CN104561136B - 一种将消旋体芳基邻二醇转化为手性芳基邻二醇的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种将消旋体芳基邻二醇转化为手性芳基邻二醇的方法，即首先利用氧化剂在添加β‑环糊精的水相体系中控制温度为60℃进行氧化反应4‑12h后，加入碱性物质调pH为7.0，然后将毕赤酵母菌Pichia sp.SIT2014细胞加入，控制温度为30℃,180rpm进行不对称还原反应6‑48h,所得反应液控制转速为12000r/min离心分离5min，所得上清液用等体积的乙酸乙酯萃取、干燥、旋转蒸发后，即得手性芳基邻二醇；所述毕赤酵母菌Pichia sp.SIT2014,其保藏编号为CGMCC NO.9300。所得到产物手性芳基邻二醇的产率＞99％，光学纯度ee值＞99%。
Description
技术领域
本发明涉及芳基邻二醇的制备方法，更具体的说是涉及一种将消旋体芳基邻二醇转化为手性芳基邻二醇的方法。
背景技术
光学活性的手性化合物在制药研究和制造上有极大地需求，手性芳基邻二醇是合成医药和其他具光学活性手性药物的重要砌块。手性芳基邻二醇分子中除含有两个羟基外,分子中还具有芳环,可以进行一系列的官能团转化,对其结构进行适当的修饰或改造,可作为一些药物的先导化合物要比一些手性芳基邻二醇本身更具有一定的生物活性,因此手性芳基邻二醇作为理想的手性合成砌块是许多光学纯药物的重要中间体,同时在农药、信息素、香料原料、材料等精细化工领域也有广泛的应用价值。
目前，有很多方法可以应用到手性二醇的制备上，然而一些方法在光学纯度以及产率方面存在着问题，或者生产成本高以及产物提取步骤复杂而难以实现工业化。Lee(LeeK,Gibson D T.Stereopecific Dihydroxylation of the Styrene Vinyl Group byPurified Naphthalene Dioxygenase from Pseudomonase sp.Strain NCIB 9816-4.J.Bacteriol.,1996,178:3353-3357.)研究小组用萘双氧化酶氧化苯乙烯，但所得的产品光学纯度较低；Liese(Liese A,Karutz M,Kamphuis J,et al.Enzymatic Resolutionof 1-Phenyl-1,2-ethanediol by Enantioselective Oxidation Overcoming ProductInhibition by Continuous Extraction[J].Biotechnol.Bioeng.1996,51:544-547.)等研究小组利用脱氢酶催化氧化还原反应需要在反应体系中加入辅酶及其辅酶再生循环系统；Bosetti(Bosetti,D.Bianchi,P.Cesti,et al.Enzymatic Resolution of 1,2-diols:comparison between hydrolysis and transesterificationreaction.J.Chem.Soc.Perkin Trans.I,1992:2395-2398)等利用脂肪酶不对称转酯得到(S)-苯基乙二醇的产率较低，最高只能达到50％。
手性二醇的去消旋化是以外消旋体为底物将其中一种对映体转化为另一种对映体得到光学纯的产物。大多数的微生物的立体选择性转化都是属于去消旋化作用。同时，直接利用微生物全细胞作为生物催化剂催化外消旋体醇备受广大研究者们的重视。这种方法最大的好处在于在反应体系中无需添加额外的辅酶，有时只需要添加一些廉价的糖类就可以使得细胞内的辅酶得到循环再生，细胞利用自身的氧化还原系统进行转化，直接对外消旋底物进行作用得到光学纯的对映体，在理论上的产率可达到百分之百，且下游的产物分离相对较为简单方便，同时可降低生产成本。目前存在的问题是找到同时含有两种对映选择性互补的氧化酶和还原酶的菌种难度很高，而且每一种菌种能作用的底物谱很有限。
