CN104521592A - 一种水稻黑条矮缩病抗性的规模化定量强化接种鉴定方法 - Google Patents
一种水稻黑条矮缩病抗性的规模化定量强化接种鉴定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104521592A CN104521592A CN201510000817.3A CN201510000817A CN104521592A CN 104521592 A CN104521592 A CN 104521592A CN 201510000817 A CN201510000817 A CN 201510000817A CN 104521592 A CN104521592 A CN 104521592A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- small brown
- brown rice
- rice
- paddy
- rice planthopper
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 title claims abstract description 43
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 40
- 208000035240 Disease Resistance Diseases 0.000 title abstract description 10
- 241001498622 Cixius wagneri Species 0.000 claims abstract description 135
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 48
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 48
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 claims abstract description 38
- 239000002574 poison Substances 0.000 claims abstract description 33
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 claims abstract description 33
- 235000021329 brown rice Nutrition 0.000 claims description 130
- 241000209094 Oryza Species 0.000 claims description 128
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 claims description 128
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 claims description 128
- 241000819999 Nymphes Species 0.000 claims description 90
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 48
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 36
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 33
- 244000037666 field crops Species 0.000 claims description 20
- 238000011835 investigation Methods 0.000 claims description 7
- 238000009395 breeding Methods 0.000 claims description 6
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 6
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 claims description 6
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 5
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 claims description 4
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 claims description 4
- 241000209140 Triticum Species 0.000 claims description 4
- 238000004088 simulation Methods 0.000 claims description 4
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 claims description 3
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 claims description 3
- 238000007654 immersion Methods 0.000 claims description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 2
