CN104394873A

CN104394873A - 全身麻醉药与氢组合而成的药品

Info

Publication number: CN104394873A
Application number: CN201380028933.5A
Authority: CN
Inventors: 风间富荣; 佐藤泰司; 与那岭龙二
Original assignee: Maruishi Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Maruishi Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2012-05-31
Filing date: 2013-05-30
Publication date: 2015-03-04
Also published as: EP2857026A1; CA2874579A1; SG11201407489TA; BR112014029260A2; HK1205450A1; JP6168420B2; RU2014152690A; AU2013268366A1; JPWO2013180240A1; IN2014MN02090A; NZ701553A; EP2857026A4; MX2014014543A; IL235718A0; WO2013180240A1; US20150079197A1; KR20150018832A

Abstract

本发明的目的在于提供能够预防和/或减轻脑(优选为发育期)的麻醉药诱发性神经障碍的全身麻醉用药品，涉及将全身麻醉药与氢组合而成的、能够预防和/或减轻脑(优选为发育期)的麻醉药诱发性神经障碍的药品。

Description

全身麻醉药与氢组合而成的药品

技术领域

本发明涉及全身麻醉药与氢组合而成的药品。

背景技术

人们担心新生儿中的神经障碍会引起长期持续的效果(非专利文献1、非专利文献2、非专利文献3)。因此，对新生儿使用可能使正常的神经发育发生变化的药物(例如引起细胞凋亡所致的神经变性的醇、苯环利定、氯胺酮、N₂O、异氟烷、苯二氮类、巴比妥类和抗痉挛药(非专利文献4))时应慎重。新生儿中的药物所致的神经障碍，即使是单次药物曝露也可能充分诱发，因此在麻醉的给药中应慎重(非专利文献5、非专利文献6)。

正常的神经发育是被周密地调节的以增殖、分化、迁移和突触形成为代表的一系列的事项(非专利文献7)。一般认为谷氨酸在这些全部过程中发挥着作用(非专利文献8)，例如在迁移的目标区域中，除检测中使用的NMDA受体(非专利文献9)之外，高浓度的谷氨酸启示作为神经细胞的化学引诱物的作用(非专利文献10)。各种解剖学领域中特定的NMDA受体亚型(例如NR2B和NR2D)的发现能够对迁移调控的正确性质的阐明发挥作用(非专利文献10)。从同一小组的研究可以明确，物种不同时，在迁移调控中使用不同的介质，可以使用GABA(与大鼠有关的研究)或谷氨酸(与小鼠有关的研究)中的任意一种(非专利文献11)。

突触形成(脑的快速生长期)是指突触快速地构建的时期，其特征在于高水平的程序性细胞死亡(PCD)(最大1％(非专利文献12))。其中包括广泛的皮质丘脑和丘脑皮质投射的形成(非专利文献13)。种间胚胎学无限复杂，但神经发育的各阶段具有以相同的顺序发生的倾向，因此可以进行比较(非专利文献14)。因此，从7日龄的大鼠仔(非专利文献15)能够推定0～8个月的人(非专利文献16)的突触形成的高峰时期。但是，根据NMDA受体亚型的分析，对于人而言，突触形成的时期涉及从妊娠的后期(妊娠8～10个月)开始直至几岁的长期的可能性高(非专利文献17)。

1972年才提出的细胞凋亡(非专利文献18)是细胞数目的削减、调整、调控和细胞的废弃等过程中的正常的神经发育的本质特征。细胞凋亡的特征在于包括仅用于该目的的细胞蛋白引起的诱导、确定和实行的“积极的细胞死亡”(非专利文献19)。

未成熟的中枢神经系(CNS)中的程序性细胞死亡(PCD)一般认为由目标来源的神经营养因子调控(神经营养假说)。据此，无法到达促进神经细胞生存的靶细胞的突触的神经细胞(非专利文献20)伴随环境的营养支持的中止，开始基于神经营养因子和电刺激这两者的特殊形式的细胞自杀(非专利文献21、非专利文献22)。神经细胞由于其存活通路的复杂趋异性和趋同性，多个配体和机制参与维持生存。神经细胞的胞浆和线粒体对应于决定细胞命运的、抗凋亡性因子(例如Bcl-2和cAMP应答结合蛋白)和凋亡促进性因子(例如Bad、Bax和Caspase家族)中的任意一种。Bcl-2及其相关肽被认为在CNS的发育中是特别重要的(非专利文献23)，这是从以下事实明确的：在新生儿中高水平的表达、Bcl-2在实验中的过表达可克服营养支持的缺乏(非专利文献24)、并且也能够完全防止PCD(非专利文献25)。Bcl-2的突变体(Bcl-X_L)有可能在神经细胞的靶细胞的突触到达前的神经细胞的发育维持中具有特别的作用(非专利文献26)。

1999年公开的数据显示出通过新生大鼠中的NMDA受体拮抗剂的使用，发生特定模式的、与神经胶质细胞不同的神经变性(非专利文献27)。电子显微镜下，该神经变性与凋亡性细胞死亡相同，且在背外侧丘脑核最为显著。背外侧丘脑核为参与学习和记忆的脑区之一(非专利文献28)。之后，通过使用其他药物在其他脑区重现了该现象(非专利文献29)。

之后的研究显示出，新生大鼠在突触形成期间对麻醉药的有害副作用是脆弱的。所述大鼠曝露于麻醉药后，在背外侧和前腹侧丘脑核以及顶叶皮质等区域中，变质的神经细胞数最大增加到基准值的68倍(非专利文献30)。之后，作为该增加的结果，在行为学试验中观察到功能性神经障碍。具体而言，GABA激动性麻醉药异氟烷(非专利文献31)本身用量依赖性地产生神经变性，通过咪达唑仑的连续添加(双重GABA激动性混合物)、接着N₂O的连续添加(三重混合物)产生协同作用的神经变性(非专利文献30)。可知大鼠中，该过程由对麻醉药以外的领域的GABA激动性药剂的曝露、例如抗痉挛药治疗和母体药物乱用引起(非专利文献32、非专利文献33)。

如上所述，虽然存在种间的复杂度，但神经发育的各阶段以相同顺序发生，因此从麻醉药给药对新生大鼠的影响可以某种程度地推定对人的影响，人的临床研究中，对于发育期脑中的麻醉药给药诱发的神经毒性，也有大量发现(非专利文献34)。但是，关于发育期脑中麻醉药给药诱发的神经毒性的作用机理，大量因子复杂地涉及其中且基本未知。根据之后的研究，作为上述作用机理，可考虑(1)细胞凋亡的增加、(2)对GABA神经元的影响、(3)对大脑皮质临界期(critical period)的影响等，也有报道称对GABA神经元的影响会引起神经障碍(非专利文献35)。迄今涉及上述作用机理的研究中，从研究方法的容易度考虑，兴趣集中于细胞凋亡。

