CN104474525A - 一种脑蛋白水解物组合药物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种脑蛋白水解物组合药物，包含如下原辅料：脑蛋白水解物溶液、磷脂原料、磷脂膜分子态稀释剂、抗氧化剂、赋型剂、表面活性剂、乙醇溶液、磷酸盐缓冲溶液、注射用水。同时，本发明还提供了脑蛋白水解物组合药物的制备方法，其制剂工艺可除去脑蛋白水解物溶液中的蛋白质等杂质，冻干针剂质地疏松，外形饱满，不萎缩，色泽均匀，表面平整，在使用时溶解迅速。提高了药物的稳定性和治疗指数，降低了毒副作用的风险性。

Description

一种脑蛋白水解物组合药物及其制备方法

技术领域

本发明涉及医药技术领域，特别是涉及一种脑蛋白水解物组合药物及其制备方法。

背景技术

脑蛋白水解物是从猪脑组织中提取的各种特异性氨基酸及小分子肽复合物，能以多种方式作用于中枢神经，调节和改善神经元的代谢，促进突触形成，诱导神经元的分化，并进一步保护神经细胞，使其免受各种缺血、低氧和神经毒素的损害。本品易通过血-脑脊液屏障，促进脑内蛋白质的合成，影响呼吸链，具有抗低氧能力，改善脑内能量代谢，激活腺苷酸环化酶和催化其他激素系统，提供神经递质肽类激素及辅酶前体，具有促进神经纤维生长的类神经生长因子功能，改善病变区脑细胞功能，是一种治疗脑神经功能障碍的药物。该药自20世纪90年代上市以来，在世界各地广泛用于各类痴呆、卒中和脑外伤的治疗。

现有脑蛋白水解物原料生产工艺可能存在较大差异，同时相应制剂生产工艺关键参数不明确，甚至外源性补加氨基酸，最终造成质量参差不齐，导致不良反应时有发生。

现有技术中脑蛋白水解物主要被制备成脑蛋白水解物注射液、注射用脑蛋白水解物、脑蛋白水解物片等。查阅相关文献资料，现有制剂均未采用脂质体制备技术。

现有技术中可能使脂质体药物工业化生产的方法有：压匀质法、超声波法、有机溶剂干燥法、喷雾干燥法、流化床包衣法、单相溶液冷冻干燥法。高压匀质法及超声波法粒径可控，但是高能破碎，对原料药有破坏；四种方法对粒径不可控且粒径分布不集中，有机溶剂残留，有泄漏、沉淀、凝聚、磷脂腐败等质量问题，使脂质体药物载体的包封率不理想，各批次波动、变化大。

发明内容

本发明目的是提供一种脑蛋白水解物组合药物及其制备方法，克服现有技术中存在的生产工艺关键参数不稳定、不成熟，制剂难以长期稳定保存，导致临床不良反应时有发生。本发明还提供了这种脑蛋白水解物组合药物的制备方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：一种脑蛋白水解物组合药物，包含如下原辅料：脑蛋白水解物溶液、磷脂原料、磷脂膜分子态稀释剂、抗氧化剂、赋型剂、表面活性剂、乙醇溶液、磷酸盐缓冲溶液、注射用水。

上述脑蛋白水解物组合药物所包含各原辅料在处方中的百分含量如下：脑蛋白水解物溶液（以总氮计）0.6％、磷脂原料1.0-8.0％、磷脂膜分子态稀释剂2.0-10.0％、抗氧化剂0.01-0.05％、赋型剂3.0-10.0％、表面活性剂0.01-1.0％、乙醇溶液适量、磷酸盐缓冲溶液适量、注射用水适量。

本发明的一种优选的实施方式中，该脑蛋白水解物组合药物所包含各原辅料在处方中的百分含量如下：脑蛋白水解物溶液（以总氮计）0.6％、磷脂原料5.0-7.0％、磷脂膜分子态稀释剂3.0-6.0％、抗氧化剂0.01-0.05％、赋型剂4.0-8.0％、表面活性剂0.01-1.0％、乙醇溶液适量、磷酸盐缓冲溶液适量、注射用水适量。

