CN104789636A - 一种检测微生物时定量稀释的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种检测微生物时定量稀释的方法，旨在提供一种能有效减少人员之间的误差，避免由不确定度控制定量结果的检测微生物时定量稀释的方法；其技术要点依次包括下述步骤：1)吸取样品前先将样品摇均匀后，用分度吸管吸吹3次，量取1ml液体沿壁放人装有稀释液的试管A中，分度吸管弃去，作为1:10供试液；2)将试管A放置涡旋混合器上进行漩涡，当漩涡到达试管底部时立刻移开试管，用分度吸管吸吹3次后量取1ml液体沿壁放去装有稀释液的试管B中，分度吸管弃去，作为1:100供试液；3)下一级稀释时重复步骤1)或/和步骤2)；属于微生物检测技术领域。
Description
技术领域
本发明公开了一种稀释方法，具体地说，是一种检测微生物时定量稀释的方法，属于微生物检测技术领域。
背景技术
微生物群体非常庞杂，种类繁多，包括细胞型和非细胞型两类。凡具有细胞形态的微生物称为细胞型微生物。细胞型微生物按细胞结构又分为原核微生物和真核微生物。原核生物的主要特点：细胞内有明显的核区，但没有核膜包围；核区内含有一条双链DNA构成的染色体；能量代谢和很多合成代谢均在质膜上进行，核糖体分布在细胞之中；相对于原核微生物，真核微生物的细胞结构有了真正的细胞核,有多种细胞器；而病毒则不具有细胞结构，由核酸和蛋白质组成，可以认为是超显微的、没有细胞结构的、专性活细胞内寄生的实体。它们在活细胞外具有一般化学大分子的特征，在宿主细胞内又具有生命特征。可以作为了解的是，病毒可以通过细菌滤器，且对抗生素不敏感，对干扰素敏感。二、细菌、霉菌、酵母菌和致病菌介绍细菌的细胞结构在原核生物中具有代表性，主要由细胞壁、细胞膜、细胞质、核质体等部分构成,有的细菌还有夹膜、鞭毛、菌毛等特殊结构。在自然界中细菌是分布最广、数量最多的一类生物，并与食品关系最为密切。是食品理论、工业发酵和酿造研究的主要对象，也是导致食品腐败的主要类群。细菌的基本形态有球状、杆状和螺旋状,分别被称为球菌、杆菌和螺旋菌。霉菌是一些丝状真菌的统称。在自然界分布极广，它的营养来源主要是糖类和少量氮、矿物盐等，极易在含糖的食品、饼干、面包和各种谷物、水果上生长。经常会有食品会因为发生霉变而不能食用，还有些霉菌会产生毒性很大的毒素，比如黄曲霉素、黄米毒素、杂色曲霉素和展青霉素等等，都可能导致癌症，这类霉菌在大米和花生中最多。由此，对霉菌的检测尤为重要。霉菌菌体是由分支或不分支的菌丝组成，菌丝细胞均由细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核、线粒体、核糖体以及内含物组成。因此，对食物中的微生物检测尤为重要。
发明内容
针对上述问题，本发明的目的在于提供一种能有效减少人员之间的误差，避免由不确定度控制定量结果的检测微生物时定量稀释的方法。
为此，本发明提供的技术方案是这样的：
一种检测微生物时定量稀释的方法，依次包括下述步骤
1)吸取样品前先将样品摇均匀后，用分度吸管吸吹3次，量取1ml液体沿壁放人装有稀释液的试管A中，分度吸管弃去，作为1:10供试液；
2)将试管A放置涡旋混合器上进行漩涡，当漩涡到达试管底部时立刻移开试管，用分度吸管吸吹3次后量取1ml液体沿壁放去装有稀释液的试管B中，分度吸管弃去，作为1:100供试液；
3)下一级稀释时重复步骤1)或/和步骤2)。
进一步的，上述的检测微生物时定量稀释的方法，步骤1)所述的将样品摇均匀是将样品顺、反时针各摇20次。
进一步的，上述的检测微生物时定量稀释的方法，步骤1)所述的将样品摇均匀是均质袋样品左右摇匀。
与现有技术相比，本发明提供的技术方案能有效减少人员之间的误差，避免由不确定度控制定量结果的问题，提高了检测的精确度和准确率。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明的权利要求做进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制，任何人在本发明权利要求保护范围之内所做的有限次修改仍在本发明的权利要求保护范围之内。
实施例1
1目的
本发明的目的是为了规范本实验室各类样品的微生物定量稀释操作，减少人员之间的误差，并由不确定度控制定量结果。
2适用范围
各类样品的微生物定量时的稀释步骤，主要用于菌落计数、酵母和霉菌的计数等稀释操作。
