CN104488726B - 太子参试管苗的瓶外生根方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开太子参试管苗的瓶外生根方法，包含如下步骤：（1）无根试管苗的制备，（2）移栽基质和苗床准备，（3）移栽前的处理，（4）移栽，（5）移栽后管理等环节。本发明省去试管苗瓶内生根环节，操作方便、省时省工，节省成本。本方法生产的太子参种参大小均一、产量和繁殖系数更高，更适合太子参种苗生产和选育。运用本发明生产的太子参种苗个体适宜，能为太子参大田生产提供优质种参。

Description

太子参试管苗的瓶外生根方法

技术领域

本发明属于药用植物组织培养技术领域，具体涉及一种太子参试管苗的瓶外生根方法，该方法特别适用于太子参的规模育种。

背景技术

太子参历版《中国药典》均有收载，为石竹科植物孩儿参Pseudostellaria heterophylla(Miq.)Pax ex Pax et Hoffm.的块茎。在夏季茎叶大部分枯萎时，采挖块根洗净，除去须根，置沸水中略烫后晒干或直接晒干后。太子参性平，味甘、微苦，归脾、肺经。具有益气健脾，生津润肺的功能；临床用于脾虚体倦，食欲不振，病后虚弱，气阴不足，自汗日渴，肺燥干咳等症。太子参用量逐年递增，市场前景广阔。目前，太子参作为常用中药已经实现人工栽培，由于长期以太子参块根进行无性繁殖，产量品质逐渐变差，病害严重。太子参组织快繁育苗技术是解决太子参产业化生产的有效途径，尤其是脱毒太子参组织快繁育苗技术的产生，既能增产保质，又能防止病害，并在太子参生产实际中得到了广泛的应用。生产上太子参以种参进行繁殖，组织快繁获得的种参，特别是脱毒的种参能大量提高大田产量，但传统组培快繁技术生产种参时，生产成本高，组培苗生产人工费占总成本的60-70％，占用室内空间大、种参产量低、生根苗移栽后得到种参大小不一且细长等，急需改进。申请人通过研究，发现太子参在瓶外生根能减少很多成本，特别是移栽这个环节，传统组培一个人工只能移栽500-800株，而本发明的技术技术一个人工能移栽1500-2000株，降低很多成本，同时，利用本发明的方法，使得瓶外生根不仅没有降低成活率和产量，反而提高种参产量和品质。

试管苗瓶外生根技术是近几年研究成功的一项先进的组培技术，该技术是将试管苗的生根阶段中的生根和驯化结合起来，省去传统瓶内生根程序，该技术简化程序，节省了培养室的空间，提高生产效率。有研究证实，试管苗生产的成本可降低35-75％。经检索，国内外对苹果、甘蔗、甘薯、月季花等一大批植物实现瓶外生根，并得到广泛应用。目前在太子参种植领域已申请了较多专利。如《一种太子参的规范化种植方法》、《延长太子参生长期的方法》、《一种太子参有性繁殖的方法》、《太子参四倍体不定根诱导培养方法》等专利。上述专利从规范化种植到组培方面做了大量研究，但其均未涉试管苗瓶外生根技术，本发明将具有较好的创新和创造性。运用本发明繁育的种参与瓶内生根方法相比，其大小均一，个头匀称，鲜重每平米可达1.5kg。

《六盘水师范学院学报》2013年8月第25卷第4期报道了《太子参组培苗瓶外生根技术研究》。但本发明较该报道具显著差异，报道文献只报道30天后移栽成活率等指标，仅获得太子参可以瓶外生根结论，但很显然，在现实生产中，要获得大量种参，满足大田种植的目的，仅仅获得可以瓶外生根显然是不够的，要一种移栽方法适用于规模育种，必须从整个生长周期的存活率及其产量和品质上进行评估。而目前，还没有适用于太子参规模育种的移栽技术的相关报道。

本发明即是针对目前现有技术中，太子参组织快繁种参或脱毒种参生产成本高，难以实现规模育种，还无法满足市场需求等问题，提供了一种适用于优质种参规模生产的太子参移栽方法，利用本发明提供的方法，太子参组培苗的生命周期存活率为92.2％，产量14.1t/hm²，是传统组培苗产量的1.2倍，成产成本降低10％左右，是一种适用于工厂化的育种方式，具备极大的现实意义。

