CN104774832A - 一种海底沉降石油降解菌剂及其制备方法 - Google Patents
一种海底沉降石油降解菌剂及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
一种海底沉降石油降解菌剂及其制备方法，属于微生物技术领域，发明人提供菌剂颗粒按照以下步骤获得活化培养料、制繁殖培养基；菌种扩培制适于石油降解的菌种的发酵料；混合造粒，得菌剂颗粒；不仅使石油降解微生物拥有寄居的空间，同时微生物可获得缓释的营养；该降解菌剂具备沉降特性，解决了石油污染后引起的海底沉降石油污染及继而引发的海底荒漠化问题。
Description
技术领域
本发明涉及海洋环境治理领域，尤其是涉及石油污染后引起的海底沉降石油污染的生物治理领域。
背景技术
近年来随着海洋石油的运输、开采、装卸、加工和使用，海洋石油泄漏事件时有发生，海洋石油污染日益加剧。石油对生物多样性的破坏严重，包括人们常见的各种鱼类、鸟类以及其它生物都受到了严重影响，石油可沾附在鱼鳃上，使鱼窒息，抑制水鸟产卵和孵化，破坏其羽毛的不透水性，降低水产品质量；同时，泄露的石油可形成油膜，阻碍水体的复氧作用，影响海洋浮游生物生长，破坏海洋生态平衡；此外还可破坏海滨风景，影响海滨美学价值。
目前，针对于石油污染，尤其是大面积石油泄漏，通常采用的应急措施除了采油人工打捞等物理方法，还采用加入消油剂使石油乳化，迅速沉降的方法以恢复海面暂时的清洁，虽然这一方法短时看似起到了治理的效果，但背后却隐藏着危机，其会造成二次化学污染，而且会促使大量原油沉降海底，继而引起海底荒漠化。
这是因为加入化学消油剂多由表面活性剂和强渗透性的溶剂组成，如烷基酚聚氧乙烯醚类、聚乙二醇油酸酯、聚氧乙烯山梨醇酐油酸酯等，其对高黏稠油(如高黏度重油、高蜡质油等)以及在低温(10℃以下)下使用时，还存在着乳化率低甚至无效的弱点，且消油剂的用量非常大，起码为溢油量的20％以上，多以30％-40％为好，甚至有时在处理粘度小或薄油层时耗量更可达到溢油量的100％。因此产生了二次化学污染，而且促使大量原油沉降海底，由于海底黑暗、低温、寡养、缺氧的极端条件，使其中的消油剂及原油混合物更加难以降解，而使海底成为荒漠，最终导致海洋生态平衡遭到严重破坏，引发全球环境的恶化。
发明内容
为了解决石油污染后引起的海底沉降石油污染及继而引发的海底荒漠化问题，本发明提供一种海底石油降解菌剂及其制备方法。
发明人的技术构思为：研发一种石油降解微生物的载体，不仅能够为石油降解微生物提供寄居的空间，同时该载体可为微生物提供缓释营养并且具备沉降特性。
本发明的目的通过下述方案实现：
一种海底沉降石油降解菌剂，是将适于石油降解的菌种的发酵料与石油降解微生物载体的制备原料按照1:5-15的质量比，优选1:10的质量比混合后造粒烘干而得；进一步的，使最终的菌剂浓度为1010cfu/ml以上为佳；所述的石油降解微生物载体的制备原料及其配比包括：
| 腐殖酸 | 50-80wt％ |
| 花生饼粉 | 2-5wt％ |
| 麸皮 | 2-5wt％ |
| 膨润土 | 15-39wt％ |
| Na2HPO4 | 0.5-0.7wt％ |
| KH2PO4 | 0.1-0.2wt％ |
| NH4NO3 | 0.2-0.3wt％ |
进一步的，所述的适于石油降解的菌株的发酵料可采用本领域普通技术人员所公知的任意一种发酵方法来获得。但采用发明人所使用的以下方法生产发酵料，会取得更好的效果：
适于石油降解的菌种的发酵料是将活化好的适于石油降解的菌种培养料与繁殖培养基按照1:5-10质量比，优选1:10的质量比混合；于20～50℃、优选37℃下固体发酵3～7天，优选发酵5天，得菌种的发酵料，最终发酵料的活菌数1010cfu/g以上；
所述的活化好的的菌种培养料是在LB斜面挑取待活化适于石油降解的菌株接入活化液体LB培养基中25-50℃下、优选37℃进行活化而得；从而得到活化后菌体浓度为1010cfu/ml的的培养料；所述活化液体LB培养基为：蛋白胨10g/L,NaCl 10g/L,酵母膏5g/L，pH 7.0～7.5；121℃,30min灭菌；
所述的繁殖培养基固态原料及配比：
| 腐殖酸 | 50-80wt％ |
| 花生饼粉 | 2-5wt％ |
| 麸皮 | 3-8wt％ |
| 膨润土 | 15-37wt％ |
繁殖培养基成品的湿度优选55％。
进一步的，所述的造粒烘干可按照常规方法造粒即可，但优选下述发明人采用的方法，可产生更优的效果：
造粒烘干是将混合料加入搅拌机中并加入粘结剂搅拌，加水充分混合使含水量低于25wt％，挤压造粒，80℃以下顺流烘干10min以下；冷却后即得菌剂颗粒，保证菌剂颗粒中活菌数达到109cfu/ml；
优选的，所述的顺流烘干，具体是将湿颗粒通过烘干机前部的中间仓进入烘干筒内，与此同时热风以顺流方式进入烘干筒，在旋转筒体的内抄板带动下，物料被抄起，形成分撒均匀的较密集的料幕；
优选的，石油降解微生物载体的制备原料均为20目以下的细粉；
优选的，繁殖培养基的制备原料均为20目以下的细粉。
本发明同时要求保护上述一种海底沉降石油降解菌剂的制备方法，是将适于石油降解的菌种的发酵料与石油降解微生物载体的制备原料按照1:5-15的质量比，优选1:10的质量比混合，然后经过造粒烘干而成菌剂颗粒；其包括以下步骤：
(1)制备石油降解菌菌种活化培养料；
(2)配制繁殖培养基；
(3)配制石油降解微生物载体的制备原料；
(4)菌种扩培制适于石油降解的菌种的发酵料；
(5)将适于石油降解的菌种的发酵料与石油降解微生物载体的制备原料混合造粒，得菌剂颗粒；
所述步骤(3)具体为将表1中原料按照表1中的配比混合，实践证明，将原料逐个粉碎成20目的细粉效果更佳。
菌剂载体原料及配比为：
表1
| 腐殖酸 | 50-80wt％ |
| 花生饼粉 | 2-5wt％ |
| 麸皮 | 2-5wt％ |
| 膨润土 | 15-39wt％ |
| Na2HPO4 | 0.5-0.7wt％ |
| KH2PO4 | 0.1-0.2wt％ |
| NH4NO3 | 0.2-0.3wt％ |
所述的石油降解微生物载体的制备原料的优选配比为：
表2
| 腐殖酸 | wt％ |
| 花生饼粉 | wt％ |
| 麸皮 | wt％ |
| 膨润土 | wt％ |
| Na2HPO4 | wt％ |
| KH2PO4 | wt％ |
| NH4NO3 | wt％ |
进一步的，所述的适于石油降解的菌株的发酵料可采用本领域普通技术人员所公知的任意一种发酵方法来获得。但采用发明人所使用的以下方法生产发酵料，会取得更好的效果：
优选的，所述的步骤(1)具体为在LB斜面挑取待活化适于石油降解的菌株接入活化液体LB培养基中于25-50℃下、优选37℃进行活化而得；从而得到活化后菌体浓度为1010cfu/ml的的培养料；所述活化液体LB培养基为：蛋白胨10g/L,NaCl 10g/L,酵母膏5g/L，pH 7.0～7.5；121℃,30min灭菌；(从)
优选的，所述的步骤(2)具体为将表3中的原料按照表3中的配比混合，实践证明，将上述的原料逐个粉碎成20目的细粉效果更佳。
繁殖培养基固态原料及配比为：
表3
| 腐殖酸 | 50-80wt％ |
| 花生饼粉 | 2-5wt％ |
| 麸皮 | 3-8wt％ |
| 膨润土 | 15-37wt％ |
繁殖培养基成品的湿度优选55％。
优选的，所述的步骤(4)具体是将步骤(1)制备的石油降解菌菌种活化培养料和步骤(2)配制的繁殖培养基按照1:5-10，优选1:10的质量比混合；于20～50℃、优选37℃下固体发酵3～7天，优选发酵5天，得菌种的发酵料；最终发酵料的活菌数1010cfu/g以上；
所述的造粒烘干可按照常规方法造粒即可，但优选下述发明人采用的方法，可产生更优的效果：
优选的，所述的步骤(5)混合造粒具体是将步骤(4)制得的菌种发酵料与步骤(3)所述的菌剂载体制备原料，按照1:10的质量比混合均匀后，使最终的菌剂浓度为1010cfu/ml以上，将混合料加入搅拌机中并加入粘结剂搅拌，加水充分混合使含水量低于25wt％，挤压造粒，80℃顺流烘干10min；冷却后即得菌剂颗粒，保证菌剂颗粒中活菌数达到109cfu/ml；
进一步的，所述的顺流烘干具体是将湿颗粒通过烘干机前部的中间仓进入烘干筒内，与此同时热风以顺流方式进入烘干筒，在旋转筒体的内抄板带动下，物料被抄起，形成分撒均匀的较密集的料幕。
本发明的有益效果在于：
发明人研发的一种海底石油降解菌剂，不仅使石油降解微生物拥有寄居的空间，同时微生物可获得缓释的营养；
该降解菌剂具备沉降特性，解决了石油污染后引起的海底沉降石油污染及继而引发的海底荒漠化问题。
附图说明
图1本发明海底沉降石油降解菌剂颗粒形态图；
图2AW29降解效果图；
图3菌剂载体对菌株AW29的营养作用参数图；
图4菌剂载体对菌株AH07的营养作用参数图。
具体实施方式
下面以具体实施的方式对本发明的技术方案作进一步的说明，但本发明不以任何形式受限于实施例内容。
实施例1—3中所述的适用于石油降解的菌株AW29(Bacillus thermotolerans，CGMCC No.10352)已提交保藏，具体保藏信息如下：
保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)；
