CN104568875B - 旋转扫描的实时荧光定量pcr检测系统 - Google Patents

Abstract

一种旋转扫描的定量荧光PCR检测系统，该检测系统包括荧光检测装置、光源激发装置、热循环模块装置、光信号传输装置四大部分。步进电机的输出轴通过光纤固定盘、光路选通旋转片保护环与光路选通旋转片相连；荧光检测装置的底座上设有与PMT保护装置探测窗口对应的孔，使得PMT探测窗口对准光纤输出端聚焦器；所述耦合筒固定在耦合筒固定装置上，耦合筒在耦合筒固定装置上为4X4均匀布置的阵列方式；热循环模块装置包括自上而下装置成一体的可插放多个试管的多孔反应池、反应池固定装置、加热制冷片、反应池制冷散热器、反应池制冷散热风扇；本发明采用成熟的大功率半导体加热制冷片实现PCR反应的温度循环，升降温速度快，扩增效率高。

Description

旋转扫描的实时荧光定量PCR检测系统

技术领域

本发明属于分子生物学检测技术领域，具体涉及临床分子诊断、检验检疫、刑侦、农林牧副渔、食品安全以及科学教育等的DNA片段扩展与检测。

背景技术

聚合酶链式反应(polymerase chainreaction,PCR)是一种体外核酸定量，即DNA片段在体外特异性地扩增。由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点，是基因扩增技术的一次重大革新。PCR技术可将极微量的靶DNA特异地扩增上百万倍，从而大大提高对DNA分子的分析和检测能力。

定量荧光PCR技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针或相应的荧光染料实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

一般来讲，定量荧光PCR仪是实时检测PCR反应的仪器，有两个功能模块：保证PCR、反应进行的热循环仪和荧光实时检测系统。这样一台仪器主要由样品载台、基因扩增热循环组件、微量荧光检测光学系统、微电路控制系统、计算机及应用软件组成。其中基因扩增热循环组件工作原理与传统基因扩增仪大致相同，分别采用空气加热、压缩机制冷、半导体加热制冷等工作方式。荧光检测系统主要有由荧光激发部件、光路、荧光检测部件、控制系统组成。常用的荧光激发光源有两种：卤钨灯和LED；荧光检测元件常用两种方式：光电倍增管和制冷CCD相机。

目前主流实时PCR的工作模式按照激发与探测的位置关系分类有以下三种。

(a)底部检测模式需要在金属块底部加工通孔，并且采用多孔的半导体加热制冷片，但是器件加工难度大，成本高；多孔的半导体加热制冷片的功率和能量分布的不均匀，造成升降温速度慢。

(b)侧面检测模式由于底部封闭，可以采用成熟的大功率半导体加热制冷片，升降温速度快，扩增效率高，但是需要在金属块中放置光纤，光纤头容易被污染，难以清洁和维护；由于侧壁开口扩增反应试管接收的热能分布不均匀，一定程度升降温速度和内部的反应进行，表现在荧光强度下降。

(c)传统的顶部检测模式，加热制冷模块封闭，可以采用成熟的大功率半导体加热制冷片，升降温速度快，扩增效率高，采用二维电机驱动扫描激发检测头或者制冷CCD进行检测。二维电机驱动扫描，速度慢，机电结构复杂；采用制冷CCD，速度快，但是由于器件本省特性导致稳定性差、成本高、故障率高。

实时PCR仪按照采用的探测器种类可以分类为点探测器(如光电倍增管或者雪崩二极管)和二维面阵列探测器(如制冷CCD相机)。采用点探测器需要二维扫描，速度慢，但性能参数占优，如信噪比高、动态范围大等。采用二维面阵列探测器一般无需扫描，检测速度快，但是性能相对不足。

发明内容

针对现有技术存在的缺陷和不足，本发明的目的在于提供一种快速、准确、方便、检测灵敏度高、精度与重复精度高的旋转扫描的实时PCR检测系统。

一种旋转扫描的定量荧光PCR检测系统，该检测系统包括荧光检测装置、光源激发装置、热循环模块装置、光信号传输装置四大部分。

具体而言，荧光检测装置包括步进电机1、电机固定盘2、光纤固定盘3、光路选通旋转片保护环4、光路选通旋转片5、滤光片固定盘6，滤光片固定盘6上设有可插放及换取滤光片7的孔，用以完成多种波长信号检测；

