CN104546611A - 五味子总素在制备抗光老化或祛痘消炎化妆品或外用药中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种五味子总素在制备抗光老化或祛痘消炎化妆品或外用药中的用途。所述的五味子总素中，五味子木脂素的质量含量不小于5%。所述的五味子总素在化妆品或外用药中的用量按质量百分比计为0.01～10%。优点在于本发明通过研究发现五味子总素具有较好的抗光老化效果，且针对痤疮丙酸杆菌引起的炎症具有较好的消炎作用，可以制备具有抗光老化效果或具有祛痘消炎效果的化妆品或外用药膏。

Description

五味子总素在制备抗光老化或祛痘消炎化妆品或外用药中的用途

技术领域

本发明涉及中药提取物技术领域，具体涉及一种五味子提取物的新用途。

背景技术

随着大气臭氧层不断遭到破坏，太阳紫外线的照射也相应不断增强，对人们的生活工作影响越来越大，紫外线长期照射直接导致皮肤光老化。皮肤光老化不仅有损于人的美容，而且与皮肤癌的发生也有着病因学的联系。因此，预防和延缓皮肤光老化已成为医学科学，特别是美容医学研究的热点之一。紫外线的照射引发皮肤光老化的机制研究主要集中在三个方面：引起胞外基质中弹性相关物质降解；引起皮肤氧化应激；引发皮肤细胞衰老和凋亡。随着科学发展，目前已有很多新型技术可用于治疗皮肤老化，然而，天然植物产品因其高效低毒等特点仍然具有很大的吸引力和广阔的市场。

痤疮，俗称青春痘、粉刺、暗疮，中医古代称其为面疮，酒刺。痤疮是皮肤科常见病，是一种发生于毛囊皮脂腺的慢性皮肤病，多发于头面部，颈部、前胸后背等皮脂腺丰富的部位。在正常的代谢过程中，毛囊皮脂腺导管上皮细胞脱屑，皮脂腺分泌皮脂，皮脂腺携带脱屑从毛囊口排除，其中毛囊可以寄生大量的皮肤正常菌群，例如痤疮丙酸杆菌等。不正常的因素导致的性激素紊乱和皮脂腺痤疮丙酸杆菌的大量繁殖、皮脂腺导管的异常角化、皮脂的大量分泌、炎症反应导致了痤疮的产生。植物来源祛痘添加剂作为祛痘功效添加剂的一种，具有天然、无害、安全、高效的特点，同样拥有广阔的市场开发价值。

五味子为木兰科植物北五味子或华中五味子的成熟果实。根据文献记载，五味子有兴奋中枢神经系统、镇咳祛痰、强心、降转氨酶、抗病毒等作用。中医认为，它味甘酸温，具有收敛固涩、益气生津、补肾宁心的功效。然而，尚未有对其在抗光老化及祛痘消炎方面的报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种五味子总素的新用途。

本发明为解决上述技术问题所采取的技术方案为五味子总素在制备抗光老化或祛痘消炎化妆品或外用药中的用途。

所述的五味子总素中，五味子木脂素的质量含量不小于5%。

所述的五味子木脂素，包括五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素中的一种或多种。五味子总素自五味子的干燥果实中提取。

所述的五味子总素在化妆品或外用药中的用量按质量百分比计为0.01～10%。

所述的五味子总素在化妆品或外用药中的用量按质量百分比计优选为0.1～5%。

所述的五味子总素在化妆品或外用药中的用量按质量百分比计进一步优选为0.5～3%。

所述化妆品或外用药的剂型为溶液、乳液、悬浮液、霜、凝胶、泡沫或喷雾。

五味子总素能显著提高紫外线导致的光老化细胞I型胶原蛋白分泌量，抑制基质金属蛋白酶的产生从而减少胶原蛋白分解，增加细胞内谷胱甘肽的含量，保护皮肤细胞，减少紫外线对其的伤害，可用于制备具有抗光老化效果的化妆品；另外，五味子总素具有较好的针对痤疮丙酸杆菌引起炎症的减轻作用，抑制相关炎症因子的释放，可用于制备具有祛痘消炎效果的化妆品或外用药膏，为改善皮肤状态提供一种新的添加剂。

