CN104404037B - 鸡抗病新品系的培育方法及与鸡抗病能力相关的snp标记 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种鸡抗病新品系的培育方法及与鸡抗病能力相关的SNP标记。所述SNP标记多态性与异嗜性粒细胞/淋巴细胞的比值显著相关，可应用于鸡抗病新品系育种，通过异嗜性粒细胞/淋巴细胞的比值表型选择与SNP标记基因型辅助选择相结合，建立鸡抗病新品系选育技术。

Description

鸡抗病新品系的培育方法及与鸡抗病能力相关的SNP标记
技术领域
本发明涉及SNP分子标记及家禽育种，具体地说，涉及鸡抗病新品系的培育方法及与鸡抗病能力相关的SNP标记。
背景技术
禽病每年给家禽养殖业造成的经济损失十分巨大。采用遗传改良方法从本质上提高鸡对病原的抗性，进行抗病育种，是禽病防治的有效途径之一。
与鸡抗病性有关的生化指标较多，包括抗体含量、血清介质水平、淋巴细胞转化率等。有些指标与特定病原有关，代表性较差，有些指标受环境、品种和营养等因素影响，变异范围大，很难应用于抗病鸡的新品系选育中。因此，抗病家禽新品系选育始终是育种中的一个难题。
异嗜性粒细胞在细胞免疫中起到抵抗外间微生物入侵第一道屏障的作用。淋巴细胞和异嗜性粒细胞在鸡体液免疫、细胞免疫反应中均起到重要作用。异嗜性粒细胞/淋巴细胞的比值(heterophil/lymphocyte,H/L)已知与家禽抗应激程度相关(Gross和Siegel，1986)。H/L值越低指示鸡抗应激能力较强。但目前尚未见到在DNA分子水平上与异嗜性粒细胞/淋巴细胞比率相关的报道。
发明内容
为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种与鸡抗病能力相关的SNP标记及其应用。
为了实现本发明目的，本发明首先提供一种与鸡抗病能力相关的SNP标记，其核苷酸序列如序列表SEQ ID No.1所示，在第1832位有1个A1832-G1832碱基突变，所述SNP标记的多态性与异嗜性粒细胞/淋巴细胞的比值显著相关，并与鸡抗病能力相关。
本发明还提供了用于检测所述SNP标记的引物对，所述引物对含有正向引物F：5’-TGAACTTCCTGAAATGGGT-3’和反向引物R：5’-GGTGTGTGGCATATCATTG-3’。
本发明还提供了所述SNP标记在选择抗病能力强的鸡品系(种)中的应用。
进一步地，所述应用包括以下步骤：
(1)提取待测鸡的基因组DNA；
(2)以待测鸡的基因组DNA为模版，利用引物F和R，通过PCR反应扩增出鸡Toll样受体4基因(TLR4)73bp片段(如SEQ ID No.2所示)，其中，
F:5’-TGAACTTCCTGAAATGGGT-3’；
R:5’-GGTGTGTGGCATATCATTG-3’；
(3)检测PCR扩增产物，如果扩增产物序列中43bp处的碱基为A，则待测鸡属于抗病能力强的个体。
其中，PCR反应体系以50μl计为：
PCR反应条件为：94℃10min,95℃50s，58℃30s，72℃30s，共32个循环；72℃10min。
本发明还提供了所述SNP标记在鸡抗病新品系育种中的应用。
进一步地，所述应用包括以下步骤：
(一)采用聚合酶链式反应和测序技术筛选到与鸡异嗜性粒细胞/淋巴细胞比率相关的SNP标记；
(二)检测待测鸡的SNP标记基因型；
(三)根据基因型进行抗病能力优势品系(种)的选育。
本发明进一步提供一种鸡抗病新品系的培育方法，所述方法为通过待测鸡血液中异嗜性粒细胞/淋巴细胞的比值(H/L)与所述SNP标记共同对抗病能力优势个体进行选育。
进一步地，所述培育方法包括以下步骤：
(a)对候选个体采血，测定血液中异嗜性粒细胞/淋巴细胞的比值，同时采血提取基因组DNA，测定SNP标记1832bp位点的碱基状态；
(b)留种时，首先利用异嗜性粒细胞/淋巴细胞的比值进行优势双亲个体的选择，其次查看SNP A1832G的多态性，避免选择GG型个体；
(c)按照每个世代不低于30只公鸡，公母比例不低于1:3的留种数量组建新的家系和繁种。
进一步地，所述候选个体数量不小于500只，其中公鸡所占比例不高于1/3，所述优势个体的选择为由低到高选择异嗜性粒细胞/淋巴细胞的比值较低的个体。
更进一步地，所述培育方法包括以下步骤：
(a)对55-60日龄的候选个体翅下静脉采血，制作血液涂片，测定异嗜性粒细胞/淋巴细胞的比值；同时取静脉血，制成抗凝血，提取基因组DNA，测定SNP标记1832bp位点的碱基状态；
(b)留种时，首先利用异嗜性粒细胞/淋巴细胞的比值进行优势双亲个体的选择；其次查看SNP A1832G的多态性，避免选择GG型个体；
(c)按照每个世代不低于30只公鸡，公母比例1:3的留种数量组建新的家系和繁种。
进一步地，所述H/L值的测定方法为：血涂片用改良的瑞氏和吉姆萨复合染色溶液染色，然后用PBS缓冲液冲洗，晾干，滴一滴松柏油，盖上盖玻片，在100倍油镜下成“Z”字型轨迹计数，淋巴细胞、异嗜性粒细胞和单核细胞共计100个，计算H/L比值
