CN104688380A - 一种提高羊超数排卵数量与质量的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及畜牧兽医领域，具体提供一种提高绵羊超数排卵数量与质量的方法。对经超数排卵处理后出现发情症状的羊，皮下注射有效成分为褪黑素的注射剂，褪黑素注射剂量为1-4mL/只(褪黑素浓度5mg/mL)。本发明通过动物实验证明，本发明所述方法可使母羊输精后6天桑葚胚/囊胚冲胚总数和可用胚胎数显著提高，可以成熟卵子和其受精后胚胎质量。

Description

一种提高羊超数排卵数量与质量的方法
技术领域
本发明涉及畜牧兽医领域，具体地说，涉及一种提高绵羊超数排卵数量与质量的方法。
背景技术
随着社会的发展和人们生活水平的不断提高，人们对羊肉、羊奶、羊毛的需求量日益加大，这就给养羊产业造成巨大的压力，传统养羊的繁殖和管理方法已经不能满足人们的需求。羊的胚胎移植技术是近40年来发展起来的一项生物技术。利用该技术可充分发挥优良母羊的繁殖潜力，进而扩繁高产畜群，同时也是进行育种工作的有效手段。
胚胎移植是将某头优良母畜配种受精后的早期胚胎取出，移植到另一头相同生理状态的同种母畜体内，使之发育成新个体的过程。实际上也是产生胚胎的供体和养育胚胎的受体分工合作，共同繁殖后代的过程。胚胎移植技术可以充分发挥优良母畜的繁殖潜力，提高繁殖效率。作为供体的优良母畜通过超数排卵处理一次即可获得多枚胚胎，移植后即可生产出比自然情况下更多的后代。通过超数排卵胚胎移植技术，可使供体繁殖的后代增加很多倍，在家畜育种工作中应用，可以加大选择强度，提高选择准确性，缩短世代间隔，加快遗传进展。
如今，国外优良种畜的引进过程比较繁琐，检验检疫时间过长。不仅费时费力，而且加大了疾病传播的风险。利用胚胎移植技术通过引进优良种畜的胚胎代替种畜的引进。可以减少保存活畜的费用，同时减少疾病传播的可能性。
随着国际自由贸易区的建立，在国外许多优质畜牧业产品不断以较低的价格和较高的品质冲击国内市场的大背景下，家畜的胚胎移植技术日渐体现出其重大的价值。我国现如今的胚胎移植技术虽然已经日趋成熟，但对于不同品种和不同个体的家畜在如何改善超排效果、提高移植妊娠率方面还有很多的工作要做。在此背景下，我们发现了一种在供受体母畜发情时注射一种抗氧化剂——“褪黑素”的方法，可以提高供体的超排效率和移植后受体妊娠率。
褪黑素(Melatonin，MT)是主要由动物松果体分泌的一种吲哚类神经内分泌激素，化学结构为N-乙酰基-5-羟色胺。研究发现，褪黑素对机体的内分泌系统、生殖系统有明显的调节作用。褪黑素可以通过下丘脑—垂体—性腺(HPG)轴，刺激促性腺激素释放激素的释放，从而调节脑下垂体分泌促黄体素、促卵泡素，引起动物发情排卵。处于排卵时期的卵泡新陈代谢十分旺盛，此过程会产生大量的自由基，自由基会造成细胞DNA损伤，引起颗粒细胞凋亡，1个卵泡中只要有10％的颗粒细胞凋亡就会导致卵泡闭锁。褪黑素可通过与卵巢上抗氧化剂膜受体或核受体结合直接参与卵泡的发育及排卵，维持固醇类激素的稳态；通过其抗氧化作用清除自由基，抑制卵泡颗粒细胞凋亡，确保卵泡发育及排卵过程的顺利进行，从而提高供体母羊的超排效率。
褪黑素自身及其代谢产物可直接清除ROS，也可改善妊娠母体的子宫和胎盘环境，促进胚胎发育和附植过程。在多数哺乳动物的子宫和胎盘上存在褪黑素受体。Dair等(2009)研究发现，去松果体大鼠的胚胎附植率下降，外源褪黑素注射3个月后可通过改善大鼠子宫内膜环境，并改变雌激素(E2)和孕激素(P)水平促进2-细胞胚移植后的发育，提高附植率，因此移植前对受体母羊进行褪黑素注射会提高其妊娠率。
本方法是在供体和受体同期发情处理后，在供体发情初期时注射抗氧化剂(即褪黑素)来达到用药效果。本方法相对于埋植褪黑素的方法有着剂量更加精确、对畜禽的应激更小、周期更容易控制等优点。
