CN104470526A - 埃克替尼磷酸盐的新晶型及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及埃克替尼磷酸盐(即结构式I所示化合物)及其多晶型、制备方法及用途。

Description

埃克替尼磷酸盐的新晶型及其用途

技术领域

本发明涉及埃克替尼磷酸盐的新晶型、这些新晶型的制备方法、含所述新晶型的药物组合物，所述新晶型及药物组合物治疗癌症和与癌症相关疾病的用途。

背景技术

酪氨酸激酶受体是跨膜蛋白，其响应细胞外刺激并传播信号级联以控制细胞增殖、血管生成、细胞凋亡和细胞生长的其他重要功能。其中一类这样的受体是表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶。在人类的许多肿瘤中，这些受体过度表达，包括脑、肺、肝脏、膀胱、乳腺、头颈部、食道、胃肠道、卵巢、子宫颈或甲状腺的肿瘤。

EGFR表达于多种类型的肿瘤细胞，并和其同源配体(包括EGF，TGFα(即，转化生长因子-α)和神经调节蛋白)结合到胞外结构域而引起族成员之间的均聚或异聚。细胞质酪氨酸激酶结构域的接触变形(juxtaposition)导致每一个细胞质结构域内的特定酪氨酸、丝氨酸和苏氨酸残基的磷酸化作用。形成的磷酸酪氨酸作为各种适配分子和随后激活信号转导串联(RAS/有丝分裂原活化、PI3K/Akt和JAK/STAT)的对接位点触发细胞增殖。

多种分子和细胞生物学以及临床研究表明，EGFR酪氨酸激酶抑制剂可以阻断癌细胞的增殖、转移和其他与EGFR相关的信号转导，从而达到临床抗肿瘤治疗效应。两个化学结构上类似的口服EGFR酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼(易瑞沙，阿斯利康公司)于2003年被美国FDA批准用于晚期非小细胞肺癌的治疗(后来撤回)及盐酸厄洛替尼(特罗凯，罗氏及OSI公司)于2004年被美国FDA批准用于晚期非小细胞肺癌和胰腺癌的治疗。

许多具有药物活性的有机化合物可以以一种以上的三维晶体结构进行结晶。也就是说，化合物可以以不同的结晶形式进行结晶，这一现象(相同的化学结构，不同的分子排列结构)被称为同质多晶现象(polymorphism)，具有这种不同晶型结构的化合物被称为多晶型物。

特定有机药物化合物的多晶型物，由于各自的独特的三维结构，而具有不同的物理性质，如溶解性、吸湿性及稳定性等。但是，通常无法预测特定有机药物化合物是否会形成不同的结晶形式，更不可能预测晶型本身的结构和性质。探索可药用化合物的新晶型或多晶型物为提高医药产品的整体性能提供了机会，同时扩大了制剂科学家设计时可用的材料品种。由发现有用化合物的新晶型而扩大了制剂设计的材料品种，显然是有利的。

中国专利公开号CN1305860C第29页实施例15的化合物23披露了埃克替尼(自由碱)的结构，WO2010/003313披露了盐酸埃克替尼及其新的晶型。

发明内容

本发明涉及埃克替尼的磷酸盐(即，式Ⅰ化合物)，及其基本上纯的晶型，和其药学上可接受的盐。

一方面，本发明提供了埃克替尼磷酸盐的晶型I。

在一些实施方式中，埃克替尼磷酸盐的晶型I，其X射线粉末衍射图谱具有衍射角2θ约为6.4°、8.4°、12.8°、14.4°和19.0°±0.2°的特征峰。

在一些实施方式中，埃克替尼磷酸盐的晶型I，其X射线粉末衍射图谱具有衍射角2θ约为6.4°、8.4°、12.8°、14.4°、19.0°、20.7°、22.7°和25.7°±0.2°的特征峰。

在另一些实施方式中，埃克替尼磷酸盐的晶型I，其X‐射线粉末衍射图谱具有的特征峰以晶面间距表示为和

在另一些实施方式中，埃克替尼磷酸盐的晶型I中，其X‐射线粉末衍射图谱具有的特征峰以晶面间距表示为和

在另一些实施方式中，晶型I的X-射线粉末衍射图谱如图1所示。

一方面，本发明提供了埃克替尼磷酸盐的晶型Ⅱ。

在一些实施方式中，埃克替尼磷酸盐的晶型Ⅱ，其X射线粉末衍射图谱具有衍射角2θ为7.4°、13.8°、14.8°、16.4°和18.0°±0.2°的特征峰。

在一些实施方式中，埃克替尼磷酸盐的晶型Ⅱ，其X射线粉末衍射谱图具有衍射角2θ为7.4°、13.8°、14.8°、16.4°、18.0°、20.2°、22.1°和23.5°±0.2°的特征峰。

在一些实施方式中，埃克替尼磷酸盐的晶型Ⅱ，其X‐射线粉末衍射图谱具有的特征峰以晶面间距表示为和

在一些实施方式中，埃克替尼磷酸盐的晶型Ⅱ中，其X‐射线粉末衍射图谱具有的特征峰以晶面间距表示为和

在另一些实施方式中，晶型Ⅱ的X-射线粉末衍射图谱如图2所示。

一方面，本发明提供了埃克替尼磷酸盐的晶型III。

在一些实施方式中，埃克替尼磷酸盐的晶型III，其X射线粉末衍射图谱具有衍射角2θ为5.4°、7.9°、13.1°、16.2°和18.6°±0.2°的特征峰。

在一些实施方式中，埃克替尼磷酸盐的晶型III，其X射线粉末衍射图谱具有衍射角2θ为5.4°、7.9°、13.1°、16.2°、18.6°、19.7°、20.9°和24.0°±0.2°的特征峰。

