CN104403000B - 人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白以及制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白及其生产方法和用途。所述的人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白,其能够结合于FcεRI分子上的IgE的结合位点。本发明提供的人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白能够用于过敏疾病,如过敏哮喘、鼻炎等。
Description
技术领域
本发明属于生物医药领域,具体涉及用于治疗过敏疾病的人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白以及制备方法和应用。
背景技术
过敏疾病也称变态反应性疾病,属于常见疾病,发病时还可引起多种并发症。常见过敏疾病主要有过敏性鼻炎、过敏性哮喘、过敏性休克等。随着全球范围内的空气和环境的恶化,发病率呈逐年上升的趋势。过敏疾病的发生主要由于机体内的过敏反应细胞(血液中的嗜碱性粒细胞和组织间隙中的肥大细胞)受抗原性物质(过敏原),如花粉颗粒、尘螨、食物(牛奶、鸡蛋、虾蟹等)、药物(青霉素、磺胺等)、寄生虫等刺激后,释放大量的组胺等血管活性和促炎介质,这些介质作用于人体不同组织和器官,引起相应的临床症状,如作用于血管引起血管舒张并使血管通透性增加,作用于支气管引起支气管痉挛。参见文献,Fang C,Corrigan CJ,Ying S.The treatment targets of asthma:from laboratory toclinic.Inflammation Allergy-Drug Targets 2008,7:119-128并如图1所示,当体质差的人,或者说易过敏人群,首先接触到过敏原时,抗原递呈细胞通过抗原的递呈活化原态辅助T细胞(Th0),Th0细胞进一步分化成Th1,Th2,Th17和TReg细胞,其中,Th2细胞释放IL-4和IL-13,并在B细胞生产过敏原特异的IgE抗体中发挥关键作用(Neurath MF,Finotto S,Glimcher LH.The role of Th1/Th2 polarization in mucosal immunity.Nat Med2002,8:567-573.)。IgE抗体是过敏反应发生的关键分子。
目前已经发现两种IgE受体,高亲和力受体FcεRI(Ravetch JV.Fcreceptors.Curr Opin Immunol 1997,9:121-125.)和低亲和力受体FcεRII(CD23)(Lemieux GA,Blumenkron F,Yeung N,Zhou P,Williams J,Grammer AC,Petrovich R,Lipsky PE,Moss ML,Werb Z.The low affinity IgE receptor(CD23)is cleaved by themetalloproteinase ADAM10.J Biol Chem 2007,282:14836-14844.)。高亲和力受体FcεRI表达在肥大细胞、嗜碱性粒细胞的表面,属于免疫球蛋白超家族,为四聚体蛋白,含有α链、β链和通过二硫键相连的两个γ链。α链为配基结合链,其胞外功能区能与IgE重链恒定区第三域的末端部分相作用(Hakimi J,Seals C,Kondas JA,Pettine L,Danho W,KochanJ.The alpha subunit of the human IgE receptor(FcεRI)is sufficient for highaffinity IgE binding.J Biol Chem 1990,265:22079-22081,Blank U,Ra CS,KinetJP.Characterization of truncated alpha chain products from human,rat,andmouse high affinity receptor for immunoglobulin E.J Biol Chem 1991,266:2639-2646,Riske F,Hakimi J,Mallamaci M,Griffin M,Pilson B,Tobkes N,Lin P,Danho W,Kochan J,Chizzonite R.High affinity human IgE receptor(Fc epsilon RI).Analysis of functional domains of the alpha-subunit with monoclonalantibodies.J Biol Chem 1991,266:11245-11251.)。β链和γ链可介导信号转导(Shirakawa T,Li A,Dubowitz M,Dekker JW,Shaw AE,Faux JA,Ra C,Cookson W,HopkinJM.Association between atopy and variants of theβsubunit of the high–affinityimmunoglobulin E receptor.Nat Genet 1994,7:125-130.)。其中,β链跨膜4次,其N端和C端均位于胞浆内;γ链为跨膜蛋白,胞外的N段经二硫键相连成二聚体。β链和γ链胞浆内的C端末端分别含有免疫受体酪氨酸活化基序(Immunoreceptor tyrosine-basedactivation motif,ITAM),与受体的信号传导相关。现已经鉴定出人IgE与人FcεRI相互作用的特异性氨基酸Arg-408、Ser-411、Lys-415、Glu-452、Arg-465和Met-469(Presta L,Shields R,O'Connell L,Lahr S,Porter J,Gorman C,Jardieu P.The binding site onhuman immunoglobulin E for its high affinity receptor.J Biol Chem 1994,269:26368-26373.)。IgE与FcεRI的作用具有非常高的特异性,结合常数约为10-10mol/L(KinetJP.THE HIGH-AFFINITY I g E RECEPTOR(FcεRI):From Physiology to Pathology.AnnuRev Immunol 1999,17:931-972。Galli SJ,Kalesnikoff J,Grimbaldeston MA,Piliponsky AM,Williams CMM,Tsai M.Mast cells as“tunable”effector andimmunoregulatory cells:recent advances.Annu Rev Immunol 2005,23:749-786.)。低亲和力受体FcεRII(CD23)表达在炎症细胞的表面,包括嗜酸粒细胞、粒性白细胞、B淋巴细胞、血小板和气道平滑肌细胞的表面。FcεRII不属于免疫球蛋白超家族,是氨基端在胞内的跨膜蛋白。现已知道有两种形式FcεRII,分别称为FcεRIIa和FcεRIIb。它们的胞外部分相同,胞内N端存在差异。FcεRIIa通常表达在B细胞的表面,FcεRIIb则表达在T细胞、B细胞、单核细胞和经IL-4诱导的嗜酸粒细胞表面。FcεRII与IgE抗体的生成有关,在过敏性疾病的炎症反应中发挥作用。