  上述各原辅料在处方中的百分含量是指质量/体积％，当体积单位为ml时，其对应质量单位为g，当体积单位为L时，其对应质量单位为kg；体积指的是灌装前定溶体积。

本发明中可使用的磷脂原料平均分子量都定义以800D计算，磷脂原料是氢化大豆卵磷脂与多烯磷脂酰胆碱的组合物，摩尔数比为1-5∶0.5的组合物。

 本发明中可使用的磷脂膜分子态稀释剂是二巯丙醇。

 本发明中可使用的抗氧化剂包括但不限于亚硫酸钠、还原型谷胱甘肽中的一种或两种的组合物。

  上述的抗氧化剂，优选亚硫酸钠。

 本发明中可使用的赋型剂包括但不限于乳糖、甘露醇、木糖醇中的一种或多种的组合物。

 上述的赋型剂，优选木糖醇。

  本发明中可使用的表面活性剂包括但不限于十二烷基硫酸钠、烷基苯磺酸钠中的一种或两种的组合物。

上述的表面活性剂，优选十二烷基硫酸钠。

 本发明中可使用的乙醇溶液是浓度大于75％的乙醇水溶液。

本发明中可使用的磷酸盐缓冲溶液浓度为0.01-0.05M，pH为值5.0-8.0。

  本发明中一种脑蛋白水解物组合药物的制备方法，包括如下步骤：

（1）将木糖醇溶解于适量磷酸盐缓冲液中，配制成10％的木糖醇磷酸盐缓冲溶液，将所配制溶液在121℃蒸汽灭菌20分钟，当溶液温度为20℃-25℃时，用截留分子量1000D的超滤膜的超滤柱过滤，过滤后，在室温下，等分超滤液得到的溶液，分为A、B溶液，将A、B溶液分别用5％-8％的氢氧化钠溶液调pH值至8.5，将A、B溶液分别经0.05μm以下孔径的滤膜过滤，再将A、B溶液分别用8％的盐酸溶液调pH值为6.9-7.5，备用；（2）脑蛋白水解物溶液用适量注射用水溶解完全，分别加入总用量0.02％的亚硫酸钠和总用量0.1％的十二烷基硫酸钠，搅拌使溶解，调pH值为6.9-7.5，加溶液总体积0.1％针用活性炭搅拌30-60分钟，用截留分子量10000D的超虑膜超滤，收集滤液，将滤液再用截留分子量6000D的超虑膜超滤，收集滤液，滤液经0.22μm滤膜过滤，取样测定所得药液中氨基酸、肽的含量以及总氮含量，符合标准规定后，合并到B溶液中搅拌均匀，再经0.05μm孔径以下的滤膜过滤，除去溶液中菌、不溶性微粒，并将所得溶液分为三等份，分别标识为溶液C1、溶液C2、溶液C3；（3）将步骤（1）中制备的A溶液置于喷雾干燥机中，按喷雾干燥法，将A溶液由设备顶部的喷雾喷咀中与100级洁净压缩空气混合喷出，与设备底部进入的温度为150℃-190℃的100级洁净空气气液逆流混合，干燥制成120-150目多孔粒子干粉，所得干燥物料标识为D；（4）将磷脂原料、磷脂膜分子态稀释剂，溶解于适量乙醇溶液中，制成比重为1.0至1.2的溶液，用截留分子量1000D的滤膜超滤，再经0.05μm以下孔径滤膜过滤，并将所得溶液分为三等份，分别标识为溶液E1、溶液E2、溶液E3；（5）按沸腾包衣及沸腾干燥法操作，将步骤(3)中制备的干燥物料D置于沸腾包衣设备中，从沸腾包衣设备底部引入无水、无菌、无油、无0.001μm以上粒径的粒子的室温纯氮气流，在40℃-60℃温度下，对步骤(3)中制备的干燥物料D进行沸腾流化状态下三次包衣-干燥：第一次包衣-干