在一些实施方式中，埃克替尼磷酸盐晶型III，其X‐射线粉末衍射图谱具有的特征峰以晶面间距表示为和

在一些实施方式中，埃克替尼磷酸盐晶型III，其X‐射线粉末衍射图谱具有的特征峰以晶面间距表示为和

在另一些实施方式中，晶型III的X-射线粉末衍射图谱如图3所示。

一方面，本发明提供了埃克替尼磷酸盐的晶型IV。

在一些实施方式中，埃克替尼磷酸盐的晶型IV，其X射线粉末衍射图谱具有衍射角2θ为6.1°、8.0°、14.7°、17.3°和18.3°±0.2°的特征峰。

在一些实施方式中，埃克替尼磷酸盐的晶型IV，其X射线粉末衍射图谱具有衍射角2θ为6.1°、8.0°、14.7°、17.3°、18.3°、20.2°、21.3°和23.8°±0.2°的特征峰。

在一些实施方式中，埃克替尼磷酸盐晶型IV，其X‐射线粉末衍射图谱具有的特征峰以晶面间距表示为和

在一些实施方式中，埃克替尼磷酸盐晶型IV，其X‐射线粉末衍射图谱具有的特征峰以晶面间距表示为和

在另一些实施方式中，晶型IV的X-射线粉末衍射图谱如图4所示。

本发明的埃克替尼磷酸盐的晶型I、晶型Ⅱ、晶型III或晶型IV的纯度≥85％，≥95％，或甚至≥99％。

又一方面，本发明提供了埃克替尼磷酸盐晶型的制备方法，包括埃克替尼和磷酸在介质中反应，及从介质中分离出埃克替尼磷酸盐晶体。埃克替尼和磷酸间的反应，例如可以在室温下进行。

在一些实施方式中，埃克替尼磷酸盐晶型的制备方法，包括室温条件下埃克替尼和磷酸在至少含有一种溶剂的介质中反应。

在一些制备方法的实施方式中，所述至少一种溶剂选自四氢呋喃(THF)、二氧六环、水或丙酮。

在一些制备方法的实施方式中，埃克替尼与磷酸反应的介质可以是水/THF或水/丙酮的混合溶剂。

在一些制备方法的实施方式中，水和THF或水和丙酮之间的体积比范围为1:10到1:30。

在一些制备方法的实施方式中，埃克替尼和磷酸反应的介质选自THF、二氧六环、水/THF或水/丙酮，并且其中从所述介质中分离出的埃克替尼磷酸盐的晶型为埃克替尼磷酸盐的晶型I。

在一些制备方法的实施方式中，所述至少一种溶剂选自异丙醇(IPA)、丙酮、丙烯腈(ACN)、2-丁酮或乙醇(EtOH)。

在一些制备方法的实施方式中，所述至少一种溶剂选自IPA、丙酮、ACN、2-丁酮或EtOH，并且其中从所述介质中分离出的埃克替尼磷酸盐晶型为埃克替尼磷酸盐的晶型Ⅱ。

在一些制备方法的实施方式中，磷酸和埃克替尼的摩尔比范围为1:1到2:1(例如，1:1，1.5:1，2:1)。

在一些制备方法的实施方式中，磷酸和埃克替尼的摩尔比为1:1。

在一些实施方式中，埃克替尼磷酸盐晶型的制备方法包括至少一个步骤，选自二甲基亚砜(DMSO)/乙酸乙酯(EtOAc)逆反溶剂结晶、DMSO/EtOAc或N,N-二甲基甲酰胺(DMF)/二氯甲烷(DCM)反溶剂结晶，或DMSO/乙酸异丙酯(IPAc)或DMSO/甲基叔丁基醚(MTBE)蒸发扩散。

在一些制备方法的实施方式中，DMSO/EtOAc或DMF/DCM反溶剂结晶步骤为：将埃克替尼磷酸盐溶解于DMSO或DMF配制成饱和溶液，向饱和溶液中加入EtOAc或DCM，搅拌至少2小时，分离得到埃克替尼磷酸盐晶体。

在一些制备方法的实施方式中，DMSO/EtOAc逆反溶剂结晶步骤为：将埃克替尼磷酸盐溶解于DMSO配制成饱和溶液，将该饱和溶液加入到EtOAc中，搅拌至少2小时，分离得到埃克替尼磷酸盐晶体。

在一些制备方法的实施方式中，DMSO/IPAc或DMSO/MTBE蒸发扩散步骤为：将埃克替尼磷酸盐溶解于DMSO在第一容器中配制成饱和溶液，将所述第一容器放于盛有IPAc或MTBE的第二容器中，在室温下诱导埃克替尼磷酸盐沉淀。

在一些实施方式中，用于上述埃克替尼磷酸盐的结晶可在单一溶剂或混合溶剂中进行。

用于结晶的合适溶剂选自，但不限于，低碳醇、酮、醚、酯、卤代烃、烷、卤代苯、脂肪腈及其他的芳香族溶剂。作为非限制性实施例，用于埃克替尼磷酸盐结晶的溶剂可以选自IPA、EtOAc、50％EtOH、水、DMF、甲醇、EtOH、丙酮及丙醇。

本发明披露的晶型可以从含有至少一种溶剂的合适的溶剂体系中结晶，可通过溶剂蒸发、冷却和/或通过加入反溶剂(本发明中所述埃克替尼磷酸盐溶解性较差的溶剂)，在溶剂体系中达到过饱和实现。