本发明的有益效果在于：

1、本发明通过研究发现五味子总素具有较好的抗光老化效果，可以作为具有较好抗光老化作用的成分制备具有抗光老化效果的化妆品或外用药膏；

2、本发明通过研究发现五味子总素针对痤疮丙酸杆菌引起的炎症具有较好的消炎作用，可以作为具有较好祛痘效果的成分制备祛痘的化妆品或外用药膏。

具体实施方式

本发明将根据具体实例做进一步的描述，但其仅为例证性的目的而不起到限制性作用。

实施例1五味子总素抗光老化作用研究

药物：

五味子总素，购于哈尔滨奥霖药业有限公司，木脂素含量＞5%（HPLC）

基质金属蛋白酶-1、谷胱甘肽的酶联免疫吸附测定试剂盒，购自南京建成生物工程研究所

改良杜氏伊格尔培养基（DMEM培养基）、胎牛血清，购自gibco公司

细胞株：

真皮成纤维细胞，购自美国菌种保藏中心。

培养条件：5%二氧化碳，37℃培养箱中培养。所用培养基为改良杜氏伊格尔培养基（DMEM培养基），并加入10%胎牛血清，过滤除菌。

一、五味子总素对光损伤人真皮成纤维细胞I型胶原蛋白的影响：

取对数生长期细胞，以105个/mL的密度接种于24孔培养板，每孔1mL，于37℃，CO₂培养箱中培养。6 h后先加入五味子总素2.5 μg/mL（低剂量组）、5μg/mL（中剂量组）、10 μg/mL（高剂量组）为加药组，并使用紫外线照射造模，以不加药的阴性对照为紫外线照射造模组，以不加药不受紫外线照射的为空白对照组。置37℃，5% CO₂及饱和湿度的培养箱分别培养12 h。小心收集上清培养基，离心，按照试剂盒说明书，取10 μL细胞悬液进行实验。以空白孔调零，在终止后15分钟内，用450 nm波长测量各孔的吸光值。根据标准品的浓度及对应的吸光值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的吸光值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。最终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

计算五味子总素对I型胶原蛋白的促进率，结果如表1所示。

促进率=（加药组-紫外线造模组）/ 紫外线造模组×100%

结果表明，相比空白对照组，紫外线照射造模组的人真皮成纤维细胞I型胶原蛋白量明显降低，表明人真皮成纤维细胞经紫外线照射后受到光损伤。然而，在添加了五味子总素后，低、中、高剂量组均能提高光老化损伤真皮成纤维细胞的I型胶原蛋白的分泌量，并且显著降低基质金属蛋白酶的分泌，具有较好的抗光老化作用。

二、五味子对光损伤人真皮成纤维细胞基质金属蛋白酶-1的影响：

取对数生长期的真皮成纤维细胞，按照105 个/mL的密度接种于24孔培养板，每孔1 mL，于37℃，CO₂培养箱中培养。6 h后先加入五味子总素2.5 μg/mL（低剂量组）、5 μg/mL（中剂量组）、10 μg/mL（高剂量组）记作加药组，并使用紫外线照射造模，以不加药的阴性对照为紫外线照射造模组，以不加药不受紫外线照射的为空白对照组。置37℃，5% CO₂及饱和湿度的培养箱分别培养12 h。小心收集上清培养基，离心，按照试剂盒说明书，取10 μL细胞悬液进行实验。以空白孔调零，在终止后15分钟内，用450 nm波长测量各孔的吸光值。根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的吸光值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。最终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

计算五味子总素对基质金属蛋白酶-1的抑制率，结果如表2所示。

抑制率=（紫外线造模组-加药组）/ 紫外线造模组×100%

结果表明，相比空白对照组，紫外线照射造模组的人真皮成纤维细胞基质金属蛋白酶-1分泌量明显提高，表明人真皮成纤维细胞经紫外线照射后受到光损伤。然而，在添加了五味子总素后，低、中、高剂量组均能显著降低光老化损伤真皮成纤维细胞的基质金属蛋白酶-1分泌量，具有较好的抗光老化作用。