燥：将溶液E1由泵输送到沸腾包衣设备中部的包衣喷咀中与经压缩的100级洁净纯氮气混合，呈喷雾状喷到机中沸腾高度为400mm-450mm的物料流最密集处，在沸腾物料粒子表面包衣，沸腾下的物料同时高度均匀地混合及分散，并极快地使溶剂挥发，形成多孔固体包衣薄层，待溶液E1包衣完成，沸腾干燥15分钟后，将溶液C1由泵输送到沸腾包衣设备中部的包衣喷咀中与无水、无菌、无油、无0.001μm以上粒径的粒子的100级洁净纯氮气流混合，按溶液E1包衣操作方法进行包衣，待溶液C1包衣完成，沸腾干燥20分钟，第一次包衣-干燥操作结束；第二次包衣-干燥：将溶液E2由泵输送到沸腾包衣设备中部的包衣喷咀中与经压缩的100级洁净纯氮气混合，呈喷雾状喷到机中沸腾高度为400mm-450mm的第一次包衣-干燥所得物料流最密集处，在沸腾物料粒子表面包衣，沸腾下的物料同时高度均匀地混合及分散，并极快地使溶剂挥发，形成多孔固体包衣薄层，待溶液E2包衣完成，沸腾干燥15分钟后，将溶液C2由泵输送到沸腾包衣设备中部的包衣喷咀中与无水、无菌、无油、无0.001μm以上粒径的粒子的100级洁净纯氮气流混合，按溶液E2包衣操作方法进行包衣，待溶液C2包衣完成，沸腾干燥20分钟，第二次包衣-干燥操作结束；第三次包衣-干燥：将溶液E3由泵输送到沸腾包衣设备中部的包衣喷咀中与经压缩的100级洁净纯氮气混合，呈喷雾状喷到机中沸腾高度为400mm-450mm的第二次包衣-干燥所得物料流最密集处，在沸腾物料粒子表面包衣，沸腾下的物料同时高度均匀地混合及分散，并极快地使溶剂挥发，形成多孔固体包衣薄层，待溶液E3包衣完成，沸腾干燥15分钟后，将溶液C3由泵输送到沸腾包衣设备中部的包衣喷咀中与无水、无菌、无油、无0.001μm以上粒径的粒子的100级洁净纯氮气流混合，按溶液E3包衣操作方法进行包衣，溶液C3包衣完成，沸腾干燥，所得包衣干燥物料中残留水份≤1.0％，残留的二巯丙醇≤0.2％时，第三次包衣-干燥操作结束；上述完成三次包衣-干燥操作所得物料标识为物料F；（6）在配料罐中加入适量注射用水，在罐内充纯氮气与罐外压持平，在100转/分钟的搅拌速度下，加热至60℃±5℃后，调整搅拌转速为500-700转/分钟，在30分钟至60分钟内把步骤（5）中制得的物料F，加入到配料罐中，加完物料F后，在罐内充氮气环境下，保持温度60℃±5℃，并在100转/分钟搅拌下保持60-120分钟，再在100转/分钟搅拌下，把配料罐中药液冷却到30℃-40℃后，向药液中依次加入总用量0.05％的十二烷基硫酸钠和总用量0.02％的亚硫酸钠，在100转/分钟搅拌下，使完全溶解，并调整药液pH值至6.9-7.5，所得药液标识为药液G；（7）保持步骤（6）中药液G温度在30℃±5℃范围内，在0.1-0.2Mpa氮气压下，用0.15μm滤膜过滤药液G，得到粒径小于150nm的脂质体药液，所得药液标识为药液H，取样测定所得药液中氨基酸、肽的含量以及总氮含量；（8）将所得药液H，按药剂学允许的剂量分装制成脑蛋白水解物组合药物注射液；（9）或将所得药液H，按药剂学允许的剂量分装，放入冻干机冻干，制成脑蛋白水解物组合药物的冻干针剂。