- 241001466042 Fulgoromorpha Species 0.000 abstract description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 abstract 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 abstract 1
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 12
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 7
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 7
- 241000702634 Rice black streaked dwarf virus Species 0.000 description 6
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 6
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 5
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 230000002319 phototactic effect Effects 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 2
- 238000012271 agricultural production Methods 0.000 description 2
- 238000009412 basement excavation Methods 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 240000001592 Amaranthus caudatus Species 0.000 description 1
- 235000009328 Amaranthus caudatus Nutrition 0.000 description 1
- 208000034656 Contusions Diseases 0.000 description 1
- 244000058871 Echinochloa crus-galli Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 244000292693 Poa annua Species 0.000 description 1
- 244000062793 Sorghum vulgare Species 0.000 description 1
- 244000046109 Sorghum vulgare var. nervosum Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 235000020535 bottled fortified water Nutrition 0.000 description 1
- 230000009519 contusion Effects 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 239000002360 explosive Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- -1 gain Species 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 235000019713 millet Nutrition 0.000 description 1
- 238000009400 out breeding Methods 0.000 description 1
- 230000032696 parturition Effects 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 1
- 230000029264 phototaxis Effects 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000000384 rearing effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000008261 resistance mechanism Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
- A01G7/00—Botany in general
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/033—Rearing or breeding invertebrates; New breeds of invertebrates
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Botany (AREA)
- Ecology (AREA)
- Forests & Forestry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Pretreatment Of Seeds And Plants (AREA)
Abstract
本发明公开了一种水稻黑条矮缩病抗性的规模化定量强化接种鉴定方法，该方法步骤如下：（a）、获取大田灰飞虱并分离纯化出大量整齐一致的5龄灰飞虱若虫；（b）、繁育并分离筛选出大量整齐一致2龄灰飞虱若虫；（c）、对获取的2龄灰飞虱若虫饲毒；（d）、计量灰飞虱若虫；（e）、将待测水稻品种与带毒2龄灰飞虱若虫定量共育传毒；（f）、大田显症统计：将待测水稻移栽至大田隔虫网室，分蘖盛期开始调查统计黑条矮缩病穴发病率，即可准确鉴定出待测水稻品种的抗病能力。本发明的强化接种鉴定方法克服了排趋性的干扰和灰飞虱规模量的难题，实现了定量而强化的水稻黑条矮缩病接种鉴定，能够准确地评价水稻品种对水稻黑条矮缩病的抗性水平。