步进电机1的输出轴通过光纤固定盘3、光路选通旋转片保护环4与光路选通旋转片5相连；步进电机1安装在电机固定盘2上；光路选通旋转片5与光纤固定盘3、光路选通旋转片保护环4均无接触；所述电机固定盘2、光纤固定盘3、光路选通旋转片保护环4、滤光片固定盘6均固定在底座8上。

荧光检测装置的底座8上设有与光电倍增管保护装置9探测窗口对应的孔，使得光电倍增管探测窗口对准光纤输出端聚焦器25；步进电机1旋转带动光路选通旋转片5选通特定通路，以使该光路导通，其中的荧光信号通过滤光片7滤除杂光使特定有效波长传输到光电倍增管保护装置9中，光电倍增管保护装置9将接收到的光信号转化，被电信号输出给后期处理电路进行信号处理。

光源激发装置包括耦合筒固定装置11、耦合筒12；所述耦合筒12固定在耦合筒固定装置11上，耦合筒12在耦合筒固定装置11上为4X4均匀布置的阵列方式；耦合筒12内安装有聚焦装置，光纤光源端聚焦器24及LED阵列13分别位于聚焦装置的像面焦点处及物面焦点处；在LED阵列13背部安装有光源散热器10。

热循环模块装置包括自上而下装置成一体的可插放多个试管的多孔反应池15、反应池固定装置16、加热制冷片17、反应池制冷散热器19、反应池制冷散热风扇20；反应池15与反应池固定装置16连接，反应池固定装置16与加热制冷片17连接，加热制冷片17与反应池制冷散热器19连接，反应池制冷散热器19与反应池制冷散热风扇20连接；热循环模块装置固定在导轨21上，热循环模块可沿导轨21滑动，以改变热循环模块沿水平方向的位置；多孔防挥发热盖升降装置18与多孔防挥发加热盖14连接，以改变多孔防挥发加热盖14竖直方向的位置；

通过调节导轨21、多孔防挥发热盖升降装置18使得多孔防挥发加热盖14上的孔位与反应池15的孔相对应；反应池15与加热制冷片17之间具有传热介质，例如导热固化胶或导热相变材料或导热石墨等，反应池固定装置16上两侧的内扣结构使反应池15、加热制冷片17、反应池制冷散热器19紧密连接；

该发明检测装置中，光信号通过光纤传输的；光信号传输装置包括多模Y型光纤22、光纤公共端聚焦器23、光纤光源端聚焦器24、光纤输出端聚焦器25；多模Y型光纤22的端口分别为光纤公共端聚焦器23、光纤光源端聚焦器24、光纤输出端聚焦器25。

光纤公共端聚焦器23插入多孔防挥发热盖14的孔中，调整光纤公共端聚焦器23的聚焦焦点位于多孔反应池15每个反应池中心处、光纤输出端聚焦器24焦点与耦合筒12中有聚焦装置的焦点重合。

光纤输出端聚焦器25插入光纤固定盘3对应的孔中，其聚焦器焦点位于光电倍增管保护装置9探测窗口中心。

本发明采用成熟的大功率半导体加热制冷片实现PCR反应的温度循环，升降温速度快，扩增效率高。

本发明与现有实时PCR装置相比，具有以下优点。

本发明可克服传统荧光定量PCR采取二维扫描方式获得各试管的荧光信号的缺点与不足：1.仪器扫描机械结构复杂，定位精度与重复定位精度不同，操作繁琐，空间体积大，不利于小型化。2、一次检测中，对于不同试管的检测精度不同。在进行扫描中，电机带动光纤准直头运动，由于对准每一个试管定位精度不相同，以及光纤准直头的震动会影响荧光信号的探测精度，造成一个检测时，不同试管的检测精度不同相同。3、不同检测批次之间的精度不同。由于定位精度与重复定位精度不同，各个反应批次中相同位置的试管的检测，也不相同。4、检测时间长，二维扫描，光纤位置需要复位，时间长。