  本发明的脑蛋白水解物组合药物优势：

（1）本发明的脑蛋白水解物组合药物的脂质体包封率大于90％，其冻干针剂用输液水化溶解时，赋型剂迅速分散，并在溶液表面张力及表面活性剂作用下，形成粒径50nm-150nm范围单室纳米粒径的脂质体载药粒子均匀分散体系；在输液中6小时内泄漏率5％以下，不沉淀、不凝聚、不分层，分散均匀，提高了药物的稳定性和治疗指数。

（2）本发明的脑蛋白水解物组合药物制备工艺中，在配制脑蛋白水解物溶液时，依次加入了十二烷基硫酸钠和针用活性炭，以除去脑蛋白水解物溶液中的蛋白质等杂质，降低了毒副作用的风险性。

（3）用二代制剂的设备创新及二代制剂工艺的创新组合制备四代靶向制剂，使神秘的脂质体药物从实验室实施工业化稳定生产。开拓了脂质体组合药物的规范配方、规范制备方法，在廉价设备内生产，极大地节省厂房、设备、人力、时间、能源，也可实现三废合理排放。

（4）本发明制备的脂质体药物，磷脂膜中磷脂是以分子状态成固态溶液分散于磷脂膜稀释剂及表面活性剂中，且比超声波法、高压匀质法破碎磷脂粒子要小千万倍；在喷雾包衣-干燥中溶剂及二巯丙醇的挥发使磷脂膜层形成无数微小孔层，这比冷冻干燥法形成网状结构比表面积要大得多，因为冻干过程中固体中水分子升华挥发路程比包衣层路程长千万倍，使网状结构溶解凝结；由于磷脂膜层和木糖醇层是磷脂膜分散剂层，在水化时迅速、高度分散磷脂。这三种优势，比现有技术形成的脂质体粒子粒径更稳定、重现性更好地形成纳米粒径范围，且粒径呈正态分布。

（5）本发明组合药物由于选的磷脂是天然磷脂，是人体及微生物细胞膜组成物质，对病菌、病毒细胞、肿瘤细胞及血管壁破坏处有更好靶向释药功能，治疗指数高，所以原料药用量仅是二代药物的三分之一至五分之一，加上磷脂的包封，大大降低了脑蛋白水解物的不良反应。脑蛋白水解物的用量减少，加大磷脂用量，确保包封率大于90％，并有“封堵”加固脂质体作用的表面活性剂，所以泄漏率极低。

（6）本研究发现，现有技术的脑蛋白水解物药物，由于是用截留分子量10000D的超滤膜超滤，分子量在6000D-10000D的异型蛋白分子片段对人体有不良反应，本发明再用截留分子量6000D的超滤膜除去异型蛋白分子片段，大大降低不良反应几率和程度。

（7）本研究发现，由于多肽和氨基酸的胺基在体外易氧化或过氧化而引起不良反应，所以本发明加入抗氧化剂亚硫酸钠，防止氧化或过氧化反应，并且研究发现亚硫酸钠与脑蛋白水解物无药物间不良相互作用。

（8）本发明的制备工艺技术含量高，生产周期适中，并且产品质量稳定可控，有利于长期贮存。

（9）本发明制备的脑蛋白水解物组合药物的冻干针剂，质地疏松，外形饱满，不萎缩，色泽均匀，表面平整，在使用时溶解迅速。

 具体实施方式：

  实施例1

 原辅料用量：脑蛋白水解物溶液（以总氮计）6g、磷脂原料50g、二巯丙醇30g、亚硫酸钠0.1g、木糖醇40g、十二烷基硫酸钠0.5g、乙醇溶液适量、磷酸盐缓冲溶液适量、注射用水适量。

