CN104620990A - 一种高精度改良White(含碳源和固定介质)培养基质的规模化制作方法 - Google Patents

一种高精度改良White(含碳源和固定介质)培养基质的规模化制作方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种高精度改良White(含碳源和固定介质)培养基质的规模化制作方法，属于植物生物技术领域。首先计算基质所含的19种元素扩大1000倍后的需求量以及CuSO4·5H2O扩大100000倍后的需求量；准确称取扩大后的药品量；将19种元素按照需求量的少多进行先后混合均匀并密封；将CuSO4·5H2O用1L蒸馏水溶解后保存备用；根据需要分别启封。通过该方法制备的基质具有精度高、操作方便、快速、应用简单、不同批次以及批次内误差小的特点，且避免了人为操作以及外界因素影响导致出现误差大、沉淀、发霉等现象，可运用于植物组织培养等生物技术用途。

Description

一种高精度改良White(含碳源和固定介质)培养基质的规模化制作方法
技术领域
本发明公开了一种高精度改良White(含碳源和固定介质)培养基质的规模化制作方法，属于植物生物技术领域。更具体地说是一种包括有准确计算、精确称量、先少后多地混合、密封、单独母液制备、启封使用等六个步骤，以期获得不同批次和批次之间误差极小的培养基质、减少试验误差的方法。
背景技术
植物组织培养技术或无土栽培技术通常需要配制培养基母液，即配制扩大一定倍数、含有各种类型试剂的液体。然而，由于母液含有不同类型试剂，常常分为大量元素、微量元素、铁盐和有机元素四大类，而四大类所扩大的倍数不同，导致药品使用质量不一致，一则容易出现计算误差；二则药品的厂家、质量不一致，即使计算、称量一致，也会影响试验结果；三则由于母液为液体状态，在春夏之交季节，由于气温上升以及湿度增大，极其容易导致母液感染细菌、霉菌，导致母液中呈现不同颜色或出现沉淀的现象，浪费了原料；四则会因称量者对容器刻度的认知(尤其是微量元素)、仪器精密度的不同而出现较大误差。
鉴于母液配制的上述缺点，用常规的母液配制培养基，常常会出现因称量者、药品、季节等因素而导致的试验结果失败或无法重复的现象，极大的影响了运用植物组织培养或无土栽培技术开展试验的进程，打击了试验者的信心。
发明内容
一种高精度改良White(含碳源和固定介质)培养基质的规模化制作方法，其特征在于，所述的方法中包括有准确计算、精确称量、先少后多地混合、密封、单独母液制备、启封使用等六个步骤。
根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的六个步骤具体操作如下：
①     准确计算：将改良White基本培养基所含的19种元素扩大1000倍，即盐酸硫胺素0.1g，盐酸吡哆醇0.1g，烟酸0.3g，碘化钾0.75g，硼酸1.5g，硫酸铁2.5g，七水硫酸锌2.67g，钼酸3g，甘氨酸3g，四水硫酸锰6.65g，一水磷酸二氢钠19g，氯化钾65g，硝酸钾80g，肌醇100g，硫酸钠200g，四水硝酸钙288g，七水硫酸镁737g，琼脂粉5000g，绵白糖20000g；五水硫酸铜扩大100000倍，即各0.1g；
②     精确称量：按照①中计算的结果准确称量；
③     先少后多地混合：按照量的少多进行先后混合，即按照盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸，碘化钾，硼酸，硫酸铁，七水硫酸锌，钼酸，甘氨酸，四水硫酸锰，一水磷酸二氢钠，氯化钾，硝酸钾，肌醇，硫酸钠，四水硝酸钙，七水硫酸镁，琼脂粉，绵白糖的顺序混合均匀，共计26509.57g；
④     密封：将混合后的固体基质按照250g每瓶的要求分装于塑料容器中，并进行密封；
⑤     单独母液制备：五水硫酸铜各称量0.1g，溶于1L蒸馏水中，配制成100000倍母液；
⑥     启封使用：根据需要，每1L蒸馏水中加入准确称量的上述固体基质26.5g，加热待其完全溶解后加入10μL五水硫酸铜的单独母液，进而加入其它所需试剂即可。
本发明的有益效果：该高精密度培养基质的规模化制作方法具有以下特点，即不同批次的基质之间无计算误差；由于19种试剂都扩大了1000倍，1种试剂扩大了100000倍，不同批次的基质之间的称量误差极小，精密度高；理论上，由于固体基质每次为1000倍的使用量(以每次1L计算)，即可以配制1000L的上述配方，液体母液每次仅需要10μL，批次内部不会出现因为使用不同厂家、不同时期的试剂而导致的人为误差；扩大后的固体基质为每250g密封于一个塑料容器中，可避免因天气、温度、水分等外界因素影响导致出现液体母液常见的沉淀、发霉等现象，而液体基质仅为1种元素。扩大100000倍后精密度高；上述的诸多优点都为以该培养基为基质开展的后续试验，获得准确的试验结果奠定基础。
具体实施方式：
下面结合具体实施例对本发明进行进一步的描述。
本实施例中一种高精度改良White(含碳源和固定介质)(含碳源和固定介质和固定介质)固体培养基质的规模化制作方法，包括有准确计算、精确称量、先少后多地混合、密封、单独母液制备、启封使用等六个步骤。
上述六个步骤具体操作如下：
①     准确计算：将改良White基本培养基所含的19种元素扩大1000倍，即盐酸硫胺素0.1g，盐酸吡哆醇0.1g，烟酸0.3g，碘化钾0.75g，硼酸1.5g，硫酸铁2.5g，七水硫酸锌2.67g，钼酸3g，甘氨酸3g，四水硫酸锰6.65g，一水磷酸二氢钠19g，氯化钾65g，硝酸钾80g，肌醇100g，硫酸钠200g，四水硝酸钙288g，七水硫酸镁737g，琼脂粉5000g，绵白糖20000g；五水硫酸铜扩大100000倍，即各0.1g；
②     精确称量：按照①中计算的结果准确称量；
③     先少后多地混合：按照量的少多进行先后混合，即按照盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸，碘化钾，硼酸，硫酸铁，七水硫酸锌，钼酸，甘氨酸，四水硫酸锰，一水磷酸二氢钠，氯化钾，硝酸钾，肌醇，硫酸钠，四水硝酸钙，七水硫酸镁，琼脂粉，绵白糖的顺序混合均匀，共计26509.57g；
④     密封：将混合后的固体基质按照250g每瓶的要求分装于塑料容器中，并进行密封；
⑤     单独母液制备：五水硫酸铜各称量0.1g，溶于1L蒸馏水中，配制成100000倍母液；
⑥     启封使用：根据需要，每1L蒸馏水中加入准确称量的上述固体基质26.5g，加热待其完全溶解后加入10μL五水硫酸铜的单独母液，进而加入其它所需试剂即可。
将上述基质配制后的1L溶液加入1ml的1N的KOH，溶解完全后分装于30个200ml的玻璃瓶中，121℃灭菌20min后。于超净工作台上接种甜叶菊茎段，25℃光照12h条件下培养10d后，生根良好。