发明内容

本发明的目的在于简化太子参组培程序，降低太子参种参的生产成本，提高太子参产量及生命周期存活率，提供了一种适用于规模育种的太子参移栽方法，具有降低成本，提高效率，增加繁殖系数，提升种参品质优等特点。

为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：

一种适用于规模育种的太子参移栽方法，包括以下步骤：

(1)无根试管苗的制备；

对按照常规方法制备的太子参组培苗进行增殖培养，太子参增殖培养采用的培养基配方为：MS+6-BA 0.9mg/l+NAA 0.6mg/l，20-30天为一个周期。在增殖培养结束后，进行壮苗培养，壮苗培养采用的培养基配方为：MS+6-BA 0.1mg/l+NAA 0.6mg/l。培养15-35天，转移至普通温室炼苗3-7天即可。

太子参增殖培养周期根据要求组培苗数量和移栽日期而定，增殖周期≤10次，增殖和壮苗培养条件为温度18-25℃左右，湿度30-70％，光照2000-4000lx左右，光照时间为10-14h/d。

壮苗培养是将增殖培养后的丛生苗分成单株培养，实现状苗的目的，培养条件与增殖培养一致。

炼苗是壮苗培养15-35天后，将壮苗培养的太子参试管苗同培养瓶一起移置于培养室外进行炼苗，炼苗在普通培养室进行，其环境条件与普通室内环境一样，炼苗时，打开瓶盖存放，注意保持瓶内足够多的水分，湿度80-100％，必要时可以适当用无菌水喷雾，炼苗时间为3-7天。炼苗结束后，无根试管苗即可进行移栽。

(2)移栽基质和苗床准备；

移栽基质和苗床准备包括基质种类和配比，其基质包含腐殖土、黄土、珍珠岩；腐殖土和黄土要过5mm孔径筛，按腐殖土：黄土：珍珠岩为3:1:1的体积比例混合铺成厚度10-20cm的苗床，苗床宽度1.0-1.2m，广谱性杀菌剂进行杀菌，薄膜覆盖一周后，揭开薄膜，翻松基质即可移栽。

所述珍珠岩大小为3-5mm，膨胀倍数k₀>5～15倍，容量≤80kg/m³～200kg/m³

所述的腐殖土收集于落叶阔叶林或杂树林下，去表层杂质，收集腐殖层。

黄土选择纯黄土，而不是粘土。

所述的广谱性杀菌剂，优选，80％多菌灵800倍稀释液喷施，每平方米用5-10g。

(3)移栽前的处理；

炼苗后的太子参无根试管苗用镊子轻轻从组培瓶内拿出，整齐放在盆或盘里，加水浸泡10-60min，然后再自来水轻轻冲洗。冲洗完后沥水，至表面微干，下面没有流水滴出。放置于50-100ppm的NAA溶液中浸泡20-30min，经无菌水漂洗即可进行移栽。

若无根苗在炼苗时有轻微污染，在放入NAA溶液浸泡前需要消毒，一般采用1000倍80％多菌灵稀释液浸泡10-15min。

(4)移栽；

在苗床上按株行距3×4cm或4×5cm用铅笔或铅笔大小棍子打进行打孔，把试管苗放入孔中，用手轻轻地一捏，用水浇透即可。

试管苗放入孔中时，试管苗在基质中至少有2个节，而地上部分至少要有3叶1心。第一次浇水是定根水，宁多勿少，使得基质与试管苗充分接触，但浇水时注意不要把苗冲倒。

太子参试管苗移栽时间一般在11月份或次年3月份，平均气温15-25℃左右。若在温室大棚或简易大棚进行移栽，移栽时间可以延长至12月份或提前到次年2月份。

(5)移栽后管理。

用塑料薄膜搭建小拱棚，湿度控制在80-100％，温度控制在15-25℃，10-15天后选阴天拆除小拱棚，进行常规的水、肥、病虫害等田间管理。

与现有技术相比，本发明的有利效果在于：

本发明太子参试管苗生产程序：无菌培养体系建立→增殖培养→壮苗→移栽→田间管理→获得种参。

从上述可见，本发明较传统太子参试管苗省去瓶内生根环节，节省培养室的空间。太子参种参生产，其人工工资占生产成本的60-70％，移栽时，瓶内生根苗清洗相当费时且易伤根，本发明在这一环节上相当轻松，传统组培苗一个人工只能移栽500-800株，而运用本发明一个人工能移栽1500-2000株，提高了效率，降低了成本。瓶内生根苗移栽后由老根发育成的太子参种参个体较大，而新发育的根长大的种参个体相对较小，大小不均匀，而本发明所得种参都是由新根发育而成，个体相对均匀，达到了提升种参质量的目的。运用本发明太子参组培苗的整个生命周期存活率为92.2％，产量达1.41kg/m²，是传统组培苗产量的1.2倍，而生产成本能降低10％左右。