Description
技术领域
本发明涉及一种水稻黑条矮缩病抗性的规模化定量强化接种鉴定方法，属于植物病害抗性鉴定技术。
背景技术
水稻黑条矮缩病是一种由水稻黑条矮缩病毒（Rice black-streaked dwarf virus, RBSDV）引起的病毒病，主要以灰飞虱为传播介体进行传播。宿主有杂交水稻、常规水稻、大麦、小麦、玉米、小米、高粱、看麦娘、早熟禾、罔草、稗草、马塘等28种。近年来，随着耕作制度和栽培方式的变化、农田生态多样、冬季气候变暖和感病品种的大面积推广，水稻黑条矮缩病在江苏、浙江、湖南等省大规模发生，迅速成为长江中下游稻区最主要的水稻病害之一。据统计，2007年水稻黑条矮缩病仅在江苏省局部地区发生，危害面积30.8万亩，至2008年已迅速在淮北、沿海和里下河地区蔓延开，全省发病面积上升至400万亩，其中仅病株率80％以上的绝收田块面积就达3万亩，按平均亩产500公斤初步估算约损失稻谷1.5亿公斤，造成了粮食减产、农民减收，给农业生产带来了巨大的损失， 同时也严重挫伤了农民的种粮积极性，也对全国的粮食安全构成极大的威胁。
目前，对水稻黑条矮缩病的防治主要是使用农药防治传毒介体灰飞虱，但由于介体昆虫种群数量大导致防治效果不佳，且存在环境污染。培育抗病品种是防治各类病害最为经济、有效的手段。筛选、发掘和创新抗病种质是开展抗病育种的前提和基础，而抗性基因定位和克隆，则为利用标记辅助选择等分子育种手段、加快和高效培育抗病品种提供了全新和有利工具。但迄今水稻黑条矮缩病抗性QTL检测和遗传效应分析还处于起步阶段，在生产上也没有发现对RBSDV免疫的品种，所以对水稻黑条矮缩病抗性种质进行大规模筛选和展开水稻黑条矮缩病抗性遗传特性研究显得尤为迫切。
面对具有突发性和爆发性特点的病毒病害，筛选抗病品种应用于生产是最为直接有效的方法，目前水稻育种上筛选抗病品种、抗病基因定位鉴定抗性家系均采用田间自然发病鉴定，即将各鉴定品种或品系以小区形式种植于大田，每个小区几十株左右，大田常规栽培管理，传毒介体灰飞虱自然传毒，待水稻显现病症后调查各鉴定品种（家系）小区的穴发病率，以此为标准鉴别水稻品种（家系）抗感能力的差异。然而，由于植物对天敌的抗性分为耐害性、抗生性和排趋性三种类别，各种抗性类别具由不同的抗性机理，水稻也不其外。不同水稻品种（家系）对灰飞虱排趋性的差异使得不同水稻品种（家系）的某些形态和生理等特性，表现出对灰飞虱的取食偏向的差异。而水稻黑条矮缩病的传毒介体正为灰飞虱，因此，通过自然鉴定方法鉴定得到的抗病水稻，可能实际上是抗虫（排趋性强）水稻而并非抗病水稻。然而，假若以该抗虫不抗病水稻育成品种进行病害区规模种植后，规模种植导致传毒介体被迫选择而使得水稻对灰飞虱排趋产生的假抗病表现消失，将可能给农业生产带来较大的损失。
为排除排趋性对抗病鉴定的影响，定量水稻进行人工定量接种带毒介体成为一种必然。目前，江苏省农科院周彤等利用人工筛选鉴定的除毒（RSV病毒）灰飞虱进行人工饲养，在室内条件下以定量带毒灰飞虱在水稻特定生育期接种待测水稻一定时间，培养待测水稻至发病显症后，根据病害发生的严重度评价待测水稻对水稻黑条矮缩病的抗性水平，该方法可以克服自然鉴定法中排趋性的干扰，实现了科学准确的水稻抗病的评价。然而，进行水稻品种资源的抗性鉴定需要大量的传毒介体灰飞虱，人工筛选无毒灰飞虱人工饲养规模量小，饲养成本很高，难以满足品种抗性鉴定的规模量的需求，限制了该方法的推广应用。
水稻黑条矮缩病和水稻条纹叶枯病均是以灰飞虱为传毒介体，所以该病也均在灰飞虱爆发的重灾区广泛传播。但是，大量的田间调查统计发现，水稻条纹叶枯病和黑条矮缩病的发病并无相关性，表明这病毒在传毒介体内并无相互作用，在水稻的病情显现上也无相互干扰，呈现相互独立的遗传规律。
灰飞虱重灾区大田生态系统内每年的灰飞虱数量均非常巨大，人工获取也比较容易，而实验室饲养灰飞虱用于品种资源抗性鉴定难以满足规模量的要求，又由于田间灰飞虱所带的RSV病毒对黑条矮缩病鉴定并无干扰。因此，如何利用大田生态系统的规模量灰飞虱而又能实现灰飞虱传毒的定量接种鉴定用于对水稻品种资源的准确评价成为本课题组研究的方向。
在自然界，昆虫与寄生作物在很长的历史时期就生活在一起，双方相互作用、彼此影响，相互调节制约，协同进化，而大田生态系统是昆虫与寄生作物的良好的互作平台，在大田黑条矮缩病等昆虫传毒介体病的大发生，正体现了作物和昆虫之间长期互作关系，而昆虫与作物间的相互影响又受自然环境、生态环境的多变性制约，为克服大田生态系统的多变性，本课题组发明了一种作物昆虫共育箱（ZL2012100557849），从而建立了作物昆虫互作研究的稳定的生态环境；另外通过一种大田来源灰飞虱成虫的纯化筛选装置（201310290925.X），实现了特定体径灰飞虱成虫的捕获和纯化筛选，且该装置结构简单、使用方便，能够高效分离出整齐一致的生命力强的灰飞虱成虫。通过作物昆虫共育箱模拟大田生态系统内灰飞虱与水稻的互作关系和纯化筛选装置利用大田生态系统解决规模灰飞虱的获取难题，从而为实现定量并强化水稻黑条矮缩病接种鉴定提供了可能。
发明内容
本发明的目的是针对水稻黑条矮缩病田间自然鉴定中存在的排趋性干扰难题和室内人工接种鉴定的灰飞虱规模量获取难题，提供一种水稻黑条矮缩病抗性的规模化接种鉴定方法，该鉴定方法既可以去除排趋性对鉴定结果的干扰，又解决了品种抗性鉴定所需灰飞虱规模量的难题，并且实现了定量而强化的水稻黑条矮缩病接种鉴定，最终实现了对水稻黑条矮缩病抗性的准确评价。
本发明的目的是通过以下技术方案解决的：
一种水稻黑条矮缩病抗性的规模化定量强化接种鉴定方法，其特征在于：所述的定量强化接种鉴定方法步骤如下：
（a）、采用盘托法从田间采集灰飞虱后通过纯化筛选装置获取大量5龄灰飞虱若虫；