附图说明

图1旋转扫描的实时荧光定量PCR检测系统。

图2为光路选通装置结构装配图。

图3为光路选通装置零件示意图。

图4为光源激发装置示意图。

图5为热循环模块装置示意图。

图中：1、步进电机，2、电机固定盘，3、光纤固定盘，4、光路选通旋转片保护环，5、光路选通旋转片，6、滤光片固定盘，7、滤光片，8、底座，9、光电倍增管保护装置，10、光源散热器，11、耦合筒固定装置，12、耦合筒，13、LED阵列，14、多孔防挥发加热盖，15、多孔反应池，16、反应池固定装置，17、加热制冷片，18多孔防挥发热盖升降装置，19、反应池制冷散热器，20、反应池制冷散热风扇，21、导轨，22、多模Y型光纤，23、光纤公共端聚焦器，24、光纤光源端聚焦器，25、光纤输出端聚焦器。

具体实施方式

以下结合附图和实例对本发明进行进一步说明。

如图1-3所示，一种旋转扫描的定量荧光PCR检测系统，该检测系统包括荧光检测装置、光源激发装置、热循环模块装置、光信号传输装置四大部分。

具体而言，荧光检测装置包括步进电机1、电机固定盘2、光纤固定盘3、光路选通旋转片保护环4、光路选通旋转片5、滤光片固定盘6，滤光片固定盘6上设有可插放及换取滤光片7的孔，用以完成多种波长信号检测；

步进电机1的输出轴通过光纤固定盘3、光路选通旋转片保护环4与光路选通旋转片5相连；步进电机1安装在电机固定盘2上；光路选通旋转片5与光纤固定盘3、光路选通旋转片保护环4均无接触；所述电机固定盘2、光纤固定盘3、光路选通旋转片保护环4、滤光片固定盘6均固定在底座8上。

荧光检测装置的底座8上设有与光电倍增管保护装置9探测窗口对应的孔，使得光电倍增管探测窗口对准光纤输出端聚焦器25；步进电机1旋转带动光路选通旋转片5选通特定通路，以使该光路导通，其中的荧光信号通过滤光片7滤除杂光使特定有效波长传输到光电倍增管保护装置9中，光电倍增管保护装置9将接收到的光信号转化，被电信号输出给后期处理电路进行信号处理。

光源激发装置包括耦合筒固定装置11、耦合筒12；所述耦合筒12固定在耦合筒固定装置11上，耦合筒12在耦合筒固定装置11上为4X4均匀布置的阵列方式；耦合筒12内安装有聚焦装置，光纤光源端聚焦器24及LED阵列13分别位于聚焦装置的像面焦点处及物面焦点处；在LED阵列13背部安装有光源散热器10。

热循环模块装置包括自上而下装置成一体的可插放多个试管的多孔反应池15、反应池固定装置16、加热制冷片17、反应池制冷散热器19、反应池制冷散热风扇20；反应池15与反应池固定装置16连接，反应池固定装置16与加热制冷片17连接，加热制冷片17与反应池制冷散热器19连接，反应池制冷散热器19与反应池制冷散热风扇20连接；热循环模块装置固定在导轨21上，热循环模块可沿导轨21滑动，以改变热循环模块沿水平方向的位置；多孔防挥发热盖升降装置18与多孔防挥发加热盖14连接，以改变多孔防挥发加热盖14竖直方向的位置；

通过调节导轨21、多孔防挥发热盖升降装置18使得多孔防挥发加热盖14上的孔位与反应池15的孔相对应；反应池15与加热制冷片17之间具有传热介质，例如导热固化胶或导热相变材料或导热石墨等，反应池固定装置16上两侧的内扣结构使反应池15、加热制冷片17、反应池制冷散热器19紧密连接；

该发明检测装置中，光信号通过光纤传输的；光信号传输装置包括多模Y型光纤22、光纤公共端聚焦器23、光纤光源端聚焦器24、光纤输出端聚焦器25；多模Y型光纤22的端口分别为光纤公共端聚焦器23、光纤光源端聚焦器24、光纤输出端聚焦器25。

光纤公共端聚焦器23插入多孔防挥发热盖14的孔中，调整光纤公共端聚焦器23的聚焦焦点位于多孔反应池15每个反应池中心处、光纤输出端聚焦器24焦点与耦合筒12中有聚焦装置的焦点重合。