引起细胞凋亡的细胞内信号转导通路中最重要的分子是称为caspase(caspase：Cysteine-ASPartic-acid-proteASE，半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶)的蛋白分解酶。细胞内caspase-3活化时，则引起细胞凋亡。凋亡诱导信号的转导通路中主要具有如下的通路。(1)死亡受体介导的通路(众所周知肿瘤坏死因子受体(TNFR1)、Fas/CD95)、(2)线粒体介导的通路(作为呼吸中的电子传递系统的构成因子之一的细胞色素c在细胞凋亡的实行中担负重要的作用)、(3)基于内质网应激的通路(在内质网中生成异常蛋白质时等产生细胞凋亡的信号)、(4)直接活化效应因子的通路(不经过起始因子，应激诱导因子直接活化效应因子)。

死亡受体介导的通路中，caspase-8、caspase-10被活化。线粒体介导的通路中，caspase-9被从线粒体游离出来的细胞色素c活化。基于内质网应激的通路中，caspase-12被活化。这些起始因子caspase组活化下游的效应因子caspase(caspase-3、caspase-6、caspase-7)。在直接活化效应因子的通路中，不经过起始因子caspase，而直接将效应因子caspase(caspase-3、caspase-6、caspase-7)活化。这些caspase以多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase，PARP)为底物，通过底物的分解来实行细胞凋亡(非专利文献36、非专利文献37)。

关于认为被麻醉药诱发的细胞凋亡，考虑有可能具有与一般的细胞凋亡不同的作用机理，其根本的机制尚不明确，有效的治疗方法也未确立。因此，待开发出减轻麻醉药所致的发育期脑的细胞凋亡、其后的认知功能障碍的新治疗方法。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1：Anand和Scalzo,2000,Biol.Neonate 77(2):69-82

非专利文献2：Balduini等,2000,Brain Research 859:318-325

非专利文献3：Jevtovic-Todorovic等,2003,The Journal ofNeuroscience 23(3):876-882

非专利文献4：Olney等,2002d,Brain Pathol 12(4):488-498

非专利文献5：Ikonomidou等,2001,Biochemical Pharmacology62:401-405

非专利文献6：Young等,Cell Death and Differentiation(2003)10,1148–1155

非专利文献7：Butler,1999,TINS 22(8):332-334

非专利文献8：Ikonomidou和Lechoslaw,2002,Lancet Neurology1:383-386

非专利文献9：Komuro和Rakie,1993,Science 260(5104):95-97

非专利文献10：Behar等,1999,The Journal of Neuroscience19(11):4449-4461

非专利文献11：Behar等,2001,Cerebral Cortex 11:744-753

非专利文献12：Olney等,2002b,Neurobiology of Disease 9:205-219

非专利文献13：Molar和Blakemore,1995,Trends Neurosci.18(9):389-397

非专利文献14：Clancy等,2001,Neuroscience 105:7-17

非专利文献15：Olney等,2002a,Neurotoxicology 23(6):659-668

非专利文献16：Ikonomidou等,1999,Science 238:70-74

非专利文献17：Dobbing和Sands,1979,Early Hum Dev3:79-84

非专利文献18：Kerr等,1972,Br J Cancer 26(4):239-257

非专利文献19：Sloviter,2002,TRENDS in Pharmacological Science23(1):19-24

非专利文献20：Sherrard和Bower,1998,Clin Exp PharmacolPhysiol 25(7-8):487-495

非专利文献21：Young等,1999,Nature Med 5:448-453

非专利文献22：Brenneman等,1990,Brain Res Dev Brain Res51(1):63-68

非专利文献23：Yuan和Yanker,2000,Nature 407:802-809

非专利文献24：Garcia等,1992,Science 258(5080):302-304

非专利文献25：Martinou等,1994,Neuron 13(4):1017-1030

非专利文献26：Motoyama等,1995,Science 267:1506-1510

非专利文献27：Ikonomidou等,1999,Science 238:70-74

非专利文献28：Goen等,2002,Behavioural Brain Research136:329-337

非专利文献29：Monti和Contestabile,2000,European Journal ofNeuroscience 12:3117-3123

非专利文献30：V.Jevtovic-Todorovic等2003Journal ofNeuroscience 23:876-882

非专利文献31：Gyulai等,2001,Anesthesiology 95:585-593

非专利文献32：Bittigau等,2002,PNAS 99(23):15089-15094

非专利文献33：Farber和Olney,2003,Developmental BrainResearch 147:37-45

非专利文献34：Wilder RT等,Anesthesiology 100:796-804,2009

非专利文献35：Anesthesiology 2009；111:1365-1371

非专利文献36：Salveen GS,Riedl SJ 2008Adv Exp Med Biol.615:13-23

非专利文献37：LA.Pradelli,M.Beneteau,JE,Ricci 2010Cell.Mol.Life Sci.67:1589-1597

发明内容

发明所要解决的问题

本发明的目的在于提供能够预防和/或减轻脑(优选为发育期)的麻醉药诱发性神经障碍的全身麻醉用药品。

用于解决问题的方法

本发明人为了解决上述课题反复进行了深入研究，结果发现通过组合全身麻醉药和氢，能够预防和/或减轻脑(优选为发育期)的麻醉药诱发性神经障碍。

即，本发明涉及以下的发明。

[1]一种人或人以外的动物用药品，将全身麻醉药与氢组合而成。

[2]一种用于人或人以外的动物的全身麻醉的药品，其特征在于，并用全身麻醉药和氢来给药。

[3]如上述[1]或[2]所述的药品，其用于预防和/或减轻麻醉药诱发性神经障碍。

[4]如上述[3]所述的药品，其中，麻醉药诱发性神经障碍是伴随神经细胞凋亡发生的。

[5]一种含有全身麻醉药的用于预防和/或减轻麻醉药诱发性神经障碍的药品，其特征在于，全身麻醉药以与氢并用的方式使用。

[6]如上述[1]～[5]中任一项所述的药品，其中，全身麻醉药为吸入麻醉药或液态的静脉麻醉药，氢为氢气。

[7]如上述[6]所述的药品，其中，氢气浓度在药品中为0.15～7％(v/v)。

[8]如上述[1]～[7]中任一项所述的药品，其以胎儿、新生儿、婴儿、幼儿、儿童或老年人为对象。

[9]如上述[1]～[8]中任一项所述的药品，其中，全身麻醉药为选自由一氧化二氮、异氟烷、安氟醚、甲氧氟烷、七氟烷、地氟烷、乙醚、异丙酚和咪达唑仑组成的组中的一种以上的麻醉药。