（b）、将筛选获得的5龄灰飞虱若虫接种到作物昆虫共育箱内培育的水稻上共育并繁育下一代灰飞虱若虫，并进一步利用调整的纯化筛选装置分离获取大量整齐一致的2龄灰飞虱若虫；
（c）、将筛选获得的2龄灰飞虱若虫移入栽有水稻黑条矮缩病重灾区取材的分蘖盛期水稻病株上进行饲毒；
（d）、通过精密电子天平称重获得单头2龄灰飞虱若虫的重量，根据确定的虫/苗比例计算所需灰飞虱总重，进而称重定量；
（e）、根据确定的虫/苗比例将饲毒后的定量2龄灰飞虱若虫接种到作物昆虫共育箱内栽培的待测水稻品种秧苗上共育传毒；
（f）、待灰飞虱半数死亡后将待测水稻移栽至大田隔虫网室，常规栽培管理，分蘖盛期调查统计黑条矮缩病穴发病率，并根据黑条矮缩病穴发病率准确鉴定出待测水稻品种的抗病能力。
所述步骤（a）中的灰飞虱收集时间为每年五月下旬-六月上旬期小麦田由青转黄期。
所述步骤（a）中的纯化筛选装置使用时，采用孔径为22目和26目的分样筛组合以有效分离出5龄灰飞虱若虫和部分灰飞虱成虫；然后将筛选分离出的灰飞虱倒入内壁光滑的深桶内，拍击桶外壁使得灰飞虱成虫飞离而若虫滞留，即可获得大量整齐一致的5龄灰飞虱若虫。
所述步骤（b）中的5龄灰飞虱若虫接种到作物昆虫共育箱内培育的水稻上时，与5龄灰飞虱若虫共育的水稻为2-3叶期。
所述步骤（b）中的作物昆虫共育箱的培养温度控制在25℃、光14h/暗10h。
所述步骤（b）中的作物昆虫共育箱内繁育下一代灰飞虱若虫后，此时筛选装置翻转90°将垂直的趋光方向改变为水平方向，采用孔径为32目和35目的分样筛组合以有效分离获得大量整齐一致的2龄灰飞虱若虫。
所述步骤（c）中的分蘖盛期水稻病株为上一年自水稻黑条矮缩病重灾区取材后于-20℃的冰箱冷藏的，待病株自然解冻后将根用浸水脱脂棉包裹并用塑料布包扎结实模拟大田移栽方式垂直固定于作物昆虫共育箱内，然后移入2龄灰飞虱若虫饲毒不低于48h。
所述步骤（d）中的2龄灰飞虱若虫饲毒后采用趋光分离毛刷刷离灰飞虱若虫时夹杂的杂质和死虫，然后转移20-50头灰飞虱若虫进称量瓶，通过精密电子天平称重，去皮计算瓶内灰飞虱若虫的总重后根据瓶内灰飞虱若虫的数量，计算得到单头灰飞虱若虫的重量，以根据待测水稻株数和接种强度确定饲毒灰飞虱若虫数目，进而计算接种所需饲毒灰飞虱若虫的总重并称重定量。
所述步骤（e）中的待测水稻生长处于1-2叶期，且待测水稻按照20cm2/株的比例留取长势健康均匀的稻苗。
所述步骤（e）中的待测水稻按照5-15虫/苗的比例接种饲毒后的2龄灰飞虱若虫，作物昆虫共育箱的培养温度控制在25℃、光14h/暗10h共育传毒至接种的灰飞虱自然衰老死亡。
本发明相比现有技术有如下优点：
本发明通过纯化筛选装置获得大量的大田来源的5龄灰飞虱若虫，进而通过作物昆虫共育箱共育出大量的2龄灰飞虱若虫，并再次通过纯化筛选装置获得大量整齐一致的2龄灰飞虱若虫，然后通过2龄灰飞虱若虫共育饲毒、待测水稻定量共育接种传毒的方式使得待测水稻发病，最后通过调查黑条矮缩病穴发病率即可准确鉴定出待测水稻品种的抗病能力。
本发明的强化接种鉴定方法既可以去除排趋性对鉴定结果的干扰，又可以克服品种抗性鉴定所需灰飞虱规模量的难题，并且实现了定量而强化的水稻黑条矮缩病接种鉴定，能够准确地评价水稻品种对水稻黑条矮缩病的抗性水平；该鉴定方法除了可以应用于水稻品种资源的发掘鉴定、品种抗性评价、抗病品种选育外，亦可以应用于抗病基因定位的表型鉴定和抗性遗传规律研究等众多领域，故适宜推广使用。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
一种水稻黑条矮缩病抗性的规模化定量强化接种鉴定方法，该定量强化接种鉴定方法步骤如下：（a）、大田灰飞虱的获取和分离纯化：在每年五月下旬-六月上旬期小麦田由青转黄期，盘托法调查灰飞虱5龄虫占多数时，采用盘托法从田间采集灰飞虱（其中含有大量杂质和杂虫），然后利用纯化筛选装置进行分离筛选，为主要获取5龄灰飞虱若虫，纯化筛选装置的分样筛采用孔径为22目和26目的分样筛组合，因为筛取调查发现，22-26目的分样筛组合可有效的屏蔽掉灰飞虱死虫、杂质和无（弱）趋光性昆虫、大体型趋光性昆虫、小体型趋光性昆虫和灰飞虱幼龄若虫的干扰，有效分离出5龄若虫和部分灰飞虱成虫，将分离出的灰飞虱置入内壁光滑的深桶内，拍击桶外壁使得灰飞虱成虫飞离而若虫滞留，最终获得大量整齐一致的5龄灰飞虱若虫；（b）、2龄灰飞虱若虫的培育和分离筛选：将筛选获得的5龄灰飞虱若虫接种到作物昆虫共育箱内培育的2-3叶期水稻上共育并繁育下一代灰飞虱若虫，作物昆虫共育箱的培养温度控制在25℃、光14h/暗10h，共育两周左右可观察到大量灰飞虱若虫出现，待多数若虫生长到2龄期，用柔软的毛刷将聚集在水稻叶和茎秆上的大量灰飞虱若虫分离进塑料盒内；为筛选整齐一致的2龄灰飞虱若虫，筛选装置参照成虫筛选装置进行调整，同样利用若虫的趋光性进行分选，分样筛组合选择32-35目，且由于若虫运动能力较弱，此时筛选装置翻转90°设置将垂直的趋光方向改变为水平方向，将若虫置于黑暗一端，若虫趋光水平爬动，采用32-35目的分样筛组合能够分离获得大量整齐一致的2龄灰飞虱若虫；（c）、灰飞虱若虫饲毒：将上一年在-20℃的冰箱中冷藏的水稻黑条矮缩病重灾区取材的分蘖盛期水稻病株自然解冻，将病株根用浸水脱脂棉包裹并用塑料布包扎结实模拟大田移栽方式垂直固定于作物昆虫共育箱（仅通风光照，不播种、不通水）内，然后移入2龄灰飞虱若虫饲毒不低于48h，使得2龄灰飞虱若虫带毒；（d）计量灰飞虱若虫：用柔软的毛刷将饲毒后的2龄灰飞虱若虫分离进塑料盒，不设分样筛，采用纯化筛选装置趋光分离毛刷刷离2龄灰飞虱若虫时夹杂的杂质和死虫，转移20-50头2龄灰飞虱若虫进称量瓶，精密电子天平称重，去皮计算瓶内2龄灰飞虱若虫的总重，瓶内2龄灰飞虱若虫肉眼计数，计算得到单头2龄灰飞虱若虫的重量，以根据待测水稻株数和接种强度确定饲毒灰飞虱若虫数目，进而计算接种所需饲毒灰飞虱若虫的总重并称重定量；（e）、待测水稻与带毒2龄灰飞虱若虫定量共育传毒：当步骤（b）中的作物昆虫共育箱内灰飞虱若虫大量出现（多一龄幼虫）时，将待测水稻播种在作物昆虫共育箱内培养，每箱播种一个待测水稻品种（家系），完成步骤（c）后待测水稻秧苗的生长会处于1-2叶期，按照20cm2/株的比例淘汰弱苗和不均匀的苗以留取长势健康均匀的稻苗，按照5-15虫/苗的比例将饲毒后的定量2龄灰飞虱若虫接种到作物昆虫共育箱内栽培的待测水稻品种秧苗上共育传毒，作物昆虫共育箱的培养温度控制在25℃、光14h/暗10h共育传毒至接种的灰飞虱自然衰老死亡；（f）、待测水稻大田显症统计：待灰飞虱半数死亡后将待测水稻移栽至大田隔虫网室，常规栽培管理，分蘖盛期调查统计黑条矮缩病穴发病率，黑条矮缩病症状主要表现为植株矮化，叶片短阔、僵直，叶色深绿，叶背的叶脉和茎秆上现初蜡白色，后变褐色的短条瘤状隆起，统计计数穴发病率，并根据黑条矮缩病穴发病率准确鉴定出待测水稻品种的抗病能力。
