CN104771394A - Trichiconins C在制备抗呼吸道合胞病毒药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及Trichiconins C在制备抗呼吸道合胞病毒药物中的应用。本发明将Trichiconins C化合物制备成片剂、胶囊剂。本发明克服了现有治疗方法都不能完全、直接有效的杀灭RSV的缺陷。本发明对于呼吸道合胞病毒(RSV)抑制活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，实验证明，Trichiconins C对RSV有显著的抑制作用：抑制RSV在HEK293细胞出现CPE效应(Cytopathic Effect，CPE)，IC₅₀为2^-10.49，TI为278.23，因此具备突出的实质性特点，同时用于呼吸道合胞病毒(RSV)的防治显然具有显著的进步。

Description

Trichiconins C在制备抗呼吸道合胞病毒药物中的应用

技术领域

本发明涉及一种药物的应用，特别涉及Trichiconins C在制备抗呼吸道合胞病毒药物中的应用。

背景技术

RSV(呼吸道合胞病毒，Respiratory Syncytial Virus)主要引起呼吸系统感染，该病毒是地方性的，在婴幼儿、老年以及免疫缺陷人群引起严重肺炎，是人类上呼吸道感染的重要病原之一。RSV具有流行性，冬季通常有一个该病的高发期。病毒传播的方式主要是通过飞沫传播，污染的手指直接将病毒接种到鼻黏膜和眼黏膜也是引起感染的重要传播途径。RSV下呼吸道感染的发病机制包括病毒与宿主受累细胞损伤、炎症、体液和局部免疫反应及高反应性之间的相互作用。既往对RSV感染缺乏特异性病因治疗，治疗以支持和对症疗法为主，近年来应用三氮唑核苷特异性抗病毒、被动免疫疗法(免疫球蛋白治疗)等，常能达到早期病因治疗的目的，但不管是特异性抗病毒还是被动免疫的方法，都不能完全、直接有效的杀灭RSV。

化合物Trichiconins C是新骨架化合物，该化合物拥有全新的骨架类型，结构式如下：

已知该化合物是从产于我国广西省的鹧鸪花(楝科)树枝中分离的，具有多样化的结构和显著生物活性。该化合物的应用仅仅限于轻微的抗HIV活性。

发明内容

本发明在于克服上述缺陷，研制一种Trichiconins C在制备抗呼吸道合胞 病毒药物的应用。

本发明的技术方案是：

Trichiconins C在制备抗呼吸道合胞病毒药物的应用，其主要技术特征在于化合物Trichiconins C是新骨架化合物，其结构式如下：

将Trichiconins C化合物制备成片剂、胶囊剂。

所述取20克化合物Trichiconins C，加入制备片剂的常规辅料180克，混匀，常规压片机制成1000片。

所述取20克化合物Trichiconins C，加入制备胶囊剂的常规辅料淀粉180克，混匀，装胶囊制成1000片。

经实验证明，Trichiconins C对RSV有显著的抑制作用：抑制RSV在HEK293细胞出现CPE效应(Cytopathic Effect，CPE)，IC₅₀为2^-10.49，TI为278.23。

本发明涉及的Trichicorins C在制备治疗呼吸道合胞病毒(RSV)药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于呼吸道合胞病毒(RSV)抑制活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于呼吸道合胞病毒(RSV)的防治显然具有显著的进步。

具体实施方式

以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。

实施例1：

Trichiconins C是新骨架化合物，其结构式如下：

本发明所涉及化合物Trichiconins C片剂的制备：

取20克化合物Trichiconins C，加入制备片剂的常规辅料180克，混匀，常规压片机制成1000片。

实施例2：

本发明所涉及化合物Trichicorins C胶囊剂的制备：

取20克化合物Trichiconins C，加入制备胶囊剂的常规辅料如淀粉180克，混匀，装胶囊制成1000片。

下面通过药效学实验来进一步说明其药物活性。

实验例：化合物Trichiconins C对呼吸道合胞病毒(RSV)的作用研究

(1)化合物Trichiconins C的配置：将化合物Trichiconins C溶于细胞维持液(含2％新生牛血清的MEM，GIBICO公司产品)中备用。

(2)细胞株与病毒株：

人胚肾细胞(HEK293，RSV病毒敏感细胞)购自美国Clontech公司；呼吸道合胞病毒(RSV)Long株引自中国CDC病毒病研究所。

(3)细胞毒性测定：

将样品以2倍比做系列稀释(2^0～-5)，然后按稀释顺序横向接种于96板孔中的HEK293上，每孔100uL，每稀释度纵向重复3孔(A、B、C行)，平行设微孔板D的1～6孔为细胞对照，7～12孔不接种细胞为空白对照，显微镜下每日观察CPE，连续观察7d，中性红染色，在540nm皮长测定OD值，将实验组与细胞对照组OD值相比计算细胞存活率，用Reed-Muench方法计算药物半数细胞中毒浓度(TD₅₀)。