[10]如上述[3]、[5]～[9]中任一项所述的药品，其中，麻醉药诱发性神经障碍为神经运动障碍、神经认知障碍、精神认知障碍或自闭症。

[11]一种药品的制备方法，为了预防和/或减轻麻醉药诱发性神经障碍而并用全身麻醉药和氢。

[12]如[11]所述的制备方法，其特征在于，麻醉药诱发性神经障碍是伴随神经细胞凋亡发生的。

[13]如上述[11]或[12]所述的制备方法，其中，全身麻醉药为吸入麻醉药或液态的静脉麻醉药，氢为氢气。

[14]如上述[13]所述的制备方法，其中，氢气浓度在药品中为0.15～7％(v/v)。

[15]如上述[11]～[14]中任一项所述的制备方法，其中，药品以胎儿、新生儿、婴儿、幼儿、儿童或老年人为对象。

[16]全身麻醉药在制造与氢组合使用的全身麻醉剂中的应用。

[17]全身麻醉药与氢在制造全身麻醉药与氢组合而成的药品中的应用。

[18]全身麻醉药与氢在制造用于预防和/或减轻麻醉药诱发性神经障碍的药品中的应用。

[19]如上述[18]所述的应用，其中，麻醉药诱发性神经障碍是伴随神经细胞凋亡发生的。

[20]如上述[16]～[18]中任一项所述的应用，其中，全身麻醉药为吸入麻醉药或液态的静脉麻醉药，氢为氢气。

[21]如上述[20]所述的应用，其中，氢气浓度在药品中为0.15～7％(v/v)。

[22]如上述[16]～[18]中任一项所述的应用，以胎儿、新生儿、婴儿、幼儿、儿童或老年人为对象。

[23]如上述[16]～[18]中任一项所述的应用，其中，全身麻醉药为选自由一氧化二氮、异氟烷、安氟醚、甲氧氟烷、七氟烷、地氟烷、乙醚、异丙酚和咪达唑仑组成的组中的一种以上的麻醉药。

[24]如上述[18]所述的应用，其中，麻醉药诱发性神经障碍为神经运动障碍、神经认知障碍、精神认知障碍或自闭症。

[25]一种预防和/或减轻麻醉药诱发性神经障碍的方法，其具有并用全身麻醉药和氢而向对象给药的步骤。

[26]如上述[25]所述的方法，其中，全身麻醉药为吸入麻醉药或液态的静脉麻醉药，氢为氢气。

[27]如上述[26]所述的方法，其中，氢气浓度在药品中为0.15～7％(v/v)。

[28]如上述[25]所述的方法，其中，给药对象为胎儿、新生儿、婴儿、幼儿、儿童或老年人。

[29]如上述[25]所述的方法，其中，全身麻醉药为选自由一氧化二氮、异氟烷、安氟醚、甲氧氟烷、七氟烷、地氟烷、乙醚、异丙酚和咪达唑仑组成的组中的一种以上的麻醉药。

[30]如上述[25]所述的方法，其中，麻醉药诱发性神经障碍为神经运动障碍、神经认知障碍、精神认知障碍或自闭症。

[31]如上述[25]所述的方法，其中，麻醉药诱发性神经障碍是伴随神经细胞凋亡发生的。

发明效果

本发明的药品能够预防和/或减轻脑(优选为发育期)的麻醉药诱发性神经障碍。另外，本发明简便、无副作用、有效地发挥作用并且廉价，因此例如能够在产科和儿科等的医疗中提供有效的全身麻醉用药品。

附图说明

图1表示试验例1的结果。A表示使用分解PARP(凋亡性细胞死亡的生物标记)的抗体后的蛋白质印迹的结果。使用β-肌动蛋白反应作为对照。B表示对分解PARP条带定量而得的结果。图中，^***表示P＜0.001。图中，Sevo表示七氟烷。

图2表示试验例2的小鼠脑的光学显微镜图像。图中，A表示载气为30％氧、且未给药七氟烷的样品(对照)的结果，B表示载气为30％氧、且在3％七氟烷中曝露6小时后的、小鼠脑的光学显微镜观察时的图像，C表示载气为30％氧、且在3％七氟烷和1.3％氢中曝露6小时后的、小鼠脑的光学显微镜图像。图中，茶色的点表示分解caspase-3阳性的细胞的存在、即细胞凋亡。各图像为对每一个组从8～10只小鼠中选出的1只的图像。图中，比例尺为1mm。

图3表示通过试验例2的免疫化学染色检测到的表示分解caspase-3的茶色点的数目的计数结果。对照、七氟烷和七氟烷+氢的各组的平均值的比较通过使用单因素方差分析和其后的Newman-Keuls事后检验(对于每一组，n＝8-10只小鼠)来实施。F值和P值显示在各组的下方。图中，与对照进行比较时，^*表示P＜0.05、^**表示P＜0.01、^***表示P＜0.001。另外，^#表示P＜0.05、^##表示P＜0.01、^###表示P＜0.001。

图4表示使用了末端脱氧核苷酸转移酶的缺口末端标记(TUNEL)法的染色结果。图中，A表示载气为30％氧、未给药七氟烷样品(对照)的结果，B表示载气为30％氧、且在3％七氟烷中曝露6小时后、再经过6小时后的小鼠脑的光学显微镜图像，C表示载气为30％氧、且在3％七氟烷和1.3％氢中曝露6小时后、再经过6小时后的小鼠脑的光学显微镜观察时的图像。图中，茶色的点为TUNEL阳性的细胞，表示发生了凋亡的细胞。各图像为对每一个组从8只小鼠中选出的1只小鼠的图像。图中，比例尺为1mm。

图5表示氢气在发育期的脑中缓和七氟烷曝露引起的氧化应激。图中，A表示载气为30％氧、且未给药七氟烷的样品(对照)的结果，B表示载气为30％氧、且在3％七氟烷中曝露6小时后的、小鼠脑的光学显微镜图像，C表示载气为30％氧、且在3％七氟烷和1.3％氢(C)中曝露6小时后的、小鼠脑的荧光显微镜观察时的图像。图中，红色为4-羟基-2-壬烯醛(4-HNE)阳性的细胞，表示受到了氧化应激。图中，比例尺为100μm。各图像为对每一个组从8只小鼠中选出的1只小鼠的图像。

图6表示试验例3的结果。图中，A表示旷场试验的结果，B表示Y字型迷宫试验的结果，C表示条件性恐惧试验场景试验的结果，D表示条件性恐惧试验噪音试验的结果。图中，与对照进行比较时，^**表示P＜0.01、^***表示P＜0.001。另外，^##表示P＜0.01、^###表示P＜0.001。

图7表示试验例3的结果。图中，A表示社会性试验的结果、B表示嗅觉试验的结果、C表示新物体试验的结果。图中，与对照进行比较时，^**表示P＜0.01、^#表示P＜0.05。另外，与对应的生物靶进行比较时，^§§§表示P＜0.001。

具体实施方式

本发明的药品为全身麻醉药与氢组合而成的、用于人或人以外的动物的药品。另外，本发明的药品为将全身麻醉药和氢并用给药的、用于人或人以外的动物的全身麻醉的药品。本发明的药品能够用于预防和/或减轻麻醉药诱发性神经障碍。本发明中的全身麻醉药适宜以与氢并用的方式使用。本发明的药品是指全身麻醉药与氢组合而成的药品，包括分别各自从相同或不同的给药途径同时给药的给药方式、和分别各自经相同或不同的给药途径且错开间隔的给药中的任一种给药方式。

