CN104604721A - 一种高精度ms(含碳源和固定介质)培养基质的规模化制作方法 - Google Patents

一种高精度ms(含碳源和固定介质)培养基质的规模化制作方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种高精度MS(含碳源和固定介质)培养基质的规模化制作方法，属于植物生物技术领域。首先计算基质所含的18种元素扩大1000倍后的需求量以及需求量极少的CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O扩大10000倍后的需求量；准确称取药品；将18种元素按照需求量的少多进行先后混合均匀、密封；将CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O用1L蒸馏水溶解后置于玻璃瓶中保存备用；根据需要分别启封使用。通过该方法制备的基质具有精度高、操作方便、快速、应用简单、不同批次以及批次内误差小的特点，且避免了人为操作以及外界因素影响导致出现误差大、沉淀、发霉等现象，可运用于植物组织培养等生物技术用途。

Description

一种高精度MS(含碳源和固定介质)培养基质的规模化制作方法
技术领域
本发明公开了一种高精度MS(含碳源和固定介质)培养基质的规模化制作方法，属于植物生物技术领域。更具体地说是一种包括有准确计算、精确称量、先少后多地混合、密封、单独母液制备、启封使用等六个步骤，以期获得不同批次和批次之间误差极小的培养基质、减少试验误差的方法。
背景技术
植物组织培养技术或无土栽培技术通常需要配制培养基母液，即配制扩大一定倍数、含有各种类型试剂的液体。然而，由于母液含有不同类型试剂，常常分为大量元素、微量元素、铁盐和有机元素四大类，而四大类所扩大的倍数不同，导致药品使用质量不一致，一则容易出现计算误差；二则药品的厂家、质量不一致，即使计算、称量一致，也会影响试验结果；三则由于母液为液体状态，在春夏之交季节，由于气温上升以及湿度增大，极其容易导致母液感染细菌、霉菌，导致母液中呈现不同颜色或出现沉淀的现象，浪费了原料；四则会因称量者对容器刻度的认知(尤其是微量元素)、仪器精密度的不同而出现较大误差。
鉴于母液配制的上述缺点，用常规的母液配制培养基，常常会出现因称量者、药品、季节等因素而导致的试验结果失败或无法重复的现象，极大的影响了运用植物组织培养或无土栽培技术开展试验的进程，打击了试验者的信心。
发明内容
一种高精度MS(含碳源和固定介质)培养基质的规模化制作方法，其特征在于，所述的方法中包括有准确计算、精确称量、先少后多地混合、密封、单独母液制备、启封使用等六个步骤。
根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的六个步骤具体操作如下：
①     准确计算：将MS基本培养基所含的18种元素扩大1000倍，即盐酸硫胺素0.1g，二水钼酸钠0.25g，烟酸0.5g，盐酸吡哆醇0.5g，碘化钾0.83g，甘氨酸2g，硼酸6.2g，七水硫酸锌8.6g，四水硫酸锰22.3g，乙二胺四乙酸钠铁36.5g，肌醇100g，磷酸二氢钾180g，七水硫酸镁370g，二水氯化钙440g，硝酸铵1850g，硝酸钾1900g，琼脂粉5000g，绵白糖30000g；2种元素六水氯化钴和五水硫酸铜扩大10000倍，即各0.25g；
②     精确称量：按照①中计算的结果准确称量，尤其是要用万分之一天平准确称量各0.25g的六水氯化钴和五水硫酸铜；
③     先少后多地混合：按照量的少多进行先后混合，即按照盐酸硫胺素，二水钼酸钠，烟酸，盐酸吡哆醇，碘化钾，甘氨酸，硼酸，七水硫酸锌，四水硫酸锰，乙二胺四乙酸钠铁，肌醇，磷酸二氢钾，七水硫酸镁，二水氯化钙，硝酸铵，硝酸钾，琼脂粉，绵白糖的顺序混合均匀，共计39707.78g；
④     密封：将混合后的固体基质按照250g每瓶的要求分装于塑料容器中，并进行密封；
⑤     单独母液制备：六水氯化钴和五水硫酸铜各称量0.25g，溶于1L蒸馏水中，配制成10000倍母液；
⑥     启封使用：根据需要，每1L蒸馏水中加入准确称量的上述固体基质39.7g，加热待其完全溶解后加入100μL六水氯化钴和五水硫酸铜的单独母液，进而加入其它所需试剂即可。
本发明的有益效果：该高精密度培养基质的规模化制作方法具有以下特点，即不同批次的基质之间无计算误差；由于18种试剂都扩大了1000倍，2种试剂扩大了10000倍，不同批次的基质之间的称量误差极小，精密度高；理论上，由于固体基质每次为1000倍的使用量(以每次1L计算)，即可以配制1000L的上述配方，液体母液每次仅需要100μL，批次内部不会出现因为使用不同厂家、不同时期的试剂而导致的人为误差；扩大后的固体基质为每250g密封于一个塑料容器中，可避免因天气、温度、水分等外界因素影响导致出现液体母液常见的沉淀、发霉等现象，而液体基质仅为两种元素的混合。扩大10000倍后精密度高；上述的诸多优点都为以该培养基为基质开展的后续试验，获得准确的试验结果奠定基础。
具体实施方式：
下面结合具体实施例对本发明进行进一步的描述。
本实施例中一种高精度MS(含碳源和固定介质)(含碳源和固定介质和固定介质)固体培养基质的规模化制作方法，包括有准确计算、精确称量、先少后多地混合、密封、单独母液制备、启封使用等六个步骤。
上述六个步骤具体操作如下：
①     准确计算：将MS基本培养基所含的18种元素扩大1000倍，即盐酸硫胺素0.1g，二水钼酸钠0.25g，烟酸0.5g，盐酸吡哆醇0.5g，碘化钾0.83g，甘氨酸2g，硼酸6.2g，七水硫酸锌8.6g，四水硫酸锰22.3g，乙二胺四乙酸钠铁36.5g，肌醇100g，磷酸二氢钾180g，七水硫酸镁370g，二水氯化钙440g，硝酸铵1850g，硝酸钾1900g，琼脂粉5000g，绵白糖30000g；2种元素六水氯化钴和五水硫酸铜扩大10000倍，即各0.25g；
②     精确称量：按照①中计算的结果准确称量，尤其是要用万分之一天平准确称量各0.25g的六水氯化钴和五水硫酸铜；
③     先少后多地混合：按照量的少多进行先后混合，即按照盐酸硫胺素，二水钼酸钠，烟酸，盐酸吡哆醇，碘化钾，甘氨酸，硼酸，七水硫酸锌，四水硫酸锰，乙二胺四乙酸钠铁，肌醇，磷酸二氢钾，七水硫酸镁，二水氯化钙，硝酸铵，硝酸钾，琼脂粉，绵白糖的顺序混合均匀，共计39707.78g；
④     密封：将混合后的固体基质按照250g每瓶的要求分装于塑料容器中，并进行密封；
⑤     单独母液制备：六水氯化钴和五水硫酸铜各称量0.25g，溶于1L蒸馏水中，配制成10000倍母液；
⑥     启封使用：根据需要，每1L蒸馏水中加入准确称量的上述固体基质39.7g，加热待其完全溶解后加入100μL六水氯化钴和五水硫酸铜的单独母液，进而加入其它所需试剂即可。
将上述基质配制后的1L溶液加入1ml的1N的KOH，溶解完全后分装于30个200ml的玻璃瓶中，121℃灭菌20min后。于超净工作台上接种甜叶菊茎段，25℃光照12h条件下培养20d后，生根良好。