保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；
保藏日期：2015年01月13日；
保藏编号：CGMCC No.10352。
实施例1
海底沉降石油降解菌剂，是将适于石油降解的菌种AW29的发酵料与石油降解微生物载体的制备原料按照1:15的质量比混合后造粒烘干而得；进一步的，使最终的菌剂浓度为1010cfu/ml以上为佳；
所述的石油降解微生物载体的制备原料及其配比包括：
| 腐殖酸 | 80wt％ |
| 花生饼粉 | 2wt％ |
| 麸皮 | 2wt％ |
| 膨润土 | 15wt％ |
| Na2HPO4 | 0.5wt％ |
| KH2PO4 | 0.2wt％ |
| NH4NO3 | 0.3wt％ |
进一步的，所述的适于石油降解的菌种AW29的发酵料可采用本领域普通技术人员所公知的任意一种发酵方法来获得。但采用发明人所使用的以下方法生产发酵料，会取得更好的效果：
适于石油降解的菌种AW29的发酵料是将活化好的适于石油降解的菌种AW29培养料与繁殖培养基按照1:10质量比，于50℃下固体发酵7天，得菌种AW29的发酵料，进一步的，使最终发酵料的活菌数1010cfu/g以上；
所述的活化好适于石油降解的菌种AW29培养料是在LB斜面挑取待活化适于石油降解的菌株接入活化液体LB培养基中50℃下、优选37℃进行活化而得；从而得到活化后菌体浓度为1010cfu/ml的培养料；所述活化液体LB培养基为：蛋白胨10g/L,NaCl 10g/L,酵母膏5g/L，pH 7.0～7.5；121℃,30min灭 菌；
所述的繁殖培养基固态原料及配比：
| 腐殖酸 | 80wt％ |
| 花生饼粉 | 2wt％ |
| 麸皮 | 3wt％ |
| 膨润土 | 15wt％ |
繁殖培养基成品的湿度优选55％。
进一步的，所述的造粒烘干可按照常规方法造粒即可，但优选下述发明人采用的方法，可产生更优的效果：
造粒烘干是将混合料加入搅拌机中并加入粘结剂搅拌，加水充分混合使含水量低于25wt％，挤压造粒，80℃以下顺流烘干10min以下；冷却后即得海底沉降石油降解菌剂，保证海底沉降石油降解菌剂中活菌数达到109cfu/ml；
优选的，所述的顺流烘干，具体是将湿颗粒通过烘干机前部的中间仓进入烘干筒内，与此同时热风以顺流方式进入烘干筒，在旋转筒体的内抄板带动下，物料被抄起，形成分撒均匀的较密集的料幕；
优选的，石油降解微生物载体的制备原料均为20目以下的细粉；
优选的，繁殖培养基的制备原料均为20目以下的细粉。
所述的烘干机可以选用任意一种能够完成烘干步骤的市售烘干机，但优选以下厂家生产的该型号的烘干机：章丘市宇龙机械有限公司，顺流滚筒式烘干机GHGф1.0*12*1。
实施例2
海底沉降石油降解菌剂，是将适于石油降解的菌种AW29的发酵料与石油降解微生物载体的制备原料按照1:5的质量比混合后造粒烘干而得；进一步的，使最终的菌剂浓度为1010cfu/ml以上为佳；
所述的石油降解微生物载体的制备原料及其配比包括：
| 腐殖酸 | 53.1wt％ |
| 花生饼粉 | 5wt％ |
| 麸皮 | 2wt％ |
| 膨润土 | 39wt％ |
| Na2HPO4 | 0.5wt％ |
| KH2PO4 | 0.2wt％ |
| NH4NO3 | 0.2wt％ |
进一步的，所述的适于石油降解的菌种AW29的发酵料可采用本领域普通技术人员所公知的任意一种发酵方法来获得。但采用发明人所使用的以下方法生产发酵料，会取得更好的效果：
适于石油降解的菌种AW29的发酵料是将活化好的适于石油降解的菌种AW29培养料与繁殖培养基按照1:5质量比混合；于20℃下固体发酵3天，优选发酵5天，得菌种AW29的发酵料，进一步的，使最终发酵料的活菌数1010cfu/g以上；
所述的活化好适于石油降解的菌种AW29培养料是在LB斜面挑取待活化适于石油降解的菌株接入活化液体LB培养基中25℃下进行活化而得；从而得到活化后菌体浓度为1010cfu/ml的培养料；所述活化液体LB培养基为：蛋白胨10g/L,NaCl 10g/L,酵母膏5g/L，pH 7.0～7.5；121℃,30min灭菌；
所述的繁殖培养基固态原料及配比：
| 腐殖酸 | 55wt％ |
| 花生饼粉 | 5wt％ |
| 麸皮 | 3wt％ |
| 膨润土 | 37wt％ |
繁殖培养基成品的湿度优选55％。
进一步的，所述的造粒烘干可按照常规方法造粒即可，但优选下述发明人采用的方法，可产生更优的效果：
造粒烘干是将混合料加入搅拌机中并加入粘结剂搅拌，加水充分混合使含水量低于25wt％，挤压造粒，80℃以下顺流烘干10min以下；冷却后即得海底沉降石油降解菌剂，保证海底沉降石油降解菌剂中活菌数达到109cfu/ml；
优选的，所述的顺流烘干，具体是将湿颗粒通过烘干机前部的中间仓进入烘干筒内，与此同时热风以顺流方式进入烘干筒，在旋转筒体的内抄板带动下，物料被抄起，形成分撒均匀的较密集的料幕；
优选的，石油降解微生物载体的制备原料均为20目以下的细粉；
优选的，繁殖培养基的制备原料均为20目以下的细粉。
所述的烘干机可以选用任意一种能够完成烘干步骤的市售烘干机，但优选以下厂家生产的该型号的烘干机：章丘市宇龙机械有限公司，顺流滚筒式烘干机GHGф1.0*12*1。
实施例3
海底沉降石油降解菌剂，是将适于石油降解的菌种AW29的发酵料与石油降解微生物载体的制备原料按照1:10的质量比混合后造粒烘干而得；进一步的，使最终的菌剂浓度为1010cfu/ml以上为佳；
所述的石油降解微生物载体的制备原料及其配比包括：
| 腐殖酸 | 75wt％ |
| 花生饼粉 | 3wt％ |
| 麸皮 | 3wt％ |
| 膨润土 | 18wt％ |
| Na2HPO4 | 0.5wt％ |
| KH2PO4 | 0.2wt％ |
| NH4NO3 | 0.3wt％ |
进一步的，所述的适于石油降解的菌种AW29的发酵料可采用本领域普通技术人员所公知的任意一种发酵方法来获得。但采用发明人所使用的以下方法生产发酵料，会取得更好的效果：
适于石油降解的菌种AW29的发酵料是将活化好的适于石油降解的菌种AW29培养料与繁殖培养基按照1:8质量比混合；于37℃下固体发酵5天，得菌种AW29的发酵料，进一步的，使最终发酵料的活菌数1010cfu/g以上；
所述的活化好适于石油降解的菌种AW29培养料是在LB斜面挑取待活化适于石油降解的菌株接入活化液体LB培养基中37℃进行活化而得；从而得到活化后菌体浓度为1010cfu/ml的培养料；所述活化液体LB培养基为：蛋白胨10g/L,NaCl 10g/L,酵母膏5g/L，pH 7.0～7.5；121℃,30min灭菌；
所述的繁殖培养基固态原料及配比：
| 腐殖酸 | 74wt％ |
| 花生饼粉 | 4wt％ |
| 麸皮 | 7wt％ |
| 膨润土 | 15wt％ |
繁殖培养基成品的湿度优选55％。
进一步的，所述的造粒烘干可按照常规方法造粒即可，但优选下述发明人采用的方法，可产生更优的效果：
造粒烘干是将混合料加入搅拌机中并加入粘结剂搅拌，加水充分混合使含水量低于25wt％，挤压造粒，80℃以下顺流烘干10min以下；冷却后即得海底沉降石油降解菌剂，保证海底沉降石油降解菌剂中活菌数达到109cfu/ml；
优选的，所述的顺流烘干，具体是将湿颗粒通过烘干机前部的中间仓进入烘干筒内，与此同时热风以顺流方式进入烘干筒，在旋转筒体的内抄板带动下，物料被抄起，形成分撒均匀的较密集的料幕；
优选的，石油降解微生物载体的制备原料均为20目以下的细粉；
优选的，繁殖培养基的制备原料均为20目以下的细粉。
所述的烘干机可以选用任意一种能够完成烘干步骤的市售烘干机，但优选以下厂家生产的该型号的烘干机：章丘市宇龙机械有限公司，顺流滚筒式烘干机GHGф1.0*12*1。
菌株AW29菌剂颗粒的石油降解性能测评
分别取制备好的活菌数达到109cfu/ml的菌剂颗粒0.2g、0.5g、1g、2g、4g，分别添加至装入100mL不含石油的ASM培养基的无菌三角瓶中，加入0.5mL的灭菌石油，混合摇匀，15℃静止培养9d后，测定石油降解率。以不加入菌剂颗粒的含石油ASM培养基作为对照。
ASM培养基的配方：
NaCl：30g，NH4NO3：1g，KH2PO4：0.2245g，Na2HPO4·12H2O：5g，天然海水1000ml，微量溶液：10ml，pH 7.5。灭菌温度121℃，30min。
微量溶液配方：
| CaCl2 | FeCl.6H2O | CuSO4 | MnCl.4H2O | ZnSO4·7H2O | 蒸馏水 |
| 2mg | 50mg | 0.5mg | 0.5mg | 10mg | 1000ml |
表4石油降解菌株AW29菌剂颗粒添加量对石油降解性能的影响(石油降解率％)
降解效果如图2所示。
菌剂载体对菌株AW29的营养作用
试验方法：
取实施例1方法制得的菌剂颗粒1800g，平均分成18份，每份100g，置于耐压厌氧培养瓶中，每份菌剂添加天然海水200ml，首先使耐压厌氧培养瓶抽真空，排出空气后充入氮气，使压力达到1个大气压，然后将耐压厌氧培养瓶置于15℃低温培养箱内培养，分别于第1周-第5周每周取3瓶，按照梯度稀释法在LB培养基上进行活菌数计数，计算每周菌株AW29的繁殖情况。以原始菌剂中的活菌数作对照。
实验结果