关于全身麻醉药，本技术领域中已知，对作为NMDA受体拮抗剂的全身麻醉药的曝露会在脑发育的突触形成阶段中诱发凋亡性神经变性。

由于对麻醉药的曝露，在神经元以外的神经胶质细胞等几个区域中凋亡增加(Anesthesiology 2010；112:834-841)、以及由于NMDA受体的上调而发生凋亡(Int.J.Devl Neuroscience 27(2009)727-731)，因此认为麻醉药通过与一般的细胞凋亡不同的作用机理诱发细胞凋亡，结果，担心会诱发神经障碍。

另外，一般认为，具有GABA受体激动作用的麻醉药通过影响GABA神经元、扰乱兴奋性神经元和抑制性神经元的平衡而诱发神经障碍(Anesthesiology 2009；111:1365-1371)。

以儿童麻醉与细胞凋亡水平上升的后述明确的关联为前提，为了确定该过程的背景机理，多个研究正在进行中。已知，GABA受体和NMDA受体两者的活化会影响神经细胞的存活信号转导(Brunet等,2001,Current Opinion in Neurobiology 11:297-305；Bittigau等,2002,PNAS 99(23):15089-15094)。考虑到该方面，乙醇中毒的小鼠形成了用于该过程的研究的动物模型的基础。caspase-3为凋亡细胞的优良标记，但其为高度分支的死亡信号转导级联的最终效应因子，因此从其位置几乎无法洞察细胞凋亡的机理。caspase-3活化是细胞凋亡的外因性死亡受体介导通路和内因性线粒体介导通路这两者共通的步骤(Green,2000,Cell 102:1-4)。

Young等考虑了通过使用一系列合格的实验来在细胞凋亡的机制中使研究对象缩小为单一通路。通过使用双重免疫组织化学-免疫荧光、蛋白质印迹分析和基因敲除小鼠的组合，明确了通路特异的成分，尤其是Bax和细胞色素c(内因性)和caspase-8(外因性)(Young等,CellDeath and Differentiation(2003)10,1148-1155)。用乙醇处理后的野生型小鼠显示出乙醇诱发性凋亡的特征性模式，与此相对，实施了同样处理的纯合体Bax-基因敲除小鼠实质上完全不显示出细胞凋亡的迹象。实际上，细胞凋亡水平低于在作为对照的生理学性细胞死亡中观察到的细胞凋亡水平。另外，Bax-基因敲除小鼠证实未发生caspase-8活化。由此可以明确，在麻醉诱发性凋亡中，内因性细胞凋亡通路参与其中。

以线粒体周边为中心的内因性通路被神经细胞的胞浆中的凋亡促进性和抗凋亡性介质的组合调控。在与发生中的神经细胞的关联中，Bcl-X_L(Bcl-2家族的成员)主要呈抗凋亡性，与此相对，Bax呈凋亡促进性(Yuan and Yanker,2000,Nature 407:802-809)。Young等设立了如下的假说：乙醇、双重NMDA受体拮抗剂(2种NMDA受体拮抗剂的同时给药)和GABA激动性麻醉剂具有将通常以非活性状态保存于线粒体膜的Bax释放到胞浆的能力。

Bax存在于胞浆中时(不被Bcl-X_L抑制时)成为活性的复合体的一部分，其可以回到线粒体膜并破坏线粒体膜(Korsmeyer等,2002,CellDeath and Differentiation 7:1166-1173)。认为之后的线粒体内容物(具体而言，细胞色素c-细胞能量产生的通常部分)向胞浆的输送产生极强的凋亡促进信号。胞浆的细胞色素c与Apaf-1和caspase-8形成复合体，接着该复合体活化caspase-3，导致进一步级联的开始，最终，引起细胞骨架蛋白和DNA两者的特征性断裂(Dikranian等,2001,Neurobiology of Disease 8:359-379)。

当然，从上述分析不可能鉴定麻醉药与该通路相互作用的正确点。另外，各个种类的药剂能够诱发细胞凋亡(例如异氟烷单独(Jevtovic-Todorovic等,2003)和氯胺酮单独(Ikonomidou等,1999,Science 238:70-74))。因此，接着引起的细胞内级联虽然向下游收敛(Brunet等,2001,Current Opinion in Neurobiology 11:297-305；Bittigau等,2002,PNAS 99(23):15089-15094)，但双重GABA激动性药剂和NMDA受体拮抗剂的使用并不区别2种受体相互作用间的潜在不同。异氟烷和/或一氧化二氮很有可能通过使细胞内钙输送混乱，而使细胞内Bax/Bcl-2之比变得调节不良。

如下的谷氨酸-钙离子学说得到支持：细胞内钙离子浓度上升时，钙离子依赖性酶的活化(NOS、PLA2、CaM激酶等)介导的级联系统被活化，并引起作为膜构成成分的脂质的障碍、自由基(ROS)的产生、线粒体呼吸链的障碍和ATP产生不良，这些成为导火索而诱发急性或迟发性细胞凋亡。但是，在该学说的级联中，细胞凋亡的真正原因因子不明(麻酔、“虚血性神経細胞死の分子生物学的機序と薬物療法による脳保護”、2007,56:248-270)。

作为本发明中的全身麻醉药，只要是可得到全身性麻醉效果的药，则没有特别限定，例如优选列举吸入麻醉药和静脉麻醉药等。

作为本发明中的吸入麻醉药，没有特别限定，例如可举出：氟烷、异氟烷、安氟醚、甲氧氟烷、七氟烷、地氟烷等挥发性吸入麻醉药；乙烯、环丙烷、乙醚、氯仿、一氧化二氮或氙气等气体性吸入麻醉药，优选异氟烷、安氟醚、七氟烷、地氟烷等卤代醚系化合物或一氧化二氮等。吸入麻醉药也可以与通过注射或静脉输液进行给药的静脉麻醉药组合使用。

作为本发明中的静脉麻醉药，没有特别限定，例如可举出：异丙酚、咪达唑仑、氯胺酮、替来他明、硫喷妥钠、美索比妥或依托咪酯等，优选异丙酚、咪达唑仑等。

作为本发明中使用的全身麻醉药，更优选上述具体例中的选自由一氧化二氮、异氟烷、安氟醚、甲氧氟烷、七氟烷、地氟烷、乙醚、异丙酚和咪达唑仑组成的组中的一种以上的麻醉药。

上述具体例中的氟烷、异氟烷、安氟醚、甲氧氟烷、七氟烷、地氟烷、依托咪酯、硫喷妥钠、异丙酚和咪达唑仑等麻醉药为GABA_A受体激动剂。另外，所述麻醉药中的几种(例如N₂O、氯胺酮和异氟烷等)为NMDA受体拮抗剂，但并没有对全部麻醉药明确NMDA受体拮抗作用。

关于全身麻醉药的用量，根据年龄、健康状态、与其他药品的相互作用和所实施的手术种类，每个患者都不同，只要是能够实现本发明效果的范围，则没有特别限定，例如，上述吸入麻醉药和静脉麻醉药等全身麻醉药在药品中的浓度可以为0.1～10％(v/v)，可以为0.2～8％(v/v)，也可以为0.2～5％(v/v)。另外，也可以改变麻醉导入时和麻醉状态维持时的浓度。