实施例一
按照本发明提供的鉴定方法采用重灾区取材的冷冻水稻病株作为毒源，接种大田来源的灰飞虱繁育后一代若虫，饲毒2天后将2龄灰飞虱若虫移入育有不同水稻品种秧苗（徐稻3号、宁粳4号、武育粳3号、IR36和武运粳7号）的作物昆虫共育箱内进行接种，接种强度为5头/株，饲育15天后分别将水稻秧苗播种于防虫网室；同期采用1-2龄无毒灰飞虱若虫（来源于江苏省农业科学院周彤实验室）作为对比例，饲毒2天后将虫移入育有不同水稻品种秧苗（徐稻3号、宁粳4号、武育粳3号、IR36和武运粳7号）的作物昆虫共育箱内进行接种，接种强度为5头/株，饲育15天后分别将水稻秧苗播种于防虫网室。上述实施例和对比例培育的水稻显症后调查发病率所得数据如表一所示。
表一 无毒灰飞虱传毒发病率和大田来源灰飞虱繁育一代若虫传毒发病率比较表
通过上述实施例和对比例可知，大田来源带毒（RSV）灰飞虱与无毒灰飞虱传播黑条矮缩病（RBSDV）的发病率差异不显著，表明携带RSV病毒的灰飞虱若虫传播RBSDV不受携带的RSV 病毒干扰，这也符合前人研究的水稻黑条矮缩病与水稻条纹叶枯病呈相互独立的遗传关系的特点。
目前黑条矮缩病的鉴定中自然鉴定法中无法克服排趋性的干扰，而人工筛选无毒灰飞虱人工饲养规模量小，饲养成本很高，难以满足品种抗性鉴定的规模量的需求，限制了该方法的推广应用。而本实施例发现利用大田来源灰飞虱成虫繁育一代若虫饲毒并接种传毒的效果与无毒（RSV）灰飞虱接种效果并无显著性差异，并且突破了无毒（RSV）灰飞虱人工饲养难以规模化的技术难题，证明了本鉴定技术的可行性和进步性。
实施例二
采用本发明提供的规模化强化接种鉴定方法，按照8虫/苗的比例分别对两箱WB1、两箱WB2、两箱WB3、两箱WB4、两箱徐稻6号、两箱连粳7号、两箱大粮203、两箱中稻1号、两箱F243和两箱武育粳3号接种带毒2龄灰飞虱若虫，上述待测水稻品种的大田显症统计结果如表二所示。
表二 十种水稻品种的黑条矮缩病发病表现统计表
采用本发明提供的鉴定技术进行水稻品种资源黑条矮缩病的抗性鉴定，对表二中的数据进行比较可知，WB1、WB2、WB3、WB4水稻品种的抗病性较好，适合作为抗病育种抗性资源利用；F243和武育粳3号抗病性很差，不适合在黑条矮缩病发病区种植。所有品种的发病率排序反映了不同水稻品种间黑条矮缩病抗性水平的差异，由于该统计数据排除了排趋性对鉴定结果的影响，故本发明的鉴定方法为不同水稻品种间的黑条矮缩病抗性水平提供了准确的评价。
以上实施例仅为说明本发明的技术思想，不能以此限定本发明的保护范围，凡是按照本发明提出的技术思想，在技术方案基础上所做的任何改动，均落入本发明保护范围之内；本发明未涉及的技术均可通过现有技术加以实现。
Claims (10)
1.一种水稻黑条矮缩病抗性的规模化定量强化接种鉴定方法，其特征在于：所述的定量强化接种鉴定方法步骤如下：
（a）、采用盘托法从田间采集灰飞虱后通过纯化筛选装置获取大量5龄灰飞虱若虫；
（b）、将筛选获得的5龄灰飞虱若虫接种到作物昆虫共育箱内培育的水稻上共育并繁育下一代灰飞虱若虫，并进一步利用调整的纯化筛选装置分离获取大量整齐一致的2龄灰飞虱若虫；
（c）、将筛选获得的2龄灰飞虱若虫移入栽有水稻黑条矮缩病重灾区取材的分蘖盛期水稻病株上进行饲毒；
（d）、通过精密电子天平称重获得单头2龄灰飞虱若虫的重量，根据确定的虫/苗比例计算所需灰飞虱总重，进而称重定量；
（e）、根据确定的虫/苗比例将饲毒后的定量2龄灰飞虱若虫接种到作物昆虫共育箱内栽培的待测水稻品种秧苗上共育传毒；
（f）、待灰飞虱半数死亡后将待测水稻移栽至大田隔虫网室，常规栽培管理，分蘖盛期调查统计黑条矮缩病穴发病率，并根据黑条矮缩病穴发病率准确鉴定出待测水稻品种的抗病能力。
2.根据权利要求1所述的水稻黑条矮缩病抗性的规模化定量强化接种鉴定方法，其特征在于：所述步骤（a）中的灰飞虱收集时间为每年五月下旬-六月上旬期小麦田由青转黄期。
3.根据权利要求1所述的水稻黑条矮缩病抗性的规模化定量强化接种鉴定方法，其特征在于：所述步骤（a）中的纯化筛选装置使用时，采用孔径为22目和26目的分样筛组合以有效分离出5龄灰飞虱若虫和部分灰飞虱成虫；然后将筛选分离出的灰飞虱倒入内壁光滑的深桶内，拍击桶外壁使得灰飞虱成虫飞离而若虫滞留，即可获得大量整齐一致的5龄灰飞虱若虫。
4.根据权利要求1所述的水稻黑条矮缩病抗性的规模化定量强化接种鉴定方法，其特征在于：所述步骤（b）中的5龄灰飞虱若虫接种到作物昆虫共育箱内培育的水稻上时，与5龄灰飞虱若虫共育的水稻为2-3叶期。
5.根据权利要求1或4所述的水稻黑条矮缩病抗性的规模化定量强化接种鉴定方法，其特征在于：所述步骤（b）中的作物昆虫共育箱的培养温度控制在25℃、光14h/暗10h。
6.根据权利要求1所述的水稻黑条矮缩病抗性的规模化定量强化接种鉴定方法，其特征在于：所述步骤（b）中的作物昆虫共育箱内繁育下一代灰飞虱若虫后，此时筛选装置翻转90°将垂直的趋光方向改变为水平方向，采用孔径为32目和35目的分样筛组合以有效分离获得大量整齐一致的2龄灰飞虱若虫。
7.根据权利要求1所述的水稻黑条矮缩病抗性的规模化定量强化接种鉴定方法，其特征在于：所述步骤（c）中的分蘖盛期水稻病株为上一年自水稻黑条矮缩病重灾区取材后于-20℃的冰箱冷藏的，待病株自然解冻后将根用浸水脱脂棉包裹并用塑料布包扎结实模拟大田移栽方式垂直固定于作物昆虫共育箱内，然后移入2龄灰飞虱若虫饲毒不低于48h。