  配制成灌装前1000ml药液。

  制备方法如下：

  （1）将木糖醇溶解于适量磷酸盐缓冲液中，配制成10％的木糖醇磷酸盐缓冲溶液，将所配制溶液在121℃蒸汽灭菌20分钟，当溶液温度为20℃-25℃时，用截留分子量1000D的超滤膜的超滤柱过滤，过滤后，在室温下，等分超滤液得到的溶液，分为A、B溶液，将A、B溶液分别用5％-8％的氢氧化钠溶液调pH值至8.5，将A、B溶液分别经0.05μm以下孔径的滤膜过滤，再将A、B溶液分别用8％的盐酸溶液调pH值为6.9-7.5，备用；（2）脑蛋白水解物溶液用适量注射用水溶解完全，分别加入总用量0.02％的亚硫酸钠和总用量0.1％的十二烷基硫酸钠，搅拌使溶解，调pH值为6.9-7.5，加溶液总体积0.1％针用活性炭搅拌30-60分钟，用截留分子量10000D的超虑膜超滤，收集滤液，将滤液再用截留分子量6000D的超虑膜超滤，收集滤液，滤液经0.22μm滤膜过滤，取样测定所得药液中氨基酸、肽的含量以及总氮含量，符合标准规定后，合并到B溶液中搅拌均匀，再经0.05μm孔径以下的滤膜过滤，除去溶液中菌、不溶性微粒，并将所得溶液分为三等份，分别标识为溶液C1、溶液C2、溶液C3；（3）将步骤（1）中制备的A溶液置于喷雾干燥机中，按喷雾干燥法，将A溶液由设备顶部的喷雾喷咀中与100级洁净压缩空气混合喷出，与设备底部进入的温度为150℃-190℃的100级洁净空气气液逆流混合，干燥制成120-150目多孔粒子干粉，所得干燥物料标识为D；（4）将磷脂原料、磷脂膜分子态稀释剂，溶解于适量乙醇溶液中，制成比重为1.0至1.2的溶液，用截留分子量1000D的滤膜超滤，再经0.05μm以下孔径滤膜过滤，并将所得溶液分为三等份，分别标识为溶液E1、溶液E2、溶液E3；（5）按沸腾包衣及沸腾干燥法操作，将步骤(3)中制备的干燥物料D置于沸腾包衣设备中，从沸腾包衣设备底部引入无水、无菌、无油、无0.001μm以上粒径的粒子的室温纯氮气流，在40℃-60℃温度下，对步骤(3)中制备的干燥物料D进行沸腾流化状态下三次包衣-干燥：第一次包衣-干燥：将溶液E1由泵输送到沸腾包衣设备中部的包衣喷咀中与经压缩的100级洁净纯氮气混合，呈喷雾状喷到机中沸腾高度为400mm-450mm的物料流最密集处，在沸腾物料粒子表面包衣，沸腾下的物料同时高度均匀地混合及分散，并极快地使溶剂挥发，形成多孔固体包衣薄层，待溶液E1包衣完成，沸腾干燥15分钟后，将溶液C1由泵输送到沸腾包衣设备中部的包衣喷咀中与无水、无菌、无油、无0.001μm以上粒径的粒子的100级洁净纯氮气流混合，按溶液E1包衣操作方法进行包衣，待溶液C1包衣完成，沸腾干燥20分钟，第一次包衣-干燥操作结束；第二次包衣-干燥：将溶液E2由泵输送到沸腾包衣设备中部的包衣喷咀中与经压缩的100级洁净纯氮气混合，呈喷雾状喷到机中沸腾高度为400mm-450mm的第一次包衣-干燥所得物料流最密集处，在沸腾物料粒子表面包衣，沸腾下的物料同时高度均匀地混合及分散，并极快地使溶剂挥发，形成多孔固体包衣薄层，待溶液E2包衣完成，沸腾干燥15分钟后，将溶液C2由泵输送到沸腾包衣设备中部的包衣喷咀中与无水、无菌、无油、无0.001μm以上粒径的粒子的100级洁净纯氮气流混合，按溶液E2包衣操作方法进行包衣，待溶液C2包衣完成，沸腾干燥20分钟，第二次包衣-干燥操作结束；第三次包衣-干燥：将溶液E3由泵输送到沸腾包衣设备中部的包衣喷咀中与经压缩的100级洁净纯氮气混合，呈喷雾状喷到机中沸腾高度为400mm-450mm的第二次包衣-干燥所得物料流最密集处，在沸腾物料粒子表面包衣，沸腾下的物料同时高度均匀地混合及分散，并极快地使溶剂挥发，形成多孔固体包衣薄层，待溶液E3包衣完成，沸腾干燥15分钟后，将溶液C3由泵输送到沸腾包衣设备中部的包衣喷咀中与无水、无菌、无油、无0.001μm以上粒径的粒子的100级洁净纯氮气流混合，按溶液E3包衣操作方法进行包衣，溶液C3包衣完成，沸腾干燥，所得包衣干燥物料中残留水份≤1.0％，残留的二巯丙醇≤0.2％时，第三次包衣-干燥操作结束；上述完成三次包衣-干燥操作所得物料标识为物料F；（6）在配料罐中加入适量注射用水，在罐内充纯氮气与罐外压持平，在100转/分钟的搅拌速度下，加热至60℃±5℃后，调整搅拌转速为500-700转/分钟，在30分钟至60分钟内把步骤（5）中制得的物料F，加入到配料罐中，加完物料F后，在罐内充氮气环境下，保持温度60℃±5℃，并在100转/分钟搅拌下保持60-120分钟，再在100转/分钟搅拌下，把配料罐中药液冷却到30℃-40℃后，向药液中依次加入总用量0.05％的十二烷基硫酸钠和总用量0.02％的亚硫酸钠，在100转/分钟搅拌下，使完全溶解，并调整药液pH值至6.9-7.5，所得药液标识为药液G；（7）保持步骤（6）中药液G温度在30℃±5℃范围内，在0.1-0.2Mpa氮气压下，用0.15μm滤膜过滤药液G，得到粒径小于150nm的脂质体药液，所得药液标识为药液H，取样测定所得药液中氨基酸、肽的含量以及总氮含量；（8）将所得药液H，按药剂学允许的剂量分装制成脑蛋白水解物组合药物注射液；（9）或将所得药液H，按药剂学允许的剂量分装，放入冻干机冻干，制成脑蛋白水解物组合药物的冻干针剂。