本发明中，氢表示氢分子(H₂)，只要是氢分子(H₂)，则形态没有特别限定，可以使用氢气，也可以使用将氢气溶解在水中而得到的氢水。

作为所述全身麻醉药和氢的应用对象，没有特别限定，例如可举出：人、牛、马、绵羊、山羊、狗、猴子、猫、熊、大鼠、兔子等动物。

本发明的药品的应用对象的年龄等没有特别限定，优选应用于容易受到麻醉影响的时期的动物。例如对象为人时，优选以胎儿、新生儿、婴儿、幼儿、儿童或老年人为对象，考虑到脑处于发育期且容易受到麻醉影响的方面，更优选为胎儿、新生儿、婴儿、幼儿、儿童等。进一步优选为胎儿、新生儿、婴儿或3岁以下的幼儿。所述胎儿是指妊娠第8周以后且出生前的胎儿。所述新生儿是指出生后且未满28天的婴儿。所述婴儿是指未满1岁的小孩。所述幼儿是指1岁以上且未满7岁。所述儿童是指7岁以上且未满15岁。所述老年人是指65岁以上的人。

作为本发明的药品的实施方式，可以并用全身麻醉药和氢，也可以预先将全身麻醉药和氢混合。

本发明的药品中，全身麻醉药的形态和氢的形态没有特别限定，从显著表现出优良的麻醉药诱发性神经障碍的预防和/或减轻效果的观点出发，优选吸入麻醉药或静脉麻醉药与氢气的组合。

对于本发明的药品而言，在并用全身麻醉药与氢的情况下，使用全身麻醉药和氢的时机没有特别限定，可以以全身麻醉药的前给药、同时给药或后给药中的任意一种方式使用氢，并且可以组合任意方式，但从没有对对象进行预处理的负担的观点出发，优选全身麻醉药与氢的同时给药。在此，“前给药”是指对未给药全身麻醉药的状态的对象给药一定时间的氢。另外，“同时给药”是指从全身麻醉药的给药开始时到给药停止时持续地对对象给药氢、或者从全身麻醉药的给药开始时到给药停止时之间对对象给药一定时间的氢。“后给药”是指从停止给药全身麻醉药后对对象给药一定时间的氢。需要说明的是，全身麻醉药和氢的给药时间没有特别限定，例如在将七氟烷以4.0％以下的浓度与氧和一氧化二氮组合使用的情况下，可以为10分钟～8小时左右。

全身麻醉药与氢的并用中，全身麻醉药的形态和氢的形态没有特别限定，本发明的一个优选方式中，从显著地显示出优良的麻醉药诱发性神经障碍的预防和/或减轻效果的观点出发，优选为全身麻醉药为吸入麻醉药或静脉麻醉药、且氢为氢气的并用。

对于本发明的药品而言，在将全身麻醉药和氢预先混合的情况下，混合比率没有特别限定，例如在使用吸入麻醉药和氢气时，药品中的氢气浓度通常为0.01～7％(v/v)，考虑到安全性时上限值优选低，例如可以为0.15～4％(v/v)，可以为0.18～3％(v/v)，可以为0.2～1.5％(v/v)，可以为0.25％(v/v)以上且小于1％(v/v)，也可以为0.28～0.9％(v/v)。使

关于本发明中使用的氢的用量，根据年龄、健康状态、与其他药品的相互作用和所实施的手术种类，每个患者都不同，只要是能够实现本发明效果的范围，则没有特别限定，药品中的氢浓度通常为0.01～7％(v/v)，考虑到安全性时上限值优选低，例如可以为0.15～4％(v/v)，可以为0.18～3％(v/v)，可以为0.2～1.5％(v/v)，可以为0.25％(v/v)以上且小于1％(v/v)，也可以为0.28～0.9％(v/v)。

作为本发明的一个优选方式，在将吸入麻醉药和氢气组合而成的、用于人或人以外的动物的药品中，没有特别限定，但药品中的氢气浓度通常为0.01～7％(v/v)，考虑到安全性时上限值优选低，例如可以为0.15～4％(v/v)，可以为0.18～3％(v/v)，可以为0.2～1.5％(v/v)，可以为0.25％(v/v)以上且小于1％(v/v)，也可以为0.28～0.9％(v/v)。

作为本发明的一个优选方式，在将液态的静脉麻醉药与氢气组合而成的、用于人或人以外的动物的药品中，没有特别限定，但药品中的作为气体的氢气浓度通常为0.01～7％(v/v)，考虑到安全性时上限值优选低，例如可以为0.15～4％(v/v)，可以为0.18～3％(v/v)，可以为0.2～1.5％(v/v)，可以为0.25％(v/v)以上且小于1％(v/v)，也可以为0.28～0.9％(v/v)。

作为本发明的一个优选方式，在将吸入麻醉药与氢气并用使用时，药品中的氢气浓度没有特别限定，通常为0.01～7％(v/v)，考虑到安全性时上限值优选低，例如可以为0.15～4％(v/v)，可以为0.18～3％(v/v)，可以为0.2～1.5％(v/v)，可以为0.25％(v/v)以上且小于1％(v/v)，也可以为0.28～0.9％(v/v)。

作为本发明的一个优选方式，在将液态的静脉麻醉药与氢气并用使用时，药品中的作为气体的氢气浓度没有特别限定，通常为0.01～7％(v/v)，考虑到安全性时上限值优选低，例如可以为0.15～4％(v/v)，可以为0.18～3％(v/v)，可以为0.2～1.5％(v/v)，可以为0.25％(v/v)以上且小于1％(v/v)，也可以为0.28～0.9％(v/v)。

只要不妨碍本发明的效果，则也可以在本发明的药品中加入氧、氮、一氧化二氮等。本发明的药品中含有的氧浓度通常为20～90％(v/v)左右、优选20～70％(v/v)左右、优选20～50％(v/v)左右。只要不妨碍本发明的效果，则氮和一氧化二氮的浓度不受限定。

本发明中，关于药品的气体成分的构成成分，上述的成分以外的余量可以全部为氮气，除氮气以外也可以含有空气中含有的微量成分。

作为使用吸入麻醉药和氢气时的优选实施方式，没有特别限定，例如可举出：(i)含有0.1～10％(v/v)的吸入麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～90％(v/v)的氧的药品；(ii)含有0.1～8％(v/v)的吸入麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～70％(v/v)的氧的药品；或者(iii)含有0.1～5％(v/v)的吸入麻醉药、0.15～1.5(v/v)的氢气和20～50％(v/v)的氧的药品等。

作为使用液态的静脉麻醉药和氢气时的优选实施方式，没有特别限定，例如可举出：(i)含有0.1～10％(w/w)的静脉麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～90％(v/v)的氧的药品；(ii)含有0.1～8％(w/w)的静脉麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～70％(v/v)的氧的药品；或者(iii)含有0.1～5％(w/w)的静脉麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～50％(v/v)的氧的药品等。