如本发明所披露的，结晶可使用或不使用晶种。

本发明披露的独特的晶型的结晶与特定条件下结晶过程的动力学和平衡性能有关。因此，本领域的技术人员会意识到，得到的晶型取决于结晶过程的动力学和热力学。在特定条件下(如，溶剂、温度、压力和本发明化合物的浓度)，一种晶型可能要比另一种晶型稳定(或实际上比任何其他晶型稳定)。然而，具有相对较低热力学稳定性的晶型可能动力学上有利。因此动力学之外的因素，例如时间、杂质分布、搅动、晶种的存在与否等也可能影响结晶的形式。

另一方面，本发明提供了一种药物组合物，包括治疗有效量的至少一种上述埃克替尼磷酸盐晶型和至少一种药学上可接受的赋形剂、辅料或载体。

术语“治疗有效量”是指一个化合物用于治疗对象时对于治疗一种疾病、或一种疾病或病症的至少一种临床症状时，足以影响对疾病、病症或症状的这种治疗的量。“治疗有效量”可以随着化合物，疾病、病症、和/或疾病或病症的症状，疾病、病症、和/或疾病或病症的症状的严重程度，被治疗患者的年龄，和/或被治疗患者的体重等变化。在任意可能的情况下，一个合适的剂量对那些本领域的技术人员可以是显而易见的，也可以是用常规实验确定的。在联合治疗的情况下，“治疗有效量”是指有效治疗疾病、病症或病状的联用对象的总量。

在一些实施方式中，药物组合物包括0.01重量％-99重量％的本发明的至少一种晶型。

在一些实施方式中，药物组合物包括1重量％-70重量％的本发明的至少一种晶型。

在一些实施方式中，药物组合物包括10重量％-50重量％的本发明的至少一种晶型。

所述“药学上可接受的载体”是指适合于期望药物制剂的常规的药用载体。例如：诸如水、各种有机溶剂等的稀释剂；诸如淀粉、蔗糖等的填充剂；诸如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的黏合剂；诸如甘油的湿润剂；诸如琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠的崩解剂；诸如季铵化合物吸收促进剂；诸如十六烷醇的表面活性剂；诸如高岭土和皂黏土的吸收载体；诸如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁和聚乙二醇等的润滑剂。另外还可以在药物组合物中加入其它药学上可接受的辅料如分散剂、稳定剂、增稠剂、络合剂、缓冲剂、渗透促进剂、聚合物、芳香剂、甜味剂和染料。优选使用适合期望剂型和期望给药方式的辅料。

在一些实施方式中，合适的药物载体选自水、各种有机溶剂和各种惰性稀释剂或填料。如有需要，所述药物组合物可含有一种或多种添加剂，如香料、粘合剂和赋形剂。对于口服给药，片剂可包含至少一种赋形剂选自，例如柠檬酸；诸如淀粉、藻酸及某些复合硅酸盐的各种分解剂；诸如蔗糖、明胶及阿拉伯胶的各种粘合剂。此外，诸如硬脂酸镁及滑石粉的润滑剂常用于制作片剂的填料。这些成分也可填充于软和硬的明胶胶囊中。当用于口服而且需要是水悬浮液时，其中的活性化合物可与选自各种甜味剂或香味剂、颜料或染料组合的至少一种成分混合。如有需要，可使用各种乳化剂或悬浮剂；还可使用诸如水、乙醇、丙二醇、甘油、或他们的组合的稀释剂。

在一些实施方式中，所述药物组合物还包括至少一种其他活性成分。

包括本发明的晶型的药物组合物可通过口服、鼻吸入、直肠、肠胃外或局部施用的方式对需要治疗的患者给药。用于口服时，药物组合物可以制成诸如片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂等的常规的固体剂型，诸如水或油悬浮剂的液体剂型或诸如糖浆、溶液、悬浮液等的其他液体剂型；用于肠胃外给药时，药物组合物可以制成溶液、水溶液、油性悬浮剂、冻干粉针等。作为非限制性的实施例，本发明的药物组合物的剂型选自片剂、包衣片剂、胶囊、栓剂、鼻喷雾剂或注射剂。在一些实施方式中，本发明的药物组合物的剂型选自片剂或胶囊。

在一些实施方式中，所述药物组合物适合于口服给药。

在一些实施方式中，所述药物组合物，可以诸如片剂、胶囊、丸剂、粉剂、持续释放剂、溶液和/或悬浮液的形式口服给药；以诸如无菌溶液、悬浮液或乳液的非肠道注射的形式给药；以诸如膏剂、乳膏或软膏的局部施用的形式给药；或者以诸如栓剂的直肠施用的形式给药。本发明的药物组合物可以是适合于精确剂量的单一施用的单位剂量形式。

在一些实施方式中，所述药物组合物的剂型为片剂或胶囊。

在一些实施方式中，本发明的药物组合物可以通过药学领域的常规方法制备。例如，将活性成分与一种或多种辅料混合，然后将其制成所需的剂型。

另一方面，本发明提供了使用所述埃克替尼磷酸盐晶型或其药物组合物在制备用于治疗或预防哺乳动物过度的非恶性增生疾病、胰腺炎、肾脏疾病、癌症、血管生成或血管生成相关疾病，或用于哺乳动物的胚胎细胞移植的药物的应用。

在一些实施方式中，所述过度的非恶性增生疾病是良性皮肤增生或良性前列腺增生。

在一些实施方式在，所述过度的非恶性增生疾病、胰腺炎、肾脏疾病、癌症、血管生成或血管生成相关疾病选自：肿瘤血管生成、慢性炎性疾病、皮肤病、糖尿病性视网膜病、早产儿视网膜病、与年龄有关的退化性染色、血管瘤、神经胶质瘤、卡波济内瘤(Kaposiinternal tumor)、卵巢癌、乳腺癌、肺癌、胰腺癌、淋巴瘤、前列腺癌、结肠癌和皮肤肿瘤及它们的并发症。