附图说明

图1为太子参增殖苗。

图2为太子无根试管苗。

图3为太子参瓶外生根实验。

图4为种参比较。

其中左图为利用常规方法制备的瓶内生根组培苗移栽后获得的太子参，右图为本发明实施例2方法制备的瓶外生根组培苗移栽后获得的太子参。

具体实施方式

通过以下具体实施例，可以进一步了解本发明，但本发明的范围不限于下述实例。本发明所述技术方案，如未特备说明，均为本领域的常规方案。

实施例1：

一种适用于规模育种的太子参移栽方法，包括以下步骤：

实施地点：湖南省农业生物资源利用研究所高桥药用植物基地温室大棚。

材料：由湖南省农业生物资源利用研究所按照参考文献生产的脱毒苗(参考文献：林丛发,罗仰奋,魏泽平,钟爱清,王少华.太子参脱毒种苗的繁殖体系[J],闽东农业科技,2003(2):18-20)设计：采用盆栽，盆口径30cm，每盆在30株，每个处理10盆，重复三次。

⑴无根试管苗的制备：对按照参考文献(林丛发,罗仰奋,魏泽平,钟爱清,王少华.太子参脱毒种苗的繁殖体系[J],闽东农业科技,2003(2):18-20)制备的未生根的太子参组培苗进行增殖培养，本实施例太子参增殖培养采用的培养基的配方为：MS+6-BA 0.9mg/l+NAA 0.6mg/l。增殖周期5次，每个周期时长30天，增值系数为5。在增殖培养结束后，进行壮苗培养，壮苗培养采用的培养基配方为：MS+6-BA 0.1mg/l+NAA 0.6mg/l。培养25天转移至普通温室炼苗5天。

增殖和壮苗培养条件为温度22℃，湿度50％，光照3000lx，光照时间为12h/d。

壮苗培养是将增殖培养后的丛生苗分成单株培养，实现状苗的目的，培养条件与增殖培养一致。

炼苗是壮苗培养25天后，将壮苗培养的太子参试管苗同培养瓶一起移置于培养室外进行炼苗，炼苗在普通培养室进行，其环境条件与普通室内环境一样，炼苗时，打开瓶盖存放，注意保持瓶内足够多的水分，湿度为80-100％，必有时可以适当用无菌水喷雾，炼苗时间为5天。炼苗结束后，无根试管苗即可进行移栽。

经本发明壮苗后，组培苗高度一般为5-9cm，节间距为0.5-1.2cm，茎秆粗壮为1-2mm。能使在增殖过程中的小苗、弱苗达到壮苗效果。

⑵移栽基质和苗床准备：移栽基质和苗床准备包括基质种类和配比，其基质包含腐殖土、黄土、珍珠岩，腐殖土和黄土要过5mm孔径筛。腐殖土，黄土，珍珠岩混合，体积比为腐殖土：黄土：珍珠岩为3:1:1。混合铺成厚度15cm的苗床，苗床宽度1.0m，经80％多菌灵800倍稀释液喷施，每平方米约用8克。灭菌后薄膜覆盖一周揭膜翻松即可进行移栽。

所述的珍珠岩大小为3-5mm，膨胀倍数k₀>5～15倍，容量≤80kg/m³～200kg/m³

所述的腐殖土收集于落叶阔叶林或杂树林下，去表层杂质，收集腐殖层。

黄土选择纯黄土，而不是粘土。

⑶移栽前的处理：炼苗后的太子参无根试管苗用镊子轻轻从组培瓶内拿出，整齐放在盆或盘里，加水浸泡20min，然后在自来水轻轻冲洗。冲洗完后沥水，达到表面微干，下面没有流水滴出，放置于100ppm的NAA溶液中浸泡20min，经无菌水漂洗即可进行移栽。

本实施例中的炼苗后的无根试管苗无污染，因此无需进行消毒处理。

⑷移栽：先在苗床上按株行距3×4cm或4×5cm用铅笔或铅笔大小棍子打进行打孔，把试管苗放入孔中，试管苗在基质中至少有2个节，同时地上部分也至少有3叶1心。用手轻轻地一捏，基质充分与苗接触，用水浇透，这次是浇定根水，宁多勿少，浇水是时注意不要把苗冲倒。