IgE通过与高亲和力受体FcεRI作用,在一系列急性和慢性炎症中发挥关键作用,如哮喘、过敏性鼻炎、遗传性过敏性皮炎和严重的食物过敏、风疹、血管性水肿和过敏休克等。当个体再次接触过敏原时,两个IgE分子识别同一个过敏原,导致嗜碱性粒细胞和肥大细胞表面的FcεRI受体交联,首先激活酪氨酸激酶Lyn,然后FcεRI受体的亚单位β和γ链上的ITAM磷酸化,促使脾酪氨酸激酶(Spleen tyrosine kinase,SYK)活化并聚集FcεRI受体的磷酸化亚单位,启动下游的信号转导事件,包括脱颗粒作用释放介体、丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase)的活化以及磷脂酶(Phospholipase)A2的活化(Kraft S,Novak N.Fc receptors as determinants of allergic reactions.TrendsImmunol 2006,27:88-95.)。因此,FcεRI受体介导了I型过敏反应的关键信号转导。血管活性和促炎性介体的释放对急性和晚期的过敏反应有作用,表现出临床过敏症状,如喷嚏、瘙痒症和支气管痉挛等。
哮喘是最典型的过敏性疾病,在工业化国家是最常见的慢性疾病。预测在今后的10年中,发生率将会持续增加。根据世界卫生组织统计,2005年全世界有3亿人口患有哮喘,其中22.5万人死于哮喘。在我国至少有2000万哮喘患者,但只有不足5%的哮喘患者接受过规范化的治疗。哮喘已对人类的健康、生活和学习造成严重的危害,随着人民健康意识的增强,就诊人数的增加,哮喘类药物的市场潜力巨大。
目前哮喘的治疗药物有以下几种:
哮喘属I型超敏反应性疾病,90%以上的病变都是由IgE介导的过敏反应导致。哮喘的药物治疗主要有两种,逆转或阻止气道炎症和逆转或阻止支气管平滑肌肉的紧缩。但这两种治疗方式均是着眼于过敏反应发生(即炎性介质释放后)的炎症的治疗,而不能解决炎症发生的根源。吸入性的皮质类固醇(Inhaled corticosteroids,ICS)和速效、长效的肾上腺素受体的激动剂(SABAS和LABAS)是治疗哮喘的主要药物,越来越多地应用于具有持续症状的哮喘病人,形成了标准的临床治疗方案。但是,依然有5~8%的哮喘病人对大剂量的皮质类固醇和肾上腺素受体激动剂的治疗无效,这一类哮喘称为慢性严重哮喘或者严重恶化哮喘。严重过敏哮喘病人占哮喘病人的5%左右,对他们尚缺少有效的治疗手段。
1)皮质类固醇
皮质类固醇通过抑制细胞因子、催化因子和黏附分子的表达,压制Th2细胞介导的哮喘气道中的炎症反应(Barnes PJ,Chung KF,Page CP.Inflammatory mediators ofasthma:an update.Pharmacol Rev 1998,50:515-596.)。
皮质类固醇能够明显减少气道炎症和超反应性,改善肺功能,减轻症状,有效阻止或减少急性哮喘恶化的发生。但是,皮质类固醇不涉及到疾病发生的根源,即使从儿童时期开始治疗也不能够治愈(Bisgaard H,Hermansen MN,Loland L,Halkjaer LB,BuchvaldF.Intermittent inhaled corticosteroids in infants with episodic wheezing.NewEngl J Med 2006,354:1998-2005.Guilbert TW,Morgan WJ,Zeiger RS,Mauger DT,Boehmer SJ,Szefler SJ,Bacharier LB,Lemanske Jr RF,Strunk RC,Allen DB.Long-term inhaled corticosteroids in preschool children at high risk forasthma.New Engl J Med 2006,354:1985-1997.),不影响疾病的过程,对病毒感染导致的哮喘恶化没有效果(Harrison TW,Oborne J,Newton S,Tattersfield AE.Doubling thedose of inhaled corticosteroid to prevent asthma exacerbations:randomisedcontrolled trial.Lancet 2004,363:271-275.),对吸烟哮喘病人也没有作用(ChaudhuriR,Livingston E,McMahon AD,Thomson L,Borland W,Thomson NC.Cigarette smokingimpairs the therapeutic response to oral corticosteroids in chronic asthma.AmJ Resp Crit Care 2003,168:1308-1311.)。并且,大剂量地系统性吸收皮质类固醇,可导致局部性和系统性的副作用,如发声障碍、声音嘶哑、骨质疏松和压制丘脑-脑下垂体-肾上腺轴的作用。
对皮质类固醇治疗无效的严重哮喘的治疗更具有挑战性,也更为紧迫。研究发现,皮质类固醇治疗无效的哮喘病人,糖皮质激素受体的结构是正常的。但是,也许环境刺激因子改变了其功能,使得皮质激素受体失去了转录抑制作用。分子修饰也影响糖皮质激素受体作用,例如糖皮质激素受体的磷酸化影响其与皮质类固醇的亲和力和核转座的能力,靶基因上靠近糖皮质激素受体作用位点附近的组织蛋白乙酰化也影响其作用。
2)β肾上腺素受体的激动剂
速效肾上腺素受体激动剂,如沙丁胺醇和特布他林,是最有效的支气管扩张剂,吸入后可以快速地缓解哮喘症状。当激动剂与β肾上腺素受体结合后,信号转导G蛋白刺激腺苷酸环化酶,增加cAMP的生成,从而激活蛋白激酶A。蛋白激酶A促使肌球蛋白轻链激酶磷酸化和打开Ca2+依赖的K离子通道,调节平滑肌的松驰,减轻哮喘中的支气管收缩。吸入式的长效腺素受体激动剂,如福莫特罗和沙美特罗,作为补充的治疗手段应用于皮质类固醇激素无法控制的哮喘治疗,可以维持支气管舒张达12h(Palmqvist M,Persson G,Lazer L,Rosenborg J,Larsson P,Lotvall J.Inhaled dry-powder formoterol and salmeterolin asthmatic patients:onset of action,duration of effect and potency.EurRespir J 1997,10:2484-2489.Usmani OS,Ito K,Maneechotesuwan K,Ito M,Johnson M,Barnes PJ,Adcock IM.Glucocorticoid receptor nuclear translocation in airwaycells after inhaled combination therapy.Am J Resp Crit Care 2005,172:704-712.)。长效腺素受体激动剂可能会掩盖恶化中的炎症而不宜单独使用,以免耽误治疗。因此,对于这些药物是好处大于坏处还是坏处大于好处一直存在争论(Andrew Mcivor R,Pizzichini E,Turner MO,Hussack P,Hargreave FE,Sears MR.Potential maskingeffects of salmeterol on airway inflammation in asthma.Am J Resp Crit Care1998,158:924-930.)。