在一些实施方式中，所述皮肤病选自牛皮癣、硬皮病或糖尿病诱发的皮肤病；慢性炎性疾病选自类风湿性关节炎或动脉粥样硬化。

另一方面，本发明还提供了一种治疗哺乳类动物的恶性组织增生的方法。这种治疗方法包括对患有此增生疾病的哺乳动物患者给予治疗有效量的所述埃克替尼磷酸盐和/或其晶型和/或药物组合物。在某些实施方案中，该治疗方法还包括使用MMP(基质金属蛋白酶)抑制剂，VEGFR(血管内皮生长因子受体)激酶抑制剂，HER2抑制剂，VEGFR抗体药物和/或内皮抑素(Endostatin)药物。在其他一些实施方案中，该治疗方法还包括使用一种或多种抗肿瘤药物，如有丝分裂抑制剂，烷化剂，抗代谢物，肿瘤抗生素，生长因子抑制剂，细胞周期抑制剂，酶，酶抑制剂，生物反应调节剂，抗激素药物等。抗肿瘤药物可选自卡铂、紫杉醇、吉西他滨、甲氨蝶吟、5-氟尿嘧啶、喜树碱、环磷酰胺、氯化亚硝脲或其他药物。

在一些实施方式中，所述被治疗的哺乳动物是人类。

又一方面，本发明提供了一种治疗哺乳动物组织过度增生疾病的方法，包括对患有此疾病的患者给予治疗有效量的至少一种所述埃克替尼磷酸盐的晶型和/或其药物组合物。

在一些实施方式中，所述治疗方法进一步包括对患者给予至少一种其他的活性成分，其可选自MMP抑制剂、VEGFR激酶抑制剂、HER2抑制剂、VEGFR抗体药物或内皮抑素药物。

在一些实施方式中，所述治疗方法进一步包括对患者给予一种抗肿瘤剂，其选自有丝分裂抑制剂、烷基化剂、抗代谢物、肿瘤抗生素、生长因子抑制剂、细胞周期抑制剂、酶，酶抑制剂、生物反应调节剂或抗激素药物。

在一些实施方式中，本发明还提供了治疗与酪氨酸激酶功能紊乱相关疾病的方法，其包括对患有此疾病的患者给予治疗有效量的至少一种所述埃克替尼磷酸盐的晶型和/或其药物组合物。

在一些实施方式中，所述酪氨酸激酶功能紊乱相关疾病选自脑、肺、肝脏、膀胱、胸、头颈、食道、胃肠道、乳腺、卵巢、子宫颈或甲状腺肿瘤及它们的并发症。

在治疗方法的一些实施方式中，所述疾病选自脑癌、肺癌(例如非小细胞肺癌(NSCLC))、肾癌、骨癌、肝癌、膀胱癌、头颈部肿瘤、食道癌、胃癌、结肠癌、直肠癌、乳腺癌、卵巢癌、黑素瘤、皮肤癌、肾上腺癌、宫颈癌、淋巴瘤或甲状腺肿瘤及它们的并发症。

在一些实施方式中，上述治疗方法可以与任何化学治疗、生物治疗和/或放射治疗相结合。

在一些实施方式中，上述治疗方法可进一步包括在同一治疗中施用抗-EGFR抗体和抗-EGF抗体中的任何一个或两个。

在一些实施方式中，所述药物组合物中含有至少85％的埃克替尼磷酸盐的晶型。在非限制性的实施例中，所述药物组合物中含有至少85％的埃克替尼磷酸盐至少有一个选自上述埃克替尼磷酸盐的晶型。

在一些实施方式中，所述药物组合物中含有至少95％的磷酸埃克替尼磷酸盐的晶型。在非限制性的实施例中，所述药物组合物中含有至少95％的埃克替尼磷酸盐至少有一个选自上述埃克替尼磷酸盐的晶型。

在一些实施方式中，所述药物组合物中含有至少99％的磷酸埃克替尼磷酸盐的晶型。在非限制性的实施例中，所述药物组合物中含有至少99％的埃克替尼磷酸盐至少有一个选自上述埃克替尼磷酸盐的晶型。

本文所用的术语“基本上纯的”是指至少85重量％，优选至少95重量％，更优选99重量％的结构式I所示的化合物以一种本发明所述的晶型存在。

上述晶型主要的峰可再现并且在误差限度内(即所述值±0.2)。

本发明中，“具有如图1所示的X射线粉末衍射图谱”是指X-射线粉末衍射图示出的主要的峰如图1所示，其中主要的峰是指与图1中最高的峰(其相对强度定为100％)相比，相对强度超过10％，优选超过30％的那些峰。同样地，本发明中，具有如图2、图3或图4所示的X-射线粉末衍射图，分别指X-射线衍射图示出的主要的峰如图2、图3及图4所示，其中主要的峰是指与图2、图3及图4中最高的峰(其相对强度定为100％)相比，相对强度超过10％，优选超过30％的那些峰。

