙0.20g/L，香蕉100g/L；马铃薯50g/L，速大多1.00ml/L，爱多收0.15ml/L，萘乙酸0.15mg/L，AC(活性炭)1.50g/L，白砂糖20g/L。
4.根据权利要求3所述的铁皮石斛组培苗快速增殖培养基，其特征在于，该铁皮石斛组培苗快速增殖培养基的pH值为5.8～6.0。
5.根据权利要求4所述的铁皮石斛组培苗快速增殖培养基，其特征在于，该铁皮石斛组培苗快速增殖培养基为固体培养基。
6.根据权利要求3所述的铁皮石斛组培苗快速增殖培养基，其特征在于，该铁皮石斛组培苗快速增殖培养基为利用琼脂为支撑物的固体培养基。
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