速效的β肾上腺素受体激动剂的副作用相对较小,因为他们具有较高的特异性,并且是经皮给药。在哮喘病人的管理中,反复使用慢性的β肾上腺素受体的激动剂可能导致副作用,这些副作用包括肌肉颤抖和痉挛、心脏病、增加哮喘的病死率和发生率。临床数据提示,有规律地使用长效的β肾上腺素受体的激动剂应当同时使用抗炎药物,如糖皮质激素。吸入或口服糖皮质激素不仅可以减少哮喘死亡的危险,也可抵消单独使用长效β肾上腺素受体激动剂带来的危险。
3)磷酸二酯酶(PDE)抑制剂
茶碱对磷酸二酯酶活性具有非选择性的抑制作用,同时也能拮抗腺苷受体的活性。曾经认为低剂量的茶碱具有一定的抗炎作用,然而缺少证据支持。茶碱作为支气管扩张剂已经应用于治疗哮喘70多年。但是,在治疗哮喘的有效剂量下,也能导致心脏和中央神经系统损伤的副作用,因此,茶碱已经退出了哮喘的主流药物。
4)白三烯抑制剂
在不同的免疫和炎症刺激响应中,花生四烯酸合成的白三烯是强大的脂介体。大部分已知的白三烯通过白三烯受体I发挥作用。白三烯(LTC4、LTD4和LTE4)是功能强大的气道平滑肌收缩的激动剂。LTD4引起支气管收缩的能力比组胺强100多倍。接触到过敏原后,白三烯释放到哮喘气道中,介导一系列的哮喘反应,包括水肿、过量黏液分泌和支气管超反应。他们对嗜酸性粒细胞、肥大细胞、嗜碱性粒细胞、树突状细胞、黏液腺和神经有广泛的作用,并增强了气道炎症和重构的病理过程(Simons F.Comparative pharmacology ofH1antihistamines:clinical relevance.Am J Med 2002,113:38-46.SamuelssonB.Leukotrienes:mediators of immediate hypersensitivity reactions andinflammation.Science 1983,220:568-575.)。体外试验发现,高剂量皮质类固醇抑制磷酯酶依赖的花生四烯酸从细胞膜上的释放,从而阻止白三烯的合成。但在体内,皮质类固醇对白三烯的生物合成和作用均没有影响(Gyllfors P,Dahlén SE,Kumlin M,Larsson K,Dahlén B.Bronchial responsiveness to leukotriene D4is resistant to inhaledfluticasone propionate.J Allergy Clin Immun 2006,118:78-83.)。其他的白三烯合成抑制剂也有研究报道,但仍处于临床开发中(Kemp JP.Recent advances in themanagement of asthma using leukotriene modifiers.Am J Resp Med 2003,2:139-156.)。有人认为,白三烯抑制剂对哮喘的控制与皮质类固醇相比,作用较小并且昂贵,仅对那些白三烯释放导致的过敏炎症的病人起作用(Polosa R.Critical appraisal ofantileukotriene use in asthma management.Curr Opin Pulm Med 2007,13:24-30.)。当前,白三烯受体的拮抗剂,如孟鲁司特、普鲁司特、扎鲁司特,已作为皮质类固醇治疗的补充药物(Nayak A,Langdon RB.Montelukast in the treatment of allergic rhinitis:an evidence-based review.Drugs 2007,67:887-901.)。但是,很少有医生单独使用白三烯受体的拮抗剂(Friedmann PS,Palmer R,Tan E,Ogboli M,Barclay G,Hotchkiss K,Berth-Jones J.A double-blind,placebo-controlled trial of montelukast in adultatopic eczema.Clin Exp Allergy 2007,37:1536-1540.)。
5)抗IgE单克隆抗体
Omalizumab(商品名Xolair)是Genentech公司于2003年6月上市的人源化单克隆抗体,是目前唯一获得美国FDA批准用于治疗哮喘的蛋白药物。在过敏炎症和过敏哮喘中,IgE是最初的一个介导因子。Xolair特异性抗IgE Fc片段上与FcεRI结合的表位,可阻止过敏原-IgE复合体与FcεRI的结合(Busse W,Corren J,Lanier BQ,McAlary M,Fowler-Taylor A,Cioppa GD,van As A,Gupta N.Omalizumab,anti-IgE recombinant humanizedmonoclonal antibody,for the treatment of severe allergic asthma.J AllergyClin Immun 2001,108:184-190.),其过程如图2所示。同时,Xolair也可与血液中IgE结合形成可溶的免疫复合体,并最终在网状内皮系统中清除。因此,Xolair给药之后,血清中游离的IgE水平快速降低。IgE的下降进而下调嗜碱性粒细胞、树突状细胞和单核细胞上的FcεRI的表达,也减少IL-13、B淋巴细胞和嗜酸性细胞在外周血中的含量和哮喘病人组织中的嗜酸性粒细胞。Xolair可以减少重复过敏原刺激诱导的晚期皮肤过敏反应,并对早期过敏反应的作用明显。III期临床实验中,观察到Xolair可以减少哮喘的恶化,也可以减少皮质类固醇和速效肾上腺素受体激动剂的用量,同时改善哮喘病人的肺功能,如呼气流量和第一秒强制呼气体积(FEV1)的峰值(Soler M,Matz J,Townley R,Buhl R,O'Brien J,Fox H,Thirlwell J,Gupta N,Della Cioppa G.The anti-IgE antibody omalizumab reducesexacerbations and steroid requirement in allergic asthmatics.Eur Resp J 2001,18:254-261.)。
FDA批准Xolair应用于12岁及以上人群的中度到重度的持续哮喘病人的治疗和那些常年性的对空气中过敏原,如花粉、草和尘螨敏感的病人。FDA推荐其作为二线治疗手段,应用于类固醇治疗没有足够疗效的病人。
上市以来,临床专家和美国FDA注意到Xolair存在一些不足(Corren J,Casale T,Deniz Y,Ashby M.Omalizumab,a recombinant humanized anti-IgE antibody,reducesasthma-related emergency room visits and hospitalizations in patients withallergic asthma.J Allergy Clin Immun 2003,111:87-90.)。首先,Xolair可导致人体内IgE水平降低。IgE在人体的抗肿瘤方面起着积极的作用,因此临床试验中发现,应用了Xolair的病人中,肿瘤发生病例增加约一倍。其次,Xolair的使用中,有些病人产生可能导致威胁生命的过敏反应,这些不良反应包括支气管痉挛、血压下降、呼吸困难、晕厥、喉肿等。另外,以前使用没有发生不良反应的病人,不能排除在后续使用中依然发生过敏的可能。在大约39,500名使用过Xolair的病人中,过敏不良反应的比例至少0.1%,但是Xolair导致过敏不良反应的原因尚不清楚。虽然对Xolair的临床应用一直存在争论,但是在2008年Xolair在美国的销售额依然达到了5亿多美元,说明临床实践中对新的治疗哮喘药物的渴望。