附图说明

图1：结构式I所示化合物晶型I的X-射线粉末衍射图谱；

图2：结构式I所示化合物晶型Ⅱ的X-射线粉末衍射图谱；

图3：结构式I所示化合物晶型III的X-射线粉末衍射图谱；

图4：结构式I所示化合物晶型IV的X-射线粉末衍射图谱；

图5：埃克替尼盐酸盐晶型I和结构式I所示化合物晶型Ⅱ的血药浓度-时间曲线图。

具体实施方式

本发明通过但不限于下述实施例，来进一步说明本发明。在这些实施例中使用的技术或方法，除非另有说明，为本领域的常规技术或方法。

埃克替尼磷酸盐的晶型的X-射线粉末衍射(XRPD)图谱是在拥有Empyrean控制台的PANalytical X-射线衍射系统上测得的。衍射峰位置用具有28.443°的2θ值的单晶硅进行校正。X-射线光源是一个Empyrean铜LEFX-射线管的K-alpha射线。

实施例1.晶型Ⅰ的制备

100g埃克替尼盐酸盐溶于300ml乙醇和200ml水的混合溶剂中。将11.2g氢氧化钠溶于100ml水中形成的溶液60℃下滴入上述混合溶液中，至pH值为13。反应液搅拌1小时，冷却至室温，析出固体。过滤并用纯净水洗涤，低于60℃真空干燥8小时得到90g埃克替尼。

室温下，埃克替尼溶液与磷酸溶液(摩尔比为1:1)在THF中反应制得埃克替尼磷酸盐的晶型I第1号样品。具体步骤：10mg埃克替尼溶于1ml THF,18.9μL磷酸溶液加入到3ml THF制成0.1mol/L磷酸溶液。0.26ml的0.1mol/L磷酸溶液加入到埃克替尼溶液，所得反应混合物搅拌24小时，分离得到晶型Ⅰ。

实施例2.晶型Ⅰ的制备

晶型I第2号样品的制备步骤和条件与实施例1相同，只是改变了反应溶液中磷酸与埃克替尼的摩尔比为1.5:1。

实施例3.晶型Ⅰ的制备

晶型I第3号样品的制备步骤和条件与实施例1相同，只是改变了反应溶液中磷酸与埃克替尼的摩尔比为2:1。

实施例4.晶型Ⅰ的制备

晶型I第4号样品的制备步骤如下：

10g埃克替尼盐酸盐溶于30ml IPA和20ml水的混合溶剂中，将1.6g氢氧化钾溶于10ml水形成的溶液加入到盐酸埃克替尼溶液中，至pH值为13。将反应混合物搅拌1-2小时，冷却至室温，析出固体。过滤并用纯净水洗涤，低于50℃下真空干燥8-10小时，得到7.9g埃克替尼。

室温下，摩尔比为1:1的埃克替尼溶液与磷酸溶液在二氧六环中依据以下步骤反应制得磷酸埃克替尼晶型I。首先10mg埃克替尼溶于1ml二氧六环中形成埃克替尼溶液。另外，18.9μL磷酸溶液加入到3ml二氧六环制成0.1mol/L磷酸溶液。0.26ml的0.1mol/L磷酸溶液加入到埃克替尼溶液，所得反应混合物搅拌24小时，分离得到晶型I。

实施例5.晶型Ⅰ的制备

晶型I第5号样品的制备步骤和条件与实施例4相同，只是改变了反应溶液中磷酸与埃克替尼的摩尔比为1.5:1。

实施例6.晶型Ⅰ的制备

晶型I第6号样品的制备步骤和条件与实施例4相同，只是改变了反应溶液中磷酸与埃克替尼的摩尔比为2:1。

实施例7.晶型Ⅰ的制备

首先，5g埃克替尼盐酸盐溶于20ml甲醇和15ml水的混合溶剂中，将1.5g碳酸钠溶于10ml水形成的溶液在40℃下滴加到盐酸埃克替尼溶液中，至pH值为13。将反应混合物搅拌1-2小时，冷却至室温，析出固体。过滤并用纯净水洗涤，低于60℃下真空干燥8-10小时，得到4.0g埃克替尼。

室温下，埃克替尼溶液与磷酸溶液(摩尔比1:1)在水/THF(体积比1:19)中依据下列步骤反应制得埃克替尼磷酸盐的晶型I第7号样品。首先10mg埃克替尼溶于1ml水/THF(体积比1:19)中形成埃克替尼溶液。另外，18.9μL磷酸溶液加入到3ml水/THF(体积比1:19)制成0.1mol/L磷酸溶液。0.26ml的0.1mol/L磷酸溶液加入到埃克替尼溶液，所得反应混合物搅拌24小时，分离得到晶型I。

实施例8.晶型Ⅰ的制备

晶型I第8号样品的制备步骤和条件与实施例7相同，只是改变了反应溶液中磷酸与埃克替尼的摩尔比为1.5:1。

实施例9.晶型Ⅰ的制备

晶型I第9号样品的制备步骤和条件与实施例7相同，只是改变了反应溶液中磷酸与埃克替尼的摩尔比2:1。

实施例10.晶型Ⅰ的制备

晶型I第10号样品的制备步骤和条件与实施例7相同，只是改变了反应溶剂中水与THF的体积比为1:10。

实施例11.晶型Ⅰ的制备

晶型I第11号样品的制备步骤和条件与实施例7相同，只是改变了反应溶液中水与四氢呋喃的体积比为1:30。

实施例12.晶型Ⅰ的制备

5g埃克替尼盐酸盐溶于20ml THF和15ml水的混合溶剂中，将1.9g碳酸钾溶于10ml水形成的溶液在50℃下滴加到盐酸埃克替尼溶液中，至pH值为13。反应混合物搅拌1-2小时，冷却至室温，析出固体。过滤并用纯净水洗涤，低于60℃下真空干燥8-10小时，得到4.0g埃克替尼。