也有中国专利(徐毅，王各，许建和，张伶娜，一种制备手性芳基仲醇的方法，ZL200710042886.9)报道了一种化学-酶法组合去消旋化制备手性芳基仲醇的方法，该方法保护的底物均为1-芳基乙醇，并未涉及到芳基邻二醇。另外在反应体系中加入底物时需要加入甲醇助溶，而且需要加入还原剂，这显然不利于环保。
结合上述已有技术背景，我们研究了在水相体系中将化学氧化和生物还原相结合的方法来实现将外消旋的芳基邻二醇以100％的理论产率和光学纯度转化为相对应的S-芳基邻二醇，这种方法巧妙的在“一锅里”将化学氧化和生物催化还原相结合，可以根据底物结构选择合适的氧化剂和微生物酶，避免了中间产物的分离过程，扩大了底物谱，克服了上述提到的目标产物产率低、光学纯度低或催化剂难以获得、需要加入有机助溶剂和还原剂等问题，是一种新颖的、有应用前景的方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种将消旋体芳基邻二醇转化为手性芳基邻二醇的方法，即在水相体系中通过“一锅煮”的去消旋化的方法将消旋的芳基邻二醇经过化学氧化反应和生物催化不对称还原反应来高产率和高立体选择性的制备手性芳基邻二醇。
本发明的技术原理
首先，在温和的条件下先利用一种化学氧化剂在以水为介质实现高化学选择性的氧化消旋体芳基邻二醇为对应的2-羟基芳基酮，然后加入少量的碱性物质调节反应液为中性后，直接加入毕赤酵母菌Pichia sp.SIT2014细胞催化第一步氧化产物2-羟基芳基酮进行不对称还原为手性芳基邻二醇，通过以上实验步骤可以实现化学-酶法的偶联的方法将消旋体芳基邻二醇转变为单一构型的手性芳基邻二醇。
本发明的技术方案
一种毕赤酵母Pichia sp.SIT2014，于2014年06月16日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC NO.9300，保藏机构地址：北京市朝阳区北辰西路1号院中国科学院微生物研究所，邮编：100101。
一种将消旋的芳基邻二醇转化为手性芳基邻二醇的方法，具体包括下列步骤：
(1)、利用氧化剂N-溴代丁二酰亚胺在添加β-环糊精的水相体系中将消旋体芳基邻二醇氧化为对应的2-羟基芳基酮，氧化反应过程中控制温度为60℃，时间为7-20h，氧化反应结束后将所得反应液用磷酸氢二钾或者氢氧化钠调pH为中性；
上述N-溴代丁二酰亚胺、β-环糊精和消旋体芳基邻二醇的用量，按摩尔比计算，即N-溴代丁二酰亚胺:β-环糊精:消旋体芳基邻二醇为1～2.5：1：1；
所述消旋体芳基邻二醇为消旋体苯乙二醇、消旋体间氯苯乙二醇、消旋体邻氯苯乙二醇、消旋体对溴苯乙二醇或消旋体对氯苯乙二醇；
上述β-环糊精的加入是为了使其与消旋体芳基邻二醇充分的包结后，便于氧化剂N-溴代丁二酰亚胺更好的发挥氧化作用；
(2)、毕赤酵母菌Pichia sp.SIT2014的培养
所用的种子培养基，按每升计算，含葡萄糖15.0g，胰蛋白胨5.0g，酵母粉5.0g，KH2PO40.5g,K2HPO40.5g，MgSO4·7H2O 0.5g，余量为水。
所用发酵培养基，按每升计算，含葡萄糖15.0g，胰蛋白胨5.0g，酵母粉5.0g，KH2PO40.5g,K2HPO40.5g，MgSO4·7H2O 0.5g，余量为水。
取4℃冰箱保存的毕赤酵母Pichia sp.SIT2014斜面菌种，挑取一环菌种接入到装有15ml种子培养基的100ml摇瓶中，在摇床上控制温度为30℃、转速为180rpm进行种子培养18h，得到种子液；
然后按种子液：发酵培养基的体积比为5：100的比例，将上述所得的种子液接种到发酵培养基中，然后在摇床上控制温度为30℃、转速为180rpm进行发酵培养24h，得到的发酵液控制转速为10000r/min进行离心10min，收获的细胞即为毕赤酵母Pichia sp.SIT2014细胞；
所述的毕赤酵母菌Pichia sp.SIT2014,其保藏编号为CGMCCNO.9300；