  实施例2

 原辅料用量：脑蛋白水解物溶液（以总氮计）6g、磷脂原料55g、二巯丙醇38g、亚硫酸钠0.18g、木糖醇52g、十二烷基硫酸钠2g、乙醇溶液适量、磷酸盐缓冲溶液适量、注射用水适量。

  配制成灌装前1000ml药液。

 制备方法：同实施例1。

  实施例3

 原辅料用量：脑蛋白水解物溶液（以总氮计）6g、磷脂原料60g、二巯丙醇44g、亚硫酸钠0.25g、木糖醇64g、十二烷基硫酸钠4g、乙醇溶液适量、磷酸盐缓冲溶液适量、注射用水适量。

 配制成灌装前1000ml药液。

  制备方法：同实施例1。

  实施例4

  原辅料用量：脑蛋白水解物溶液（以总氮计）6g、磷脂原料65g、二巯丙醇52g、亚硫酸钠0.32g、木糖醇70g、十二烷基硫酸钠6g、乙醇溶液适量、磷酸盐缓冲溶液适量、注射用水适量。

  配制成灌装前1000ml药液。

 制备方法：同实施例1。

 实施例5

 原辅料用量：脑蛋白水解物溶液（以总氮计）6g、磷脂原料70g、二巯丙醇60g、亚硫酸钠0.5g、木糖醇80g、十二烷基硫酸钠8g、乙醇溶液适量、磷酸盐缓冲溶液适量、注射用水适量。

  配制成灌装前1000ml药液。

  制备方法：同实施例1。

 药效学验证试验：

  (1)动物选择：体重20-24克小鼠，雌雄不限。

 (2)训练方法：实验装置分明暗两室，两室之间有一圆洞。将每组30只小鼠面部背向洞口放入明室，同时启动计时器，动物穿过洞口进入暗室受到电击，取出小鼠，记录小鼠从放入明室至进入暗室遇到电击所需的时间，此即潜伏期。24小时后重做测验，记录进入暗室的动物数、潜伏期和5分钟内的电击次数。

  (3)记忆障碍动物模型：记忆再现缺失经训练的小鼠在重测验前半小时口服20％-40％酒精0.1ml/10g，可明显干扰记忆的再现。记录潜伏期、5分钟内电击次数。

 (4)给药

记忆再现缺失后给药：对照组设生理盐水空白组，模型不给药也不给生理盐水组，现有技术的脑蛋白水解物组分为1g/kg脑蛋白水解物中含氮物质、2g/kg脑蛋白水解物中含氮物质两个剂量；

本发明脑蛋白水解物组合药物组：1g/kg脑蛋白水解物中含氮物质、2g/kg脑蛋白水解物中含氮物质两个剂量。都是尾静脉给药，1ml生理盐水溶解，静注0.5ml药液。

  观察小鼠过敏及发热不良反应记录。

 实验结果：

项目	24小时后训练时潜伏期，电击次数	记忆再现缺失潜伏期，电击次数	药物过敏率（％）	药物发热率（％）
					不给药组	1秒，41次	1秒，46次	-	-
给生理盐水组	1秒，35次	1秒，42次	-	-
					现有脑蛋白水解物1g/kg组	10秒，22次	12秒，24次	17	17
现有脑蛋白水解物2g/kg组	12秒，20次	14秒，21次	33	33
					本发明脑蛋白水解物组合药物1g/kg组	18秒，9次	16秒，10次	3.1	6.2
本发明脑蛋白水解物组合药物2g/kg组	27秒，5次	25秒，9次	6.9	6.7

  已经根据优选实施例对本发明进行了描述。应当理解的是前面的描述和实施例仅仅是为了说明本发明而已，在不偏离本发明的精神和范围的前提下，本领域的技术人员可以设计出本发明的多种替代方案，其均应被理解为在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种脑蛋白水解物组合药物,其特征在于包含如下原辅料：脑蛋白水解物溶液、磷脂原料、磷脂膜分子态稀释剂、抗氧化剂、赋型剂、表面活性剂、乙醇溶液适量、磷酸盐缓冲溶液适量、注射用水适量。