室温下，埃克替尼溶液与磷酸溶液(摩尔比1:1)在水/丙酮(体积比1:19)中依据下列步骤反应制得埃克替尼磷酸盐的晶型I第12号样品。首先10mg埃克替尼溶于1ml水/丙酮(体积比1:19)中形成埃克替尼溶液。另外，18.9μL磷酸溶液加入到3ml水/丙酮(体积比1:19)制成0.1mol/L磷酸溶液。0.26ml的0.1mol/L磷酸溶液加入到埃克替尼溶液。所得反应混合物搅拌24小时，分离得到埃克替尼磷酸盐的晶型I。

实施例13.晶型Ⅰ的制备

晶型I第13号样品的制备步骤和条件与实施例12相同，只是改变了反应溶液中磷酸与埃克替尼的摩尔比为1.5:1。

实施例14.晶型Ⅰ的制备

晶型I第14号样品的制备步骤和条件与实施例12相同，只是改变了反应溶液中磷酸与埃克替尼的摩尔比为2:1。

实施例15.晶型Ⅰ的制备

晶型I第15号样品的制备步骤和条件与实施例12相同，只是改变了反应溶剂中水与丙酮的体积比为1:10。

实施例16.晶型Ⅰ的制备

晶型I第16号样品的制备步骤和条件与实施例12相同，只是改变了反应溶剂中水与丙酮的体积比为1:30。

实施例17.晶型Ⅱ的制备

室温下，通过埃克替尼(来自实施例1)溶液与磷酸溶液(摩尔比1:1)在IPA中依据下列步骤反应制得埃克替尼磷酸盐的晶型Ⅱ第1号样品。

首先10mg埃克替尼溶于1ml IPA中形成埃克替尼溶液。另外，18.9μL磷酸溶液加入到3ml IPA制成0.1mol/L磷酸溶液。0.26ml的0.1mol/L磷酸溶液加入到埃克替尼溶液，所得反应混合物搅拌24小时，分离得到埃克替尼磷酸盐的晶型Ⅱ。

实施例18.晶型Ⅱ的制备

晶型Ⅱ第2号样品的制备步骤和条件与实施例17相同，只是改变了反应溶液中磷酸与埃克替尼的摩尔比为1.5:1。

实施例19.晶型Ⅱ的制备

晶型Ⅱ第3号样品的制备步骤和条件与实施例17相同，只是改变了反应溶液中磷酸与埃克替尼的摩尔比为2:1。

实施例20.晶型Ⅱ的制备

晶型Ⅱ第4号样品的制备步骤和条件与实施例17相同，只是反应溶剂由丙酮代替IPA。

实施例21.晶型Ⅱ的制备

晶型Ⅱ第5号样品的制备步骤和条件与实施例20相同，只是改变了反应溶液中磷酸与埃克替尼的摩尔比为1.5:1。

实施例22.晶型Ⅱ的制备

晶型Ⅱ第6号样品的制备步骤和条件与实施例20相同，只是改变了反应溶液中磷酸与埃克替尼的摩尔比为2:1。

实施例23.晶型Ⅱ的制备

晶型Ⅱ第7号样品的制备步骤和条件与实施例17相同，只是反应溶剂由ACN代替IPA。

实施例24.晶型Ⅱ的制备

晶型Ⅱ第8号样品的制备步骤和条件与实施例23相同，只是改变了反应溶液中磷酸与埃克替尼的摩尔比为1.5:1。

实施例25.晶型Ⅱ的制备

晶型Ⅱ第9号样品的制备步骤和条件与实施例23相同，只是改变了反应溶液中磷酸与埃克替尼的摩尔比为2:1。

实施例26.晶型Ⅱ的制备

晶型Ⅱ第10号样品的制备步骤和条件与实施例17相同，只是反应溶剂由2-丁酮代替IPA。

实施例27.晶型Ⅱ的制备

晶型Ⅱ第11号样品的制备步骤和条件与实施例26相同，只是改变了反应溶液中磷酸与埃克替尼的摩尔比为1.5:1。

实施例28.晶型Ⅱ的制备

晶型Ⅱ第12号样品的制备步骤和条件与实施例26相同，只是改变了反应溶液中磷酸与埃克替尼的摩尔比为2:1。

实施例29.晶型Ⅱ的制备

晶型Ⅱ第13号样品的制备步骤和条件与实施例17相同，只是反应溶剂由EtOH代替IPA。

实施例30.晶型Ⅱ的制备

晶型Ⅱ第14号样品的制备步骤和条件与实施例29相同，只是改变了反应溶液中磷酸与埃克替尼的摩尔比为1.5:1。

实施例31.晶型Ⅱ的制备

晶型Ⅱ第15号样品的制备步骤和条件与实施例29相同，只是改变了反应溶液中磷酸与埃克替尼的摩尔比为2:1。

实施例32.晶型III的制备

DMSO/EtOAc反溶剂结晶步骤为：将10mg晶型Ⅱ溶于DMSO配制成饱和溶液。向饱和溶液中加入EtOAc。得到的溶液搅拌24小时，分离得到晶型III第1号样品。

实施例33.晶型III的制备

DMSO/EtOAc逆反溶剂结晶步骤为：将10mg晶型Ⅱ溶解于DMSO配制成饱和溶液，向5ml EtOAc中加入此饱和溶液以产生沉淀。得到的溶液搅拌24小时，分离得到晶型III第2号样品。

实施例34.晶型III的制备

DMSO/IPAc蒸发扩散步骤为：将10mg晶型Ⅱ溶解于DMSO配制成饱和溶液，置于3ml小玻璃瓶中。将3ml小玻璃瓶封于盛有4ml IPAc的20ml小玻璃瓶中，在室温下产生沉淀，分离得到晶型III第3号样品。