发明内容
为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种提高绵羊超数排卵数量与质量的方法。
为了实现本发明目的，本发明的技术方案如下：
一种提高绵羊超数排卵数量与质量的方法，所述方法为：对经超数排卵处理后出现发情症状的羊，皮下注射有效成分为褪黑素的注射剂，褪黑素的注射剂量为5-20mg/只。
注射液的注射剂量为1-4mL/只，注射液中褪黑素浓度为5mg/mL。
进一步地，注射时所用的注射器为黑色、不透明。
进一步地，所述注射剂的制备方法为：将褪黑素溶于75％乙醇溶液或无水乙醇，得到浓度为5mg/mL的褪黑素乙醇溶液，制备过程避光进行。
本发明还提供了一种用于提高绵羊超数排卵数量与质量的制剂，所述进一步地，所述制剂的制备方法为：将褪黑素溶于75％乙醇溶液或无水乙醇，得到浓度为5g/L的褪黑素乙醇溶液，制备过程避光进行。
更进一步地，所述制剂为注射剂。
本发明还提供了所述制剂在提高羊超数排卵数量与质量上的应用。
作为优选，所述羊为绵羊。
本发明还提供了所述制剂在提高羊体内胚胎生产效率上的应用。
本发明的有益效果在于：
本发明通过动物实验证明，本发明所述方法可使母羊输精后6天桑葚胚/囊胚冲胚总数和可用胚胎数显著提高，可以成熟卵子和其受精后胚胎质量。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
以下实施例中使用的试剂和材料均为市售商品。
褪黑素要求纯度达到99.9％。
实施例1用于提高绵羊超数排卵数量与质量的制剂及其制备方法
原料：褪黑素、75％乙醇溶液。
制备方法：将褪黑素用75％乙醇溶液溶解，搅拌均匀，制备得到褪黑素浓度为5mg/mL的褪黑素乙醇溶液，所有操作均在暗室中完成。
实施例2用于提高绵羊超数排卵数量与质量的制剂及其制备方法
同实施例1，区别在于，用无水乙醇替换75％乙醇溶液。
实验例1提高绵羊超数排卵体内胚胎生产效率的方法。
1、绵羊超排处理
在发情周期任何一天给供体羊阴道内放入孕酮阴道栓(CIDR)，此日为第1天，在埋栓的第10天开始肌注FSH(总量为200-280IU，国产，如宁波三生药业有限公司)，共4天8次减量注射，在第7次注射FSH的同时取出CIDR，取出CIDR后24-48小时发情。
2、对经超数排卵处理后出现发情症状的羊，皮下注射实施例1制备得到的注射剂2mL：
于种羊场(北京奥鑫牧业有限公司和河北省遵化市雅华牧业有限公司)内选取健康、繁殖性能良好的供体母羊与受体母羊，自由采食和饮水，自然光照和补光(光照16h/d)，羊舍内温度为10-25℃，日粮为草料和预混料。埋栓后进行每只实验羊每天饲喂至少0.5kg的胡萝卜补充足够的维生素。
选取撤栓后20小时出现发情表现的供体绵羊30只，随机分成两组，一组颈部皮下注射实施例1制备得到的制剂2mL，另一组作为对照(对照组在实验过程中淘汰2只)。
3、供体超数排卵与受体妊检结果
在胚胎移植过程中，准确详细记录实验组和对照组供体羊的冲胚数量、冲胚质量及移植情况。移植完成50-60天后，采用B超方法检查受体母羊妊娠情况。统计结果见下：
表1注射实施例1制备的制剂对供体绵羊超排后桑葚胚/囊胚效率的影响
注：表中同行肩注不同小写字母者表示差异显著(P<0.05)；肩注不同大写字母者表示差异极显著(P<0.01)。下同。
发情时供体注射实施例1制备的制剂，可以显著提高输精后6天桑葚胚/囊胚冲胚总数(P<0.05)(表1)。
4、注射实施例1制备的制剂对供体绵羊超排后原核胚效率的影响
表2注射实施例1制备的制剂对供体绵羊超排后原核胚效率的影响
在本实验室的研究中，还发现注射实施例1制备的制剂对原核期胚胎数量也有提高，没有显著差异(表2)，但可以显著提高原核胚的质量(P<0.01)。从注射实施例1制备的制剂的供体羊获得的原核胚移植后，妊娠率显著高于对照组(P<0.01)(表3、表4)。
