CN104621184A - 一种防治黄瓜南方根结线虫病的组合菌剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物防治领域，是一种防治温室蔬菜根结线虫病害的生防菌剂。该复合微生物菌剂包括摩西球囊霉接种物和枯草芽孢杆菌发酵液，该组合菌剂是在9种单一菌剂和12种组合菌剂中根据生长状况和抗线虫情况筛选出来的。每份复合微生物菌剂中含5000接种势摩西球囊霉，枯草芽孢杆菌发酵液总活菌数达到3×108CFU/ml，将摩西球囊霉和枯草芽孢杆菌菌剂复配在一起后，相比于单独的摩西球囊霉菌剂或枯草芽孢杆菌菌剂，二者呈现出非常显著的协同增效的防治根结线虫功效，对于根结线虫的防效有了显著改善。
Description
技术领域
本发明属于生物防治领域，尤其涉及一种防治黄瓜南方根结线虫病的组合菌剂及其制备方法。
背景技术
根结线虫是一种高度专化型的杂食性植物病原线虫，线虫寄主范围广泛，常为害瓜类、茄果类、豆类及萝卜、葫萝卜、莴苣、白菜等30多种蔬菜，还能传播一些真菌和细菌性病害，是当前保护地蔬菜重要害虫之一。随着保护地蔬菜生产面积增加，特别是日光温室大面积推广以来，复种指数增加，加之重茬多年，导致根结线虫危害日趋严重，一般可造成减产10％－20％，严重可达30％－70％，甚至绝产。目前国内防治该病害多采用化学防治和农业防治，效果不太理想。因此，蔬菜根结线虫的生物防治作为一项关键技术受到了广泛重视。蔬菜根结线虫防治研究中，一定条件下AM真菌和PGPR的生防潜力和效应有待评价。
发明内容
未解决上述问题，本发明提供一种防治黄瓜南方根结线虫病的组合菌剂，所述组合菌剂包括AM真菌+PGPR菌剂，是在9种单一菌剂(地表球囊霉、根内球囊霉、摩西球囊霉、刺无梗囊霉、易误巨孢囊霉、荧光假单胞菌、蜡状芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌)和12种组合菌剂(摩西球囊霉+多粘类芽孢杆菌、摩西球囊霉+枯草芽孢杆菌、地表球囊霉+蜡状芽孢杆菌、地表球囊霉+多粘类芽孢杆菌、地表球囊霉+枯草芽孢杆菌、根内球囊霉+荧光假单胞菌、根内球囊霉+蜡状芽孢杆菌、刺无梗囊霉+多粘类芽孢杆菌、刺无梗囊霉+枯草芽孢杆菌、刺无梗囊霉+荧光假单胞菌、易误巨孢囊霉+荧光假单胞菌、易误巨孢囊霉+蜡状芽孢杆菌)中根据生长状况和抗线虫情况筛选出来的，接种量为每株黄瓜接种AM真菌4000-6000接种势，3×108CFU/ml浓度的PGPR菌5-15ml。
所述组合菌剂进一步优选为为摩西球囊霉和枯草芽孢杆菌，接种量为每株黄瓜接种摩西球囊霉5000接种势，3×108CFU/ml浓度的枯草芽孢杆菌10ml。
制备如权利要求1所述防治黄瓜根结线虫病的组合菌剂的方法为(1)所述AM真菌菌种经三叶草在灭菌沙土中扩繁8-10个月，以孢子、菌根化根段、土壤中的菌丝体和根围土壤组成的接种混合物备用；(2)所述PGPR菌株转移到牛肉膏蛋白胨液体培养基上，25-30℃下震荡培养28-32h，细菌悬浮液均稀释到浓度为3×108CFU/ml。进一步优化为摩西球囊霉种经三叶草在灭菌沙土中扩繁8-10个月，以孢子、菌根化根段、土壤中的菌丝体和根围土壤组成的接种混合物备用；所述枯草芽孢杆菌菌株转移到牛肉膏蛋白胨液体培养基上，29℃下震荡培养30h，细菌悬浮液均稀释到浓度为3×108CFU/ml。
一种防治黄瓜根结线虫病的组合菌剂的应用方法，由以下步骤组成：
(1)播种时接种AM真菌，接种量为每株黄瓜5000接种势；
(2)黄瓜生长至三叶一心时用灌根法接种PGPR，接种量为每株黄瓜接种浓度3×108CFU/ml的菌液10ml。
进一步优选为：