目前治疗哮喘的新药开发的方向如下:
人们一直在尝试寻找安全有效的哮喘治疗药物,除了基于传统药物的改良和优化外,更多地把希望寄托新的治疗靶点和生物药物的开发上,目前处于临床研究中的治疗哮喘的生物药物达十多种,另有更多临床前研究中的候选药物。
1)传统药物的改良
尽管皮质类固醇只能改善哮喘的症状,但一直是治疗哮喘的主流药物,人们也一直设法降低其副作用,如开发所谓的软类固醇化合物。Ciclesonide是一种新的吸入皮质类固醇的前体药物,与皮质类固醇相比,局部抗炎功能延长,且更加安全,人体对其的耐受力更好。这可能是由其药理和药代动力学的特点所决定的,如与蛋白质的结合强,较低的口服生物相容性和快速的清除速率。其次,非类固醇类的糖皮质激素受体激活剂也处于研究开发中,如AL-438正处于临床试验中,其副作用也小于皮质类固醇。
2)细胞因子及其拮抗剂
普遍认为T细胞,尤其是Th2细胞在哮喘的病理中起着关键作用。Th1细胞能够抑制Th2。因此,抑制那些促进Th2细胞生成或功能的细胞因子,如IL-4、IL-5和IL-13,和促进那些可以诱导Th1细胞生成或功能的细胞因子,如IL-12和IFNγ,也许能够重新平衡人体内的Th1/Th2比例,起到抗哮喘作用。细胞因子治疗哮喘的途径如图3所示。
IL4诱导IgE同种异型基因转换的开关,促进初期T淋巴细胞发育生成Th2细胞,并维持Th2的表型。动物实验表明,阻止IL-4的生成或者抑制IL-4的活性对过敏哮喘有明显作用。针对IL-4,已经有两个药物处于临床实验中,一是使用可溶的IL-4的受体(IL-4R,Altrakincept)中和IL-4,早期的临床试验表明,病人给药后,不再使用吸入式的皮质类固醇激素也不会复发(Borish LC,Nelson HS,Lanz MJ,Claussen L,Whitmore JB,AgostiJM,Garrison L.Interleukin-4receptor in moderate atopic asthma.A phase I/IIrandomized,placebo-controlled trial.Am J Resp Crit Care 1999,160:1816-1823.)。然而,进一步的大规模的临床实验发现,可溶的IL-4受体并不能改善哮喘的症状和恶化。另一个临床研究中的药物是IL-4Rα抗体Pascolizumab,该抗体能够特异性阻断IL-4的作用,但是临床试验的结果也不理想,这大大地打击了人们开发以IL-4为靶向的治疗哮喘的生物药物的热情(Hart TK,Blackburn MN,Brigham-Burke M,Dede K,Al-Mahdi N,Zia-Amirhosseini P,Cook RM.Preclinical efficacy and safety of pascolizumab(SB240683):a humanized anti-interleukin-4antibody with therapeutic potential inasthma.Clin Exp Immun 2002,130:93-100.)。
IL-5是响应过敏刺激,调节嗜酸性粒细胞的增殖、引发、在组织中富集和生存的核心因子。在哮喘病人的支气管黏膜中,嗜酸性粒细胞的累积可能是哮喘病理的重要机制。动物实验表明,IL-5在各种哮喘模型中发挥重要作用,阻断IL-5是治疗哮喘的可能方向(Menzies-Gow AN,Flood-Page PT,Robinson DS,Kay AB.Effect of inhaledinterleukin-5on eosinophil progenitors in the bronchi and bone marrow ofasthmatic and non-asthmatic volunteers.Clin Exp Allergy 2007,37:1023-1032.)。
IL-13可以调节IgE的生成、嗜酸性粒细胞炎症、杯状细胞增殖、黏液生成、气道平滑肌的增生、气道超反应性和富集单核细胞、巨噬细胞和T细胞到气道中。这预示着IL-13也许是过敏和哮喘治疗中的一个重要靶点(Wynn TA.IL-13effector functions.Annu RevImmunol 2003,21:425-456.)。
IL-10具有广谱的抗炎效果。哮喘病人,尤其是比较严重的哮喘病人,不能分泌IL-10。IL-10是由Treg细胞分泌的过敏原免疫治疗中主要的抑制性细胞因子。IL-10基因缺失小鼠的过敏原刺激后气道炎症反应增强(Grünig G,Corry DB,Leach MW,Seymour BWP,Kurup VP,Rennick DM.Interleukin-10is a natural suppressor of cytokineproduction and inflammation in a murine model of allergic bronchopulmonaryaspergillosis.J Exp Med 1997,185:1089-1100.Fu CL,Chuang YH,Chau LY,ChiangBL.Effects of adenovirus-expressing IL-10in alleviating airway inflammationin asthma.J Gene Med 2006,8:1393-1399.)。IL-10治疗哮喘的功效仍需要进一步的临床试验研究。
IFNγ是Th1细胞因子,其抑制Th2细胞介导过敏炎症的功能最强。然而,皮下注射IFNγ治疗哮喘的结果令人失望。IL-12、IL-18和IL-23也许能抑制哮喘中Th2介导的反应,但仍需要进一步的研究。
3)催化因子和受体
趋化因子作用于细胞表面的受体。趋化因子受体与哮喘中各种炎症细胞,如T细胞、树突状细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞和中性粒细胞的富集有关。许多功能强且高度特异性的趋化因子受体的拮抗剂已经进入了早期的临床研究中,主要针对CC趋化因子受体3(CCR3)。CCR3表达在嗜酸性粒细胞、Th2淋巴细胞、嗜碱性粒细胞和肥大细胞的表面,并与趋化因子CCL5(CC趋化配体5)、CCL7、CCL8、CCL11、CCL13、CCL24、CCL26和CCL28结合。过敏原刺激可以上调这些趋化因子的表达(Palmqvist C,Wardlaw AJ,Bradding P.Chemokines andtheir receptors as potential targets for the treatment of asthma.Brit JPharmacol 2007,151:725-736.)。已有抗CCR3的单克隆抗体和小分子CCR3拮抗剂的治疗效果的研究,但是尽管在动物模型中的数据比较有前景,这些策略尚没有进入人体试验阶段。过敏哮喘中,存在许多趋化因子的累积,有着丰富的功能,仅仅阻止其中一个,难以达到预期的效果(Pease JE,Williams TJ.The attraction of chemokines as a target forspecific anti-inflammatory therapy.Brit J Pharmacol 2006,147:S212-S221.)。