如图3所示，随着培养时间的延长，AW29活菌数逐渐呈上升趋势，到第四周时趋于稳定，说明菌剂载体能够为菌株AW29提供生长所需的营养。
实施例4-6所述的具有石油降解功能的低温细菌BW02(Rhodococcus qingshengii，CGMCC No.10354)已提交保藏，具体保藏信息如下：
保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)；
保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；
保藏日期：2015年01月13日；
保藏编号：CGMCC No.10354。
实施例4
海底沉降石油降解菌剂，是将菌种BW02的发酵料与石油降解微生物载体的制备原料按照1:15的质量比混合后造粒烘干而得；进一步的，使最终的菌剂浓度为1010cfu/ml以上为佳；
所述的石油降解微生物载体的制备原料及其配比包括：
| 腐殖酸 | 80wt％ |
| 花生饼粉 | 2wt％ |
| 麸皮 | 2wt％ |
| 膨润土 | 15wt％ |
| Na2HPO4 | 0.5wt％ |
| KH2PO4 | 0.2wt％ |
| NH4NO3 | 0.3wt％ |
进一步的，所述的菌种BW02的发酵料可采用本领域普通技术人员所公知的任意一种发酵方法来获得。但采用发明人所使用的以下方法生产发酵料，会取得更好的效果：
菌种BW02的发酵料是将活化好的菌种BW02培养料与繁殖培养基按照1:10质量比，于50℃下固体发酵7天，得菌种BW02的发酵料，进一步的，使最终发酵料的活菌数1010cfu/g以上；
所述的活化好菌种BW02培养料是在LB斜面挑取待活化适于石油降解的菌株接入活化液体LB培养基中50℃下、优选37℃进行活化而得；从而得到活化后菌体浓度为1010cfu/ml的培养料；所述活化液体LB培养基为：蛋白胨10g/L,NaCl10g/L,酵母膏5g/L，pH 7.0～7.5；121℃,30min灭菌；
所述的繁殖培养基固态原料及配比：
| 腐殖酸 | 80wt％ |
| 花生饼粉 | 2wt％ |
| 麸皮 | 3wt％ |
| 膨润土 | 15wt％ |
繁殖培养基成品的湿度优选55％。
进一步的，所述的造粒烘干可按照常规方法造粒即可，但优选下述发明人采用的方法，可产生更优的效果：
造粒烘干是将混合料加入搅拌机中并加入粘结剂搅拌，加水充分
混合使含水量低于25wt％，挤压造粒，80℃以下顺流烘干10min以下；冷却后即得海底沉降石油降解菌剂，保证海底沉降石油降解菌剂中活菌数达到109cfu/ml；
优选的，所述的顺流烘干，具体是将湿颗粒通过烘干机前部的中间仓进入烘干筒内，与此同时热风以顺流方式进入烘干筒，在旋转筒体的内抄板带动下，物料被抄起，形成分撒均匀的较密集的料幕；
优选的，石油降解微生物载体的制备原料均为20目以下的细粉；
优选的，繁殖培养基的制备原料均为20目以下的细粉。
所述的烘干机可以选用任意一种能够完成烘干步骤的市售烘干机，但优选以下厂家生产的该型号的烘干机：章丘市宇龙机械有限公司，顺流滚筒式烘干机GHGф1.0*12*1。
实施例5
海底沉降石油降解菌剂，是将菌种BW02的发酵料与石油降解微生物载体的制备原料按照1:5的质量比混合后造粒烘干而得；进一步的，使最终的菌剂浓度为1010cfu/ml以上为佳；
所述的石油降解微生物载体的制备原料及其配比包括：
| 腐殖酸 | 53.1wt％ |
| 花生饼粉 | 5wt％ |
| 麸皮 | 2wt％ |
| 膨润土 | 39wt％ |
| Na2HPO4 | 0.5wt％ |
| KH2PO4 | 0.2wt％ |
| NH4NO3 | 0.2wt％ |
进一步的，所述的菌种BW02的发酵料可采用本领域普通技术人员所公知的 任意一种发酵方法来获得。但采用发明人所使用的以下方法生产发酵料，会取得更好的效果：
菌种BW02的发酵料是将活化好的菌种BW02培养料与繁殖培养基按照1:5质量比混合；于20℃下固体发酵3天，优选发酵5天，得菌种BW02的发酵料，进一步的，使最终发酵料的活菌数1010cfu/g以上；
所述的菌种BW02培养料是在LB斜面挑取待活化的BW02菌株接入活化液体LB培养基中25℃下进行活化而得；从而得到活化后菌体浓度为1010cfu/ml的培养料；所述活化液体LB培养基为：蛋白胨10g/L,NaCl 10g/L,酵母膏5g/L，pH 7.0～7.5；121℃,30min灭菌；
所述的繁殖培养基固态原料及配比：
| 腐殖酸 | 55wt％ |
| 花生饼粉 | 5wt％ |
| 麸皮 | 3wt％ |
| 膨润土 | 37wt％ |
繁殖培养基成品的湿度优选55％。
进一步的，所述的造粒烘干可按照常规方法造粒即可，但优选下述发明人采用的方法，可产生更优的效果：
造粒烘干是将混合料加入搅拌机中并加入粘结剂搅拌，加水充分混合使含水量低于25wt％，挤压造粒，80℃以下顺流烘干10min以下；冷却后即得海底沉降石油降解菌剂，保证海底沉降石油降解菌剂中活菌数达到109cfu/ml；
优选的，所述的顺流烘干，具体是将湿颗粒通过烘干机前部的中间仓进入烘干筒内，与此同时热风以顺流方式进入烘干筒，在旋转筒体的内抄板带动下，物料被抄起，形成分撒均匀的较密集的料幕；
优选的，石油降解微生物载体的制备原料均为20目以下的细粉；
优选的，繁殖培养基的制备原料均为20目以下的细粉。
所述的烘干机可以选用任意一种能够完成烘干步骤的市售烘干机，但优选以下厂家生产的该型号的烘干机：章丘市宇龙机械有限公司，顺流滚筒式烘干机GHGф1.0*12*1。
实施例6
海底沉降石油降解菌剂，是将菌种BW02的发酵料与石油降解微生物载体的制备原料按照1:10的质量比混合后造粒烘干而得；进一步的，使最终的菌剂浓度为1010cfu/ml以上为佳；
所述的石油降解微生物载体的制备原料及其配比包括：
| 腐殖酸 | 75wt％ |
| 花生饼粉 | 3wt％ |
| 麸皮 | 3wt％ |
| 膨润土 | 18wt％ |
| Na2HPO4 | 0.5wt％ |
| KH2PO4 | 0.2wt％ |
| NH4NO3 | 0.3wt％ |
进一步的，所述的菌种BW02的发酵料可采用本领域普通技术人员所公知的任意一种发酵方法来获得。但采用发明人所使用的以下方法生产发酵料，会取得更好的效果：
适于石油降解的菌种BW02的发酵料是将活化好的菌种BW02培养料与繁殖培养基按照1:8质量比混合；于37℃下固体发酵5天，得菌种BW02的发酵料，进一步的，使最终发酵料的活菌数1010cfu/g以上；
所述的活化好菌种BW02培养料是在LB斜面挑取待活化BW02菌株接入活化液体LB培养基中37℃进行活化而得；从而得到活化后菌体浓度为1010cfu/ml的培养料；所述活化液体LB培养基为：蛋白胨10g/L,NaCl 10g/L,酵母膏5g/L，pH 7.0～7.5；121℃,30min灭菌；
所述的繁殖培养基固态原料及配比：
| 腐殖酸 | 74wt％ |
| 花生饼粉 | 4wt％ |
| 麸皮 | 7wt％ |
| 膨润土 | 15wt％ |
繁殖培养基成品的湿度优选55％。
进一步的，所述的造粒烘干可按照常规方法造粒即可，但优选下述发明人采 用的方法，可产生更优的效果：
造粒烘干是将混合料加入搅拌机中并加入粘结剂搅拌，加水充分混合使含水量低于25wt％，挤压造粒，80℃以下顺流烘干10min以下；冷却后即得海底沉降石油降解菌剂，保证海底沉降石油降解菌剂中活菌数达到109cfu/ml；
优选的，所述的顺流烘干，具体是将湿颗粒通过烘干机前部的中间仓进入烘干筒内，与此同时热风以顺流方式进入烘干筒，在旋转筒体的内抄板带动下，物料被抄起，形成分撒均匀的较密集的料幕；
优选的，石油降解微生物载体的制备原料均为20目以下的细粉；
优选的，繁殖培养基的制备原料均为20目以下的细粉。
所述的烘干机可以选用任意一种能够完成烘干步骤的市售烘干机，但优选以下厂家生产的该型号的烘干机：章丘市宇龙机械有限公司，顺流滚筒式烘干机GHGф1.0*12*1。
菌株BW02菌剂颗粒的石油降解性能测评
分别取制备好的活菌数达到109cfu/ml的菌剂颗粒0.2g、0.5g、1g、2g、4g，分别添加至装入100mL不含石油的ASM培养基的无菌三角瓶中，加入0.5mL的灭菌石油，混合摇匀，15℃静止培养9d后，测定石油降解率。以不加入菌剂颗粒的含石油ASM培养基作为对照。
实验结果
随着培养时间的延长，BW02活菌数逐渐呈上升趋势，到第四周时趋于稳定，说明菌剂载体能够为菌株BW02提供生长所需的营养。
实施例7-9所述的菌株AH07(Ochrobactrum cytisi，CGMCC No.10349)已提交保藏，具体保藏信息如下：
保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)；
保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；
保藏日期：2015年01月13日；
保藏编号：CGMCC No.10349；
实施例7
海底沉降石油降解菌剂，是将菌种AH07的发酵料与石油降解微生物载体的制备原料按照1:15的质量比混合后造粒烘干而得；进一步的，使最终的菌剂浓度为1010cfu/ml以上为佳；
所述的石油降解微生物载体的制备原料及其配比包括：