表3注射实施例1制备的制剂对供体绵羊超排原核胚移植效率的影响
受体数 平均移植胚胎数 妊娠率
实验组 45 2.4(108/45) 44.4％(20/45)a
对照组 58 2.9(168/58) 24.1％(14/58)b
表4注射实施例1制备的制剂对供体绵羊超排桑椹胚/囊胚移植效率的影响
受体数 平均移植胚胎数 妊娠率
实验组 25 1.9(47/25) 48.0％(12/25)a
对照组 19 1.9(41/22) 22.8％(5/22)b
发情时供体注射实施例1制备的制剂还可以显著提高桑椹胚/囊胚移植效率，实验组的妊娠率显著高于对照组(P<0.05)。
综上，超排绵羊在发情时注射实施例1制备的制剂可以增加胚胎数量，还可以提高成熟卵子和胚胎质量。
对比例1
1、绵羊超排方案
在发情周期任何一天给供体关阴道内放入孕酮阴道栓(CIDR)，此日为第1天，在埋栓的第10天开始肌注FSH，共4天8次，在第7次注射FSH的同时取出CIDR，取出CIDR后24-48小时发情。
2、选择超数排卵处理后出现发情症状的羊50只，随机分成4组，分别颈部皮下注射褪黑素制剂0mL、1mL、2mL、4mL和6mL(所含褪黑素浓度均为5mg/mL),记录超排数据，分析结果。
表5注射不同剂量本专利所涉及的褪黑素制剂对供体绵羊超排后桑葚胚/囊胚效率的影响
发情时供体颈部皮下注射本专利所涉及的褪黑素制剂可以提高绵羊超数排卵的胚胎数量，注射2mL效果最好，但与注射4mL没有统计学差异，注射1mL的效果次于注射2mL和4mL，但高于注射6mL效果。所有注射组的胚胎数量均高于对照组(P<0.05)(表5)。
对比例2
对经超数排卵处理后出现发情症状的羊，分别颈部皮下和颈部静脉注射实施例1制备的制剂2mL(所含褪黑素浓度为5mg/mL)。随机注射，记录超排数据，分析结果。
表6不同部位注射实施例1制剂对供体绵羊超排后桑葚胚/囊胚效率的影响
在绵羊超数排卵过程中，供体发情时颈部皮下注射实施例1制备的制剂的效果显著高于颈部静脉注射的效果。颈部皮下注射的供体绵羊的胚胎平均数和可用胚胎平均数均显著(P<0.05)高于颈部静脉注射组(表6)。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种提高绵羊超数排卵数量与质量的方法，其特征在于，所述方法为：对经超数排卵处理后出现发情症状的羊，皮下注射有效成分为褪黑素的注射剂，褪黑素的注射剂量为5-20mg/只。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述皮下注射的注射位置位于颈背部皮下。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，注射时所用的注射器为黑色、不透明。
4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述注射剂的制备方法为：将褪黑素溶于75％乙醇溶液或无水乙醇，得到浓度为5mg/mL的褪黑素乙醇溶液，制备过程避光进行。
5.一种用于提高绵羊超数排卵数量与质量的制剂，其特征在于，所述制剂的有效成分为褪黑素，所述褪黑素的浓度为5mg/mL。
6.根据权利要求5所述的制剂，其特征在于，所述制剂的制备方法为：将褪黑素溶于75％乙醇溶液或无水乙醇，得到浓度为5g/L的褪黑素乙醇溶液，制备过程避光进行。
7.根据权利要求6所述的制剂，其特征在于，所述制剂为注射剂。
8.权利要求5-7任一项所述制剂在提高羊超数排卵数量与质量上的应用。
9.根据权利要求8所述的用于，其特征在于，所述羊为绵羊。
10.权利要求5-7任一项所述制剂在提高羊体内胚胎生产效率上的应用。
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