实施例35.晶型III的制备

DMSO/MTBE蒸发扩散步骤为：将10mg晶型Ⅱ溶解于DMSO配制成饱和溶液，置于3ml小玻璃瓶中。将3ml小玻璃瓶封于盛有4ml MTBE的20ml小玻璃瓶中，在室温下产生沉淀，分离得到晶型III第4号样品。

实施例36.晶型Ⅳ的制备

DMF/DCM反溶剂结晶步骤为：将10mg晶型Ⅱ溶于DMF配制成饱和溶液。向饱和溶液中加入DCM，得到的溶液搅拌24小时，产生沉淀，分离得到晶型Ⅳ。

实施例37.埃克替尼盐酸盐及埃克替尼磷酸盐晶型Ⅱ的药代动力学试验

药品与试剂：本研究中所使用的埃克替尼盐酸盐是WO2010/003313披露的晶型Ⅰ。埃克替尼磷酸盐晶型Ⅱ和埃克替尼盐酸盐均被磨成细颗粒。物质含量(纯度)不小于99％。羟甲基纤维素钠是医疗供应级。

试验动物：SD大鼠被随机分为埃克替尼盐酸盐组和晶型Ⅱ组，两组雌雄各半。

药物配制：各化合物的量称重然后加入羧甲基纤维素钠使试验化合物的浓度为0.5％。然后在水中加入固体混合物以制备其水悬浮液使其终浓度为10mg/ml。

给药和样品采集：每个悬浮液以在5ml/kg的剂量体积中埃克替尼的等效剂量为50mg/kg口服给药于禁食SD大鼠。在试验化合物给药后的0.5、1、1.5、2、4、6、8和24小时的时间间隔采集0.4ml血液于EDTA-K预抗凝管中，以3000rpm离心10分钟，收集120μl血浆，冷藏。

样品通过HPLC分析。色谱条件下利用C18-硅烷键合硅作为固定相，用0.02mmol/L的磷酸二氢钠/丙烯腈溶液(40:60，用氢氧化钠调节pH至5.0)作为流动相，检测波长334nm。埃克替尼盐酸盐晶型Ⅰ和埃克替尼磷酸盐晶型Ⅱ的PK的对比如表1和图5所示。可以得出结论：埃克替尼磷酸盐晶型Ⅱ的生物利用度高于埃克替尼盐酸盐晶型Ⅰ。

表1

实施例38.硬胶囊的配方

作为一个口服药的明确具体化，大约100mg实施例1-37记载的多晶型用充分细微划分的乳糖调配得到总量约为580mg至590mg去填充0型硬胶囊。

虽然本发明已经结合实施例连同参考附图进行了详细的描述，但是值得注意的是，各种变化和修改对本领域技术人员而言都是显而易见的。这样的变化和修改都应理解为包括在本发明所附权利要求的范围内。

Claims (35)

1.结构式I所示化合物埃克替尼磷酸盐的晶型，

2.根据权利要求1所述的晶型，其特征在于，所述晶型为晶型Ⅰ，其X射线粉末衍射谱图具有衍射角2θ为6.4°、8.4°、12.8°、14.4°和19.0°±0.2°的特征峰。

3.根据权利要求2所述的晶型，其特征在于，其X射线粉末衍射谱图具有衍射角2θ为6.4°、8.4°、12.8°、14.4°、19.0°、20.7°、22.7°和25.7°±0.2°的特征峰。

4.根据权利要求2或3任一项所述的晶型，其特征在于，具有如图1所示的X-射线粉末衍射图。

5.根据权利要求1所述的晶型，其特征在于，所述晶型为晶型Ⅱ，其X射线粉末衍射谱图具有衍射角2θ为7.4°、13.8°、14.8°、16.4°和18.0°±0.2°的特征峰。

6.根据权利要求5所述的晶型，其特征在于，其X射线粉末衍射谱图具有衍射角2θ为7.4°、13.8°、14.8°、16.4°、18.0°、20.2°、22.1°和23.5°±0.2°的特征峰。

7.根据权利要求5或6任一项所述的晶型，其特征在于，具有如图2所示的X-射线粉末衍射图。

8.根据权利要求1所述的晶型，其特征在于，所述晶型为晶型Ⅲ，其X射线粉末衍射谱图具有衍射角2θ为5.4°、7.9°、13.1°、16.2°和18.6°±0.2°的特征峰。

9.根据权利要求8所述的晶型，其特征在于，其X射线粉末衍射谱图具有衍射角2θ为5.4°、7.9°、13.1°、16.2°、18.6°、19.7°、20.9°和24.0°±0.2°的特征峰。

10.根据权利要求8或9任一项所述的晶型，其特征在于，具有如图3所示的X-射线粉末衍射图。

11.根据权利要求1所述的晶型，其特征在于，所述晶型为晶型Ⅳ，其X射线粉末衍射谱图具有衍射角2θ为6.1°、8.0°、14.7°、17.3°和18.3°±0.2°的特征峰。

12.根据权利要求11所述的晶型，其特征在于，其X射线粉末衍射谱图具有衍射角2θ为6.1°、8.0°、14.7°、17.3°、18.3°、20.2°、21.3°和23.8°±0.2°的特征峰。