| 腐殖酸 | 80wt％ |
| 花生饼粉 | 2wt％ |
| 麸皮 | 2wt％ |
| 膨润土 | 15wt％ |
| Na2HPO4 | 0.5wt％ |
| KH2PO4 | 0.2wt％ |
| NH4NO3 | 0.3wt％ |
进一步的，所述的菌种AH07的发酵料可采用本领域普通技术人员所公知的任意一种发酵方法来获得。但采用发明人所使用的以下方法生产发酵料，会取得更好的效果：
菌种AH07的发酵料是将活化好的菌种AH07培养料与繁殖培养基按照1:10质量比，于50℃下固体发酵7天，得菌种AH07的发酵料，进一步的，使最终发酵料的活菌数1010cfu/g以上；
所述的菌种AH07培养料是在LB斜面挑取待活化适于石油降解的菌株接入活化液体LB培养基中50℃下、优选37℃进行活化而得；从而得到活化后菌体浓度为1010cfu/ml的培养料；所述活化液体LB培养基为：蛋白胨10g/L,NaCl 10g/L,酵母膏5g/L，pH 7.0～7.5；121℃,30min灭菌；
所述的繁殖培养基固态原料及配比：
| 腐殖酸 | 80wt％ |
| 花生饼粉 | 2wt％ |
| 麸皮 | 3wt％ |
| 膨润土 | 15wt％ |
繁殖培养基成品的湿度优选55％。
进一步的，所述的造粒烘干可按照常规方法造粒即可，但优选下述发明人采 用的方法，可产生更优的效果：
造粒烘干是将混合料加入搅拌机中并加入粘结剂搅拌，加水充分混合使含水量低于25wt％，挤压造粒，80℃以下顺流烘干10min以下；冷却后即得海底沉降石油降解菌剂，保证海底沉降石油降解菌剂中活菌数达到109cfu/ml；
优选的，所述的顺流烘干，具体是将湿颗粒通过烘干机前部的中间仓进入烘干筒内，与此同时热风以顺流方式进入烘干筒，在旋转筒体的内抄板带动下，物料被抄起，形成分撒均匀的较密集的料幕；
优选的，石油降解微生物载体的制备原料均为20目以下的细粉；
优选的，繁殖培养基的制备原料均为20目以下的细粉。
所述的烘干机可以选用任意一种能够完成烘干步骤的市售烘干机，但优选以下厂家生产的该型号的烘干机：章丘市宇龙机械有限公司，顺流滚筒式烘干机GHGф1.0*12*1。
实施例8
海底沉降石油降解菌剂，是将菌种AH07的发酵料与石油降解微生物载体的制备原料按照1:5的质量比混合后造粒烘干而得；进一步的，使最终的菌剂浓度为1010cfu/ml以上为佳；
所述的石油降解微生物载体的制备原料及其配比包括：
| 腐殖酸 | 53.1wt％ |
| 花生饼粉 | 5wt％ |
| 麸皮 | 2wt％ |
| 膨润土 | 39wt％ |
| Na2HPO4 | 0.5wt％ |
| KH2PO4 | 0.2wt％ |
| NH4NO3 | 0.2wt％ |
进一步的，所述的菌种AH07的发酵料可采用本领域普通技术人员所公知的任意一种发酵方法来获得。但采用发明人所使用的以下方法生产发酵料，会取得更好的效果：
菌种AH07的发酵料是将活化好的菌种AH07培养料与繁殖培养基按照1:5质量比混合；于20℃下固体发酵3天，优选发酵5天，得菌种AH07的发酵料，进一步的，使最终发酵料的活菌数1010cfu/g以上；
所述的活化好菌种AH07培养料是在LB斜面挑取待活化适于石油降解的菌株接入活化液体LB培养基中25℃下进行活化而得；从而得到活化后菌体浓度为1010cfu/ml的培养料；所述活化液体LB培养基为：蛋白胨10g/L,NaCl 10g/L,酵母膏5g/L，pH 7.0～7.5；121℃,30min灭菌；
所述的繁殖培养基固态原料及配比：
| 腐殖酸 | 55wt％ |
| 花生饼粉 | 5wt％ |
| 麸皮 | 3wt％ |
| 膨润土 | 37wt％ |
繁殖培养基成品的湿度优选55％。
进一步的，所述的造粒烘干可按照常规方法造粒即可，但优选下述发明人采用的方法，可产生更优的效果：
造粒烘干是将混合料加入搅拌机中并加入粘结剂搅拌，加水充分混合使含水量低于25wt％，挤压造粒，80℃以下顺流烘干10min以下；冷却后即得海底沉降石油降解菌剂，保证海底沉降石油降解菌剂中活菌数达到109cfu/ml；
优选的，所述的顺流烘干，具体是将湿颗粒通过烘干机前部的中间仓进入烘干筒内，与此同时热风以顺流方式进入烘干筒，在旋转筒体的内抄板带动下，物料被抄起，形成分撒均匀的较密集的料幕；
优选的，石油降解微生物载体的制备原料均为20目以下的细粉；
优选的，繁殖培养基的制备原料均为20目以下的细粉。
所述的烘干机可以选用任意一种能够完成烘干步骤的市售烘干机，但优选以下厂家生产的该型号的烘干机：章丘市宇龙机械有限公司，顺流滚筒式烘干机GHGф1.0*12*1。
实施例9
海底沉降石油降解菌剂，是将菌种AH07的发酵料与石油降解微生物载体的制备原料按照1:10的质量比混合后造粒烘干而得；进一步的，使最终的菌剂浓 度为1010cfu/ml以上为佳；
所述的石油降解微生物载体的制备原料及其配比包括：
| 腐殖酸 | 75wt％ |
| 花生饼粉 | 3wt％ |
| 麸皮 | 3wt％ |
| 膨润土 | 18wt％ |
| Na2HPO4 | 0.5wt％ |
| KH2PO4 | 0.2wt％ |
| NH4NO3 | 0.3wt％ |
进一步的，所述的菌种AH07的发酵料可采用本领域普通技术人员所公知的任意一种发酵方法来获得。但采用发明人所使用的以下方法生产发酵料，会取得更好的效果：
菌种AH07的发酵料是将活化好的菌种AH07培养料与繁殖培养基按照1:8质量比混合；于37℃下固体发酵5天，得菌种AH07的发酵料，进一步的，使最终发酵料的活菌数1010cfu/g以上；
所述的活化好菌种AH07培养料是在LB斜面挑取待活化适于石油降解的菌株接入活化液体LB培养基中37℃进行活化而得；从而得到活化后菌体浓度为1010cfu/ml的培养料；所述活化液体LB培养基为：蛋白胨10g/L,NaCl 10g/L,酵母膏5g/L，pH 7.0～7.5；121℃,30min灭菌；
所述的繁殖培养基固态原料及配比：
| 腐殖酸 | 74wt％ |
| 花生饼粉 | 4wt％ |
| 麸皮 | 7wt％ |
| 膨润土 | 15wt％ |
繁殖培养基成品的湿度优选55％。
进一步的，所述的造粒烘干可按照常规方法造粒即可，但优选下述发明人采用的方法，可产生更优的效果：
造粒烘干是将混合料加入搅拌机中并加入粘结剂搅拌，加水充分混合使含水 量低于25wt％，挤压造粒，80℃以下顺流烘干10min以下；冷却后即得海底沉降石油降解菌剂，保证海底沉降石油降解菌剂中活菌数达到109cfu/ml；
优选的，所述的顺流烘干，具体是将湿颗粒通过烘干机前部的中间仓进入烘干筒内，与此同时热风以顺流方式进入烘干筒，在旋转筒体的内抄板带动下，物料被抄起，形成分撒均匀的较密集的料幕；
优选的，石油降解微生物载体的制备原料均为20目以下的细粉；
优选的，繁殖培养基的制备原料均为20目以下的细粉。
所述的烘干机可以选用任意一种能够完成烘干步骤的市售烘干机，但优选以下厂家生产的该型号的烘干机：章丘市宇龙机械有限公司，顺流滚筒式烘干机GHGф1.0*12*1。
菌株AH07菌剂颗粒的石油降解性能测评
分别取制备好的活菌数达到109cfu/ml的菌剂颗粒0.2g、0.5g、1g、2g、4g，分别添加至装入100mL不含石油的ASM培养基的无菌三角瓶中，加入0.5mL的灭菌石油，混合摇匀，15℃静止培养9d后，测定石油降解率。以不加入菌剂颗粒的含石油ASM培养基作为对照。
表5石油降解菌株AH07菌剂颗粒添加量对石油降解性能的影响(石油降解率％)
菌剂载体对菌株AH07的营养作用。
试验方法：
取实施例7方法制得的菌剂颗粒1800g，平均分成18份，每份100g，置于耐压厌氧培养瓶中，每份菌剂添加天然海水200ml，首先使耐压厌氧培养瓶抽真空，排出空气后充入氮气，使压力达到1个大气压，然后将耐压厌氧培养瓶置于 15℃低温培养箱内培养，分别于第1周-第5周每周取3瓶，按照梯度稀释法在LB培养基上进行活菌数计数，计算每周菌株AH07的繁殖情况。以原始菌剂中的活菌数作对照。
实验结果
如图4所示，随着培养时间的延长，AH07活菌数逐渐呈上升趋势，到第四周时趋于稳定，说明菌剂载体能够为菌株AH07提供生长所需的营养。
实施例10-12所述的具有石油降解功能的细菌AW25(Pseudomonas indoloxydans，CGMCC No.10351)已提交保藏，具体保藏信息如下：
保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)；
保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；
保藏日期：2015年01月13日；
保藏编号：CGMCC No.10351；
实施例10
海底沉降石油降解菌剂，是将菌种AW25的发酵料与石油降解微生物载体的制备原料按照1:15的质量比混合后造粒烘干而得；进一步的，使最终的菌剂浓度为1010cfu/ml以上为佳；
所述的石油降解微生物载体的制备原料及其配比包括：
| 腐殖酸 | 80wt％ |
| 花生饼粉 | 2wt％ |
| 麸皮 | 2wt％ |
| 膨润土 | 15wt％ |
| Na2HPO4 | 0.5wt％ |
| KH2PO4 | 0.2wt％ |
| NH4NO3 | 0.3wt％ |