实施例2五味子总素祛痘效果研究

药物：

五味子总素，购于哈尔滨奥霖药业有限公司，木脂素含量>5%（HPLC）

RPMI-1640培养基，胎牛血清，购于gibco公司

碎肉培养基，脱水牛肉，购于青岛日水生物技术有限公司

白介素-8、肿瘤坏死因子-α的酶联免疫吸附测定试剂盒，购于上海威奥生物有限公司

细胞：

人急性单核细胞，购于上海中科院细胞库

培养条件：5%二氧化碳，37℃培养箱中培养。所用培养基为RPMI-1640培养基，并加入10%胎牛血清，过滤除菌

痤疮丙酸杆菌，购于上海复祥生物有限公司

培养条件：培养于含1/3庖肉的碎肉培养基中，恒温37℃厌氧培养。

取指数生长期的人急性单核细胞，以1×106/ml的密度接种于96孔培养板中，加不同浓度的五味子总素6.25 μg/mL（低剂量组）、25 μg/mL（中剂量组）、50μg/mL（高剂量组），孵育4 h。取厌氧培养72 h的痤疮丙酸杆菌，离心，用磷酸盐缓冲溶液清洗3-4次，制成活菌悬液，按细菌：细胞为100:1的比例加入96孔板中，以加五味子总素孵育加菌为加药组，以不加药孵育加菌为阴性对照组，以不加药不加菌为空白对照组。置于37℃恒温，5 %CO₂及饱和湿度的培养箱培养24 h。采用酶联免疫吸附法测细胞上清中白介素-8和肿瘤坏死因子-α的含量变化，计算五味子总素对白介素-8和肿瘤坏死因子-α的抑制率，结果如表3和表4所示。

抑制率=（阴性对照组-加药组）/ 阴性对照组× 100%

结果表明，人急性单核细胞在自然状态下能分泌少量的白介素-8和肿瘤坏死因子，且活的痤疮丙酸杆菌可以上调细胞炎症因子的分泌水平。然而，五味子总素对痤疮丙酸杆菌上调的炎症因子分泌具有剂量依赖性的抑制作用，具有较好的消炎祛痘效果。

实施例3 五味子总素安全性研究

药物：

五味子总素，购于哈尔滨奥霖药业有限公司，木脂素含量>5%（HPLC）

RPMI-1640培养基，DMEM培养基，胎牛血清，购于gibco公司

细胞：

人急性单核细胞，购于上海中科院细胞库

人真皮成纤维细胞，购于美国菌种保藏中心

培养条件：5%二氧化碳，37℃培养箱中培养。所用培养基为RPMI-1640或DMEM培养基，并加入10%胎牛血清，过滤除菌。

采用噻唑兰（MTT）法检测供试物对人单核细胞及人真皮成纤维细胞增殖的影响，从而间接检测五味子总素对皮肤是否安全。

取指数生长期的细胞，用培养液调节细胞密度约为2×10⁴ /ml，接种于96孔培养板中，加不同浓度五味子总素，终浓度分别为6.25 μg/ml，12.5 μg/ml，25 μg/ml，50 μg/ml，100 μg/ml，孵育48 h。测定细胞增殖率时，每孔加入20 μl的MTT（5 mg/mL），保证每孔内加入终浓度为0.5 mg/mL，置CO₂培养箱中继续培养4小时后，3000 rpm/min离心，小心吸弃孔内培养上清液，每孔加入100 μL二甲基亚砜（DMSO），振荡10 min，使结晶物完全溶解，放置于酶标仪，选取570 nm为测量波长，630 nm为参照波长测光吸收值。测试结果如表5所示。

细胞存活率=检测组的OD平均值/对照组的OD平均值×100%

结果表明，人真皮成纤维细胞和人单核细胞在五味子总素剂量为0~100μg/mL时，存活率均大于95%。故在上述抗光老化及祛痘消炎实例中的所用剂量，均在安全范围内。

从以上实施例可以看出，五味子总素具有良好的抗光老化作用，可以预防细胞在紫外线照射下的光损伤，可用于制备抗光老化的化妆品；五味子总素对痤疮丙酸杆菌引起的炎症反应，具有显著的缓解作用，可用于制备祛痘的化妆品或外用药膏，为改善皮肤状态提供新的化妆品添加剂。