4)信号传导途径中的关键因子
毫无疑问,关键的信号转导途径的中间分子是哮喘治疗的有效靶点,因为它们可以上调或下调哮喘病理相关的某些分子。如磷酯3激酶(PI3K)家族,它们控制着与哮喘相关的大部分炎症细胞的生长、分化、生存、增殖和细胞因子的生成等。丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)可更多地抑制Th2细胞因子的合成(与Th1细胞相比),通过激活凋亡途径降低嗜酸性粒细胞生存。这些特征表明,激酶抑制剂有可能用于哮喘的治疗(Rahman MS,Yamasaki A,Yang J,Shan L,Halayko AJ,Gounni AS.IL-17A induces eotaxin-1/CC chemokineligand 11expression in human airway smooth muscle cells:role of MAPK(Erk1/2,JNK,and p38)pathways.J Immunol 2006,177:4064-4071.)。另外,SYK酪氨酸激酶和其上游的酪氨酸激酶LYN,在肥大细胞和嗜碱性粒细胞的活化中发挥重要作用,它们的抑制剂也有可能应用于哮喘的治疗。
5)IgE和IgE受体
阻断IgE-多价抗原复合体与嗜碱性粒细胞和肥大细胞表面的受体FcεRI的结合可以从源头上阻止过敏反应的发生,是治疗过敏疾病的主要方向。这主要包括可溶性受体、针对于IgE受体的抗体以及已在临床上应用的IgE抗体和基于ITIM的信号抑制分子。
6)可溶性FcεRI
鉴于多价抗原的IgE抗体与FcεRI的α链结合,Yanagida课题组尝试了可溶性FcεRIα治疗过敏性疾病的可能性。可溶性FcεRIα与IgE结合,避免或减少了IgE与过敏细胞表面FcεRI的结合,阻止过敏信号转导的发生。该课题组实验观察到可溶性FcεRIα可以消除小鼠模型上的被动皮肤过敏反应,也能抑制IgE结合到人外周血的嗜碱性粒细胞,进而抑制组胺的释放(Yanagida M,Irikura M,Suto H,Yagi S,Ogawa H,Ra C.Kinetic analysis of theinteraction between recombinant human FcεRIαand serum IgEs from allergicpatients.Clin Immunol 2000,95:190-196.)。Haak-Frendscho等设计了FcεRIα-IgG融合蛋白。与可溶的FcεRIα相比,该融合蛋白具有较长的半衰期,与IgE的亲和力相当。由于具有更长的血清半衰期,它能有效阻止IgE分子与细胞表面的受体结合(Haak-Frendscho M,Ridgway J,Shields R,Robbins K,Gorman C,Jardieu P.Human IgE receptor alpha-chain IgG chimera blocks passive cutaneous anaphylaxis reaction in vivo.JImmunol 1993,151:351-358.)。但除了这些早期的研究报道外,没有进一步临床试验报道。
7)抗IgE受体FcεRII的抗体
抗FcεRII的人源化抗体(IDEC-152,或者Lumiliximab)是Biogen-Idec公司开发的产品。体外研究表明,小鼠FcεRII的交联可以下调IgE的生成。在I期临床试验中,也确实观察到Lumiliximab能够长期地(~85天)减小体内IgE水平(Byrd JC,O'Brien S,Flinn IW,Kipps TJ,Weiss M,Rai K,Lin TS,Woodworth J,Wynne D,Reid J.Phase 1study oflumiliximab with detailed pharmacokinetic and pharmacodynamic measurements inpatients with relapsed or refractory chronic lymphocytic leukemia.Clin CancerRes 2007,13:4448-4455.)。尽管单剂量的I期临床试验没有观察到Lumiliximab改善过敏哮喘病人的肺功能指征,但是临床试验专家认为,Lumiliximab明显降低了人体内的IgE水平,使人们有理由期待Lumiliximab的重复给药对过敏哮喘的治疗作用(Poole JA,Meng J,Reff M,Spellman MC,Rosenwasser LJ.Anti-CD23monoclonal antibody,lumiliximab,inhibited allergen-induced responses in antigen-presenting cells and T cellsfrom atopic subjects.J Allergy Clin Immunol 2005,116:780-788.)。
8)ITIM信号抑制分子
肥大细胞和嗜碱性细胞的表面除了表达有刺激过敏信号转导的受体FcεRI外,也表达含有免疫受体酪氨酸抑制基序Immunoreceptor tyrosine-based inhibition motif(ITIM)的低亲和力受体FcγRIIb(Da ron M,Latour S,Malbec O,Espinosa E,Pina P,Pasmans S,Fridman WH.The same tyrosine-based inhibition motif,in the intra-cytoplasmic domain of FcγRIIB,regulates negatively BCR-,TCR-,and FcR-dependent cell activation.Immunity 1995,3:635-646.)。FcγRIIb是抑制受体超家族(Inhibitory receptor superfamily,IRS)的代表,可以负调节含有免疫受体酪氨酸活化基序Immunoreceptor tyrosine-based activation motif(ITAM)的激活受体(如FcεRI)的功能和一系列细胞应答。IRS成员与激活受体的交联可导致ITIM的酪氨酸残基磷酸化,随后激活含有SH2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-1和肌醇多磷酸磷酸酶SHIP,抑制下游的激活受体的信号转导(Fong DC,Malbec O,Arock M,Cambier JC,Fridman WH,Da ronM.Selective in vivo recruitment of the phosphatidylinositol phosphatase SHIPby phosphorylated Fc[gamma]RIIB during negative regulation of IgE-dependentmouse mast cell activation.Immunol Lett 1996,54:83-91.Ono M,Bolland S,TempstP,Ravetch JV.Role of the inositol phosphatase SHIP in negative regulation ofthe immune system by the receptor FeγRIIB.Nature 1996,383:263-266.)