所述SNP标记测定方法为：待测鸡的基因组为模板，用正向引物F：5’-TGAACTTCCTGAAATGGGT-3’和反向引物R：5’-GGTGTGTGGCATATCATTG-3’进行PCR扩增。根据DNA测序结果，统计SNP A1832G位点SNP多态性。
其中，PCR反应体系以50μl计为：
PCR反应条件为：94℃10min,95℃50s，58℃30s，72℃30s，共32个循环；72℃10min。
该方法具有操作简便、检测费用低廉、准确的特点，且选出的抗性品系(种)遗传稳定性良好。
本发明的有益效果在于：
本发明经过多年科技攻关，针对这一异嗜性粒细胞/淋巴细胞的比值作为抗病指标的应用效果进行评价，并找到了与该异嗜性粒细胞/淋巴细胞的比值显著相关的SNP分子标记。在抗病鸡育种中，应用分子标记筛选与H/L表型选择结合，成功建立了鸡抗病新品系选育技术。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1 与H/L比值相关SNP位点的获得与鉴定
随机对87只白来航鸡和94只京星黄鸡父系鸡进行SNP A1832G位点分型。
具体为，对55-60日龄的待测鸡翅下静脉采血，制成抗凝血，提取基因组DNA，以待测鸡的基因组为模板，用正向引物F：5’-TGAACTTCCTGAAATGGGT-3’和反向引物R：5’-GGTGTGTGGCATATCATTG-3’进行PCR扩增。对扩增得到的鸡Toll样受体4基因73bp片段进行测序，根据扩增产物序列中43bp处的碱基为A或G统计SNP A1832G位点SNP多态性，进行基因型分型。
其中，PCR反应体系以50μl计为：
PCR反应条件为：94℃10min,95℃50s，58℃30s，72℃30s，共32个循环；72℃10min。
统计结果发现，在两个群体中均存在两种等位基因，三种基因型，其中检测群体中各基因型频率分别为，AA型为20％-26％；AG型为36％-50％；GG型为36％-30％。进一步与H/L表型值进行关联分析，该位点与H/L值极显著相关(p<0.01)，各基因型鸡群的表型平均值如表1所示。可见AA型为优势等位基因，具有该基因型的鸡群H/L值相对较低，约为0.3；在选育中应避免使用GG型鸡，其H/L值较高，为0.44-0.47；结合H/L表型值适当选用杂合AG型，H/L值在0.33-0.36左右。
表1 白来航鸡和京星黄鸡父系鸡各基因型群体的H/L值情况
品系/基因型 AA AG GG
京星黄鸡父系鸡 0.29±0.01 0.33±0.02 0.44±0.01
白来航鸡 0.30±0.01 0.36±0.02 0.47±0.01
注：数据的表示方式为：平均值±标准误。数据均为H/L比值，即异嗜性粒细胞和淋巴细胞的比值。
实施例2 白来航鸡各世代H/L选择效果
试验鸡群为来航蛋鸡B系，饲养于中国农科院北京畜牧兽医研究所昌平养殖基地。基础群来自150只公鸡和450只母鸡，组群的方法是每个世代在56日龄测定所有个体的H/L值，然后由低到高选择H/L比值较低的个体；其次检测并查看SNP A1832G的多态性，避免选择GG型个体。
建立30只公鸡家系，每个家系中公母比例为1:3只繁殖下一世代。每个世代执行同样的选择方法，在繁种家系建立过程中避免近交。随机选取其中部分鸡群进行选择效果分析，结果如表2所示，可以看出，每个世代的H/L比率逐渐降低，选择效果良好。
表2 来航鸡的H/L比值选择进展检测
注：数据的表示方式为：平均值±标准误。H/L表示异嗜性粒细胞和淋巴细胞的
比值。H表示异嗜性粒细胞个数，L表示淋巴细胞数。
实施例3 京星黄鸡各世代H/L选择效果
试验鸡群为京星黄鸡父系鸡，饲养于中国农科院北京畜牧兽医研究所昌平养殖基地。基础群来自200只公鸡和500只母鸡，组群的方法是：每个世代在60日龄测定所有个体的H/L值，然后由低到高选择H/L比值较低的个体。其次查看SNP A1832G的多态性，避免选择GG型个体。
最终选择30-45只公鸡组建家系，每个家系中公母比例为1:3-4只繁殖下一世代。同时每一代均设有对照组，对照组采用混合输精繁殖下一代。每个世代执行同样的选择方法，在繁种家系建立过程中避免近交。
选择效果分析如表3所示，每个世代的H/L比值在选择系中逐渐降低，选择效果良好。
表3 京星黄鸡每个世代的H/L测定结果和选择进展
注：数据的表示方式为：平均值±标准误.。H/L表示异嗜性粒细胞和淋巴细胞的比值。H表示异嗜性粒细胞数，L表示淋巴细胞数。
实施例4 低H/L选择使京星黄羽肉鸡父系免疫力和生产性能提高
将实施例3中的群体，经过3个世代的H/L单向选择，对G3代选择系鸡和对照系鸡的群免疫性状和生产性能进行检测和比较。结果如表4所示。H/L比值、淋巴细胞数、免疫球蛋白IgG和60日龄的体重在选择系中显著(P<0.05)的高于对照系，异嗜性粒细胞数显著(P<0.05)低于对照组。SRBC和AI抗体滴度在选择系中的值高于对照系。免疫球蛋白IgG和SRBC抗体滴度的提高，指示经选择后的鸡群的一般抗病水平提高、AI滴度的升高代表抗禽流感水平有所增强。因此，说明利用H/L比值这一指标，结合SNP位点基因型进行抗病育种选择，可以选择出抗病力较强的鸡的新品系。也同时证明，H/L比值可作为鸡抗病能力的评价指标之一。