Claims (3)

1.一种高精度改良White(含碳源和固定介质)培养基质的规模化制作方法，其特征在于，所述的方法中包括有准确计算、精确称量、先少后多地混合、密封、单独母液制备、启封使用等六个步骤。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的六个步骤具体操作如下：
①准确计算：将改良White基本培养基所含的19种元素扩大1000倍，即盐酸硫胺素0.1g，盐酸吡哆醇0.1g，烟酸0.3g，碘化钾0.75g，硼酸1.5g，硫酸铁2.5g，七水硫酸锌2.67g，钼酸3g，甘氨酸3g，四水硫酸锰6.65g，一水磷酸二氢钠19g，氯化钾65g，硝酸钾80g，肌醇100g，硫酸钠200g，四水硝酸钙288g，七水硫酸镁737g，琼脂粉5000g，绵白糖20000g；五水硫酸铜扩大100000倍，即各0.1g；
②精确称量：按照①中计算的结果准确称量；
③先少后多地混合：按照量的少多进行先后混合，即按照盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸，碘化钾，硼酸，硫酸铁，七水硫酸锌，钼酸，甘氨酸，四水硫酸锰，一水磷酸二氢钠，氯化钾，硝酸钾，肌醇，硫酸钠，四水硝酸钙，七水硫酸镁，琼脂粉，绵白糖的顺序混合均匀，共计26509.57g；
④密封：将混合后的固体基质按照250g每瓶的要求分装于塑料容器中，并进行密封；
⑤单独母液制备：五水硫酸铜各称量0.1g，溶于1L蒸馏水中，配制成100000倍母液；
⑥启封使用：根据需要，每1L蒸馏水中加入准确称量的上述固体基质26.5g，加热待其完全溶解后加入10μL五水硫酸铜的单独母液，进而加入其它所需试剂即可。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，该高精密度培养基质的规模化制作方法具有以下特点，即不同批次的基质之间无计算误差；由于19种试剂都扩大了1000倍，1种试剂扩大了100000倍，不同批次的基质之间的称量误差极小，精密度高；理论上，由于固体基质每次为1000倍的使用量(以每次1L计算)，即可以配制1000L的上述配方，液体母液每次仅需要10μL，批次内部不会出现因为使用不同厂家、不同时期的试剂而导致的人为误差；扩大后的固体基质为每250g密封于一个塑料容器中，可避免因天气、温度、水分等外界因素影响导致出现液体母液常见的沉淀、发霉等现象，而液体基质仅为1种元素；扩大100000倍后精密度高；上述的诸多优点都为以该培养基为基质开展的后续试验，获得准确的试验结果奠定基础。
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