(1)播种时接种摩西球囊霉，接种量为每株黄瓜5000接种势；
(2)黄瓜生长至三叶一心时用灌根法接种枯草芽孢杆菌，接种量为每株黄瓜接种浓度3×108CFU/ml枯草芽孢杆菌10ml。
与现有技术相比，本发明的优点和积极效果：
1、传统化学防治导致线虫抗药性增强，虫口密度上升，环境污染加重，本发明属于生物防治，不会对环境造成污染，且防效在盆栽条件下达到68.4％。
2、本发明作为生物菌剂，具有稳定、经济、长效、相对安全的特点，不需像化学药剂需要多次喷洒，只需一次接种即可达到防治效果，减轻环境污染。
3、本生物菌剂不仅可以防治根结线虫，还对黄瓜生长起到促进作用，可作为生物肥料使用。
具体实施方式
实施例1：
(1)摩西球囊霉(Glomus mosseae)，文中以Gm表示，经三叶草在灭菌沙土中扩繁8-10个月，以孢子、菌根化根段、土壤中的菌丝体和根围土壤组成的接种混合物备用；枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，文中以BS表示，菌株转移到牛肉膏蛋白胨液体培养基上，29℃下震荡培养30h，细菌悬浮液均稀释到浓度为3×108CFU/ml备用。
(3)播种时接种摩西球囊霉，接种量为每株黄瓜5000接种势；黄瓜生长至三叶一心时用灌根法接种枯草芽孢杆菌，接种量为每株黄瓜接种浓度3×108CFU/ml枯草芽孢杆菌10ml。
对比实施例1-10：
(1)供试AM真菌菌剂有地表球囊霉(Glomus versiforme)、根内球囊霉(Glomus intraradices)、刺无梗囊霉(Acaulospora spinosa)、易误巨孢囊霉(Gigaspora decipens)4种，分别由Gv、Gi、Gm、Asp、Giga表示，由青岛农业大学菌根生物技术研究所提供。菌种是经三叶草在灭菌沙土中扩繁8-10个月，以菌根化根段、土壤中的菌丝体和根围土壤组成的接种混合物。
供试PGPR有荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)3种，文章中分别以PF、BC、PP表示，菌株转移到牛肉膏蛋白胨液体培养基上，28℃下震荡培养30h。细菌悬浮液均稀释到浓度为3×108cfu/mL。
(2)播种时接种AM真菌，接种量为每株黄瓜5000接种势；黄瓜生长至三叶一心时用灌根法接种PGPR，接种量为每株黄瓜接种浓度3×108CFU/ml的菌液10ml。
对比试验及结果分析：
1.供试品种及处理：供试黄瓜品种为津优35号，将黄瓜种子用75％酒精消毒后浸种12h，放在垫有滤纸的培养皿中，置于恒温培养箱中，于28℃下催芽，出芽后播种。
2.南方根结线虫制成卵悬浮液，以Mi表示，接种3000卵/株。
3.试验在青岛农业大学日光温室进行。试验用基质为土︰蛭石︰草炭＝2︰1︰1，基质用高压灭菌锅121℃灭菌1h，灭菌后装入用酒精消毒的16cm×22cm花盆中。初步试验设不接种对照(CK)和22个处理，分别为Gm、Gv、Gi、Asp、Gigaspora、PF、BC、PP、BS、Gm+PP、Gm+BS、Gv+BC、Gv+BS、Gv+PP、Gi+PF、Gi+BC、Asp+PF、Asp+BS、Asp+PP、Giga+PF、Giga+BC，随机排列，每个处理三次重复，根据生长状况筛选出Gm+BS、Gv+BS、Gv+PP、Gi+BC四个组合菌剂，进行下一步试验。