作为本发明的另一个优选方式，在将静脉麻醉药和氢水组合而成的、用于人或人以外的动物的药品中，药品中的氢水浓度没有特别限定。

本发明的另一个优选方式中，在将静脉麻醉药与氢水并用使用时，药品中的氢水浓度没有特别限定。

本发明的药品能够预防和/或减轻麻醉药诱发性神经障碍。“预防和/或减轻神经障碍”是指在对应用了本发明的药品的对象(例如在人的情况下为患者)、与在不存在氢的条件下应用了全身麻醉药的对象进行比较的情况下，使一种以上的神经障碍的严重度下降。另外，“预防和/或减轻神经细胞损伤”是指在对应用了本发明的药品的对象、与在不存在氢的条件下应用了全身麻醉药的对象进行比较的情况下，使一种以上的神经细胞的损伤的严重度下降。

从现有数据可以推定，发育中的人脑在子宫内和人生的最初1年这两个时间从胎儿表型向与成人表型类似的表型发生极为动态的转变。该过程具有如下特征：突触的极快转化(ターンオーバー)(高达20％/天(Okabe等,1999,Nat.Neuroscience 2:804-811))和高水平的背景细胞凋亡(Hua和Smith,2004,Nature Neuroscience 7(4):327-332)。这大概是由于为了维持能量效率，无法到达靶细胞的突触的神经细胞被排除。该研究确认：神经发生(突触形成)在该决定性阶段内对麻醉剂的曝露会在发育中的脑中引起细胞凋亡。根据实验证实，对GABA激动性吸入剂(例如异氟烷等)的曝露会在皮质中诱发细胞凋亡水平上升4倍。另外，对于一氧化二氮(作为单一的药剂时不显示神经变性)而言，大幅增强至以异氟烷诱发性凋亡为对照观察到的12倍，由此显示出其神经变性潜力。从海马中得到同样的结果，该结果中，异氟烷和异氟烷-一氧化二氮混合物使细胞凋亡水平上升(分别为4倍和7倍)。

海马、即形成边缘系统的一部分的皮质组织特化而成的层，在记忆形成中具有重要的功能(Aggleton and Brown,1999,Behav Brain Sci22(3):425-44)。海马的神经细胞具有显示出下述现象的能力：突触的效力因特定模式的神经活性而逐渐增强、即作为“长时程增强”(LTP)已知的现象。认为该过程是细胞水平上的记忆的基础。一般而言，海马的处理在海马和海马旁回(下托)这两者发生，然后投影到穹窿。考虑到海马和下托中神经细胞损伤的扩展，就不会惊讶于曝露于高水平麻醉药的新生大鼠显示出成人学习障碍的迹象(Jevtovic-Todorovic等,2003)，这在相同的研究中被LTP抑制的发现证实。

作为本发明中的麻醉药诱发性神经障碍，可优选举出：脑的麻醉药诱发性神经障碍，本发明的神经障碍没有特别限定，可举出：神经运动障碍、神经认知障碍、精神认知障碍、智力障碍、自闭症等。所述神经运动障碍包括强度、平衡和移动性的障碍。所述神经认知障碍包括学习障碍和记忆障碍。一般认为上述神经障碍因神经变性、神经细胞凋亡、神经细胞坏死等因素引起，认为其可能不是因特定的一个因素、而是因复合因素引起。其中，推测神经细胞凋亡在所述任一障碍中造成某些影响。所述神经变性是指伴随细胞收缩、边缘化和封入膜中的凋亡小体的形成的染色质凝聚。

这样的神经认知障碍通常通过如下充分确立的基准进行评价：Randt记忆测验的短故事模型(short-story module)[Randt C,Brown E.Administration manual:Randt Memory Test.New York:Life Sciences,1983]、修订韦氏成人智力测验(Wechsler Adult Intelligence ScaleRevised)的数字广度分测验(Digit Span subtest)和数字符号分测验(DigitSymbol subtest)[Wechsler D.The Wechsler Adult IntelligenceScale-Revised(WAIS-R).San Antonio,Tex.:Psychological Corporation,1981.]、修订本顿视觉保持测验(Benton Revised Visual RetentionTest)[Benton AL,Hansher K.Multilingual aphasia examination.Iowa City:University of Iowa Press,1978]和连线测验(Trail Making Test)(B部分)[Reitan RM.Validity of the Trail Making Test as an indicator oforganic brain damage.Percept Mot Skills 1958；8:271-6]等。其他适合的神经运动和神经认知检查记载于：Combs D,D'Alecy L:Motorperformance in rats exposed to severe forebrain ischemia:Effect of fastingand 1,3-butanediol.Stroke 1987；18:503-511和Gionet T,Thomas J,Warner D,Goodlett C,Wasserman E,West J:Forebrain ischemia inducesselective behavioral impairments associated with hippocampal injury inrats.Stroke 1991；22:1040-1047。

本发明的另一方式涉及将全身麻醉药与氢并用的、麻醉药诱发性神经障碍的预防和/或减轻用药品的制备方法。全身麻醉药、氢、药品的应用对象和麻醉药诱发性神经障碍以及它们的组合如上所述。本制备方法可以具有将全身麻醉药与氢并用的步骤，也可以具有将全身麻醉药和氢预先混合的步骤。

本制备方法中，作为使用吸入麻醉药和氢气时的优选实施方式，没有特别限定，例如可举出：(i)具备以含有0.1～10％(v/v)的吸入麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～90％(v/v)的氧的方式将吸入麻醉药与氢气并用的步骤、或将吸入麻醉药和氢气预先混合的步骤的药品的制备方法；(ii)具备以含有0.1～8％(v/v)的吸入麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～70％(v/v)的氧的方式将吸入麻醉药与氢气并用的步骤、或将吸入麻醉药和氢气预先混合的步骤的药品的制备方法；或者(iii)具备以含有0.1～5％(v/v)的吸入麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～50％(v/v)的氧的方式将吸入麻醉药与氢气并用的步骤、或将吸入麻醉药和氢气预先混合的步骤的药品的制备方法；等。

本制备方法中，作为使用液态的静脉麻醉药和氢气时的优选实施方式，没有特别限定，例如可举出：(i)具备以含有0.1～10％(w/w)的静脉麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～90％(v/v)的氧的方式将静脉麻醉药与氢气并用的步骤、或将静脉麻醉药和氢气预先混合的步骤的药品的制备方法；(ii)具备以含有0.1～8％(w/w)的静脉麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～70％(v/v)的氧的方式将静脉麻醉药与氢气并用的步骤、或将静脉麻醉药和氢气预先混合的步骤的药品的制备方法；或者(iii)具备以含有0.1～5％(w/w)的静脉麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～50％(v/v)的氧的方式将静脉麻醉药与氢气并用的步骤、或将静脉麻醉药和氢气预先混合的步骤的药品的制备方法；等。