13.根据权利要求11或12任一项所述的晶型，其特征在于，具有如图4所示的X-射线粉末衍射图。

14.一种制备埃克替尼磷酸盐晶型的方法，其特征在于所述方法包括：

a)埃克替尼溶液与磷酸溶液在THF、二氧六环、水/THF或水/丙酮溶液中反应得到权利要求2-4任一项所述的晶型；或

b)埃克替尼溶液与磷酸溶液在IPA、丙酮、ACN、2-丁酮或乙醇溶液中反应得到权利要求5-7任一项所述的晶型；或

c)至少一步选自：使用逆反溶剂或反溶剂DMSO/EtOAc进行结晶，或使用DMSO/IPAc或DMSO/MTBE进行蒸发扩散而得到权利要求8-10任一项所述的晶型；或

d)至少一步选自使用反溶剂DMF/DCM进行结晶而得到权利要求11-13任一项所述的晶型。

15.根据权利要求14所述的制备方法，其特征在于：

(a)其中步骤a)、b)、c)或d)的反应温度为室温；或

(b)其中步骤a)中水和THF或水和丙酮的体积比范围为1：10到1:30；或

(c)其中步骤a)或b)中磷酸和埃克替尼的摩尔比范围为1:1到2:1。

16.根据权利要求14或15所述的制备方法，其特征在于磷酸和埃克替尼的摩尔比为1:1。

17.根据权利要求14所述的制备方法，其特征在于步骤c)或d)包含：

(i)将埃克替尼磷酸盐溶解于DMSO中配制成饱和溶液，加入EtOAc，搅拌至少2小时，分离得到权利要求8-10任一项所述的晶型；或

(ii)将埃克替尼磷酸盐溶解于DMSO中配制成饱和溶液，将该饱和溶液加入到EtOAc中，搅拌至少2小时，分离得到权利要求8-10任一项所述的晶型；或

(iii)将埃克替尼磷酸盐溶解于DMSO在第一容器中配制成饱和溶液，将所述第一容器放于盛有IPAc或MTBE的第二容器中，在室温下诱导沉淀得到权利要求8-10任一项所述的晶型；或

(iv)将埃克替尼磷酸盐溶解于DMF中配制成饱和溶液，加入DCM，搅拌至少2小时，分离得到权利要求11-13任一项所述的晶型。

18.一种药物组合物，其特征在于，含有治疗有效量的权利要求1-13任一项所述的晶型和药学上可接受的赋形剂、辅料或载体。

19.根据权利要求18所述的药物组合物，其特征在于，权利要求1-13任一项所述的晶型纯度为≥85重量％。

20.根据权利要求18所述的药物组合物，其特征在于，权利要求1-13任一项所述的晶型纯度为≥99重量％.

21.根据权利要求18-20任一项所述的药物组合物，其特征在于，含有至少一种其他活性成分。

22.根据权利要求18-21任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物适于口服给药。

23.根据权利要求18-22任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物为片剂或胶囊。

24.根据权利要求18-23任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含0.01重量％-99重量％的权利要求1-13任一项所述晶型。

25.根据权利要求24任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含10重量％-50重量％的权利要求1-13任一项所述晶型。

26.权利要求1-13任一项所述晶型或权利要求18-25任一项所述药物组合物在制备用于治疗或预防哺乳动物的过度的非恶性增生疾病、胰腺炎、肾脏疾病、癌症、血管生成或血管生成相关疾病，或用于哺乳动物胚胎细胞移植药物的应用。

27.根据权利要求26的应用，其特征在于，所述过度的非恶性增生疾病是良性皮肤增生或良性前列腺增生。

28.根据权利要求26或27任一项所述的应用，其特征在于，所述过度的非恶性增生疾病、胰腺炎、肾脏疾病、癌症、血管生成或血管生成相关疾病选自：肿瘤血管生成、慢性炎性疾病、皮肤病、糖尿病性视网膜病、早熟视网膜病、与年龄相关的退化性染色、血管瘤、神经胶质瘤、卡波济内瘤(Kaposiinternal tumor)、卵巢癌、乳腺癌、肺癌、胰腺癌、淋巴瘤、前列腺癌、结肠癌及皮肤肿瘤及它们的并发症。

29.根据权利要求28所述的应用，其特征在于，所述皮肤病选自牛皮癣、硬皮病或糖尿病诱发的皮肤病；慢性炎性疾病选自类风湿性关节炎或动脉粥样硬化。

30.一种治疗哺乳类动物组织的过度的增生的方法，其包括对患有此疾病的患者施用治疗有效量的权利要求1-13任一项所述晶型和/或权利要求18-25任一项所述药物组合物。

31.根据权利要求30所述的方法，进一步包括对患者施用至少一种其他活性药物，所述的活性药物选自基质金属蛋白酶抑制剂，血管内皮生长因子受体激酶抑制剂，HER2抑制剂，血管内皮生长因子受体抗体药物或内皮抑素药物。

32.根据权利要求30或31所述的治疗方法，进一步包括对患者施用抗肿瘤剂，其选自有丝分裂抑制剂，烷基化剂，抗代谢物，肿瘤抗生素类，生长因子抑制剂，细胞周期抑制剂，酶，酶抑制剂，生物反应调节剂，抗激素类药。

33.一种治疗与酪氨酸激酶功能失调所致相关疾病的方法，其包括对患有此疾病的患者施用治疗有效量的权利要求1-13任一项所述晶型和/或权利要求18-25任一项所述药物组合物。

34.根据权利要求33所述的治疗方法，所述酪氨酸激酶功能失调所致相关疾病选自脑、肺、肝脏、膀胱、胸、头颈部、食道、胃肠道、乳腺、卵巢、子宫颈或甲状腺肿瘤及它们的并发症。

35.根据权利要求33或34所述的治疗方法，所述疾病选自脑癌、肺癌、肾癌、骨癌、肝癌、膀胱癌、胸、头颈部肿瘤、食道癌、胃癌、结肠癌、直肠癌、乳腺癌、卵巢癌、黑素瘤、皮肤癌、肾上腺癌、宫颈癌、淋巴瘤或甲状腺肿瘤及它们的并发症。