表4 选择3个世代后与对照组免疫、生长指标的比较
注：数据的表示方式是平均值±标准误，同列中不同字母上标表示差异显著达到P<0.05水平，H/L表示异嗜性粒细胞和淋巴细胞的比值。H表示异嗜性粒细胞数，L表示淋巴细胞数，AI，表示禽流感的抗体滴度，IgG表示免疫球蛋白G，单位是毫克每毫升(mg/ml)，体重表示是60日龄时的鸡的活重。n表示样本量。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (4)

1.一种鸡抗病新品系的培育方法，其特征在于，通过候选个体血液中异嗜性粒细胞/淋巴细胞的比值与SNP标记共同对抗病能力优势个体进行选育；所述SNP标记的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，在第1832位有1个A1832-G1832碱基突变，所述SNP标记的多态性与鸡抗病能力相关；
利用SNP标记进行选育的方法包括如下步骤：
(1)提取待测鸡的基因组DNA；
(2)以待测鸡的基因组DNA为模版，利用引物F和R，通过PCR反应扩增出鸡Toll样受体4基因73bp片段，其中，
F:5’-TGAACTTCCTGAAATGGGT-3’；
R:5’-GGTGTGTGGCATATCATTG-3’；
(3)检测PCR扩增产物，如果扩增产物序列中43bp处的碱基为A，则待测鸡属于异嗜性粒细胞/淋巴细胞的比值低，抗病力强的个体。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(a)对候选个体采血，测定血液中异嗜性粒细胞/淋巴细胞的比值，同时采血提取基因组DNA，测定SNP标记1832bp位点的碱基状态；
(b)留种时，首先利用异嗜性粒细胞/淋巴细胞的比值进行优势双亲个体的选择，其次查看SNP A1832G的多态性，避免选择GG型个体；
(c)按照每个世代不低于30只公鸡，公母比例不低于1:3的留种数量组建新的家系和繁种。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述候选个体数量不小于500只，所述优势个体的选择为由低到高选择异嗜性粒细胞/淋巴细胞的比值较低的个体。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(a)对55-60日龄的候选个体翅下静脉采血，制作血液涂片，测定异嗜性粒细胞/淋巴细胞的比值；同时取静脉血，制成抗凝血，提取基因组DNA，测定SNP标记1832bp位点的碱基状态；
(b)留种时，首先利用异嗜性粒细胞/淋巴细胞的比值进行优势双亲个体的选择；其次查看SNP A1832G的多态性，避免选择GG型个体；
(c)按照每个世代不低于30只公鸡，公母比例1:3的留种数量组建新的家系和繁种。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116606938A (zh) * 2023-05-26 2023-08-18 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 提高黄羽肉鸡先天免疫能力相关的snp位点及其应用
CN116516026B (zh) * 2023-06-14 2024-01-23 广州市江丰实业翁源有限公司 一种与肉鸡抗体滴度相关的分子标记、检测方法及应用
CN118355878A (zh) * 2024-05-09 2024-07-19 江苏省家禽科学研究所 一种早熟、高产、快慢羽自别雌雄的优质肉鸡新品系制种方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20070082832A1 (en) * 2005-10-06 2007-04-12 Dicosimo Robert Enzymatic production of peracids from carboxylic acid ester substrates using non-heme haloperoxidases
CN102399868B (zh) * 2011-10-10 2013-01-30 江苏省农业科学院 一种猪tlr4基因t611a碱基突变的检测方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
鸡H/L和SRBC遗传选择及部分抗病性状全基因组关联分析;胡耀东;《中国博士学位论文全文数据库 农业科技辑》;20130715(第7期);全文 *
鸡TLR4信号通路与肠炎沙门氏菌感染关系的研究;宋咏梅;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 农业科技辑》;20110215(第2期);表格2.8，图3.1，第25页第3.1.6.1-3.1.6.2节，第36页最后一段 *

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