应用例1 五味子总素在洁面乳中的应用

洁面乳的配方如表6所示。

其中，洁面乳1为添加五味子总素的洁面乳应用例，洁面乳2为不添加五味子总素的洁面乳比较例。

制备工艺：

第一步，将A相各成分混合并加热至80℃，将B相各成分混合并加热至 80℃；

第二步，将B相加入到A相中，搅拌均匀，均质8min，保温55min，使皂化完全；

第三步，在80℃，将C相加入由上步得到的A及B的混合相；

第四步，降温到50℃以下加入D相；

第五步，在42~45℃皂化时，保温20~25min，加入E相香精，搅拌10~15min，出料。

应用例2 五味子总素在洁面膏中的应用

洁面膏的配方如表7所示。

其中，洁面膏1为添加五味子总素的洁面膏应用例，洁面膏2为不添加五味子总素的洁面膏比较例。

制备工艺：

第一步，将A相各成分混合并加热至85℃，将B相各成分混合并加热至 85℃；

第二步，将B相加入到A相中，搅拌均匀，均质15 min，保温60 min，使皂化完全；

第三步，在85 ℃，将C相加入由上步得到的A及B的混合相；

第四步，在42~45℃皂化时，保温20~25 min，加入E相香精，搅拌10~15min，出料。

一、应用例1及应用例2的稳定性测试：

1、测试样品：将洁面乳1和洁面乳2，洁面膏1和洁面膏2分别装在40个100g 的密闭塑料瓶中；

2、测试时间：3个月；

3、测试条件：在恒温培养箱、冰箱和室温下放置，分别在15天，30天，60天和90天观察样品是否变色、变味，以及是否油水分离、分层等；

4、测试结果：“—”表示膏体正常，“+”“表示膏体有发粗、油水分离等异常2现象。

稳定性测试结果如表8所示。

稳定性测试表明，应用例1中的洁面乳1和洁面乳2，应用例2中的洁面膏1和洁面膏2都通过了3个月的稳定性考验，在不同的温度下表现良好，没有出现结块、发粗、油水分离等现象，达到了市售产品的标准。

二、应用例1及应用例2的控油祛痘洁短期功效测试：

1、测试目的：以25~40岁混合性或油性肌肤的女性为对象，通过皮肤油脂的方式，评价基础系列控油祛痘洁面膏的控油效果。

2、测试样品：洁面乳1和洁面乳2、洁面膏1和洁面膏2，其中，洁面乳2和洁面膏2分别作为空白对比较，以便考察添加五味子总素的功效。

3、测试仪器：MPA580皮肤多功能测试仪，Sebumeter油脂测试探头，德国CK公司）。

4、受试者：25名年龄25~40岁的中国女性（常住上海，平均年龄32.4±4.5岁），混合性或油性肌肤，非哺乳期或妊娠期，无皮肤病及皮肤过敏史，测试部位无明显胎记、色素痣或其他影响测试的特征，自愿参与并能按要求完成测试。

5、测试环境：温度：22~26℃；相对湿度：40~66%。

6、测试步骤：

（1）受试部位在测试前一天晚上清洗后不能使用任何化妆品，测试当天早上不得再次清洗或擦拭。在整个测试过程中要求受试者静坐在符合要求的房间内，每次测试前1小时不能喝水和饮料，不能进食。

（2）测试人员向受试者讲解测试流程，受试者签署知情协议书。

（3）测试人员用定位模板在志愿者两边额头分别对称标记3处（每个标记测试一个指标）边长1.5cm的正方形标记，每个标记之间间隔1cm。测试两边额头初始皮肤油脂。

（4）受试者左右半边脸各使用一种测试样品清洗（尤其是额头部位），确保左右脸使用产品在统计学上达到平衡，样品使用量按0.40g±0.01g/半脸称取。

（5）清洗后30min、1h、2h和4h分别测试额头两侧标记部位的油脂。

应用例1中的洁面乳1和洁面乳2的油脂测试结果如表9所示。

应用例2中的洁面膏1和洁面膏2的油脂测试结果如表10所示。

从表9和表10可见，洁面乳1和洁面乳2相比、洁面膏1和洁面膏2相比，使用前（洗前）额头油脂含量无显著差异（P＞0.05）。

分别用洁面乳1或洁面乳2、洁面膏1或洁面膏2清洗，在洗后2小时和4小时，洁面乳1与洁面乳2相比、洁面膏1与洁面膏2相比，皮肤油脂含量均显著下降（P＜0.05）。这些结果显示，在产品中添加了五味子总素之后，能够明显降低皮脂的分泌，这些测试结果与细胞试验的结果相吻合，进一步论证了五味子总素对痤疮丙酸杆菌引起的炎症反应，具有显著的缓解作用。

需要说明的是，以上较佳实施例仅供说明本发明之用，而非对本发明的限制，有关技术领域的技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，所作出各种变换或变型，均属于本发明的范畴。

Claims (7)

1.五味子总素在制备抗光老化或祛痘消炎化妆品或外用药中的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的五味子总素中，五味子木脂素的质量含量不小于5%。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述的五味子木脂素，包括五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素中的一种或多种。

4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的五味子总素在化妆品或外用药中的用量按质量百分比计为0.01～10%。

5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于：所述的五味子总素在化妆品或外用药中的用量按质量百分比计为0.1～5%。

6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于：所述的五味子总素在化妆品或外用药中的用量按质量百分比计为0.5～3%。

7. 根据权利要求4至6之一所述的用途，其特征在于：所述化妆品或外用药的剂型为溶液、乳液、悬浮液、霜、凝胶、泡沫或喷雾。