本实施例太子参试管苗移栽时间为在11月份，室外平均气温20℃。

⑸移栽后管理：移栽后，整个厢面用塑料薄膜搭建小拱棚，湿度控制在95％左右，温度控制在20℃左右，10-15天后选阴天拆除小拱棚，然后进行日常的水、肥管理。

利用本实施例中的方案，太子参组培苗的生命周期存活率为93.6％，获得的产量,1.47kg/m²。利用本发明的基质，获得的种参个头均匀，其种参径粗为8-10mm，长度适宜为8-12cm，为优质种参。

实施例2：

本实施例是以本发明的适用于规模育种的太子参栽培方法与常规组培苗试验效果比较：

实验地点：湖南省农业生物资源利用研究所高桥药用植物基地温室大棚。

实验材料：由湖南省农业生物资源利用研究所按照参考文献生产的脱毒苗(参考文献：林丛发,罗仰奋,魏泽平,钟爱清,王少华.太子参脱毒种苗的繁殖体系[J],闽东农业科技,2003(2):18-20)

实验设计：两个处理，每个处理重复3次，每个处理面积6平方米。各处理如下：

①实验组(T)：按照本发明方法进行，具体为：

⑴无根试管苗的制备：对按照参考文献(林丛发,罗仰奋,魏泽平,钟爱清,王少华.太子参脱毒种苗的繁殖体系[J],闽东农业科技,2003(2):18-20)制备的未生根太子参组培苗进行增殖培养，本实施例太子参增殖培养采用配方为：MS+6-BA 0.9mg/l+NAA 0.6mg/l。增殖周期5次，每个周期时长30天，增值系数为5。在增殖培养结束后，进行壮苗培养，壮苗培养采用配方为：MS+6-BA 0.1mg/l+NAA 0.6mg/l。培养25天转移至普通温室炼苗3-5天。

增殖和壮苗培养条件为温度22℃，湿度50％，光照3000lx，光照时间为12h/d。

壮苗培养是将增殖培养后的丛生苗分成单株培养，实现状苗的目的，培养条件与增殖培养一致。

炼苗是壮苗培养25天后，将壮苗培养的太子参试管苗同培养瓶一起移置于培养室外进行炼苗，炼苗在普通培养室进行，其环境条件与普通室内环境一样，炼苗时，打开瓶盖存放，注意保持瓶内足够多的水分，湿度为80-100％，必有时可以适当用无菌水喷雾，炼苗时间为3-5天。炼苗结束后，无根试管苗即可进行移栽。

经本发明壮苗后，组培苗高度一般为5-9cm，节间距为0.5-1.2cm，茎秆粗壮为1-2mm。能使在增殖过程中的小苗、弱苗达到壮苗效果。

⑵移栽基质和苗床准备：移栽基质和苗床准备包括基质种类和配比，其基质包含腐殖土、黄土、珍珠岩，腐殖土和黄土要过5mm孔径筛。腐殖土，黄土，珍珠岩混合，体积比为腐殖土：黄土：珍珠岩为3:1:1。混合铺成厚度15cm的苗床，苗床宽度1.0m，经80％多菌灵800倍稀释液喷施，每平方米用8克。灭菌后薄膜覆盖一周揭膜翻松即可进行移栽。

所述的珍珠岩大小为3-5mm，膨胀倍数k₀>5～15倍，容量≤80kg/m³～200kg/m³

所述的腐殖土收集于落叶阔叶林或杂树林下，去表层杂质，收集腐殖层。

黄土选择纯黄土，而不是粘土。

⑶移栽前的处理：炼苗后的太子参无根试管苗用镊子轻轻从组培瓶内拿出，整齐放在盆或盘里，加水浸泡20min，然后在自来水轻轻冲洗。冲洗完后沥水，达到表面微干，下面没有流水滴出，放置于100ppm的NAA溶液中浸泡20min，经无菌水漂洗即可进行移栽。

本实施例中的炼苗后的无根试管苗无污染，因此无需进行消毒处理。

⑷移栽：先在苗床上按株行距3×4cm或4×5cm用铅笔或铅笔大小棍子打进行打孔，把试管苗放入孔中，试管苗在基质中至少有2个节，同时地上部分也至少有3叶1心。用手轻轻地一捏，基质充分与苗接触，用水浇透，这次是浇定根水，宁多勿少，浇水是时注意不要把苗冲倒。