(3)、将步骤(2)得到的毕赤酵母菌Pichia sp.SIT2014细胞置于步骤(1)中pH为中性的反应液中，控制温度为30℃,180rpm的恒温摇床下进行不对称还原反应6-48h,所得的反应液控制转速为12000r/min进行离心分离5min，得到的上清液用等体积的乙酸乙酯萃取三次后，萃取液用无水硫酸钠干燥，然后用旋转蒸发仪蒸干，即得手性芳基邻二醇；
上述进行不对称还原反应所用的毕赤酵母菌Pichia sp.SIT2014和pH为7.0的反应液的量，按毕赤酵母菌Pichia sp.SIT2014细胞的干重：pH为中性的反应液的量为1g:100ml的比例计算。
本发明的有效成果
本发明的一种将消旋的芳基邻二醇转化为手性芳基邻二醇的方法，即通过化学与酶法的偶联，即首先利用一种化学氧化剂在温和的条件下化学选择性的氧化消旋醇为相对应的2-羟基芳基酮，其次加入的碱性物质形成一种生物相容性非常好的反应体系使得生物催化剂毕赤酵母菌Pichia sp.SIT2014细胞能更好的发现它的催化性能：之后在此反应混合液中直接加入生物催化剂毕赤酵母菌Pichia sp.SIT2014细胞催化羰基的不对称还原为手性醇，从而实现了“两步一锅”法将消旋的芳基邻二醇转化为手性芳基邻二醇，该方法可以很好的减少有机溶剂的用量，对环境绿色环保，非常方便的实现“一锅煮”的化学-酶法偶联反应。
进一步，本发明的一种将消旋的芳基邻二醇转化为手性芳基邻二醇的方法，可将消旋体芳基邻二醇转变为高光学纯度(>98％)的手性芳基邻二醇，且反应条件温和、生物催化剂毕赤酵母菌Pichia sp.SIT2014易于制备、环保污染小，具有潜在的应用前景。
具体实施方式
下面通过具体的实施例对本发明进一步阐述，但并不限制本发明。
本发明所用的试剂分别是分析纯或者HPLC纯的试剂。
消旋体芳基邻二醇以及对应的羟基苯乙酮含量检测，采用岛津气相色谱仪GC-2010PLUS，出自于岛津仪器公司，采用RXi-5Sil MS(30m×0.25mm×0.25um)毛细管柱子分析，分析条件如下；
进样器温度220℃，检测器温度250℃，柱温采用程序升温的方法：初始温度80℃，按10℃/min升高到120℃，保持2min后，按15℃/min升高到250℃，保持2min。手性芳基邻二醇光学纯度ee值的检测，采用岛津高效液相色谱仪LC-20A，出自于岛津仪器公司；
本发明各实施例中目标产物的(R,S)-苯乙二醇色谱分析条件如下：
流动相为正己烷：异丙醇＝95:5，流速0.8ml/min,检测波长为210nm,柱温为27℃,采用手性OD-H柱(4.6mm×250mm，购于大赛璐药业手性技术(上海)有限公司)。
光学纯度ee值计算方法如下:
ee(％)＝[S(构型)-R(构型)]/[S(构型)+R(构型)]×100％
S(构型)：表示S(构型)产物对映体的浓度；
R(构型)：表示R(构型)产物对映体的浓度。
本发明中所指的细胞羰基还原酶活力单位的定义为：在30℃，pH6.5的条件下，每分钟催化2-羟基苯乙酮还原生成1.0μmol的苯乙二醇所需的酶量即为1个活力单位，即1U。
实施例1
手性芳基邻二醇的化学氧化(以消旋体苯乙二醇为例)；
在15ml去离子水中加入1mmol的β-环糊精，搅拌加热到50-60℃使得β-环糊精完全溶解在去离子水中后，缓慢加入1mmol消旋体苯乙二醇，待溶解后冷却到室温，加入1mmolN-溴代丁二酰亚胺(以下简称NBS)，控制温度为60℃反应12h，即得到含有2-羟基苯乙酮的反应液，经气相色谱检测消旋体苯乙二醇转化率为52％。
实施例2
手性芳基邻二醇的化学氧化(以消旋体苯乙二醇为例)；
在15ml去离子水中加入1mmol的β-环糊精，搅拌加热到50-60℃使得β-环糊精完全溶解在去离子水中后，缓慢加入1mmol消旋体苯乙二醇，待溶解后冷却到室温，加入2.3mmolNBS，控制温度为60℃反应4h，即得到含有2-羟基苯乙酮的反应液，经气相色谱检测消旋体苯乙二醇转化率65％。
实施例3