3.仪器
涡旋混合器、分度吸管
4操作步骤
4.1吸取样品前先将样品顺、反时针各摇20次，使其均匀后(若样品使用均质袋等盛装的则左右摇匀即可)用分度吸管吸吹3次，量取1ml液体沿壁放人装有稀释液的试管A中，分度吸管弃去，作为1:10供试液。
所述的稀释液根据检测样品确定，均按照本领域常规稀释液选择。
4.2将试管A放置涡旋混合器上进行漩涡，当漩涡到达试管底部时立刻移开试管。用分度吸管吸吹3次后量取1ml液体沿壁放去装有稀释液的试管B中，分度吸管弃去，作为1:100供试液。
4.3稀释下一级时同4.1操作或者4.2操作，或者按照4.1，4.2操作顺次进行，具体操作根据本领域的检测样品浓度的要求。
5注意事项
5.1吸取样品前需使其均匀后方可吸液。
5.2每次将液体转移到下一级的试管后，所用的分度吸管即可弃去不需要吹洗。
5.3加液至平皿时亦需要吸吹3次后才能进行。
6偏离范围
6.1菌落计数、酵母菌计数
6.1.1适用于30～300CFU的平板。
6.1.2同一份样品，不同实验人员间的结果差异：当平均值小于100CFU时，以超出平均值±15CFU为偏离范围；当平均值大于等于100CFU时，以超出平均值的±18％为偏离范围。
6.2霉菌计数
6.2.1适用于小于100CFU的平板。
6.2.2同一份样品，不同实验人员间的结果差异：以超出平均值±15CFU为偏离范围。
6.3超出偏离范围的值不可信，不纳入不确定度的计算。实验人员需寻找原因，或进行再培训，重新实验。
7不确定度
7.1不确定度来源
菌落计数检验的不确定度来源主要为培养温度、培养时间、培养基类型、稀释方法、样品重现性以及人员操作等，由于本方法为同一份样品，由不同实验人员在同一时间、同一地点、相同环境下按相同的稀释方法进行，而且培养温度、培养时间、所用培养基均一致，其带来的影响均可忽略不计。故本方法的不确定度只考虑为人员间的操作所带来的误差。
7.2本方法的扩展不确定度为：U95＝0.019(以对数表示)
则菌落数可表示为：
7.3实例
如：测得样品菌落数分别为48CFU/ml和52CFU/ml，则取对数之后分别为1.681和1.716，对数平均值为1.699，则以对数表示时的取值范围为lgX＝1.699±0.019，即1.680～1.718，取反对数后可得到依本方法不确定度计算出来的菌落数(48～52)CFU/ml。
Claims (3)
1.一种检测微生物时定量稀释的方法，其特征在于，依次包括下述步骤
1)吸取样品前先将样品摇均匀后，用分度吸管吸吹3次，量取1ml液体沿壁放人装有稀释液的试管A中，分度吸管弃去，作为1:10供试液；
2)将试管A放置涡旋混合器上进行漩涡，当漩涡到达试管底部时立刻移开试管，用分度吸管吸吹3次后量取1ml液体沿壁放去装有稀释液的试管B中；
3)下一级稀释时重复步骤1)或/和步骤2)。
2.根据权利要求1所述的检测微生物时定量稀释的方法，其特征在于，步骤1)所述的将样品摇均匀是将样品顺、反时针各摇20次。
3.根据权利要求1所述的检测微生物时定量稀释的方法，其特征在于，步骤1)所述的将样品摇均匀是均质袋样品左右摇匀。
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| CN201510242565.5A CN104789636A (zh) | 2015-05-12 | 2015-05-12 | 一种检测微生物时定量稀释的方法 |
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Publications (1)
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Citations (3)
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| CN101440392A (zh) * | 2008-12-15 | 2009-05-27 | 浙江大学 | 一种肠道类杆菌培养方法 |
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| 李志香: "《食品微生物学及其技能训练》", 31 August 2011 * |
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