8.根据权利要求1所述的水稻黑条矮缩病抗性的规模化定量强化接种鉴定方法，其特征在于：所述步骤（d）中的2龄灰飞虱若虫饲毒后采用趋光分离毛刷刷离灰飞虱若虫时夹杂的杂质和死虫，然后转移20-50头灰飞虱若虫进称量瓶，通过精密电子天平称重，去皮计算瓶内灰飞虱若虫的总重后根据瓶内灰飞虱若虫的数量，计算得到单头灰飞虱若虫的重量，以根据待测水稻株数和接种强度确定饲毒灰飞虱若虫数目，进而计算接种所需饲毒灰飞虱若虫的总重并称重定量。
9.根据权利要求1或8所述的水稻黑条矮缩病抗性的规模化定量强化接种鉴定方法，其特征在于：所述步骤（e）中的待测水稻生长处于1-2叶期，且待测水稻按照20cm2/株的比例留取长势健康均匀的稻苗。
10.根据权利要求9所述的水稻黑条矮缩病抗性的规模化定量强化接种鉴定方法，其特征在于：所述步骤（e）中的待测水稻按照5-15虫/苗的比例接种饲毒后的2龄灰飞虱若虫，作物昆虫共育箱的培养温度控制在25℃、光14h/暗10h共育传毒至接种的灰飞虱自然衰老死亡。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510000817.3A CN104521592B (zh) | 2015-01-04 | 2015-01-04 | 一种水稻黑条矮缩病抗性的规模化定量强化接种鉴定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510000817.3A CN104521592B (zh) | 2015-01-04 | 2015-01-04 | 一种水稻黑条矮缩病抗性的规模化定量强化接种鉴定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104521592A true CN104521592A (zh) | 2015-04-22 |
| CN104521592B CN104521592B (zh) | 2016-09-07 |
Family
ID=52837376
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510000817.3A Expired - Fee Related CN104521592B (zh) | 2015-01-04 | 2015-01-04 | 一种水稻黑条矮缩病抗性的规模化定量强化接种鉴定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104521592B (zh) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105248168A (zh) * | 2015-10-26 | 2016-01-20 | 江苏省农业科学院 | 利用小麦绿矮病植株为毒源建立的一种玉米粗缩病品种抗性接种鉴定方法 |
| CN105393815A (zh) * | 2015-10-26 | 2016-03-16 | 江苏省农业科学院 | 一种玉米品种抗粗缩病人工接种鉴定方法 |
| CN106489564A (zh) * | 2015-09-08 | 2017-03-15 | 无锡南理工科技发展有限公司 | 一种水稻抗齿叶矮化病鉴定方法 |
| CN108812125A (zh) * | 2018-06-12 | 2018-11-16 | 广西大学 | 一种水稻苗期抗稻褐飞虱规模化精准鉴定方法 |
| CN109652583A (zh) * | 2019-01-08 | 2019-04-19 | 扬州大学 | 水稻品种IR36抗黑条矮缩病位点qRBSDV-1及其分子标记方法和应用 |
| CN113693033A (zh) * | 2021-09-14 | 2021-11-26 | 广西壮族自治区农业科学院 | 一种基于人工接种评价水稻品种抗南方水稻黑条矮缩病的方法 |
| CN115005091A (zh) * | 2022-04-28 | 2022-09-06 | 江苏丘陵地区镇江农业科学研究所 | 一种水稻抗黑条矮缩病育种材料的选育方法 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1961641A (zh) * | 2006-11-15 | 2007-05-16 | 江苏省农业科学院 | 一种抗条纹叶枯病水稻品种的鉴定方法 |
| CN101816273A (zh) * | 2010-05-06 | 2010-09-01 | 江苏省农业科学院 | 水稻品种抗黑条矮缩病室内接种鉴定方法 |
| CN102487742A (zh) * | 2011-12-05 | 2012-06-13 | 江西省农业科学院植物保护研究所 | 水稻稻瘟病抗性鉴定方法 |
| CN102578050A (zh) * | 2012-03-02 | 2012-07-18 | 浙江大学 | 携带水稻齿叶矮缩病毒的褐飞虱的获得方法及其应用 |
| CN103229674A (zh) * | 2013-05-21 | 2013-08-07 | 江苏胜田农业科技发展有限公司 | 一种简易快速鉴定水稻稻瘟病抗性的方法 |
| CN103749230A (zh) * | 2014-01-27 | 2014-04-30 | 江苏徐淮地区连云港农业科学研究所 | 水稻品种抗黑条矮缩病田间接种鉴定方法 |
| CN103918518A (zh) * | 2014-05-04 | 2014-07-16 | 湖南省水稻研究所 | 一种水稻品种资源稻曲病抗性的病圃鉴定方法 |
-
2015
- 2015-01-04 CN CN201510000817.3A patent/CN104521592B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1961641A (zh) * | 2006-11-15 | 2007-05-16 | 江苏省农业科学院 | 一种抗条纹叶枯病水稻品种的鉴定方法 |