光纤输出端聚焦器25插入光纤固定盘3对应的孔中，其聚焦器焦点位于光电倍增管保护装置9探测窗口中心。

向外横向拉动导轨21，使热循环装置模块移出多孔防挥发加热盖14，将需检测试剂放入多孔反应池15中，推动导轨21使热循环装置模块进入多孔防挥发加热盖14，调节多孔防挥发热盖升降装置18使得多孔防挥发加热盖14紧密贴紧多孔反应池15。将光纤公共端聚焦器23依次对应插入存有检测试剂的多孔防挥发热盖14的孔中，将光纤的光纤输出端聚焦器25依次插入光纤固定盘3的孔中，光纤固定盘3中未使用的孔进行避光处理。将光纤光源端聚焦器24依次插入对应耦合筒固定装置11的孔中，未使用到的耦合筒固定装置11的孔进行避光处理。调节步进电机1的控制电路，使光路选通旋转片5选通检测光路。

所述多模Y型光纤22的光纤光源端聚焦器24、光纤输出端聚焦器25在检测过程中固定不动。

所述光纤光源端聚焦器24分别设置在距离多个光源一倍焦距处，分别耦合接收光源发出的激发光。

所述多模Y型光纤22是一根粗光纤，两端具有聚焦能力，其两端各自加上一个透镜，或者通过工艺处理成为自聚焦透镜。

所述多孔防挥发加热盖14内部为方形凹陷结构，凹面内设置有耐热密封圈或密封涂胶、内嵌铜片及加热片，加热片与铜片之间具有传热介质，传热介质可以是导热固化胶或导热相变材料或导热石墨等。加热片和铜片上布有与反应池孔一一对应的通孔，可以防止试管内试剂挥发而影响探测结果。

所述多孔防挥发加热盖14内部设有多孔防挥发热盖升降装置18，多孔防挥发热盖升降装置18可设计为螺旋升降设计、弹簧升降设计或者卡槽升降设计等。

所述步进电机1的输出轴与光路选通旋转片5圆心连接处横截面为扇形、菱形等非圆形设计，并且连接处用瞬间胶、环氧树脂粘结类、厌氧胶水、热熔胶、乳胶类等粘接，为防止步进电机1工作时，其输出轴与光路选通旋转片5连接处相对运动。

所述光纤固定盘3上的光纤孔成星形散射状分布，光纤固定盘3上的光纤孔的圆心中轴线均与横轴坐标夹角在0°～90°之间，圆心中轴线均与光电倍增管保护装置9探测窗口重合，使得光纤输出端聚焦器25对准光电倍增管保护装置9探测窗口。

所述光路选通旋转片5上的选通孔成星形散射状分布，其分布状态与光纤固定盘3上的光纤孔分布一致，并且光路选通旋转片5上的选通孔圆心均对应分布于光纤固定盘3上的光纤孔的圆心中轴线上，保证光信号在从光纤输出端聚焦器25到光电倍增管保护装置9探测窗口传输中无机械损耗。

所述滤光片固定盘6上设有可插放及换取滤光片7的孔，用以完成多种波长信号检测，孔的内侧与滤光片7外边缘的接触部分按有密封避光装置，密封避光装置可以是橡胶片、树脂片、软塑料片等，防止检测系统内与外环境光的传输交换。

所述滤光片固定盘6一侧设有圆形凸槽，其凸槽的圆形半径与厚度与滤光片7的半径和厚度一致，另外一侧设有凹槽，凹槽的厚度和直径均略大于光路选通旋转片5的尺寸，保证光路选通旋转片5无摩擦旋转。

所述耦合筒12内安装有聚焦装置，聚焦转置可以是凸透镜、平凸透镜或者透镜组合，光纤光源端聚焦器24及LED阵列13与耦合筒连接安装时，其分别位于聚焦装置的像面焦点处及物面焦点处；

所述加热制冷片17可以是帕尔贴等热电半导体制冷组件。

所述光纤固定盘3、光路选通旋转片保护环4、滤光片固定盘6、底座8，其连接部分有密封避光装置，密封避光装置可以是橡胶片、树脂片、软塑料片等，防止检测系统内与外环境光的传输交换。

Claims (10)

1.一种旋转扫描的定量荧光PCR检测系统，其特征在于：该检测系统包括荧光检测装置、光源激发装置、热循环模块装置、光信号传输装置四大部分；

具体而言，荧光检测装置包括步进电机(1)、电机固定盘(2)、光纤固定盘(3)、光路选通旋转片保护环(4)、光路选通旋转片(5)、滤光片固定盘(6)，滤光片固定盘(6)上设有可插放及换取滤光片(7)的孔，用以完成多种波长信号检测；