。基于这样的原理,文献报道了双特异性抗体(Jacman J,Chen Y,Huang A,Moffat B,Scheer J,LeongS,Lee W,Zhang J,Sharma N,Lu Y,Lyer S,Shields R,Chiang N,Bauer M,Wadley D,Roose-Girma M,Vandlen R,Yansura D,Wu Y,Wu L.Development of a two partstrategy to identify a therapeutic human bispecific antibody that inhibitsIgE receptor signaling.J.Biol.Chem(2010),285:20850-20859.Tam SW,Demissie S,Thomas D,Daeron M.A bispecific antibody against human IgE and human FcrRIIthat inhibits antigen-induced histamine release by human mast cells andbasophils.Allergy(20040,59:772-780.)、已经有IgG Fc和人IgE Fc构成的融合蛋白(ZhuD,Kepley C,Zhang M,Zhang K,Saxon A.A novel human immunoglobulin Fcr-Fcebifunctional fusion protein inhibits FceRI-mediated degranulation.Nat Med(2002),8:518-521.)。这些生物分子的功能主要在于交联肥大细胞和嗜碱性细胞表面的FcεRI和FcγRIIb,从而利用FcγRIIb分子上的ITIM信号抑制FcεRI的信号途径,阻止细胞活化释放炎性介质,达到治疗过敏疾病的目的。目前这类生物分子尚处于临床研究阶段。
总体上,目前临床中尚缺少有效的治疗过敏疾病的药物。而治疗过敏疾病的创新药物开发依然寄希望于生物药物。鉴于此,我们设计和开发了重组人IgE Fc片段蛋白,并应用于过敏疾病的治疗。
根据现有知识,人IgE与FcεRI的结合是过敏细胞活化的基础,也是所有过敏疾病发生的根源。因此,任何阻止人IgE与FcεRI的结合都具有治疗过敏疾病的潜力。因此,本发明目的在于开发人IgE Fc片段蛋白,并利用之竞争性结合于FcεRI受体从而阻止IgE与FcεRI结合,以实现治疗过敏疾病的目的。
发明内容
本发明的一个目的在于提供一种人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白。
本发明的另一个目的是提供该人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白的制备方法。
本发明的又一个目的是提供该人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白的医药用途。
本发明再一目的是提供包含hIgE Fc蛋白的药物组合物。
本发明再一目的是提供包含hIgE Fc蛋白的药物组合物在过敏类疾病治疗中的应用。
本发明提供一种人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白,其能够结合于FcεRI分子上的IgE的结合位点。
在本发明的个优选实施例中,所述人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白包含了人人IgE-CH3中与人FcεRI相互作用的特异性氨基酸。
在本发明的一个优选实施例中,所述人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白包含了人IgE的CH2-CH3-CH4区域。
众所周知,蛋白分子上的某个或某些氨基酸的变化或某一片段的缺失并不会影响该蛋白的功能,甚至有可能增强该蛋白的功能,在本发明的一个优选实施例中,所述人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白包含人IgE的CH2-CH3-CH4区域任何部位氨基酸残基片段进行突变修饰获得的变异体。
在本发明的一个优选实施例中,所述人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白如序列表中SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
众所周知,一个氨基酸可以有多种密码子编码。在某些实施方案中,可以根据实际需要对核酸密码子进行突变,特别是使用CHO细胞偏爱的密码子,但人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白的氨基酸序列不变。因此在本发明的一个优选实施例中,所述人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白中至少有一个核酸密码子采用CHO细胞进行突变。
本发明中所指的CHO细胞包括CHO-K1,CHO-DG44等商业化的CHO细胞株。
在本发明的一个优选实施例中,所述人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白如序列表中SEQ ID NO:2所示的核甘酸序列。
本发明提供一种人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白的制备方法,包括如下步骤:
(1)将编码hIgE Fc核苷酸序列可操作地连于表达载体,得到hIgE Fc重组表达载体;
(2)将步骤(1)中的重组表达载体转录CHO细胞,筛选获得表达hIgE Fc的工程细胞株;
(3)在合适的条件下培养步骤(2)获得的工程细胞株;
(4)从步骤(3)中的培养产物中分离所述的人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白。
在本发明的一个优选的实施例中,在合适的条件下培养表达hIgE Fc蛋白的工程细胞株的步骤包括:将经筛选得到的工程细胞株培养在不含有牛血清的培养基中,培养条件为:温度36℃~37.5℃,CO2浓度为5%。培养15天后,离心培养液得上清,经过疏水层析和离子交换层析分离获得hIgE Fc蛋白。
本发明使用的表达载体可以选用各种已知的载体,如商业化载体:pCDNA3.1、pSecTag等等。将重组表达载体通过电转染或化学转染的方法转入宿主细胞,利用合适的条件筛选稳定的重组细胞,作为制备人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白的工程细胞株。
众所周知,也可以利用其他表达载体和宿主细胞建立工程细胞株来表达本发明所述的人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白。
本发明提供一种包含人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白在制备预防和治疗过敏疾病药物中的应用。
本发明提供一种包含人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白的药物组合物。