(4)抑毒试验： 

将样品按稀释顺序(2^-2～-13)横向接种于96板孔中的单层细胞上，每孔100uL，每稀释度纵向重复4孔，微孔板的A、B、C行加含100个TCID₅₀的病毒100uL作为试验组，D行补充等容量细胞维持液为不同浓度药物对照，平行设F行作为病毒对照，E行的1～12作为细胞对照。37℃、5％CO₂培养，每日观察CPE，连续观察4d。病毒对照出现90％以上CPE时，加1％中性红染色，用酶标仪在波长540nm波长读取A值，各组A值去除病毒对照组A值，将各试验组与细胞对照组A值相比，获得细胞存活率，用Reed-Muench方法计算半数抑毒浓度(IC₅₀)，最终将TD₅₀和IC₅₀相比获得抑毒指数(TI)。

(5)结果：

①样品TD₅₀的测定：对照组细胞显微镜下观察贴壁生长致密、形态良好。化合物Trichiconins C对HEK293的TD₅₀为2^-2.37。

②抑毒实验：对照组细胞贴壁致密、形态良好。镜下观察发现，RSV病毒对照组在第2d出现90％以上的CPE，RSV在HEK293CPE以折光性增强、变圆、脱落、破碎为主要特征。

而抑毒试验各组细胞，按照样品稀释梯度，梯度规律出现CPE：

RSV-HEK293试验组细胞在第9稀释度之前，细胞完全被保护，之后出现CPE，CPE随样品浓度减少逐渐加重。

将上述实验板用1％中性红染色、用酶标仪测450nmA值，各组A值减掉病毒对照组A值后，各实验组A值与细胞对照组A值相比获得IC₅₀，TD₅₀与IC₅₀相比获得TI：抑制RSV在HEK293细胞发生CPE，IC₅₀为2^-10.49，TI为278.23。

实验例：化合物Trichiconins C体内抗呼吸道合胞病毒(RSV)活性研究

①昆明种雄性小白鼠(BALB/C小鼠)(18-22g)

②动物实验：采用小鼠RSV感染模型，测定化合物Trichiconins C体内抗呼吸道合胞病毒(RSV)活性

③选用BALB/C雄性小鼠60只，随机分成6组，分别为生理盐水阴性对照组，RSV模型组，病毒唑组(10mg/(kg·d))，Trichiconins C高浓度组(60mg/(kg·d))，Trichiconins C中浓度组(30mg/(kg·d))，Trichiconins C低浓度组(15mg/(kg·d))。灌胃给药，RSV模型组和生理盐水阴性对照组灌胃生理盐水。 三天后，经鼻滴入RSV悬液(TCID₅₀为10^-6.6/ml)，每2日灌胃给药一次，14天后观察小鼠存活情况。最后一次给药40分钟后处死小鼠，无菌取肺组织匀浆、离心、稀释，接种在HEK293细胞上，采用细胞病变效应抑制法测定病毒滴度，计算病毒抑制率。

④实验结果如表1所示，提示Trichiconins C在体内具有抗呼吸道合胞病毒(RSV)的活性，在高、中浓度组明显优于病毒唑，且浓度越高，抑制能力越强。

表1：各组体内抗呼吸道合胞病毒(RSV)活性，^*表示与RSV模型组比较差异具有显著性(P＜0.05)，^▲表示与病毒唑组比较差异具有显著性(P＜0.05)

结论：Trichiconins C具有显著的抗副粘科病毒呼吸道合胞病毒RSV的作用，可以用来制备抗副粘科病毒呼吸道合胞病毒RSV药物。

Claims (3)

1.Trichiconins C在制备抗呼吸道合胞病毒药物中的应用，其特征在于化合物Trichiconins C是新骨架化合物，其结构式如下：

将Trichiconins C化合物制备成片剂、胶囊利。

2.根据权利要求1所述的Trichiconins C在制备抗呼吸道合胞病毒药物中的应用，其特征在于取20克化合物Trichiconins C，加入制备片剂的常规辅料180克，混匀，常规压片机制成1000片。

3.根据权利要求1所述的Trichiconins C在制备抗呼吸道合胞病毒药物中的应用，其特征在于取20克化合物Trichiconins C，加入制备胶囊剂的常规辅料淀粉180克，混匀，装胶囊制成1000片。