步进电机(1)的输出轴通过光纤固定盘(3)、光路选通旋转片保护环(4)与光路选通旋转片(5)相连；步进电机(1)安装在电机固定盘(2)上；光路选通旋转片(5)与光纤固定盘(3)、光路选通旋转片保护环(4)均无接触；所述电机固定盘(2)、光纤固定盘(3)、光路选通旋转片保护环(4)、滤光片固定盘(6)均固定在底座(8)上；

荧光检测装置的底座(8)上设有与光电倍增管保护装置(9)探测窗口对应的孔，使得光电倍增管探测窗口对准光纤输出端聚焦器(25)；步进电机(1)旋转带动光路选通旋转片(5)选通特定通路，以使该光路导通，其中的荧光信号通过滤光片(7)滤除杂光使特定有效波长传输到光电倍增管保护装置(9)中，光电倍增管保护装置(9)将接收到的光信号转化，被电信号输出给后期处理电路进行信号处理；

光源激发装置包括耦合筒固定装置(11)、耦合筒(12)；所述耦合筒(12)固定在耦合筒固定装置(11)上，耦合筒(12)在耦合筒固定装置(11)上为4X4均匀布置的阵列方式；耦合筒(12)内安装有聚焦装置，光纤光源端聚焦器(24)及LED阵列(13)分别位于聚焦装置的像面焦点处及物面焦点处；在LED阵列(13)背部安装有光源散热器(10)；

热循环模块装置包括自上而下装置成一体的可插放多个试管的多孔反应池 (15)、反应池固定装置(16)、加热制冷片(17)、反应池制冷散热器(19)、反应池制冷散热风扇(20)；反应池(15)与反应池固定装置(16)连接，反应池固定装置(16)与加热制冷片(17)连接，加热制冷片(17)与反应池制冷散热器(19)连接，反应池制冷散热器(19)与反应池制冷散热风扇(20)连接；热循环模块装置固定在导轨(21)上，热循环模块可沿导轨(21)滑动，以改变热循环模块沿水平方向的位置；多孔防挥发热盖升降装置(18)与多孔防挥发加热盖(14)连接，以改变多孔防挥发加热盖(14)竖直方向的位置；

通过调节导轨(21)、多孔防挥发热盖升降装置(18)使得多孔防挥发加热盖(14)上的孔位与反应池(15)的孔相对应；反应池(15)与加热制冷片(17)之间具有传热介质，反应池固定装置(16)上两侧的内扣结构使反应池(15)、加热制冷片(17)、反应池制冷散热器(19)紧密连接；

该检测装置中，光信号通过光纤传输的；光信号传输装置包括多模Y型光纤(22)、光纤公共端聚焦器(23)、光纤光源端聚焦器(24)、光纤输出端聚焦器(25)；多模Y型光纤(22)的端口分别为光纤公共端聚焦器(23)、光纤光源端聚焦器(24)、光纤输出端聚焦器(25)；

光纤公共端聚焦器(23)插入多孔防挥发热盖(14)的孔中，调整光纤公共端聚焦器(23)的聚焦焦点位于多孔反应池(15)每个反应池中心处、光纤输出端聚焦器(24)焦点与耦合筒(12)中有聚焦装置的焦点重合；

光纤输出端聚焦器(25)插入光纤固定盘(3)对应的孔中，其聚焦器焦点位于光电倍增管保护装置(9)探测窗口中心。

2.根据权利要求1所述的一种旋转扫描的定量荧光PCR检测系统，其特征在于：向外横向拉动导轨(21)，使热循环装置模块移出多孔防挥发加热盖(14)，将需检测试剂放入多孔反应池(15)中，推动导轨(21)使热循环装置模块进 入多孔防挥发加热盖(14)，调节多孔防挥发热盖升降装置(18)使得多孔防挥发加热盖(14)紧密贴紧多孔反应池(15)；将光纤公共端聚焦器(23)依次对应插入存有检测试剂的多孔防挥发热盖(14)的孔中，将光纤的光纤输出端聚焦器(25)依次插入光纤固定盘(3)的孔中，光纤固定盘(3)中未使用的孔进行避光处理；将光纤光源端聚焦器(24)依次插入对应耦合筒固定装置(11)的孔中，未使用到的耦合筒固定装置(11)的孔进行避光处理；调节步进电机(1)的控制电路，使光路选通旋转片(5)选通检测光路；