手性芳基邻二醇的化学氧化(以消旋体苯乙二醇为例)；
在15ml去离子水中加入1mmol的β-环糊精，搅拌加热到50-60℃使得β-环糊精完全溶解在去离子水中后，缓慢加入1mmol消旋体苯乙二醇，待溶解后冷却到室温，加入2.3mmolNBS，控制温度为60℃反应8h，即得到含有2-羟基苯乙酮的反应液，经气相色谱检测消旋体苯乙二醇转化率85％。
实施例4
手性芳基邻二醇的化学氧化(以消旋体苯乙二醇为例)；
在15ml去离子水中加入1mmol的β-环糊精，搅拌加热到50-60℃使得β-环糊精完全溶解在去离子水中后，缓慢加入1mmol消旋体苯乙二醇，待溶解后冷却到室温，加入2.3mmolNBS，控制温度为60℃反应12h，即得到含有2-羟基苯乙酮的反应液，经气相色谱检测消旋体苯乙二醇转化率大于99％。
实施例5
手性芳基邻二醇的化学氧化(以消旋体苯乙二醇为例)；
在15ml去离子水中加入1mmol的β-环糊精，搅拌加热到50-60℃使得β-环糊精完全溶解在去离子水中后，缓慢加入1mmol消旋体苯乙二醇，待溶解后冷却到室温，加入2.5mmolNBS，控制温度为60℃反应12h，即得到含有2-羟基苯乙酮的反应液，经气相色谱检测消旋体苯乙二醇转化率大于99％。
实施例6
毕赤酵母Pichia sp.SIT2014(CGMCC NO.9300)的发酵培养，所用的种子培养基和发酵培养基，按每升计算，含葡萄糖15.0g，胰蛋白胨5.0g，酵母粉5.0g，KH2PO40.5g,K2HPO40.5g，MgSO4·7H2O 0.5g，余量为水，pH为7.0。
取4℃冰箱保存的毕赤酵母Pichia sp.SIT2014斜面菌种，挑取一环菌种接入到装有15ml种子培养基的100ml摇瓶中，在摇床上控制温度为30℃、转速为180rpm进行种子培养18h，得到种子液；
然后按种子液：发酵培养基的体积比为5％的比例，将种子液接种到发酵培养基中，在摇床上控制温度为30℃、转速为180rpm进行发酵培养24h，得到的发酵液控制转速为10000r/min进行离心10min，收获的细胞即为毕赤酵母Pichia sp.SIT2014细胞。
上述所得的发酵液经检测，其产羰基还原酶活力约为20～30U/L，发酵液中细胞浓度按干重计算约4～5g/L，即单位毕赤酵母Pichia sp.SIT2014菌体细胞产羰基还原酶活力约为4-7.5U/g干细胞。
实施例7
化学氧化和生物催化还原偶联制备(S)-苯乙二醇。
按实施例4所述的手性芳基邻二醇的化学氧化方法，利用2.3mmolNBS将1mmol消旋体苯乙二醇控制温度为60℃氧化反应12h后，在所得的含有2-羟基苯乙酮的反应液中加入固体磷酸氢二钾调节反应液pH为7.0后，加入pH为7.0的磷酸盐缓冲液(0.1mol/L)稀释至30ml,再加入1.5g葡萄糖，之后加入0.3g干重的按照实施例6的方法培养的毕赤酵母Pichiasp.SIT2014菌体细胞，所得的混合物在30℃，180rpm的恒温摇床上进行不对称还原反应，反应过程中定时取样以乙酸乙酯萃取，气相色谱分析产率，手性液相色谱(CHIRALCEL OD-H柱4.6mm*250mml)分析产物的对映体过量值；
上述不对称还原反应24h后，所得的反应液控制转速为12000rpm下离心5min，所得上清液用等体积乙酸乙酯萃取三遍后，合并乙酸乙酯相，加入无水硫酸钠干燥过夜，减压蒸馏蒸干溶剂即得产物。所得的产物经分析为(S)-苯乙二醇，产率>99％(分离收率为91％)，光学纯度ee值为99.1％。
实施例8
化学氧化和生物催化还原偶联制备(S)-对氯苯乙二醇；
按实施例4所述的手性芳基邻二醇的化学氧化方法，利用2.3mmolNBS将1mmol消旋体对氯苯乙二醇控制温度为60℃氧化反应12h后，在所得的反应液中加入磷酸氢二钾固体调节反应液pH为7.0后，加入pH为7.0的磷酸盐缓冲液(0.1mol/L)稀释至30ml,再加入1.5克葡萄糖，之后加入0.3g干重的按照实施例6的方法培养的毕赤酵母Pichia sp.SIT2014菌体细胞，所得的混合物在30℃，180rpm的恒温摇床上进行不对称还原反应，反应过程中定时取样以乙酸乙酯萃取，气相色谱分析产率，手性液相色谱(CHIRALCEL OD-H柱4.6mm*250mml)分析产物的对映体过量值；