进一步的，所述的菌种AW25的发酵料可采用本领域普通技术人员所公知的任意一种发酵方法来获得。但采用发明人所使用的以下方法生产发酵料，会取得更好的效果：
菌种AW25的发酵料是将活化好的菌种AW25培养料与繁殖培养基按照1:10质量比，于50℃下固体发酵7天，得菌种AW25的发酵料，进一步的，使最终发酵料的活菌数1010cfu/g以上；
所述的菌种AW25培养料是在LB斜面挑取待活化适于石油降解的菌株接入活化液体LB培养基中50℃下、优选37℃进行活化而得；从而得到活化后菌体浓度为1010cfu/ml的培养料；所述活化液体LB培养基为：蛋白胨10g/L,NaCl 10g/L,酵母膏5g/L，pH 7.0～7.5；121℃,30min灭菌；
所述的繁殖培养基固态原料及配比：
| 腐殖酸 | 80wt％ |
| 花生饼粉 | 2wt％ |
| 麸皮 | 3wt％ |
| 膨润土 | 15wt％ |
繁殖培养基成品的湿度优选55％。
进一步的，所述的造粒烘干可按照常规方法造粒即可，但优选下述发明人采用的方法，可产生更优的效果：
造粒烘干是将混合料加入搅拌机中并加入粘结剂搅拌，加水充分混合使含水量低于25wt％，挤压造粒，80℃以下顺流烘干10min以下；冷却后即得海底沉降石油降解菌剂，保证海底沉降石油降解菌剂中活菌数达到109cfu/ml；
优选的，所述的顺流烘干，具体是将湿颗粒通过烘干机前部的中间仓进入烘干筒内，与此同时热风以顺流方式进入烘干筒，在旋转筒体的内抄板带动下，物料被抄起，形成分撒均匀的较密集的料幕；
优选的，石油降解微生物载体的制备原料均为20目以下的细粉；
优选的，繁殖培养基的制备原料均为20目以下的细粉。
所述的烘干机可以选用任意一种能够完成烘干步骤的市售烘干机，但优选以下厂家生产的该型号的烘干机：章丘市宇龙机械有限公司，顺流滚筒式烘干机GHGф1.0*12*1。
实施例11
海底沉降石油降解菌剂，是将菌种AW25的发酵料与石油降解微生物载体的制备原料按照1:5的质量比混合后造粒烘干而得；进一步的，使最终的菌剂浓度 为1010cfu/ml以上为佳；
所述的石油降解微生物载体的制备原料及其配比包括：
| 腐殖酸 | 53.1wt％ |
| 花生饼粉 | 5wt％ |
| 麸皮 | 2wt％ |
| 膨润土 | 39wt％ |
| Na2HPO4 | 0.5wt％ |
| KH2PO4 | 0.2wt％ |
| NH4NO3 | 0.2wt％ |
进一步的，所述的菌种AW25的发酵料可采用本领域普通技术人员所公知的任意一种发酵方法来获得。但采用发明人所使用的以下方法生产发酵料，会取得更好的效果：
菌种AW25的发酵料是将活化好的菌种AW25培养料与繁殖培养基按照1:5质量比混合；于20℃下固体发酵3天，优选发酵5天，得菌种AW25的发酵料，进一步的，使最终发酵料的活菌数1010cfu/g以上；
所述的活化好菌种AW25培养料是在LB斜面挑取待活化适于石油降解的菌株接入活化液体LB培养基中25℃下进行活化而得；从而得到活化后菌体浓度为1010cfu/ml的培养料；所述活化液体LB培养基为：蛋白胨10g/L,NaCl 10g/L,酵母膏5g/L，pH 7.0～7.5；121℃,30min灭菌；
所述的繁殖培养基固态原料及配比：
| 腐殖酸 | 55wt％ |
| 花生饼粉 | 5wt％ |
| 麸皮 | 3wt％ |
| 膨润土 | 37wt％ |
繁殖培养基成品的湿度优选55％。
进一步的，所述的造粒烘干可按照常规方法造粒即可，但优选下述发明人采用的方法，可产生更优的效果：
造粒烘干是将混合料加入搅拌机中并加入粘结剂搅拌，加水充分混合使含水量低于25wt％，挤压造粒，80℃以下顺流烘干10min以下；冷却后即得海底沉降石油降解菌剂，保证海底沉降石油降解菌剂中活菌数达到109cfu/ml；
优选的，所述的顺流烘干，具体是将湿颗粒通过烘干机前部的中间仓进入烘干筒内，与此同时热风以顺流方式进入烘干筒，在旋转筒体的内抄板带动下，物料被抄起，形成分撒均匀的较密集的料幕；
优选的，石油降解微生物载体的制备原料均为20目以下的细粉；
优选的，繁殖培养基的制备原料均为20目以下的细粉。
所述的烘干机可以选用任意一种能够完成烘干步骤的市售烘干机，但优选以下厂家生产的该型号的烘干机：章丘市宇龙机械有限公司，顺流滚筒式烘干机GHGф1.0*12*1。
实施例12
海底沉降石油降解菌剂，是将菌种AW25的发酵料与石油降解微生物载体的制备原料按照1:10的质量比混合后造粒烘干而得；进一步的，使最终的菌剂浓度为1010cfu/ml以上为佳；
所述的石油降解微生物载体的制备原料及其配比包括：
| 腐殖酸 | 75wt％ |
| 花生饼粉 | 3wt％ |
| 麸皮 | 3wt％ |
| 膨润土 | 18wt％ |
| Na2HPO4 | 0.5wt％ |
| KH2PO4 | 0.2wt％ |
| NH4NO3 | 0.3wt％ |
进一步的，所述的菌种AW25的发酵料可采用本领域普通技术人员所公知的任意一种发酵方法来获得。但采用发明人所使用的以下方法生产发酵料，会取得更好的效果：
菌种AW25的发酵料是将活化好的菌种AW25培养料与繁殖培养基按照1:8质量比混合；于37℃下固体发酵5天，得菌种AW25的发酵料，进一步的，使最 终发酵料的活菌数1010cfu/g以上；
所述的活化好菌种AW25培养料是在LB斜面挑取待活化适于石油降解的菌株接入活化液体LB培养基中37℃进行活化而得；从而得到活化后菌体浓度为1010cfu/ml的培养料；所述活化液体LB培养基为：蛋白胨10g/L,NaCl 10g/L,酵母膏5g/L，pH 7.0～7.5；121℃,30min灭菌；
所述的繁殖培养基固态原料及配比：
| 腐殖酸 | 74wt％ |
| 花生饼粉 | 4wt％ |
| 麸皮 | 7wt％ |
| 膨润土 | 15wt％ |
繁殖培养基成品的湿度优选55％。
进一步的，所述的造粒烘干可按照常规方法造粒即可，但优选下述发明人采用的方法，可产生更优的效果：
造粒烘干是将混合料加入搅拌机中并加入粘结剂搅拌，加水充分混合使含水量低于25wt％，挤压造粒，80℃以下顺流烘干10min以下；冷却后即得海底沉降石油降解菌剂，保证海底沉降石油降解菌剂中活菌数达到109cfu/ml；
优选的，所述的顺流烘干，具体是将湿颗粒通过烘干机前部的中间仓进入烘干筒内，与此同时热风以顺流方式进入烘干筒，在旋转筒体的内抄板带动下，物料被抄起，形成分撒均匀的较密集的料幕；
优选的，石油降解微生物载体的制备原料均为20目以下的细粉；
优选的，繁殖培养基的制备原料均为20目以下的细粉。
所述的烘干机可以选用任意一种能够完成烘干步骤的市售烘干机，但优选以下厂家生产的该型号的烘干机：章丘市宇龙机械有限公司，顺流滚筒式烘干机GHGф1.0*12*1。
菌株AW25菌剂颗粒的石油降解性能测评
分别取制备好的活菌数达到109cfu/ml的菌剂颗粒0.2g、0.5g、1g、2g、4g，分别添加至装入100mL不含石油的ASM培养基的无菌三角瓶中，加入0.5mL的灭菌石油，混合摇匀，15℃静止培养9d后，测定石油降解率。以不加入菌剂颗粒的含石油ASM培养基作为对照。
表6石油降解菌株AW25菌剂颗粒添加量对石油降解性能的影响(石油降解率％)
附件：
序列表1
SEQ ID No.1(菌株AW29(Bacillus thermotolerans)的16S rRNA序列)：
CTTCAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGCAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTTCGGGAAACCGGAGCTAATACCGGATAATCCTTTCCTTCACATGGAGGGAAGCTGAAAGACGGTTTCGGCTGTCACTTACAGATGGGCCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGGGGTAACGGCCCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGCGAAGAAGGCCTTCGGGTCGTAAAGCTCTGTTGTCAGGGAAGAACAAGTACCGGAGTAACTGCCGGTACCTTGACGGTACCTGACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGCGCGCGCAGGCGGCCTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCACGGCTCAACCGTGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGGGCTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGCGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGAGGGTTTCCGCCCTTTAGTGCTGCAGCAAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACACTCCTGGAGACAGGACGTTCCCCTTCGGGGGACAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGAC GTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGATGGTACAAAGGGCAGCGAAGCCGCGAGGTGAAGCCAATCCCATAAAACCATTCTCAGTTCGGATTGCAGGCTGCAACTCGCCTGCATGAAGCCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGGGAGTTTGTAACACCCGAAGTC