Claims (3)

1.一种高精度MS(含碳源和固定介质)培养基质的规模化制作方法，其特征在于，所述的方法中包括有准确计算、精确称量、先少后多地混合、密封、单独母液制备、启封使用等六个步骤。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的六个步骤具体操作如下：
①准确计算：将MS基本培养基所含的18种元素扩大1000倍，即盐酸硫胺素0.1g，二水钼酸钠0.25g，烟酸0.5g，盐酸吡哆醇0.5g，碘化钾0.83g，甘氨酸2g，硼酸6.2g，七水硫酸锌8.6g，四水硫酸锰22.3g，乙二胺四乙酸钠铁36.5g，肌醇100g，磷酸二氢钾180g，七水硫酸镁370g，二水氯化钙440g，硝酸铵1850g，硝酸钾1900g，琼脂粉5000g，绵白糖30000g；2种元素六水氯化钴和五水硫酸铜扩大10000倍，即各0.25g；
②精确称量：按照①中计算的结果准确称量，尤其是要用万分之一天平准确称量各0.25g的六水氯化钴和五水硫酸铜；
③先少后多地混合：按照量的少多进行先后混合，即按照盐酸硫胺素，二水钼酸钠，烟酸，盐酸吡哆醇，碘化钾，甘氨酸，硼酸，七水硫酸锌，四水硫酸锰，乙二胺四乙酸钠铁，肌醇，磷酸二氢钾，七水硫酸镁，二水氯化钙，硝酸铵，硝酸钾，琼脂粉，绵白糖的顺序混合均匀，共计39707.78g；
④密封：将混合后的固体基质按照250g每瓶的要求分装于塑料容器中，并进行密封；
⑤单独母液制备：六水氯化钴和五水硫酸铜各称量0.25g，溶于1L蒸馏水中，配制成10000倍母液；
⑥启封使用：根据需要，每1L蒸馏水中加入准确称量的上述固体基质39.7g，加热待其完全溶解后加入100μL六水氯化钴和五水硫酸铜的单独母液，进而加入其它所需试剂即可。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，该高精密度培养基质的规模化制作方法具有以下特点，即不同批次的基质之间无计算误差；由于18种试剂都扩大了1000倍，2种试剂扩大了10000倍，不同批次的基质之间的称量误差极小，精密度高；理论上，由于固体基质每次为1000倍的使用量(以每次1L计算)，即可以配制1000L的上述配方，液体母液每次仅需要100μL，批次内部不会出现因为使用不同厂家、不同时期的试剂而导致的人为误差；扩大后的固体基质为每250g密封于一个塑料容器中，可避免因天气、温度、水分等外界因素影响导致出现液体母液常见的沉淀、发霉等现象，而液体基质仅为两种元素的混合；扩大10000倍后精密度高；上述的诸多优点都为以该培养基为基质开展的后续试验，获得准确的试验结果奠定基础。
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