| CN101816273A (zh) * | 2010-05-06 | 2010-09-01 | 江苏省农业科学院 | 水稻品种抗黑条矮缩病室内接种鉴定方法 |
| CN102487742A (zh) * | 2011-12-05 | 2012-06-13 | 江西省农业科学院植物保护研究所 | 水稻稻瘟病抗性鉴定方法 |
| CN102578050A (zh) * | 2012-03-02 | 2012-07-18 | 浙江大学 | 携带水稻齿叶矮缩病毒的褐飞虱的获得方法及其应用 |
| CN103229674A (zh) * | 2013-05-21 | 2013-08-07 | 江苏胜田农业科技发展有限公司 | 一种简易快速鉴定水稻稻瘟病抗性的方法 |
| CN103749230A (zh) * | 2014-01-27 | 2014-04-30 | 江苏徐淮地区连云港农业科学研究所 | 水稻品种抗黑条矮缩病田间接种鉴定方法 |
| CN103918518A (zh) * | 2014-05-04 | 2014-07-16 | 湖南省水稻研究所 | 一种水稻品种资源稻曲病抗性的病圃鉴定方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 王宝祥等: "水稻黑条矮缩病抗性评价方法及抗性资源筛选", 《作物学报》 * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106489564A (zh) * | 2015-09-08 | 2017-03-15 | 无锡南理工科技发展有限公司 | 一种水稻抗齿叶矮化病鉴定方法 |
| CN105248168A (zh) * | 2015-10-26 | 2016-01-20 | 江苏省农业科学院 | 利用小麦绿矮病植株为毒源建立的一种玉米粗缩病品种抗性接种鉴定方法 |
| CN105393815A (zh) * | 2015-10-26 | 2016-03-16 | 江苏省农业科学院 | 一种玉米品种抗粗缩病人工接种鉴定方法 |
| CN108812125A (zh) * | 2018-06-12 | 2018-11-16 | 广西大学 | 一种水稻苗期抗稻褐飞虱规模化精准鉴定方法 |
| CN109652583A (zh) * | 2019-01-08 | 2019-04-19 | 扬州大学 | 水稻品种IR36抗黑条矮缩病位点qRBSDV-1及其分子标记方法和应用 |
| CN113693033A (zh) * | 2021-09-14 | 2021-11-26 | 广西壮族自治区农业科学院 | 一种基于人工接种评价水稻品种抗南方水稻黑条矮缩病的方法 |
| CN115005091A (zh) * | 2022-04-28 | 2022-09-06 | 江苏丘陵地区镇江农业科学研究所 | 一种水稻抗黑条矮缩病育种材料的选育方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104521592B (zh) | 2016-09-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104521592B (zh) | 一种水稻黑条矮缩病抗性的规模化定量强化接种鉴定方法 | |
| Tursun et al. | The critical period for weed control in three corn (Zea mays L.) types | |
| CN104584890B (zh) | 一种玉米粗缩病抗性的规模化接种鉴定方法 | |
| Singh et al. | Effect of high temperature on yield attributing traits in bread wheat | |
| CN104542144B (zh) | 一种南方水稻黑条矮缩病品种抗性鉴定方法 | |
| Nath et al. | Effect of climatic variation on yield of sesame (Sesamum indicum L.) at different dates of sowing | |
| Henckes et al. | Fitness cost and competitive ability of ryegrass susceptible and with multiple resistance to glyphosate, iodosulfuron-methyl, and pyroxsulam | |
| CN107155871B (zh) | 抗旱优质谷子的选育方法 | |
| Sikder et al. | Heat tolerance and relative yield performance of wheat varieties under late seeded conditions | |
| Trethowan et al. | Genetics Options for Improving the Productivity of Wheat in Water‐Limited and Temperature‐Stressed Environments | |
| Reddy et al. | Sorghum genetic enhancement for climate change adaptation | |
| CN104429665B (zh) | 一种小麦丛矮病抗性的规模化定量强化接种鉴定方法 | |
| Badiger et al. | Screening of germplasm of Abelmoschus against biotic stresses | |