序列表2
SEQ ID No.1(菌株BW02(Rhodococcus qingshengii)的16S rRNA序列)：
CTTCAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGCAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTTCGGGAAACCGGAGCTAATACCGGATAATCCTTTCCTTCACATGGAGGGAAGCTGAAAGACGGTTTCGGCTGTCACTTACAGATGGGCCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGGGGTAACGGCCCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGCGAAGAAGGCCTTCGGGTCGTAAAGCTCTGTTGTCAGGGAAGAACAAGTACCGGAGTAACTGCCGGTACCTTGACGGTACCTGACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGCGCGCGCAGGCGGCCTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCACGGCTCAACCGTGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGGGCTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGCGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGAGGGTTTCCGCCCTTTAGTGCTGCAGCAAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACACTCCTGGAGACAGGACGTTCCCCTTCGGGGGACAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGATGGTACAAAGGGCAGCGAAGCCGCGAGGTGAAGCCAATCCCATAAAACCATTCTCAGTTCGGATTGCAGGCTGCAACTCGCCTGCATGAAGCCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGGGAGTTTGTAACACCCGAAGTC
序列表3
SEQ ID No.1(菌株AH07(Ochrobactrum cytisi)的16S rRNA序列)：
TGAGTAACGCGTGGGAACGTACCTTTTGCTACGGAATAACTCAGGGAAACTTGTGCTAATACCGTATGTGCCCTTCGGGGGAAAGATTTATCGGCAAAGGATCGGCCCGCGTTGGATTAGCTAGTTGGTGAGGTAAAGGCTCACCAAGGCGACGATCCATAGCTGGTCTGAGAGGATGATCAGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGCG CAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGAGTGATGAAGGCCCTAGGGTTGTAAAGCTCTTTCACCGGTGAAGATAATGACGGTAACCGGAGAAGAAGCCCCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGGGCTAGCGTTGTTCGGATTTACTGGGCGTAAAGCGCACGTAGGCGGACTTTTAAGTCAGGGGTGAAATCCCGGGGCTCAACCCCGGAACTGCCTTTGATACTGGAAGTCTTGAGTATGGTAGAGGTGAGTGGAATTCCGAGTGTAGAGGTGAAATTCGTAGATATTCGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTCACTGGACCATTACTGACGCTGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAATGTTAGCCGTTGGGGAGTTTACTCTTCGGTGGCGCAGCTAACGCATTAAACATTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGATTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGCAGAACCTTACCAGCCCTTGACATACCGGTCGCGGACACAGAGATGTGTCTTTCAGTTCGGCTGGACCGGATACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTCGCCCTTAGTTGCCAGCATTTAGTTGGGCACTCTAAGGGGACTGCCGGTGATAAGCCGAGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCCTCATGGCCCTTACGGGCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTGGTGACAGTGGGCAGCGAGCACGCGAGTGTGAGCTAATCTCCAAAAGCCATCTCAGTTCGGATTGCACTCTGCAACTCGAGTGCATGAAGTTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCA
序列表4
SEQ ID No.1(菌株AW25(Pseudomonas indoloxydans)的16S rRNA核苷酸序列)：
AGCTTGCTCCTGGATTCAGCGGCGGACGGGTGAGTAATGCCTAGGAATCTGCCTGGTAGTGGGGGATAACGTTCCGAAAGGAACGCTAATACCGCGTACGTCCTACGGGAGAAAGCAGGGGACCTTCGGGCCTTGCGCTATCAGATGAGCCTAGGTCGGATTAGCTAGTTGGTGAGGTAATGGCTCACCAAGGCGACGATCCGTAACTGGTCTGAGAGGATGATCAGTCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGCGAAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGTCTTCGGATTGTAAAGCACTTTAAGTTGGGAGGAAGGGCTGTAGGCTAATATCCTGCGGTTTTGACGTTACCAACAGAATAAGCACCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCGCGTAGGTGGTTCGTTAAGTTGGATGTGAAAGCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATCCAAAACTGGCGAGCTAGAGTACGGTAGAGGGTAGTGGAATTTCCTGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTACCTGGACTGATACTGACACTGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCAACTAGCCGTTGGAATCCTTGAGATTTTAGTGGCGCAGCTAACGCATTAAGTTGACCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGTTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCTGGCCTTG ACATGCTGAGAACTTTCCAGAGATGGATTGGTGCCTTCGGGAACTCAGACACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGTAACGAGCGCAACCCTTGTCCTTAGTTACCAGCACGTTATGGTGGGCACTCTAAGGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGGCCAGGGCTACACACGTGCTACAATGGTCGGTACAAAGGGTTGCCAAGCCGCGAGGTGGAGCTAATCCCATAAAACCGATCGTAGTCCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGTGAATCAGAATGTCACGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTTGCTCCAGAAGTAGCTAGTCT