试验设不接种对照(CK)和22个处理，分别为Gm、Gv、Gi、PF、BC、PP、BS、Gm+BS、Gv+BS、Gv+PP、Gi+BC、Gm+Mi、Gv+Mi、Gi+Mi、PF+Mi、BC+Mi、PP+Mi、BS+Mi、Gm+BS+Mi、Gv+BS+Mi、Gv+PP+Mi、Gi+BC+Mi，随机排列，每个处理4次重复。种子发芽后播种，播种前将5000接种势单位(IPU)AM真菌接种物加入花盆，对照则加入等量的灭菌混合接种物和接种物滤液，每盆2粒。昼温27℃-30℃、夜温16℃-18℃，出苗后每盆间苗后留1株苗，待幼苗子叶出土后每2d浇1次水，黄瓜生长至三叶一心时采用灌根法接种PGPR和南方根结线虫，PGPR浓度为3×108cfu/mL悬浮液，每株接10ml，南方根结线虫3000卵/株。黄瓜生长期间适当补充Hoagland营养液，其他常规管理。
4.结果与分析
4.1黄瓜根结线虫发病状况
由下表可以看出，摩西球囊霉+枯草芽孢杆菌组合菌剂接种的黄瓜病情指数最低，达到30％，其防效最高，达到68.4％。
4.2接种组合菌剂对南方根结线虫繁殖体数量的影响
由下表可以看出，接种摩西球囊霉+枯草芽孢杆菌组合菌剂的单位根重内其二龄幼虫数、雌虫数、线虫总数、卵囊数、含卵量均呈现最低水平，说明该组合菌剂对于抑制线虫生长、产卵都有较高的影响。
4.3接种组合菌剂对黄瓜生长影响
由下表可以看出，接种线虫后黄瓜减产43.4％，接种摩西球囊霉+枯草芽孢杆菌组合菌剂后增产82.5％。
试验研究表明，接种摩西球囊霉+枯草芽孢杆菌组合菌剂能够促进黄瓜生长，减少南方根结线虫侵染，使得二龄幼虫数、雌虫数、线虫总数、卵囊数、含卵量均呈现最低水平，黄瓜病情指数最低，达到30％，其防效最高，达到68.4％。其组合菌剂可以作为防治南方根结线虫的生物菌剂使用。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。
Claims (6)
1.一种防治黄瓜根结线虫病的组合菌剂，其特征在于：所述组合菌剂包括AM真菌+PGPR菌剂，接种量为每株黄瓜接种AM真菌4000-6000接种势，3×108CFU/ml浓度的PGPR菌剂5-15ml。
2.如权利要求1所述的一种防治黄瓜根结线虫病的组合菌剂，其特征在于：所述组合菌剂为摩西球囊霉和枯草芽孢杆菌，接种量为每株黄瓜接种摩西球囊霉5000接种势，3×108CFU/ml浓度的枯草芽孢杆菌10ml。
3.制备如权利要求1所述防治黄瓜根结线虫病的组合菌剂的方法，其特征在于：所述AM真菌菌种经三叶草在灭菌沙土中扩繁8-10个月，以孢子、菌根化根段、土壤中的菌丝体和根围土壤组成的接种混合物备用；所述PGPR菌株转移到牛肉膏蛋白胨液体培养基上，25-30℃下震荡培养28-32h，细菌悬浮液均稀释到浓度为3×108CFU/ml。
4.如权利要求3所述的防治黄瓜根结线虫病的组合菌剂的制备方法，其特征在于：摩西球囊霉种经三叶草在灭菌沙土中扩繁8-10个月，以孢子、菌根化根段、土壤中的菌丝体和根围土壤组成的接种混合物备用；所述枯草芽孢杆菌菌株转移到牛肉膏蛋白胨液体培养基上，29℃下震荡培养30h，细菌悬浮液均稀释到浓度为3×108CFU/ml。
5.一种防治黄瓜根结线虫病的组合菌剂的应用方法，其特征在于由以下步骤组成：
(1)播种时接种AM真菌，接种量为每株黄瓜5000接种势；
(2)黄瓜生长至三叶一心时用灌根法接种PGPR，接种量为每株黄瓜接种浓度3×108CFU/ml的菌液10ml。
6.如权利要求5所述的一种防治黄瓜根结线虫病的组合菌剂的应用方法，其特征在于由以下步骤组成：
(1)播种时接种摩西球囊，接种量为每株黄瓜5000接种势；
(2)黄瓜生长至三叶一心时用灌根法接种枯草芽孢杆菌，接种量为每株黄瓜接种浓度3×108CFU/ml枯草芽孢杆菌10ml。
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