CN104758362A - 中药组合物在制备抗呼吸道合胞病毒药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种中药组合物在制备抗呼吸道合胞病毒药物中的应用。经实验证明，本发明中药组合物对呼吸道合胞病毒RSV有显著的抑制作用，本发明为中药组合物临床用于治疗呼吸道合胞病毒RSV感染性疾病提供实验依据，对研制抗呼吸道合胞病毒RSV的药物提供了一定的指导意义，具有重要的参考价值。

Description

中药组合物在制备抗呼吸道合胞病毒药物中的应用

技术领域

本发明涉及中药组合物的新用途，尤其涉及中药组合物在制备抗呼吸道合胞病毒药物中的应用。

背景技术

RSV主要引起呼吸系统感染，在婴幼儿、老年以及免疫缺陷人群引起严重肺炎，是人类上呼吸道感染的重要病原之一。目前市场缺乏有效安全的治疗方法。

发明内容

本发明提供了一种中药组合物在制备抗呼吸道合胞病毒药物中的应用。从药理实验看出，这种中药组合物有较好的抗呼吸道合胞病毒的作用。

本发明首次公开中药组合物在制备抗呼吸道合胞病毒方面的药理作用，所述中药组合物由如下重量份数的原料制备得到：六月寒15份、四季青10份、吊灯花20份、刺针草12份、滑叶跌打18份。

所述中药组合物的制备方法为：取上述中药，加水煎煮2次，第一次加水量为药材重量的10倍量，煎煮2小时，第二次加水量为药材重量的8倍量，煎煮1小时，合并煎液，浓缩，干燥，粉碎得中药组合物颗粒。

浓缩条件为:0.07MPa、60-70℃下减压浓缩至65℃时相对密度为1.30。喷雾干燥条件为:进风温度为120℃，出风温度为80℃，物料温度为90℃，雾化压力为0.4兆帕，喷雾速度为10ml/s。

经实验证明，中药组合物对RSV有显著的抑制作用：抑制RSV在HEK293细胞出现CPE效应(Cytopathic Effect，CPE)，IC50为2^-8.15，TI为116.42。

六月寒为宜昌楼梯草(Elatostema ichangense H.Schroter)，荨麻科多年生草本。因其阴历六月开白花，常成片生长，犹如高山积雪，给人寒意，故得此名。该药具散寒、化积、祛瘀、消肿的功效。发表散寒，宣肺止咳，活血调经。用于感冒咳嗽，慢性支气管炎，百日咳，通经，产后腹痛；外用治刀伤，烧烫伤，毒蛇咬伤。

四季青为冬青科的植物。分布于我国长江以南各地，常生长于疏林中。其根、叶均可制药，拉丁学名Ilex purpurea Hassk.，清热解毒，活血止血。用于上呼吸道肝炎，慢性气管炎，肾盂肾炎，细菌性痢疾；外用治烧烫伤，下肢溃疡，麻风溃疡，创收出血，冻伤，乳腺炎，皮肤皲裂(烧灰调油外搽)。

吊灯花为萝藦科吊灯花Ceropegia christenseniana Hand.-Mazz.，以全草入药。酸，平。清热解毒。

刺针草，学名Bidens bipinnata L.，菊科，刺针草属植物，刺针草多生于山坡、草地或路旁。广布于全国各地。完达山区数量较多。以全草入药。夏季开花时采收，切段，晒干。清热解毒，祛风活血。用于上呼吸道感染，咽喉肿痛，急性阑尾炎，急性黄疸型传染性肝炎，胃肠炎，消化不良，风湿关节痛，疟疾；外用治疮疖，毒蛇咬伤，跌打肿痛。本发明以全草入药。

滑叶跌打为假鹊肾树树皮，拉丁名为Streblus indicus(Bur.)Corner，桑科肾鹊树属乔木，以树皮入药，止血，止痛。用于消化道出血，胃痛；外用治外伤出血。

本发明涉及的中药组合物在制备治疗呼吸道合胞病毒(RSV)药物中的用途属于首次公开，由于中药组合物成分的复杂性，而且其对于呼吸道合胞病毒(RSV)抑制活性强得意想不到，不存在由其他中药给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于呼吸道合胞病毒(RSV)的防治显然具有显著的进步。