作为本发明的另一方式，可举出全身麻醉药在与氢组合使用的全身麻醉剂的制造中的应用。以药效成分的稳定、患者的水分补给和维持电解质平衡为目的，所述麻醉剂中可以加入公知的赋形剂、添加剂。作为所述赋形剂、添加剂，只要不妨碍本发明的效果，就可以使用现有公知的赋形剂、添加剂。例如异丙酚的麻醉剂中可以添加豆油、中链脂肪酸甘油三酯、纯化蛋黄卵磷脂、浓甘油、油酸钠等。全身麻醉药、氢和药品的应用对象如上所述。

该应用中，作为使用吸入麻醉药和氢气时的优选实施方式，没有特别限定，例如可举出：(i)全身麻醉药在如下全身麻醉剂的制造中的应用，所述全身麻醉剂含有0.1～10％(v/v)的吸入麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～90％(v/v)的氧、还可以根据需要含有添加剂；(ii)全身麻醉药在如下全身麻醉剂的制造中的应用，所述全身麻醉剂含有0.1～8％(v/v)的吸入麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～70％(v/v)的氧、还可以根据需要含有添加剂；或者(iii)全身麻醉药在如下全身麻醉剂的制造中的应用，所述全身麻醉剂含有0.1～5％(v/v)的吸入麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～50％(v/v)的氧、还可以根据需要含有添加剂；等。

该应用中，作为使用液态的静脉麻醉药和氢气时的优选实施方式，没有特别限定，例如可举出：(i)全身麻醉药在如下全身麻醉剂的制造中的应用，所述全身麻醉剂含有0.1～10％(w/w)的静脉麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～90％(v/v)的氧、还可以根据需要含有添加剂；(ii)全身麻醉药在如下全身麻醉剂的制造中的应用，所述全身麻醉剂含有0.1～8％(w/w)的静脉麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～70％(v/v)的氧、还可以根据需要含有添加剂；或者(iii)全身麻醉药在如下全身麻醉剂的制造中的应用，所述全身麻醉剂含有0.1～5％(w/w)的静脉麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～50％(v/v)的氧、还可以根据需要含有添加剂；等。

本发明的另一方式涉及全身麻醉药与氢在将全身麻醉药与氢组合而成的药品的制造中的应用。全身麻醉药、氢和药品的应用对象以及它们的组合如上所述。作为该应用的实施方式，可以将全身麻醉药与氢并用，也可以将全身麻醉药和氢预先混合。

该应用中，作为使用吸入麻醉药和氢气时的优选实施方式，没有特别限定，例如可举出：(i)全身麻醉药与氢在含有0.1～10％(v/v)的吸入麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～90％(v/v)的氧的药品的制造中的应用；(ii)全身麻醉药与氢在含有0.1～8％(v/v)的吸入麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～70％(v/v)的氧的药品的制造中的应用；或者(iii)全身麻醉药与氢在含有0.1～5％(v/v)的吸入麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～50％(v/v)的氧的药品的制造中的应用；等。

该应用中，作为使用液态的静脉麻醉药和氢气时的优选实施方式，没有特别限定，例如可举出：(i)全身麻醉药与氢在含有0.1～10％(w/w)的静脉麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～90％(v/v)的氧的药品的制造中的应用；(ii)全身麻醉药与氢在含有0.1～8％(w/w)的静脉麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～70％(v/v)的氧的药品的制造中的应用；或者(iii)全身麻醉药与氢在含有0.1～5％(w/w)的静脉麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～50％(v/v)的氧的药品的制造中的应用；等。

本发明的另一方式涉及全身麻醉药与氢在用于预防和/或减轻麻醉药诱发性神经障碍的药品的制造中的应用。全身麻醉药、氢、药品的应用对象、麻醉药诱发性神经障碍和实施方式以及它们的组合如上所述。

该应用中，作为使用吸入麻醉药和氢气时的优选实施方式，没有特别限定，例如可举出：(i)全身麻醉药与氢在用于预防和/或减轻麻醉药诱发性神经障碍的药品的制造中的应用，所述药品含有0.1～10％(v/v)的吸入麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～90％(v/v)的氧；(ii)全身麻醉药与氢在用于预防和/或减轻麻醉药诱发性神经障碍的药品的制造中的应用，所述药品含有0.1～8％(v/v)的吸入麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～70％(v/v)的氧；或者(iii)全身麻醉药与氢在用于预防和/或减轻麻醉药诱发性神经障碍的药品的制造中的应用，所述药品含有0.1～5％(v/v)的吸入麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～50％(v/v)的氧；等。

该应用中，作为使用液态的静脉麻醉药和氢气时的优选实施方式，没有特别限定，例如可举出：(i)全身麻醉药与氢在用于预防和/或减轻麻醉药诱发性神经障碍的药品的制造中的应用，所述药品含有0.1～10％(w/w)的静脉麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～90％(v/v)的氧；(ii)全身麻醉药与氢在用于预防和/或减轻麻醉药诱发性神经障碍的药品的制造中的应用，所述药品含有0.1～8％(w/w)的静脉麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～70％(v/v)的氧；或者(iii)全身麻醉药与氢在用于预防和/或减轻麻醉药诱发性神经障碍的药品的制造中的应用，所述药品含有0.1～5％(w/w)的静脉麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～50％(v/v)的氧；等。

本发明的另一方式涉及全身麻醉药与氢在用于预防和/或减轻伴随神经细胞凋亡发生的麻醉药诱发性神经障碍的药品的制造中的应用。全身麻醉药、氢、药品的应用对象、麻醉药诱发性神经障碍和实施方式以及它们的组合如上所述。

该应用中，作为使用吸入麻醉药和氢气时的优选实施方式，没有特别限定，例如可举出：(i)全身麻醉药与氢在用于预防和/或减轻伴随神经细胞凋亡发生的麻醉药诱发性神经障碍的药品的制造中的应用，所述药品含有0.1～10％(v/v)的吸入麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～90％(v/v)的氧；(ii)全身麻醉药与氢在用于预防和/或减轻伴随神经细胞凋亡发生的麻醉药诱发性神经障碍的药品的制造中的应用，所述药品含有0.1～8％(v/v)的吸入麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～70％(v/v)的氧；或者(iii)全身麻醉药与氢在用于预防和/或减轻伴随神经细胞凋亡发生的麻醉药诱发性神经障碍的药品的制造中的应用，所述药品含有0.1～5％(v/v)的吸入麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～50％(v/v)的氧；等。

该应用中，作为使用液态的静脉麻醉药和氢气时的优选实施方式，没有特别限定，例如可举出：(i)全身麻醉药与氢在用于预防和/或减轻伴随神经细胞凋亡发生的麻醉药诱发性神经障碍的药品的制造中的应用，所述药品含有0.1～10％(w/w)的静脉麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～90％(v/v)的氧；(ii)全身麻醉药与氢在用于预防和/或减轻伴随神经细胞凋亡发生的麻醉药诱发性神经障碍的药品的制造中的应用，所述药品含有0.1～8％(w/w)的静脉麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～70％(v/v)的氧；或者(iii)全身麻醉药与氢在用于预防和/或减轻伴随神经细胞凋亡发生的麻醉药诱发性神经障碍的药品的制造中的应用，所述药品含有0.1～5％(w/w)的静脉麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～50％(v/v)的氧；等。