<110> 大连民族学院
<120> 一株具有石油降解功能的细菌AH07和其用途以及海底沉降石油降解菌剂
<160> 1
<210> 1
<211> 1261
<212> rDNA
<213> Ochrobactrum cytisi
<400> 1
TGAGTAACGCGTGGGAACGTACCTTTTGCTACGGAATAACTCAGGGAAACTTGTGCTAATACCGTATGTGCCCTTCGGGGGAAAGATTTATCGGCAAAGGATCGGCCCGCGTTGGATTAGCTAGTTGGTGAGGTAAAGGCTCACCAAGGCGACGATCCATAGCTGGTCTGAGAGGATGATCAGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGCGCAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGAGTGATGAAGGCCCTAGGGTTGTAAAGCTCTTTCACCGGTGAAGATAATGACGGTAACCGGAGAAGAAGCCCCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGGGCTAGCGTTGTTCGGATTTACTGGGCGTAAAGCGCACGTAGGCGGACTTTTAAGTCAGGGGTGAAATCCCGGGGCTCAACCCCGGAACTGCCTTTGATACTGGAAGTCTTGAGTATGGTAGAGGTGAGTGGAATTCCGAGTGTAGAGGTGAAATTCGTAGATATTCGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTCACTGGACCATTACTGACGCTGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAATGTTAGCCGTTGGGGAGTTTACTCTTCGGTGGCGCAGCTAACGCATTAAACATTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGATTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGCAGAACCTTACCAGCCCTTGACATACCGGTCGCGGACACAGAGATGTGTCTTTCAGTTCGGCTGGACCGGATACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTCGCCCTTAGTTGCCAGCATTTAGTTGGGCACTCTAAGGGGACTGCCGGTGATAAGCCGAGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCCTCATGGCCCTTACGGGCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTGGTGACAGTGGGCAGCGAGCACGCGAGTGTGAGCTAATCTCCAAAAGCCATCTCAGTTCGGATTGCACTCTGCAACTCGAGTGCATGAAGTTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCA
<110> 大连民族学院
<120> 具有石油降解功能的细菌AW25和其用途及细菌载体
<160> 1
<210> 1
<211> 1363
<212> rDNA
<213> Pseudomonas indoloxydans
<400> 1
AGCTTGCTCCTGGATTCAGCGGCGGACGGGTGAGTAATGCCTAGGAATCTGCCTGGTAGTGGGGGATAACGTTCCGAAAGGAACGCTAATACCGCGTACGTCCTACGGGAGAAAGCAGGGGACCTTCGGGCCTTGCGCTATCAGATGAGCCTAGGTCGGATTAGCTAGTTGGTGAGGTAATGGCTCACCAAGGCGACGATCCGTAACTGGTCTGAGAGGATGATCAGTCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGCGAAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGTCTTCGGATTGTAAAGCACTTTAAGTTGGGAGGAAGGGCTGTAGGCTAATATCCTGCGGTTTTGACGTTACCAACAGAATAAGCACCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCGCGTAGGTGGTTCGTTAAGTTGGATGTGAAAGCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATCCAAAACTGGCGAGCTAGAGTACGGTAGAGGGTAGTGGAATTTCCTGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTACCTGGACTGATACTGACACTGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCAACTAGCCGTTGGAATCCTTGAGATTTTAGTGGCGCAGCTAACGCATTAAGTTGACCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGTTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCTGGCCTTGACATGCTGAGAACTTTCCAGAGATGGATTGGTGCCTTCGGGAACTCAGACACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGTAACGAGCGCAACCCTTGTCCTTAGTTACCAGCACGTTATGGTGGGCACTCTAAGGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGGCCAGGGCTACACACGTGCTACAATGGTCGGTACAAAGGGTTGCCAAGCCGCGAGGTGGAGCTAATCCCATAAAACCGATCGTAGTCCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGTGAATCAGAATGTCACGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTTGCTCCAGAAGTAGCTAGTCT
<110> 大连民族学院
<120> 适用于石油降解的菌株AW29和其用途以及海底沉降石油降解菌剂
<160> 1
<210> 1
<211> 1353
<212> rDNA
<213> Bacillus thermotolerans
<400> 1
CTTCAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGCAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTTCGGGAAACCGGAGCTAATACCGGATAATCCTTTCCTTCACATGGAGGGAAGCTGAAAGACGGTTTCGGCTGTCACTTACAGATGGGCCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGGGGTAACGGCCCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGCGAAGAAGGCCTTCGGGTCGTAAAGCTCTGTTGTCAGGGAAGAACAAGTACCGGAGTAACTGCCGGTACCTTGACGGTACCTGACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGCGCGCGCAGGCGGCCTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCACGGCTCAACCGTGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGGGCTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGCGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGAGGGTTTCCGCCCTTTAGTGCTGCAGCAAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACACTCCTGGAGACAGGACGTTCCCCTTCGGGGGACAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGATGGTACAAAGGGCAGCGAAGCCGCGAGGTGAAGCCAATCCCATAAAACCATTCTCAGTTCGGATTGCAGGCTGCAACTCGCCTGCATGAAGCCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGGGAGTTTGTAACACCCGAAGTC