具体实施方式

以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。

实施例1：取六月寒15g、四季青10g、吊灯花20g、刺针草12g、滑叶跌打18g，加水煎煮2次，第一次加水量为药材重量的10倍量，煎煮2小时，第二次加水量为药材重量的8倍量，煎煮1小时，合并煎液，浓缩，干燥，粉碎得中药组合物颗粒，浓缩条件为:0.07MPa、60-70℃下减压浓缩至65℃时相对密度为1.30。喷雾干燥条件为:进风温度为120℃，出风温度为80℃，物料温度为90℃，雾化压力为0.4兆帕，喷雾速度为10ml/s。

实施例2：本发明中药组合物对呼吸道合胞病毒(RSV)的作用研究

(1)按照上述实施例1的方法制备本发明中药组合物作为试验药品。

(2)细胞株与病毒株：人胚肾细胞(HEK293，RSV病毒敏感细胞)购自美国Clontech公司；呼吸道合胞病毒(RSV)Long株引自中国CDC病毒病研究所。

(3)细胞毒性测定：

参照文献(汪受传，王霖，陈超等，清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒抑制作用的实验研究，南京中医药大学学报，2008；24(1)：25-27)的方法，将样品以2倍比做系列稀释(2^0-5)，然后按稀释顺序横向接种于96板孔中的HEK293上，每孔100uL，每稀释度纵向重复3孔(A、B、C行)，平行设微孔板D的1-6孔为细胞对照，7-12孔不接种细胞为空白对照，显微镜下每日观察CPE，连续观察7d，中性红染色，在540nm波长测定OD值，将实验组与细胞对照组OD值相比计算细胞存活率，用Reed-Muench方法计算药物半数细胞中毒浓度(TD₅₀)。

(4)抑毒试验：

参照文献(汪受传，王霖，陈超等，清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒抑制作用的实验研究，南京中医药大学学报，2008；24(1)：25-27)的方法，将样品按稀释顺序(2^-2-13)横向接种于96板孔中的单层细胞上，每孔100uL，每稀释度纵向重复4孔，微孔板的A、B、C行加含100个TCID₅₀的病毒100uL作为试验组，D行补充等容量细胞维持液为不同浓度药物对照，平行设F行作为病毒对照，E行的1-12作为细胞对照。37℃、5％CO₂培养，每日观察CPE，连续观察4d。病毒对照出现90％以上CPE时，加1％中性红染色，用酶标仪在波长540nm波长读取A值，各组A值去除病毒对照组A值，将各试验组与细胞对照组A值相比，获得细胞存活率，用Reed-Muench方法计算半数抑毒浓度(IC₅₀)，最终将TD₅₀和IC₅₀相比获得抑毒指数(TI)。

(5)结果：

①样品TD₅₀的测定：对照组细胞显微镜下观察贴壁生长致密、形态良好。本发明中药组合物对HEK293的TD₅₀为2^-8.15。

②抑毒实验：对照组细胞贴壁致密、形态良好。镜下观察发现，RSV病毒对照组在第2d出现90％以上的CPE，RSV在HEK293CPE以折光性增强、变圆、脱落、破碎为主要特征。而抑毒试验各组细胞，按照样品稀释梯度，梯度规律出现CPE：

RSV-HEK293试验组细胞在第9稀释度之前，细胞完全被保护，之后出现CPE，CPE随样品浓度减少逐渐加重。

将上述实验板用1％中性红染色、用酶标仪测450nmA值，各组A值减掉病毒对照组A值后，各实验组A值与细胞对照组A值相比获得IC₅₀，IC₅₀与TD₅₀相比获得TI：抑制RSV在HEK293细胞发生CPE，IC₅₀为2^-8.15，TI为116.42。

结论：Aspeverin具有显著的抗副粘科病毒呼吸道合胞病毒RSV的作用，可以用来制备抗副粘科病毒呼吸道合胞病毒RSV药物。

Claims (2)

1.一种中药组合物在抗呼吸道合胞病毒药物中的应用，其特征在于所述中药组合物由如下重量份数的原料制备得到：六月寒15份、四季青10份、吊灯花20份、刺针草12份、滑叶跌打18份。

2.如权利要求1所述中药组合物在抗呼吸道合胞病毒药物中的应用，其特征在于所述中药组合物的制备方法为：取上述中药，加水煎煮2次，第一次加水量为药材重量的10倍量，煎煮2小时，第二次加水量为药材重量的8倍量，煎煮1小时，合并煎液，浓缩，干燥，粉碎得中药组合物颗粒。