上述不对称还原反应24h后，所得的反应液控制转速为12000rpm下离心5min，所得上清液用等体积乙酸乙酯萃取三遍后，合并乙酸乙酯相，加入无水硫酸钠干燥过夜，减压蒸馏蒸干溶剂即得产物，所得的产物经分析为(S)-对氯苯乙二醇，产率>99％(分离收率为92％)，光学纯度ee值为99.1％。
实施例9
化学氧化和生物催化还原偶联制备(S)-对溴苯乙二醇；
按实施例4所述的手性芳基邻二醇的化学氧化方法，利用2.3mmolNBS将1mmol消旋体对溴苯乙二醇控制温度为60℃氧化反应12h后，在所得的反应液中加入磷酸氢二钾固体调节反应液pH为7.0后，加入pH为7.0的磷酸盐缓冲液(0.1mol/L)稀释至30ml,再加入1.5克葡萄糖，之后加入0.3g干重的按照实施例6的方法培养的毕赤酵母Pichia sp.SIT2014菌体细胞，所得的混合物在30℃，180rpm的恒温摇床上进行不对称还原反应，反应过程中定时取样以乙酸乙酯萃取，气相色谱分析产率，手性液相色谱(CHIRALCEL OD-H柱4.6mm*250mml)分析产物的对映体过量值；
上述不对称还原反应24h后，所得的反应液控制转速为12000rpm下离心5min，所得上清液用等体积乙酸乙酯萃取三遍后，合并乙酸乙酯相，加入无水硫酸钠干燥过夜，减压蒸馏蒸干溶剂即得产物。所得的产物经分析为(S)-对溴苯乙二醇，产率>99％(分离收率为88％)，光学纯度ee值为99.3％。
实施例10
化学氧化和生物催化还原偶联制备(S)-间氯苯乙二醇；
按实施例4所述的手性芳基邻二醇的化学氧化方法，利用2.3mmolNBS将1mmol消旋体间氯苯乙二醇控制温度为60℃氧化反应12h后，在所得的反应液中加入磷酸氢二钾固体调节反应液pH为7.0后，加入pH为7.0的磷酸盐缓冲液(0.1mol/L)稀释至30ml,再加入1.5克葡萄糖，之后加入0.3g干重的按照实施例6的方法培养的毕赤酵母Pichia sp.SIT2014菌体细胞，所得的混合物在30℃，180rpm的恒温摇床上进行不对称还原反应，不对称还原反应过程中定时取样以乙酸乙酯萃取，气相色谱分析产率，手性液相色谱(CHIRALCEL OD-H柱4.6mm*250mml)分析产物的对映体过量值；
上述不对称还原反应24h后，所得的反应液控制转速为12000rpm下离心5min，所得上清液用等体积乙酸乙酯萃取三遍后，合并乙酸乙酯相，加入无水硫酸钠干燥过夜，减压蒸馏蒸干溶剂即得产物。所得的产物经分析为(S)-间氯苯乙二醇，产率>99％(分离收率为92％)，光学纯度ee值为98.9％。
实施例11
化学氧化和生物催化还原偶联制备(S)-邻氯苯乙二醇。
按实施例4所述的手性芳基邻二醇的化学氧化方法，利用2.3mmolNBS将1mmol消旋体邻氯苯乙二醇控制温度为60℃氧化反应12h后，在所得的反应液中加入磷酸氢二钾固体调节反应液pH为7.0后，加入pH为6.5的磷酸盐缓冲液(0.1mol/L)稀释至30ml,再加入1.5克葡萄糖，之后加入0.3g干重的按照实施例6的方法培养的毕赤酵母Pichia sp.SIT2014菌体细胞，所得的混合物在30℃，180rpm的恒温摇床上进行不对称还原反应，不对称还原反应过程中定时取样以乙酸乙酯萃取，气相色谱分析产率，手性液相色谱(CHIRALCEL OD-H柱4.6mm*250mml)分析产物的对映体过量值；
上述不对称还原反应24h后，所得的反应液控制转速为12000rpm下离心5min，所得上清液用等体积乙酸乙酯萃取三遍后，合并乙酸乙酯相，加入无水硫酸钠干燥过夜，减压蒸馏蒸干溶剂后即得产物。所得的产物经分析为(S)-邻氯苯乙二醇，产率>99％(分离收率为87％)，光学纯度ee值为99.2％。