<110> 大连民族学院
<120> 具有石油降解功能的低温细菌BW02和其用途以及海底沉降石油降解菌剂
<160> 1
<210> 1
<211> 1353
<212> rDNA
<213> Rhodococcus qingshengii
<400> 1
CTTCAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGCAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTTCGGGAAACCGGAGCTAATACCGGATAATCCTTTCCTTCACATGGAGGGAAGCTGAAAGACGGTTTCGGCTGTCACTTACAGATGGGCCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGGGGTAACGGCCCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGCGAAGAAGGCCTTCGGGTCGTAAAGCTCTGTTGTCAGGGAAGAACAAGTACCGGAGTAACTGCCGGTACCTTGACGGTACCTGACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGCGCGCGCAGGCGGCCTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCACGGCTCAACCGTGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGGGCTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGCGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGAGGGTTTCCGCCCTTTAGTGCTGCAGCAAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACACTCCTGGAGACAGGACGTTCCCCTTCGGGGGACAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGATGGTACAAAGGGCAGCGAAGCCGCGAGGTGAAGCCAATCCCATAAAACCATTCTCAGTTCGGATTGCAGGCTGCAACTCGCCTGCATGAAGCCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGGGAGTTTGTAACACCCGAAGTC
Claims (10)
1.一种海底沉降石油降解菌剂，是将适于石油降解的菌种的发酵料与石油降解微生物载体的制备原料按照1:5-15的质量比，优选1:10的质量比混合后造粒烘干而得；
所述的石油降解微生物载体的制备原料及其配比包括：
。
2.如权利要求1所述的海底沉降石油降解菌剂，其特征在于：所述的适于石油降解的菌种的发酵料是将活化好的的适于石油降解的菌种培养料与繁殖培养基按照1:5-10质量比，优选1:10的质量比混合；于20～50℃、优选37℃下固体发酵3～7天，优选发酵5天而得的菌种的发酵料；
所述的活化好的的菌种培养料是在LB斜面挑取待活化适于石油降解的菌株接入活化液体LB培养基中25-50℃下、优选37℃进行活化而得；从而得到活化后菌体浓度为1010cfu/ml的的培养料；所述活化液体LB培养基为：蛋白胨10g/L,NaCl 10g/L,酵母膏5g/L，pH 7.0～7.5；121℃,30min灭菌；
所述的繁殖培养基固态原料及配比：
繁殖培养基成品的湿度优选55％；
优选的，所述繁殖培养基的制备原料均为20目以下的细粉。
3.如权利要求1所述的海底沉降石油降解菌剂，其特征在于：所述的造粒烘干是将混合料加入搅拌机中并加入粘结剂搅拌，加水充分混合使含水量低于25wt％，挤压造粒，80℃以下顺流烘干10min以下；冷却后即得菌剂颗粒，保证菌剂颗粒中活菌数达到109cfu/ml。
4.如权利要求3所述的海底沉降石油降解菌剂，其特征在于：所述的顺流烘干是将湿颗粒通过烘干机前部的中间仓进入烘干筒内，与此同时热风以顺流方式进入烘干筒，在旋转筒体的内抄板带动下，物料被抄起，形成分撒均匀的较密集的料幕。
5.如权利要求1所述的海底沉降石油降解菌剂，其特征在于：所述的石油降解微生物载体的制备原料均为20目以下的细粉。
6.一种海底沉降石油降解菌剂的制备方法，是将适于石油降解的菌种的发酵料与石油降解微生物载体的制备原料按照1:5-15的质量比，优选1:10的质量比混合，然后经过造粒烘干而成菌剂颗粒；其包括以下步骤：
(1)制备石油降解菌菌种活化培养料；
(2)配制繁殖培养基；
(3)配制石油降解微生物载体的制备原料；
(4)菌种扩培制适于石油降解的菌种的发酵料；
(5)将适于石油降解的菌种的发酵料与石油降解微生物载体的制备原料混合造粒，得菌剂颗粒；
所述步骤(3)具体为将石油降解微生物载体的制备原料按配比混合，优选的，将原料逐个粉碎成20目的细粉；
石油降解微生物载体的制备原料及配比为：
。
7.如权利要求6所述的一种海底沉降石油降解菌剂的制备方法，其特征在于所述的步骤(1)具体为在LB斜面挑取待活化适于石油降解的菌株接入活化液体LB培养基中于25-50℃下、优选37℃进行活化而得；从而得到活化后菌体浓度为1010cfu/ml的培养料；所述活化液体LB培养基为：蛋白胨10g/L,NaCl 10g/L,酵母膏5g/L，pH 7.0～7.5；121℃,30min灭菌。
8.如权利要求6所述的一种海底沉降石油降解菌剂的制备方法，其特征在于所述的步骤(2)具体为将繁殖培养基固态原料按配比混合，优选的，所述原料逐个粉碎成20目的细粉；
繁殖培养基固态原料及配比为：
繁殖培养基成品的湿度优选55％。
9.如权利要求6所述的一种海底沉降石油降解菌剂的制备方法，其特征在于所述的步骤(4)具体是将步骤(1)制备的石油降解菌菌种活化培养料和步骤(2)配制的繁殖培养基按照1:5-10，优选1:10的质量比混合；于20～50℃、优选37℃下固体发酵3～7天，优选发酵5天，得菌种的发酵料。
10.如权利要求6所述的一种海底沉降石油降解菌剂的制备方法，其特征在于所述的步骤(5)混合造粒具体是将步骤(4)制得的菌种发酵料与步骤(3)所述的菌剂载体制备原料，按照1:10的质量比混合均匀后，将混合料加入搅拌机中并加入粘结剂搅拌，加水充分混合使含水量低于25wt％，挤压造粒，80℃顺流烘干10min；冷却后即得菌剂颗粒，所述的顺流烘干具体是将湿颗粒通过烘干机前部的中间仓进入烘干筒内，与此同时热风以顺流方式进入烘干筒，在旋转筒体的内抄板带动下，物料被抄起，形成分撒均匀的较密集的料幕。
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| CN110655199B (zh) * | 2018-06-29 | 2021-12-24 | 龙岩学院 | 一种利用异养硝化-好氧反硝化的假单胞菌菌株处理氨氮废水的方法 |
| CN109609133A (zh) * | 2018-11-09 | 2019-04-12 | 河南正达环保科技有限公司 | 石油污染土壤修复材料 |
| CN110713947A (zh) * | 2019-10-30 | 2020-01-21 | 中国石油集团川庆钻探工程有限公司长庆井下技术作业公司 | 一种石油污染修复复合微生物菌剂及其制备方法 |
| CN113637600A (zh) * | 2021-04-22 | 2021-11-12 | 华东理工大学 | 一种高效石油烃降解菌及其筛选方法和应用 |
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| CN115197867B (zh) * | 2022-05-17 | 2023-07-04 | 广西师范大学 | 一种生物调整剂及利用其对铝电解炭渣进行分选的方法 |
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