在本发明的一个优选实施例中,所述药物组合物为由适应性载体和人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白制备的注射针剂、口服制剂、含服制剂、肺部给药制剂、气道给药制剂、鼻腔给药制剂或其他非肠道给药制剂。
在本发明的一个优选实施例中,所述适应性载体选自药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂中的一种或任意混合。
本发明提供一种包含人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白的药物组合物在在制备预防和治疗过敏疾病药物中的应用。
在本发明的一个优选实施例中,所述过敏疾病为过敏鼻炎、过敏哮喘、过敏皮炎或药物过敏。
上述药物的用量一般为0.1-5mg人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白/kg/week,疗程一般为10至30天。
附图说明
图1为过敏的机制示意图。
图2为过敏反应中的IgE的作用示意图。
图3为过敏分子途径中的细胞因子示意图。
图4为hIgE Fc蛋白抑制嗜碱性粒细胞活化和组胺的释放示意图。
图5为系统给药hIgE Fc蛋白抑制恒河猴过敏反应的PCA模型试验示意图。
具体实施方式
本发明提供的一种人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白,其能够结合于FcεRI分子上的IgE的结合位点。并且包含了人人IgE-CH3中与人FcεRI相互作用的特异性氨基酸。尤其是包含了人IgE的CH2-CH3-CH4区域。
众所周知,蛋白分子上的某个或某些氨基酸的变化或某一片段的缺失并不会影响该蛋白的功能,甚至有可能增强该蛋白的功能,在本发明的一个优选实施例中,所述人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白包含人IgE的CH2-CH3-CH4区域任何部位氨基酸残基片段进行突变修饰获得的变异体。
本发明的人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白如序列表中SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。众所周知,一个氨基酸可以有多种密码子编码。在某些实施方案中,可以根据实际需要对核酸密码子进行突变,特别是使用CHO细胞偏爱的密码子,但人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白的氨基酸序列不变。因此在本发明的一个优选实施例中,所述人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白中至少有一个核酸密码子采用CHO细胞进行突变。
本发明中所指的CHO细胞包括CHO-K1,CHO-DG44等商业化的CHO细胞株。
本发明的人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白如序列表中SEQ ID NO:2所示的核甘酸序列。
本发明提供一种人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白的制备方法,包括如下步骤:
(1)将编码hIgE Fc核苷酸序列可操作地连于表达载体,得到hIgE Fc重组表达载体;
(2)将步骤(1)中的重组表达载体转录CHO细胞,筛选获得表达hIgE Fc的工程细胞株;
(3)在合适的条件下培养步骤(2)获得的工程细胞株;
(4)从步骤(3)中的培养产物中分离所述的人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白。
步骤(3)中在合适的条件下培养表达hIgE Fc蛋白的工程细胞株的步骤包括:将经筛选得到的工程细胞株培养在不含有牛血清的培养基中,培养条件为:温度36℃~37.5℃,CO2浓度为5%。培养15天后,离心培养液得上清,经过疏水层析和离子交换层析分离获得hIgE Fc蛋白。本发明使用的表达载体可以选用各种已知的载体,如商业化载体:pCDNA3.1、pSecTag等等。将重组表达载体通过电转染或化学转染的方法转入宿主细胞,利用合适的条件筛选稳定的重组细胞,作为制备人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白的工程细胞株。
众所周知,也可以利用其他表达载体和宿主细胞建立工程细胞株来表达本发明所述的人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白。
本发明提供的包含人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白在制备预防和治疗过敏疾病药物中的应用。尤其是在制备预防和治疗过敏鼻炎、过敏哮喘、过敏皮炎、药物过敏等过敏疾病药物中的应用。
本发明还提供了一种包含人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白的药物组合物。该药物组合物为由适应性载体和人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白制备的注射针剂、口服制剂、含服制剂、肺部给药制剂、气道给药制剂、鼻腔给药制剂或其他非肠道给药制剂。例如可以制成用于静脉注射等的注射剂,用于皮下注射、表皮外敷等的经皮吸收剂,用于喷鼻、喉、口腔、表皮、粘膜等的喷雾剂,用于滴鼻、眼、耳等的滴剂,用于肛肠等的栓剂、片剂、粉剂、粒剂、胶囊、口服液、膏剂、霜剂等多种形式。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。
制备药物组合物过程中使用的适应性载体选自药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂中的一种或任意混合。
上述包含人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白的药物组合物在在制备预防和治疗过敏疾病药物中的应用。
上述药物的用量一般为0.1-5mg人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白/kg/week,疗程一般为10至30天。
实施例
下面用实施例对本发明作进一步阐述。应当理解,这些实施例仅用于说明本发明而非对本发明有任何限制。本领域技术人员在本说明书的启示下对本发明实施中所作的任何变动都将落在权利要求书的范围内。
实施例1hIgE Fc蛋白的表达
hIgE Fc蛋白的表达过程包括以下步骤:合成基因;把基因插入表达载体,用表达载体转染CHO细胞;利用Hygromycin筛选表达hIgE Fc融合蛋白CHO工程细胞株,培养该细胞株,最后从细胞培养液中分离纯化RANKL-Fc蛋白。具体地:
1)基因合成
委托基因合成的专业公司合成SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列,并在5’端依次加上BamHI的酶切位点和Kozak序列;在3’端加上Xba I酶切位点。
2)表达载体的构建
从基因合成公司得到上述合成的基因后,用BamHI和Xba I双酶切基因和载体pCDNA3.1,分别回收基因和载体的酶切片段,用T4连接酶将基因插入到载体中,构成表达载体pCDNA/hIgE Fc.