2.根据权利要求1所述的脑蛋白水解物组合药物,其特征在于所述脑蛋白水解物组合药物所包含各原辅料在处方中的百分含量如下：脑蛋白水解物溶液（以总氮计）0.6％、磷脂原料1.0-8.0％、磷脂膜分子态稀释剂2.0-10.0％、抗氧化剂0.01-0.05％、赋型剂3.0-10.0％、表面活性剂0.01-1.0％、乙醇溶液适量、磷酸盐缓冲溶液适量、注射用水适量。

3.根据权利要求2所述的脑蛋白水解物组合药物,其特征在于所述脑蛋白水解物组合药物优选实施方式中，该脑蛋白水解物组合药物所包含各原辅料在处方中的百分含量如下：脑蛋白水解物溶液（以总氮计）0.6％、磷脂原料5.0-7.0％、磷脂膜分子态稀释剂3.0-6.0％、抗氧化剂0.01-0.05％、赋型剂4.0-8.0％、表面活性剂0.01-1.0％、乙醇溶液适量、磷酸盐缓冲溶液适量、注射用水适量。

4.根据权利要求1、2或3所述的脑蛋白水解物组合药物,其特征在于所述的磷脂原料平均分子量都定义以800D计算，磷脂原料是氢化大豆卵磷脂与多烯磷脂酰胆碱的组合物，摩尔数比为1-5∶0.5的组合物。

5.根据权利要求1、2或3所述的脑蛋白水解物组合药物,其特征在于所述的磷脂膜分子态稀释剂是二巯丙醇；所述的抗氧化剂包括但不限于亚硫酸钠、还原型谷胱甘肽中的一种或两种的组合物，优选亚硫酸钠；所述的赋型剂包括但不限于乳糖、甘露醇、木糖醇中的一种或多种的组合物，优选木糖醇；所述的表面活性剂包括但不限于十二烷基硫酸钠、烷基苯磺酸钠中的一种或两种的组合物，优选十二烷基硫酸钠；所述的乙醇溶液是浓度大于75％的乙醇水溶液；所述的磷酸盐缓冲溶液浓度为0.01-0.05M，pH为值5.0-8.0。

6.一种如权利要求1所述的脑蛋白水解物组合药物的制备方法，包括如下步骤：

（1）将木糖醇溶解于适量磷酸盐缓冲液中，配制成10％的木糖醇磷酸盐缓冲溶液，将所配制溶液在121℃蒸汽灭菌20分钟，当溶液温度为20℃-25℃时，用截留分子量1000D的超滤膜的超滤柱过滤，过滤后，在室温下，等分超滤液得到的溶液，分为A、B溶液，将A、B溶液分别用5％-8％的氢氧化钠溶液调pH值至8.5，将A、B溶液分别经0.05μm以下孔径的滤膜过滤，再将A、B溶液分别用8％的盐酸溶液调pH值为6.9-7.5，备用；

（2）脑蛋白水解物溶液用适量注射用水溶解完全，分别加入总用量0.02％的亚硫酸钠和总用量0.1％的十二烷基硫酸钠，搅拌使溶解，调pH值为6.9-7.5，加溶液总体积0.1％针用活性炭搅拌30-60分钟，用截留分子量10000D的超虑膜超滤，收集滤液，将滤液再用截留分子量6000D的超虑膜超滤，收集滤液，滤液经0.22μm滤膜过滤，取样测定所得药液中氨基酸、肽的含量以及总氮含量，符合标准规定后，合并到B溶液中搅拌均匀，再经0.05μm孔径以下的滤膜过滤，除去溶液中菌、不溶性微粒，并将所得溶液分为三等份，分别标识为溶液C1、溶液C2、溶液C3；

（3）将步骤（1）中制备的A溶液置于喷雾干燥机中，按喷雾干燥法，将A溶液由设备顶部的喷雾喷咀中与100级洁净压缩空气混合喷出，与设备底部进入的温度为150℃-190℃的100级洁净空气气液逆流混合，干燥制成120-150目多孔粒子干粉，所得干燥物料标识为D；

（4）将磷脂原料、磷脂膜分子态稀释剂，溶解于适量乙醇溶液中，制成比重为1.0至1.2的溶液，用截留分子量1000D的滤膜超滤，再经0.05μm以下孔径滤膜过滤，并将所得溶液分为三等份，分别标识为溶液E1、溶液E2、溶液E3；