所述多模Y型光纤(22)的光纤光源端聚焦器(24)、光纤输出端聚焦器(25)在检测过程中固定不动；

所述光纤光源端聚焦器(24)分别设置在距离多个光源一倍焦距处，分别耦合接收光源发出的激发光；

所述多模Y型光纤(22)是一根粗光纤，两端具有聚焦能力，其两端各自加上一个透镜，或者通过工艺处理成为自聚焦透镜。

3.根据权利要求1所述的一种旋转扫描的定量荧光PCR检测系统，其特征在于：所述多孔防挥发加热盖(14)内部为方形凹陷结构，凹面内设置有耐热密封圈或密封涂胶、内嵌铜片及加热片，加热片与铜片之间具有传热介质，传热介质可以是导热固化胶或导热相变材料或导热石墨；加热片和铜片上布有与反应池孔一一对应的通孔，可以防止试管内试剂挥发而影响探测结果；

所述多孔防挥发加热盖(14)内部设有多孔防挥发热盖升降装置(18)，多孔防挥发热盖升降装置(18)可设计为螺旋升降设计、弹簧升降设计或者卡槽升降设计。

4.根据权利要求1所述的一种旋转扫描的定量荧光PCR检测系统，其特征在于：所述步进电机(1)的输出轴与光路选通旋转片(5)圆心连接处横截面 为扇形或菱形设计，并且连接处用瞬间胶、环氧树脂粘结类、厌氧胶水、热熔胶或乳胶类粘接，为防止步进电机1工作时，其输出轴与光路选通旋转片(5)连接处相对运动。

5.根据权利要求1所述的一种旋转扫描的定量荧光PCR检测系统，其特征在于：所述光纤固定盘(3)上的光纤孔成星形散射状分布，光纤固定盘(3)上的光纤孔的圆心中轴线均与横轴坐标夹角在0°～90°之间，圆心中轴线均与光电倍增管保护装置(9)探测窗口重合，使得光纤输出端聚焦器(25)对准光电倍增管保护装置(9)探测窗口。

6.根据权利要求1所述的一种旋转扫描的定量荧光PCR检测系统，其特征在于：所述光路选通旋转片(5)上的选通孔成星形散射状分布，其分布状态与光纤固定盘(3)上的光纤孔分布一致，并且光路选通旋转片(5)上的选通孔圆心均对应分布于光纤固定盘(3)上的光纤孔的圆心中轴线上，保证光信号在从光纤输出端聚焦器(25)到光电倍增管保护装置(9)探测窗口传输中无机械损耗。

7.根据权利要求1所述的一种旋转扫描的定量荧光PCR检测系统，其特征在于：所述滤光片固定盘(6)上设有可插放及换取滤光片(7)的孔，用以完成多种波长信号检测，孔的内侧与滤光片(7)外边缘的接触部分安有密封避光装置，密封避光装置可以是橡胶片、树脂片、软塑料片，防止检测系统内与外环境光的传输交换。

8.根据权利要求1所述的一种旋转扫描的定量荧光PCR检测系统，其特征在于：所述滤光片固定盘(6)一侧设有圆形凸槽，其凸槽的圆形半径与厚度与滤光片(7)的半径和厚度一致，另外一侧设有凹槽，凹槽的厚度和直径均略大于光路选通旋转片(5)的尺寸，保证光路选通旋转片(5)无摩擦旋转。

9.根据权利要求1所述的一种旋转扫描的定量荧光PCR检测系统，其特征在于：所述耦合筒(12)内安装有聚焦装置，聚焦转置可以是凸透镜、平凸透镜或者透镜组合，光纤光源端聚焦器(24)及LED阵列(13)与耦合筒连接安装时，其分别位于聚焦装置的像面焦点处及物面焦点处；

所述加热制冷片(17)可以是帕尔贴热电半导体制冷组件。

10.根据权利要求1所述的一种旋转扫描的定量荧光PCR检测系统，其特征在于：所述光纤固定盘(3)、光路选通旋转片保护环(4)、滤光片固定盘(6)、底座(8)，其连接部分有密封避光装置，密封避光装置可以是橡胶片、树脂片、软塑料片，防止检测系统内与外环境光的传输交换。