本实施例太子参试管苗移栽时间为在11月份，室外平均气温20℃。

⑸移栽后管理：移栽后，整个厢面用塑料薄膜搭建小拱棚，湿度控制在95％左右，温度控制在20℃左右，10-15天后选阴天拆除小拱棚，然后进行日常的水、肥管理。

利用本方法获得的种参个头均匀，其种参径粗为8-10mm，长度为6-12cm，为优质种参(图4右图)。

②对照组(CK)：按照参考文献(林丛发,罗仰奋,魏泽平,钟爱清,王少华.太子参脱毒种苗的繁殖体系[J],闽东农业科技,2003(2):18-20)制备的瓶内生根组培苗，直接进行移栽，移栽密度移栽后期管理与实验组相同。

对照组获得的种参个头大小不一，略显细长。其大小粗壮为3-12mm，长度为4-15cm，种参参差不齐，需经过挑选才能做种参(图4左图)。

结果分析：每个处理取1平方米进行数据统计和分析如表1：

表1：两种不同方法移栽太子参试管苗的结果：

注：同列数据后面的小写字母表示差异显著性(P<0.01)。

由此可以看出：运用本发明太子参试管苗瓶外生根方法，没有降低太子参试管苗的成活率，但提高种参质量，同时种参产量明显比传统生根苗移栽要高，超过了20％。另在生产过程中，本发明在移栽环节时，能节省清洗工时，且不易损伤试管苗，降低了生产成本达10％。若规模增加，降低成本率会更高。

Claims (3)

1.一种适用于规模育种的太子参移栽方法，包括以下步骤：

(1)无根试管苗的制备；

对按照常规方法制备的太子参组培苗进行增殖培养，太子参增殖培养基的配方为：MS+6-BA 0.9mg/l+NAA 0.6mg/l，20-30天为一个周期；在增殖培养结束后，进行壮苗培养，壮苗培养基的配方为：MS+6-BA 0.1mg/l+NAA 0.6mg/l；培养15-35天，转移至普通温室炼苗3-7天即可；

(2)移栽基质和苗床准备；

移栽基质和苗床准备包括基质种类和配比，其基质包含腐殖土、黄土、珍珠岩；腐殖土和黄土要过5mm孔径筛，按腐殖土：黄土：珍珠岩为3:1:1的体积比例混合铺成厚度10-20cm的苗床，苗床宽度1.0-1.2m，广谱性杀菌剂进行杀菌，薄膜覆盖一周后，揭开薄膜，翻松基质即可移栽；

(3)移栽前的处理；

炼苗后的太子参无根试管苗用镊子轻轻从组培瓶内拿出，整齐放在盆或盘里，加水浸泡10-60min，然后再自来水轻轻冲洗；冲洗完后沥水，至表面微干，下面没有流水滴出；放置于50-100ppm的NAA溶液中浸泡20-30min，经无菌水漂洗即可进行移栽；

若无根苗在炼苗时有轻微污染，在放入NAA溶液浸泡前需要消毒，采用1000倍80％多菌灵稀释液浸泡10-15min；

(4)移栽；

在苗床上按株行距3×4cm或4×5cm用铅笔或铅笔大小棍子进行打孔，把试管苗放入孔中，用手轻轻地一捏，用水浇透即可；

试管苗放入孔中时，试管苗在基质中至少有2个节，而地上部分至少要有3叶1心；第一次浇水是定根水，宁多勿少，使得基质与试管苗充分接触，但浇水时注意不要把苗冲倒；(5)移栽后管理

用塑料薄膜搭建小拱棚，湿度控制在80-100％，温度控制在15-25℃，10-15天后选阴天拆除小拱棚，进行常规的水、肥、病虫害等田间管理。

2.根据权利要求1所述的方法，太子参增殖培养周期≤10次，增殖和壮苗培养条件为温度18-25℃，湿度30-70％，光照2000-4000lx左右，光照时间为10-14h/d。

3.根据权利要求1所述的方法，步骤(2)中，所述珍珠岩大小为3-5mm，膨胀倍数k₀>15倍，容量≤80kg/m³；所述的腐殖土收集于落叶阔叶林或杂树林下，去表层杂质，收集腐殖层；所述的广谱性杀菌剂为80％多菌灵800倍稀释液。