3)CHO工程细胞株的建立
利用大肠杆菌扩增上述表达载体。抽提质粒后,用电转的方法把表达载体转入CHO-S细胞中。将细胞培养与含有500mg/L的hygromycin的无血清清培养基中,14天后,得到抗性细胞库。经过克隆筛选,获得稳定的hIgE Fc表达的CHO工程细胞株。
4)hIgE Fc融合蛋白的生产
利用CD CHO(INVITROGEN,CA)培养基,在37℃,5%CO2培养上述CHO工程细胞株15天,2000rpm离心后,收集上清,再用离子交换和疏水层析分离纯化得到hIgE Fc蛋白。
实施例2hIgE Fc蛋白抑制嗜碱性粒细胞活化释放组胺
从健康人外周血中分离出嗜碱性粒细胞,按照1×106cells/孔分装到96板中,然后加入图4中所示量的hIgE和hIgE Fc,4个小时后,小心吸出培养上清,并用无钙镁的HBSS缓冲液洗两次,用100μL Anti-IgE Fc多抗刺激,半小时后,取出上清,利用组胺ELISA分析试剂盒检测组胺浓度。组胺释放的百分率为细胞激发后释放的组胺量与等量细胞100℃煮沸6分钟后释放的组胺量的比值。
实施例3利用恒河猴评价系统性给药hIgE Fc蛋白对IgE介导的过敏反应。
本实验观察了hIgE Fc静脉滴注给药后对恒河猴PCA反应的抑制作用。实验中取12只恒河猴,雌雄各半,3~4岁,随机分成3个给药组(0.17、0.50、1.50mg/kg)和1个对照组(静脉滴注给药氯化钠注射液),每组3只。给药后在猴腹部皮内注射Anti-NP-IgE溶液,每只猴注射3个点;4h后从右前肢静脉注射过敏原和染料(NP-BSA溶于1%伊文氏蓝溶液);30min后观察腹部局部皮肤颜色反应;照相并测量蓝色反应斑的短径和长径,计算各组动物的蓝斑径值。蓝斑径值统计见图5。结果表明,系统性给药hIgE Fc可以剂量依赖抑制IgE介导的过敏反应,说明,hIgE Fc可应用于过敏疾病的治疗。
工业实用性
本发明的hIgE Fc蛋白完全是人源(human)IgE的序列,因此,该蛋白作为一种药物进入人体,没有任何异体蛋白的免疫源性。hIgE Fc竞争性结合于FcεRI,从而阻止IgE/FcεRI介导的嗜碱性粒细胞和肥大细胞的活化,从源头上,控制过敏疾病的发生,将在过敏性疾病的治疗中发挥重要作用。
Claims (10)
1.一种人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白,其能够结合于FcεRI分子上的IgE的结合位点,从而阻止IgE/FcεRI介导的嗜碱性粒细胞和肥大细胞的活化;其编码序列如序列表中SEQ ID NO:2所示的核甘酸序列所示。
2.如权利要求1所述的一种人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)将编码hIgE Fc核苷酸序列可操作地连于表达载体,得到hIgE Fc重组表达载体;
(2)将步骤(1)中的重组表达载体转录CHO细胞,筛选获得表达hIgE Fc的工程细胞株;
(3)在合适的条件下培养步骤(2)获得的工程细胞株;
(4)从步骤(3)中的培养产物中分离所述的人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白。
3.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,在所述步骤(3)中,在合适的条件下培养表达hIgE Fc蛋白的工程细胞株的步骤包括:将经筛选得到的工程细胞株培养在不含有牛血清的培养基中,培养条件为:温度36℃~37.5℃,CO2浓度为5%,培养15天后,离心培养液得上清,经过疏水层析和离子交换层析分离获得hIgE Fc蛋白。
4.如权利要求1或权利要求2所述的人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白在制备预防和治疗过敏疾病药物中的应用。
5.如权利要求4所述的应用,其中所述过敏疾病为过敏鼻炎、过敏哮喘、过敏皮炎或药物过敏。
6.一种包含如权利要求1或权利要求2中所述的人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白的药物组合物。
7.如权利要求6所述的药物组合物,其特征在于,为由适应性载体和人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白制备的注射针剂、口服制剂、含服制剂、肺部给药制剂、气道给药制剂、鼻腔给药制剂或其他非肠道给药制剂。
8.如权利要求7所述的药物组合物,其特征在于,所述适应性载体选自药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂中的一种或任意混合。
9.如权利要求6所述的一种包含人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白的药物组合物在在制备预防和治疗过敏疾病药物中的应用。
10.如权利要求9所述的应用,其中所述过敏疾病为过敏鼻炎、过敏哮喘、过敏皮炎或药物过敏。
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"Inhibition of the Prausnitz-Kustner reaction by an immunoglobulin ε-chain fragment synthesized in E.coli;Raif S. Geha et al.;《Nature》;19850613;第315卷(第6020期);第577页左栏第1段、右栏第2段,table1和第578页右栏第4段 |
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