综上所述，本发明的一种将消旋的芳基邻二醇转化为手性芳基邻二醇的方法，通过化学与酶法的偶联，即首先利用一种化学氧化剂在温和的条件下化学选择性的氧化消旋醇为相对应的2-羟基酮，其次加入的碱性物质形成一种生物相容性非常好的反应体系使得生物催化剂毕赤酵母菌Pichia sp.SIT2014细胞能更好的发现它的催化性能：之后在此反应混合液中直接加入生物催化剂毕赤酵母菌Pichia sp.SIT2014细胞催化羰基的不对称还原为手性醇，从而实现了“两步一锅”法将消旋的芳基邻二醇转化为手性芳基邻二醇，该方法可以很好的减少有机溶剂的用量，对环境绿色环保，非常方便的实现“一锅煮”的化学-酶法偶联反应。
进一步，本发明的一种将消旋的芳基邻二醇转化为手性芳基邻二醇的方法，可将消旋体芳基邻二醇转变为高光学纯度(>98％)的手性芳基邻二醇，且反应条件温和、生物催化剂毕赤酵母菌Pichia sp.SIT2014易于制备、环保污染小，具有潜在的应用前景。
以上所述内容仅为本发明构思下的基本说明，而依据本发明的技术方案所作的任何等效变换，均应属于本发明的保护范围。
Claims (3)
1.一种将消旋体芳基邻二醇转化为手性芳基邻二醇的方法，其特征在于具体包括下列步骤：
（1）、利用氧化剂N-溴代丁二酰亚胺在添加β-环糊精的水相体系中将消旋体芳基邻二醇氧化为对应的2-羟基芳基酮，氧化反应过程中控制温度为60℃，时间为4-12h，氧化反应结束后将所得反应液加入碱性物质调pH为7.0；
上述氧化剂N-溴代丁二酰亚胺、β-环糊精和消旋体芳基邻二醇的用量，按摩尔比计算，N-溴代丁二酰亚胺:β-环糊精:芳基邻二醇为1～2.5：1：1；
所述消旋体芳基邻二醇为消旋体苯乙二醇、消旋体间氯苯乙二醇、消旋体邻氯苯乙二醇、消旋体对溴苯乙二醇或消旋体对氯苯乙二醇；
（2）、毕赤酵母菌Pichia sp. SIT2014的培养，将收获的毕赤酵母菌Pichia sp.SIT2014细胞置于步骤（1）中pH为中性的反应液中，控制温度为30℃,180rpm的恒温摇床下进行不对称还原反应6-48h,所得的反应液控制转速为12000r/min进行离心分离5min，得到的上清液用等体积的乙酸乙酯萃取三次后，萃取液用无水硫酸钠干燥，然后用旋转蒸发仪蒸干，即得手性芳基邻二醇；
所述的毕赤酵母菌Pichiasp.SIT2014,其保藏编号为CGMCC NO.9300；
上述进行不对称还原反应所用的毕赤酵母菌Pichiasp.SIT2014和pH为中性的反应液的量，按毕赤酵母菌Pichiasp.SIT2014细胞的干重：pH为中性的反应液的量为1g:100ml的比例计算。
2.如权利要求1所述的一种将消旋体芳基邻二醇转化为手性芳基邻二醇的方法，其特征在于步骤（1）中碱性物质为磷酸氢二钾或氢氧化钾。
3.如权利要求1所述的一种将消旋体芳基邻二醇转化为手性芳基邻二醇的方法，其特征在于步骤（2）中所述的毕赤酵母菌Pichia sp. SIT2014的培养：
即首先取4℃冰箱保存的毕赤酵母Pichiasp.SIT2014 斜面菌种，挑取一环菌种接入到装有15ml种子培养基的100ml摇瓶中，在摇床上控制温度为30℃、转速为180rpm进行种子培养18h，得到种子液；
然后按种子液：发酵培养基的体积比为5：100的比例，将上述所得的种子液接种到发酵培养基中，然后在摇床上控制温度为30℃、转速为180rpm进行发酵培养24h，得到的发酵液控制转速为10000r/min进行离心10min，收获的细胞即为毕赤酵母Pichia sp.SIT2014细胞；
所述的毕赤酵母菌Pichiasp.SIT2014,其保藏编号为CGMCC NO.9300；
所述的种子培养基和发酵培养基组分相同，按每升计算，含葡萄糖15.0g，胰蛋白胨5.0g，酵母粉5.0g，KH2PO4 0.5g,K2HPO4 0.5g，MgSO4·7H2O 0.5g，余量为水。
Priority Applications (1)
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