| Fan et al. | Combining ability analysis on rhizomatousness via incomplete diallel crosses between perennial wild relative of rice and Asian cultivated rice | |
| CN106489564A (zh) | 一种水稻抗齿叶矮化病鉴定方法 | |
| CN109197444A (zh) | 田间筛抗/耐水稻二、三化螟兼抗稻纵卷叶螟材料的方法 | |
| Banda | Genetic analysis for heat tolerance in tropical maize (Zea mays) | |
| Panneerselvam et al. | Monsoon variability trends and strategies to get through its vagaries in rice-based systems in eastern India. | |
| Kumar et al. | Screening of rice varieties resistant against brown plant hopper, Nilaparvata lugens (Stal.) | |
| Girase et al. | Correlation and path analysis of cotton—A review | |
| Nalini et al. | Screening of rice genotypes for resistance to yellow stem borer, Scirpophaga incertulas (Walker) | |
| Wachenje | Genetic analysis of drought tolerance and earliness in tropical maize (zea mays l.) germplasm | |
| Sardar et al. | Comparative resistance and yield performance of summer mungbean mutants and varieties as affected by MYMV | |
| Bai et al. | Good practice: using intraspecific crop diversity to manage pests and pathogens in China | |
| Valkova et al. | Hybridization Between Cultivated Sunflower and Wild Species Helianthus bolanderi A. Gray |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Qian Xinghua Inventor after: Yan Fumin Inventor after: Liu Jiankun Inventor after: Shen Huaiying Inventor after: Zhang Shouzheng Inventor before: Lu Baiguan Inventor before: Song Zhaoqiang Inventor before: Li Jian Inventor before: Wang Baoxiang Inventor before: Zhou Zhenling Inventor before: Chi Ming Inventor before: Liu Yan Inventor before: Xu Dayong |
|
| CB03 | Change of inventor or designer information | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20170425 Address after: 675000 Yunnan Yi Autonomous Prefecture in Chuxiong province Chuxiong City No. 258 Po Yi is the first floor of the hotel Patentee after: Yunnan Chuyuan SEED Industry Co.,Ltd. Address before: 100000 Beijing city Chaoyang District Albemarle Road No. 12 Chaowai room 801 8 Patentee before: Beijing Gao Hang United Technology Co.,Ltd. Effective date of registration: 20170425 Address after: 100000 Beijing city Chaoyang District Albemarle Road No. 12 Chaowai room 801 8 Patentee after: Beijing Gao Hang United Technology Co.,Ltd. Address before: 222006 Jiangsu Province, Lianyungang city Sinpo District Yingzhou Road No. 8 Patentee before: LIANYUNGANG ACADEMY OF AGRICULTURAL SCIENCES |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20160907 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |