CN104434890A - 扁桃酸的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了扁桃酸的新用途，包括结构如式1所示的化合物或其药学上可接受的衍生物在制备预防艾滋病的药物中的应用，其中，Ra为-OH或环戊基；R1为一个或多个任选卤代基或羟基或羰基；R2为一个或多个任选羟基取代基或C1-2烷氧基；R3为-CH2-或-(CH2)2-。

Description

扁桃酸的用途
技术领域
本发明涉及药物治疗领域。更具体地涉及扁桃酸的新用途。
背景技术
意外妊娠和包括艾滋病病毒（HIV）在内的性传播感染，STIs构成了威胁女性生殖健康的2大问题。2010年的的统计结果显示，全球每年有超过2.2亿对夫妇不能获得有效的避孕措施，导致8000万例意外妊娠、4500万例流产发生，其中因不安全流产导致的疾病与死亡的分别有500万例和70000例。根据联合国艾滋病规划署（USAIDS）、世界卫生组织（WHO）联合报告截止2010年底，全球已累计HIV感染者超过3400万例，2010年HIV新发感染有270万，卫生部2011年的中国艾滋病疫情评估报告显示，估计中国存活的HIV感染者和艾滋病患者78万例，性传播占63.9%，性传播已成为艾滋病传播的主要途径。值得注意的是，在2011年新发HIV感染的39183例中，经性传播的感染案例占到总数的80%以上，这意味着随着我国性观念西化及性开放程度的加深，艾滋病离普通大众的距离愈来愈近，其从高危人群向普通人群扩散的趋势越发显著，这样的疫情对保障我国的人口健康和经济社会发展势必产生巨大的影响。
在过去的10年间，节育技术的研究与应用从单纯注重杀精效果趋向使女性能主动采用避孕兼顾预防包括HIV在内的STIs双重保护作用的新技术。其中，一类被称为杀微生物剂（microbicides）的药物研究开发已被USAIDS和WHO定为全球优先发展的策略。
本领域迫切需要提供避孕型杀微生物剂，能兼顾避孕和预防艾滋病功能。
发明内容
本发明旨在提供一种女性可自主使用的新的杀微生物剂。
在本发明的第一方面，提供了一种结构如式1所示的化合物或其药学上可接受的衍生物在制备预防艾滋病的药物中的应用，
其中，Ra为-OH或环戊基；
R1为一个或多个任选卤代基或羟基或羰基；
R2为一个或多个任选羟基取代基或C1-2烷氧基；
R3为-CH2-或-(CH2)2-。
在另一优选例中，结构如式1所示的化合物或其药学上可接受的衍生物选自DL-扁桃酸，对烷氧基扁桃酸，3-甲氧基-4-羟基扁桃酸，3-乙氧基-4-羟基扁桃酸，对羟基-和DL-对羟基扁桃酸，3,4-二羟基扁桃酸，2-羟基-3-甲氧基-5-扁桃酸，硼酸扁桃酸钠盐，邻羟基扁桃酸钠盐，邻氮扁桃酸，R-邻氮扁桃酸及其醇酯，扁桃酸甲酯，扁桃酸乙酯，2-环戊基扁桃酸甲酯，阿托莫西汀和托莫西汀扁桃酸盐，3,4-二羟基扁桃酸烷基酰胺，扁桃酸酰胺，或式1所示的化合物与酸所形成的衍生物。
在另一优选例中，所述式1所示的化合物与下述任意一种酸形成衍生物：醋酸、乳酸、硼酸、枸橼酸、酒石酸和牛磺酸。
在另一优选例中，所述药物中含有治疗有效量的式1所示的化合物或其药学上可接受的衍生物和药学上可接受的载体；更佳地，所述药物中还含有蛋白酶抑制剂，和/或逆转录酶抑制剂；最佳地，所述药物兼备避孕和预防艾滋病的作用。
在另一优选例中，所述药物的剂型选自凝胶、乳膏、片剂、栓剂、药膜海绵或阴道环。
在本发明的第二方面，提供了精子顶体反应抑制剂的用途，用于制备避孕药物组合物；所述精子顶体反应抑制剂为结构如式1所示的化合物或其药学上可接受的衍生物。
在另一优选例中，所述药物组合物还用于：
抑制精子线粒体酶；
抑制精子能量代谢；
诱导“精子稳态”。
在另一优选例中，所述药物组合物中含有治疗有效量的式1所示的化合物或其药学上可接受的衍生物和药学上可接受的载体。
在另一优选例中，所述的结构如式1所示的化合物或其药学上可接受的衍生物选自DL-扁桃酸，对烷氧基扁桃酸，3-甲氧基-4-羟基扁桃酸，3-乙氧基-4-羟基扁桃酸，对羟基-和DL-对羟基扁桃酸，3,4-二羟基扁桃酸，2-羟基-3-甲氧基-5-扁桃酸，硼酸扁桃酸钠盐，邻羟基扁桃酸钠盐，邻氮扁桃酸，R-邻氮扁桃酸及其醇酯，扁桃酸甲酯，扁桃酸乙酯，2-环戊基扁桃酸甲酯，阿托莫西汀和托莫西汀扁桃酸盐，3,4-二羟基扁桃酸烷基酰胺，扁桃酸酰胺，或式1所示的化合物与酸所形成的衍生物。
在另一优选例中，所述式1所示的化合物与下述任意一种酸形成衍生物：醋酸、乳酸、硼酸、枸橼酸、酒石酸和牛磺酸。
在另一优选例中，所述避孕药物组合物为女性外用避孕药物组合物；更佳地，所述药物组合物的剂型选自凝胶、乳膏、片剂、栓剂、药膜海绵或阴道环。
在本发明的第三方面，提供了精子固定剂的用途，用于制备避孕药物组合物；所述精子固定剂为结构如式1所示的化合物或其药学上可接受的衍生物。
在另一优选例中，所述的精子固定剂为可诱导“精子稳态”的物质。
在另一优选例中，所述的精子固定剂为抑制精子线粒体酶。
在另一优选例中，所述的精子固定剂为可抑制精子能量代谢的物质。
在另一优选例中，所述药物组合物还用于：
抑制精子线粒体酶；
抑制精子能量代谢；
诱导“精子稳态”。
在另一优选例中，所述药物组合物中含有治疗有效量的式1所示的化合物或其药学上可接受的衍生物和药学上可接受的载体。
在另一优选例中，所述的结构如式1所示的化合物或其药学上可接受的衍生物选自DL-扁桃酸，对烷氧基扁桃酸，3-甲氧基-4-羟基扁桃酸，3-乙氧基-4-羟基扁桃酸，对羟基-和DL-对羟基扁桃酸，3,4-二羟基扁桃酸，2-羟基-3-甲氧基-5-扁桃酸，硼酸扁桃酸钠盐，邻羟基扁桃酸钠盐，邻氮扁桃酸，R-邻氮扁桃酸及其醇酯，扁桃酸甲酯，扁桃酸乙酯，2-环戊基扁桃酸甲酯，阿托莫西汀和托莫西汀扁桃酸盐，3,4-二羟基扁桃酸烷基酰胺，扁桃酸酰胺，或式1所示的化合物与酸所形成的衍生物。
在另一优选例中，所述式1所示的化合物与下述任意一种酸形成衍生物：醋酸、乳酸、硼酸、枸橼酸、酒石酸和牛磺酸。
在另一优选例中，所述避孕药物组合物为女性外用避孕药物组合物；更佳地，所述药物组合物的剂型选自凝胶、乳膏、片剂、栓剂、药膜海绵或阴道环。
据此，本发明提供了一种女性可自主使用的新的杀微生物剂。
附图说明
图1显示了扫描电镜结果；其中，A为1mg/ml扁桃酸处理后精子；B为1mg/ml N-9处理后精子。
具体实施方式
发明人发现了扁桃酸的一系列新特性，由此将其作为活性成分制备一种兼备避孕的杀微生物剂。在此基础上，完成了本发明。
如本文所用，“扁桃酸”是指一种结构如式1所示的化合物或其药学上可接受的衍生物：
其中，Ra为-OH或环戊基；
R1为一个或多个任选卤代基或羟基或羰基；
R2为一个或多个任选羟基取代基或C1-2烷氧基；
R3为-CH2-或-(CH2)2-。
较佳地，所述的式1化合物或其药学上可接受的衍生物选自DL-扁桃酸，对烷氧基扁桃酸，3-甲氧基-4-羟基扁桃酸，3-乙氧基-4-羟基扁桃酸，对羟基-和DL-对羟基扁桃酸，3,4-二羟基扁桃酸，2-羟基-3-甲氧基-5-扁桃酸，硼酸扁桃酸钠盐，邻羟基扁桃酸钠盐，邻氮扁桃酸，R-邻氮扁桃酸及其醇酯，扁桃酸甲酯，扁桃酸乙酯，2-环戊基扁桃酸甲酯，阿托莫西汀，托莫西汀扁桃酸盐，3,4-二羟基扁桃酸烷基酰胺，扁桃酸酰胺，或式1所示的化合物与酸所形成的衍生物。
所述式1所示的化合物与下述任意一种酸形成衍生物：醋酸、乳酸、硼酸、枸橼酸、酒石酸和牛磺酸。
如本文所用，“精子稳态（spermostasis）”是指精子运动障碍，例如但不限于，精子尾部活动迟钝，头部左右摇摆，原地打转，失去进行性直线运动的能力。
如本文所用，“精子的活率（viability）”是指以精子的总量计，其中活的然而不动的精子的百分比。
如本文所用，术语“药学上可接受的载体”指用于治疗剂给药的载体，包括各种赋形剂和稀释剂。该术语指这样一些药剂载体：它们本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性。合适的载体是本领域普通技术人员所熟知的。在Remington’s Pharmaceutical Sciences(Mack Pub.Co.，N.J.1991)中可找到关于药学上可接受的赋形剂的充分讨论。在组合物中药学上可接受的载体可含有液体，如水、盐水、甘油和乙醇。另外，这些载体中还可能存在辅助性的物质，如填充剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、泡腾剂、润湿剂或乳化剂、矫味剂、pH缓冲物质等。
如本文所用，术语“含有”或“包括”包括了“包含”、“基本上由……构成”、和“由……构成”。
如本文所用，术语“基本上由……构成”指在组合物中，除了含有必要成分或必要组份之外，还可含有少量的且不影响有效成分的次要成分和/或杂质。
如本文所用，术语“有效量”或“治疗有效量”是指可对人和/或动物产生功能或活性的且可被人和/或动物所接受的量。
如本文所用，术语“杀微生物剂”是指一类性交前置入阴道、宫颈或直肠，可有效预防HIV/STIs的制剂，可分为有避孕和无避孕作用两类。
在很低的浓度0.02-0.1mg/ml范围内，扁桃酸与人类精子接触20秒-5分钟即可诱发精子稳态（spermostasis），扁桃酸有阻止精子运动（sperm movement）的能力，但不影响精子的活率（viability）。
扁桃酸诱发“精子稳态”的效果明显，而且固定精子运动而不可逆转，是一种精子固定剂（spermostatic agent）。正由于这种优越性，扁桃酸具有更高的安全性，在避孕的同时，对阴道粘膜上皮细胞无破坏作用。因此扁桃酸很有潜力开发作为一种新型外用避孕剂。
发明人还发现扁桃酸在精子质膜完整的条件下可诱发人类精子顶体反应，而市售外用杀精剂壬苯醇醚（N-9）可灭活人精子。两者可共同表现为使精子失去受精能力。但它们的作用机制是不同的，提示扁桃酸作用新靶点在精子顶体部位，是精子顶体反应的抑制剂。
发明人发现，扁桃酸可诱导“精子稳态”是与线粒体损伤有关，在扁桃酸作用下，线粒体功能丧失的活精子可表现为“精子稳态”提示扁桃酸作用新靶点在精子中段的线粒体部位是精子能量代谢的抑制剂。
发明人以N-9作为阳性对照物，比较了扁桃酸的抗HIV-1活性及作用机制，结果经合胞体抑制实现和感染细胞上清液中HIV-1p24抗原检测说明了扁桃酸有抗HIV-1活性，高浓度的扁桃酸有微弱的直接杀病毒作用，扁桃酸不抑制重组HIV-1逆转录酶的活性，表明其靶点不在病毒的逆转录酶，而是阻断感染细胞与正常细胞间融合的作用，提示扁桃酸的作用靶点或靶点之一为阻断病毒进入细胞，是一种作用于新靶点的抗HIV-1药物。扁桃酸对多种细胞系的毒性小，其中对人阴道上皮细胞系VK2/E6E7的细胞毒性最小。
将扁桃酸作为抗HIV-1的药物的活性成分或将其作为兼备避孕的杀微生物剂时，将阴道外用安全有效量的扁桃酸施用于人，其中该安全有效量通常约80-100mg/50kg/次。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。
虽然用以界定本发明较广范围的数值范围与参数皆是约略的数值，此处已尽可能精确地呈现具体实施例中的相关数值。然而，任何数值本质上不可避免地含有因个别测试方法所致的标准偏差。在此处，“约”通常是指实际数值在一特定数值或范围的正负10%、5%、1%或0.5%之内。或者是，“约”一词代表实际数值落在平均值的可接受标准误差之内，视本领域技术人员的考虑而定。除了实验例之外，或除非另有明确的说明，当可理解此处所用的所有范围、数量、数值与百分比（例如用以描述材料用量、时间长短、温度、操作条件、数量比例及其它相似者）均经过“约”的修饰。因此，除非另有相反的说明，本说明书与附随权利要求书所揭示的数值参数皆为约略的数值，且可视需求而更动。至少应将这些数值参数理解为所指出的有效位数与套用一般进位法所得到的数值。
本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。
本发明的主要优点在于：
1、首次发现扁桃酸具有抗HIV活性的作用。
2、首次发现可以将扁桃酸作为活性成分开发兼具避孕作用的杀微生物剂。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例、或份数按重量计。
本发明中的重量体积百分比中的单位是本领域技术人员所熟知的，例如是指在100毫升的溶液中溶质的重量。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
（一）DL-扁桃酸抑制精子运动的特征
实验例1
DL-扁桃酸对人类精子制动作用
1.1人精液样品，符合WHO标准的正常精液，在0.5h内液化，精液量>2ml，pH为7.0-7.7，精子活率＞80%。该研究经伦理委员会批准，精液标本捐献者知情同意。
1.2精子上游法获得高活力精子
将精液样品用EBSS（含0.4%牛血清白蛋白）300g离心5min，洗涤。取沉淀精液，小心加在EBSS培养液下方，并将试管倾斜45°，在37℃CO2培养箱中孵育1h。取上层1.0ml培养液，300×g离心5min，弃上清。用1.0ml EBSS重悬精子沉淀团，可获高活力精子。用EBSS液调整精子浓度1×107/ml。
1.3精子的制动试验
分别取50μl高活力精子置于含50μl37℃预热的不同浓度扁桃酸（空白、0.5mg/ml、0.75mg/ml、1.0mg/ml）的96孔板中，混匀。分别于20sec、5min、15min和30min时吸取精子悬液10μl用CASA精子分析仪记录，每份样本200个精子运动轨迹。按WHO诊断标准精子活力分为a、b、c、d级，其中a级：快速向前运动；b级：慢或呆滞的前向运动；c级：非向前运动；d级：不动。以精子活力（a级+b级）百分率评价活动力。
表1不同浓度DL-扁桃酸对精子活力（sperm motility）的影响
由表1结果可见，未加DL-扁桃酸的空白对照组，人精子活力（a级+b级）在77-79%范围未见明显变化。DL-扁桃酸在同一浓度下精子随接触时间的延长选择性地抑制精子运动。表现为运动速率减缓、尾部摆幅变小的震动状态，诱发精子稳态（spermostasis），有明显的剂量-时间相关性。可把这种诱发精子稳态的化合物称为精子固定剂（spermostatic agent），并非杀灭精子，且其作用为不可逆。
实验例2
扫描电子显微镜下观察精子形态
将经上述实验例1的按1.3项方法处理的精子，分别取50μl高活力精子置于含50μl37℃预热的含DL-扁桃酸和阳性对照物壬苯醇醚（N-9）1.0mg//ml，96孔板混匀，作用5min后离心去上清，然后，分别经2.5%戊二醛固定2h以上，0.1mol/L PBS清洗5min，100%乙醇脱水3次，每次5min；醋酸异戊酯置3次，每次5min；CO2临界点干燥，金属镀膜，扫描电镜观察。结果见图1。
结果表明，DL-扁桃酸处理后的精子头部呈椭圆形，顶部比较光滑，成帽状，可见顶体后边界和后环（A）；而阳性对照N-9处理后精子头部出现明显的褶皱，并且都会出现裂隙或缺损，质膜缺损/破裂（B）。说明DL-扁桃酸诱发精子稳态不是破坏精子质膜杀灭精子，与目前全世界常规使用的N-9杀精剂不同。
实验例3
细胞毒性测定
用MTT方法测定DL-扁桃酸对人类阴道上皮细胞株VK2/E6E7细胞毒性。96孔细胞培养板中，于37℃培养至细胞长满。弃去上清，每孔加入200μl用培养基稀释成不同浓度的扁桃酸，（0mg/ml,0.75mg/ml,1.25mg/ml,1.50mg/ml,1.75mg/ml和2mg/ml），每个稀释度3个孔孵育，37℃、5%CO2培养6h、24h和72h，每孔吸去100μl上清，加入5%MTT溶液（Sigma）20μl，37℃、5%CO2培养箱培养4h，加入100μl SDS-DMF溶液，37℃过夜。用Bio-TeKElx800酶标仪测定OD值，测定波长595nm，参考波长630nm。用Calcusyn软件计算化合物的毒性，用半数毒性浓度（CC50）并计算治疗指数（therapeuticindex，TI=CC50/IC50。扁桃酸的细胞毒性见表2。
表2DL-扁桃酸对VK2/E6E7的体外毒性
扁桃酸作用6、24和72h，其TI(CC50/IC50)分别为44.56、38.60和34.66，均大于10，说明对人类阴道上皮细胞毒性小，提示有作为阴道避孕制剂的发展潜力。
实验例4
流式细胞术检测精子质膜完整性
通过精子上游法获得高活力精子，检测DL-扁桃酸对人类精子质膜完整性的影响。将高活力精子样本用EBSS精子培养液调整精子密度为1×106/ml。取50μl精液充分混匀后于37℃、5%CO2培养箱孵育20min，300×g离心10min，弃上清。用50μlEBSS精子培养液重悬，并与终浓度为50μg/ml SYBR-14和10μg/ml PI溶液充分混匀后，在37℃、5%CO2培养箱孵育10min，加入EBSS洗涤1次除去游离的荧光染料，加适量EBSS调节精子密度为1×106/ml，上流式细胞仪（FACS calibur型，美国BD公司），计数约10000个精子算出检测精子质膜完整率（SYBR-14+/PI-）。结果见表3。
表3DL-扁桃酸对人类精子质膜的影响
空白对照（高活力精液）组质膜完整精子为86.10%；浓度0.5和1.0mg/ml，扁桃酸组精子质膜完整率分别为85.80%和79.28%；而浓度1.0mg/ml N-9阳性对照组的精子质膜完整率仅达9.97%。经χ2检验显示扁桃酸与N-9组比较差异明显，p＜0.01，说明扁桃酸在抑精IC50范围可保持精子质膜的完整性，不会引起质膜的损伤。
结果表明，当DL-扁桃酸浓度在诱发“精子稳态”的浓度范围内时，可保持精子质膜的完整性，不会引起精子质膜的损伤，这是与N-9最大的区别。
实验例5
DL-扁桃酸对人类精子顶体反应的影响
方法：分别取高活力精液100μl，置入100μl经37℃预温的1.0mg/ml DL-扁桃酸液、阳性对照4mg/ml、N-9液和空白对照等量EBSS液。于1.5ml离心管中，置37℃、5%CO2培养箱20min，后100×g离心5min，弃上清。各管加入200μl EBSS重悬，再加入FITC-PAS25μl，PI1.0μl，混匀避光混合，37℃、5%CO2培养箱30min后，1000×g离心5min，弃上清，分别取沉淀10μl涂片。空气干燥后，用2%福尔马林固定15min，最后用双蒸水洗涤，干燥后甘油封片。在200倍荧光显微镜下每个涂片计数200个精子。
在荧光显微镜下可见：
（1）精子头部顶体区显示似半月形均匀明亮绿色荧光，代表获能且顶体完整的精子
（2）若在精子半月板（顶体环）显示不均匀的绿色荧光，代表不完整的顶体部分或完全发生了顶体反应。
（3）若精子头中后部显示椭圆形桔红色荧光（PI阳性）为死亡精子。
表4DL-扁桃酸对人类精子顶体反应（AR）的影响
完整的精子顶体结构和功能对精卵结合及受精是十分必要的，检测精子顶体反应（acrosome reaction，AR）能力可以预判精子的生育能力，只有完整的顶体结构和功能才能发生有效的AR，精子AR检测时检测精子受精功能的一项重要手段，有表4可见DL-扁桃酸组AR精子率在75.4-83.2%范围之间，与对照组12.5±1.6%相比有显著性生物学统计意义的差异（p＜0.001）。由于阳性对照组N-9有78.4±0.5%的精子PI染色阳性为死亡精子，提示DL-扁桃酸能诱导人精子顶体产生顶体反应，而N-9表现在破坏精子质膜，FITC-PAS不被染色，但PI荧光染料可以染色，出现桔红色荧光精子，两者作用靶点不同。
实验例6
DL-扁桃酸对人类精子线粒体膜电位的影响——JC-1荧光染色法
在实验例5中的空白对照组和0.5、1.0、1.5mg/ml DL-扁桃酸组以及N-9阳性对照组，分别吸取20μl人精子沉淀物，加入20μl终浓度为10μg/ml荧光染料JC-1（JC，美国Molecular公司），混匀，37℃、5%CO2培养箱中避光孵育30min，用EBSS洗涤2次后1000×g离心5min，弃上清。分别取沉淀10μl涂片。400倍荧光显微镜下，每个涂片计数200个精子，观察拍照，当精子线粒体膜电位高时，JC-1主要以聚合体形式存在，呈橙红色或红色荧光，当膜电位水平较低时，主要以单体形式存在，呈绿色荧光。通过ImageProPlus图像分析软件测定精子线粒体内的橙黄色和绿色荧光强度，相对定量线粒体膜电位水平。
表5DL-扁桃酸对人类精子线粒体膜电位的影响
结果表明，与空白对照组相比，N-9阳性对照组膜电位水平未见变化（p﹥0.05）；DL-扁桃酸组无论低中剂量还是高剂量，精子线粒体膜电位水平与空白对照组或N-9阳性对照组相比，膜电位水平明显下降（p﹤0.01）。当DL-扁桃酸浓度为1.5mg/ml时，MMP水平仅为对照组的14.29%。
线粒体膜电位下降，进入精子线粒体的JC-1浓度随之下降，导致橙黄/绿荧光强度比值下降，同时，亦可从实验结果提示，DL-扁桃酸造成精子线粒体膜电位下降，而下降程度呈剂量依赖性。抑制线粒体活性，ATP能量供应不足，在显微镜下，DL-扁桃酸作用于精子后即可引起精子尾部活动迟钝，头部左右摇摆，原地打转，失去直线运动能力，继而停止活动，对精子起到制动作用，这是与N-9的区别之一。
（二）DL-扁桃酸的体外抗HIV活性试验
实验例1
DL-扁桃酸对HIV-1诱导细胞形成合胞体的抑制作用
将DL-扁桃酸2倍倍比稀释，设3个重复孔，同时设置正常细胞核HIV-1感染细胞对照。每孔加入4×105个C8166细胞，300TCID50的HIV-1ⅢB，终体积为200μl。培养3天后在倒置显微镜（100×）下观察DL-扁桃酸对合胞体形成的影响。观察抑制合胞体形成大50%（50%effective concentration EC50）时的药物浓度。计算治疗指数（therapeutic index，TI=CC50/EC50），已知C8611是HIV-1的敏感宿主细胞，HIV-1感染C8166细胞后会诱导巨大细胞（合胞体）的形成，通过计数合胞体产生的数量，可以反映DL-扁桃酸对HIV-1感染的抑制作用。
结果显示，DL-扁桃酸对HIV-1ⅢB诱导C8166细胞形成合胞体有较好的抑制作用，EC50值为39.50μg/ml，低于自身抑制精子运动IC50值500-1000μg/ml。
实验例2
DL-扁桃酸对HIV-1感染细胞与正常细胞融合的阻断作用
将DL-扁桃酸倍比稀释，设3个重复孔，每孔100μl，对照孔不含待测物，阳性对照物为硫酸葡聚糖（dextoxan sulfate，DS，MW=506,000），为Pharmacta产品。用RPMI-1640配置10mg/ml的贮液，每孔滴加6×104个正常C8166细胞和2×104个HIV-1ⅢB阳性感染H9细胞各50μl。置于细胞培养箱内培养6-8h后，在倒置显微镜下选取5个不重叠视野计数合胞体，判断DL-扁桃酸是否阻断感染细胞与正常细胞的融合过程。由表6可见，DL-扁桃酸对感染细胞与正常细胞的融合有阻断作用，而且有明显的量效关系。提示DL-扁桃酸的作用靶点或靶点之一为阻断HIV-1病毒进入细胞，是一种作用于新靶点的抗HIV-1新化合物。
表6DL-扁桃酸对HIV-1感染细胞与正常细胞融合的阻断作用（n=3）
用C8166细胞作为指示细胞与慢性感染的H9细胞共培养6-8h，观察合胞体形成情况。如果DL-扁桃酸能干扰病毒包膜蛋白gp120与CD4受体的相互作用，不但能抑制病毒吸附到宿主细胞，而且能抑制病毒诱导的合胞体的形成。这种方法可以明确DL-扁桃酸是否能阻断HIV进入宿主细胞。
实验例3
DL-扁桃酸对HIV-1急性感染病毒复制的影响
急性感染是指HIV-1感染正常宿主细胞数天内的复制繁殖，采用HIV核心抗原p24作为指标。用硫酸盐缓冲液稀释抗HIV-1p24McAb至合适浓度，置于ELISA板；37℃封板2h；每孔加TritonX-100灭活的待测样品100μl，孵育2h后，加1：3000稀释的APS100μl。37℃孵育1h，每孔加合适浓度的HPR标记羊抗人IgG100μl。37℃孵育1h，充分洗涤后，加入OPD底物使用液100μl，15-30min后，用H2SO4溶液终止反应后，BioTek Elx800酶标仪测定A490/630值。
HIV-1p24是HIV的衣壳蛋白，通过测定含有不同稀释浓度的DL-扁桃酸HIV感染细胞培养液中。培养上清的HIV-1p24抗原含量是判断DL-扁桃酸的抗HIV-1活性重要指标。实验结果表明，DL-扁桃酸对HIV-1急性感染细胞p24抗原的产生有明显的抑制作用，具有剂量依赖性，其半数抑制浓度和90%抑制浓度（IC50和IC90）分别为11.5±3.2μg/ml和27.4±3.9μg/ml。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用以限定本发明的实质技术内容范围，本发明的实质技术内容是广义地定义于申请的权利要求范围中，任何他人完成的技术实体或方法，若是与申请的权利要求范围所定义的完全相同，也或是一种等效的变更，均将被视为涵盖于该权利要求范围之中。

Claims (10)

1.一种结构如式1所示的化合物或其药学上可接受的衍生物在制备预防艾滋病的药物中的应用，
其中，Ra为-OH或环戊基；
R1为一个或多个任选卤代基或羟基或羰基；
R2为一个或多个任选羟基取代基或C1-2烷氧基；
R3为-CH2-或-(CH2)2-。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的结构如式1所示的化合物或其药学上可接受的衍生物选自DL-扁桃酸，对烷氧基扁桃酸，3-甲氧基-4-羟基扁桃酸，3-乙氧基-4-羟基扁桃酸，对羟基-和DL-对羟基扁桃酸，3,4-二羟基扁桃酸，2-羟基-3-甲氧基-5-扁桃酸，硼酸扁桃酸钠盐，邻羟基扁桃酸钠盐，邻氮扁桃酸，R-邻氮扁桃酸及其醇酯，扁桃酸甲酯，扁桃酸乙酯，2-环戊基扁桃酸甲酯，阿托莫西汀和托莫西汀扁桃酸盐，3,4-二羟基扁桃酸烷基酰胺，扁桃酸酰胺，或式1所示的化合物与酸所形成的衍生物。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述式1所示的化合物与下述任意一种酸形成衍生物：醋酸、乳酸、硼酸、枸橼酸、酒石酸和牛磺酸。
4.如权利要求1-3任一项所述的应用，其特征在于，所述药物中含有治疗有效量的式1所示的化合物或其药学上可接受的衍生物和药学上可接受的载体。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述药物中还含有蛋白酶抑制剂，和/或逆转录酶抑制剂。
6.如权利要求1-5任一项所述的应用，其特征在于，所述药物兼备避孕和预防艾滋病的作用。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型选自凝胶、乳膏、片剂、栓剂、药膜海绵或阴道环。
8.精子顶体反应抑制剂的用途，用于制备避孕药物组合物；所述精子顶体反应抑制剂为结构如式1所示的化合物或其药学上可接受的衍生物。
9.精子固定剂的用途，用于制备避孕药物组合物；所述精子固定剂为结构如式1所示的化合物或其药学上可接受的衍生物。
10.如权利要求8或9所述的用途，其特征在于，所述避孕药物组合物为女性外用避孕药物组合物。
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