（5）按沸腾包衣及沸腾干燥法操作，将步骤(3)中制备的干燥物料D置于沸腾包衣设备中，从沸腾包衣设备底部引入无水、无菌、无油、无0.001μm以上粒径的粒子的室温纯氮气流，在40℃-60℃温度下，对步骤(3)中制备的干燥物料D进行沸腾流化状态下三次包衣-干燥：第一次包衣-干燥：将溶液E1由泵输送到沸腾包衣设备中部的包衣喷咀中与经压缩的100级洁净纯氮气混合，呈喷雾状喷到机中沸腾高度为400mm-450mm的物料流最密集处，在沸腾物料粒子表面包衣，沸腾下的物料同时高度均匀地混合及分散，并极快地使溶剂挥发，形成多孔固体包衣薄层，待溶液E1包衣完成，沸腾干燥15分钟后，将溶液C1由泵输送到沸腾包衣设备中部的包衣喷咀中与无水、无菌、无油、无0.001μm以上粒径的粒子的100级洁净纯氮气流混合，按溶液E1包衣操作方法进行包衣，待溶液C1包衣完成，沸腾干燥20分钟，第一次包衣-干燥操作结束；第二次包衣-干燥：将溶液E2由泵输送到沸腾包衣设备中部的包衣喷咀中与经压缩的100级洁净纯氮气混合，呈喷雾状喷到机中沸腾高度为400mm-450mm的第一次包衣-干燥所得物料流最密集处，在沸腾物料粒子表面包衣，沸腾下的物料同时高度均匀地混合及分散，并极快地使溶剂挥发，形成多孔固体包衣薄层，待溶液E2包衣完成，沸腾干燥15分钟后，将溶液C2由泵输送到沸腾包衣设备中部的包衣喷咀中与无水、无菌、无油、无0.001μm以上粒径的粒子的100级洁净纯氮气流混合，按溶液E2包衣操作方法进行包衣，待溶液C2包衣完成，沸腾干燥20分钟，第二次包衣-干燥操作结束；第三次包衣-干燥：将溶液E3由泵输送到沸腾包衣设备中部的包衣喷咀中与经压缩的100级洁净纯氮气混合，呈喷雾状喷到机中沸腾高度为400mm-450mm的第二次包衣-干燥所得物料流最密集处，在沸腾物料粒子表面包衣，沸腾下的物料同时高度均匀地混合及分散，并极快地使溶剂挥发，形成多孔固体包衣薄层，待溶液E3包衣完成，沸腾干燥15分钟后，将溶液C3由泵输送到沸腾包衣设备中部的包衣喷咀中与无水、无菌、无油、无0.001μm以上粒径的粒子的100级洁净纯氮气流混合，按溶液E3包衣操作方法进行包衣，溶液C3包衣完成，沸腾干燥，所得包衣干燥物料中残留水份≤1.0％，残留的二巯丙醇≤0.2％时，第三次包衣-干燥操作结束；上述完成三次包衣-干燥操作所得物料标识为物料F；

（6）在配料罐中加入适量注射用水，在罐内充纯氮气与罐外压持平，在100转/分钟的搅拌速度下，加热至60℃±5℃后，调整搅拌转速为500-700转/分钟，在30分钟至60分钟内把步骤（5）中制得的物料F，加入到配料罐中，加完物料F后，在罐内充氮气环境下，保持温度60℃±5℃，并在100转/分钟搅拌下保持60-120分钟，再在100转/分钟搅拌下，把配料罐中药液冷却到30℃-40℃后，向药液中依次加入总用量0.05％的十二烷基硫酸钠和总用量0.02％的亚硫酸钠，在100转/分钟搅拌下，使完全溶解，并调整药液pH值至6.9-7.5，所得药液标识为药液G；

（7）保持步骤（6）中药液G温度在30℃±5℃范围内，在0.1-0.2Mpa氮气压下，用0.15μm滤膜过滤药液G，得到粒径小于150nm的脂质体药液，所得药液标识为药液H，取样测定所得药液中氨基酸、肽的含量以及总氮含量；

（8）将所得药液H，按药剂学允许的剂量分装制成脑蛋白水解物组合药物注射液；

（9）或将所得药液H，按药剂学允许的剂量分装，放入冻干机冻干，制成脑蛋白水解物组合药物的冻干针剂。