本发明的再一方式涉及全身麻醉药与氢在用于预防和/或减轻麻醉诱发性神经细胞损伤的药品的制造中的应用。全身麻醉药、氢、药品的应用对象、麻醉药诱发性神经障碍和实施方式以及它们的组合如上所述。

本发明的另一方式涉及具有并用全身麻醉药和氢而向对象给药的步骤的、预防和/或减轻麻醉药诱发性神经障碍的方法。全身麻醉药、氢和麻醉药诱发性神经障碍以及它们的组合如上所述。该方法可以具有将全身麻醉药与氢并用的步骤，也可以具有将全身麻醉药和氢预先混合的步骤。

该方法中，作为使用吸入麻醉药和氢气时的优选实施方式，没有特别限定，例如可举出：(i)具有向对象给药包括0.1～10％(v/v)的吸入麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～90％(v/v)的氧的步骤的、预防和/或减轻麻醉药诱发性神经障碍的方法；(ii)具有向对象给药包括0.1～8％(v/v)的吸入麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～70％(v/v)的氧的步骤的、预防和/或减轻麻醉药诱发性神经障碍的方法；或者(iii)具有向对象给药包括0.1～5％(v/v)的吸入麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～50％(v/v)的氧的步骤的、预防和/或减轻麻醉药诱发性神经障碍的方法；等。

该方法中，作为使用液态的静脉麻醉药和氢气时的优选实施方式，没有特别限定，例如可举出：(i)具有向对象给药包括0.1～10％(w/w)的静脉麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～90％(v/v)的氧的步骤的、预防和/或减轻麻醉药诱发性神经障碍的方法；(ii)具有向对象给药包括0.1～8％(w/w)的静脉麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～70％(v/v)的氧的步骤的、预防和/或减轻麻醉药诱发性神经障碍的方法；或者(iii)具有向对象给药包括0.1～5％(w/w)的静脉麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～50％(v/v)的氧的步骤的、预防和/或减轻麻醉药诱发性神经障碍的方法；等。

该方式中，将全身麻醉药与氢并用的时机没有特别限定，可以以全身麻醉药的前给药、同时给药或后给药中的任一种方式使用氢，并且可以组合任意方式，但从没有对对象进行预处理的负担的观点出发，优选全身麻醉药与氢的同时给药。在此，“前给药”是指对未给药全身麻醉药的状态的对象给药一定时间的氢。另外，“同时给药”是指从全身麻醉药的给药开始时到给药停止时持续地对对象给药氢、或者从全身麻醉药的给药开始时到给药停止时之间对对象给药一定时间的氢。“后给药”是指从停止给药全身麻醉药后对对象给药一定时间的氢。需要说明的是，全身麻醉药和氢的给药时间没有特别限定。作为所述全身麻醉药和氢的给药对象，没有特别限定，例如可举出：人、牛、马、绵羊、山羊、狗、猴子、猫、熊、大鼠、兔子等动物。

本发明的全身麻醉药和氢的给药对象的年龄等没有特别限定，优选应用于容易受到麻醉影响的时期的动物。例如对象为人时，优选以胎儿、新生儿、婴儿、幼儿、儿童或老年人为对象，考虑到脑处于发育期且容易受到麻醉影响的方面，更优选为胎儿、新生儿、婴儿、幼儿、儿童等，进一步优选为胎儿、新生儿、婴儿或3岁以下的幼儿。胎儿、新生儿、婴儿、幼儿、儿童或老年人的各定义如上所述。

本发明的另一方式涉及具有将全身麻醉药与氢组合而成的药品向对象给药的步骤的、抑制麻醉药诱发性凋亡的方法。全身麻醉药、氢和药品的应用对象以及它们的组合如上所述。本方法可以具有将全身麻醉药与氢并用的步骤，也可以具有将全身麻醉药和氢预先混合的步骤。

该方法中，作为使用吸入麻醉药和氢气时的优选实施方式，没有特别限定，例如可举出：(i)具有下述步骤的抑制麻醉药诱发性凋亡的方法：以含有0.1～10％(v/v)的吸入麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～90％(v/v)的氧的方式并用吸入麻醉药与氢气的步骤或预先混合吸入麻醉药和氢气的步骤、以及向对象给药由上述步骤得到的药品的步骤；(ii)具有下述步骤的抑制麻醉药诱发性凋亡的方法：以含有0.1～8％(v/v)的吸入麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～70％(v/v)的氧的方式并用吸入麻醉药与氢气的步骤或预先混合吸入麻醉药和氢气的步骤、以及向对象给药由上述步骤得到的药品的步骤；或者(iii)具有下述步骤的抑制麻醉药诱发性凋亡的方法：以含有0.1～5％(v/v)的吸入麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～50％(v/v)的氧的方式并用吸入麻醉药与氢气的步骤或预先混合吸入麻醉药和氢气的步骤、以及向对象给药由上述步骤得到的药品的步骤；等。

该方法中，作为使用液态的静脉麻醉药和氢气时的优选实施方式，没有特别限定，例如可举出：(i)具有下述步骤的抑制麻醉药诱发性凋亡的方法：以含有0.1～10％(w/w)的静脉麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～90％(v/v)的氧的方式并用静脉麻醉药与氢气的步骤或预先混合静脉麻醉药和氢气的步骤、以及向对象给药由上述步骤得到的药品的步骤；(ii)具有下述步骤的抑制麻醉药诱发性凋亡的方法：以含有0.1～8％(w/w)的静脉麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～70％(v/v)的氧的方式并用静脉麻醉药与氢气的步骤或预先混合静脉麻醉药和氢气的步骤、以及向对象给药由上述步骤得到的药品的步骤；或者(iii)具有下述步骤的抑制麻醉药诱发性凋亡的方法：以含有0.1～5％(w/w)的静脉麻醉药、0.15～1.5％(v/v)的氢气和20～50％(v/v)的氧的方式并用静脉麻醉药与氢气的步骤或预先混合静脉麻醉药和氢气的步骤、以及向对象给药由上述步骤得到的药品的步骤；等。

本发明中，从细胞凋亡和行为学试验评价了麻醉药诱发性神经障碍。对于细胞凋亡，通过(i)分解PARP的定量、(ii)活性caspase-3染色、或者(iii)TUNEL法进行评价。

本发明中，分解PARP的检测和定量中使用蛋白质印迹分析。细胞凋亡级联的主要起始因子之一为caspase的活化、和基于此的聚(腺苷二磷酸-核糖)聚合酶(PARP)的分解。正常时作为参与DNA修复、DNA的稳定化和其他细胞内事件的核内酶的PARP，在细胞凋亡级联中是caspase-3的最终靶标。相对于在细胞凋亡过程中分解的活性型caspase的测定，分解PARP的测定在细胞凋亡的后期阶段也能够检测到持续的信号。

本发明中，活性caspase-3染色中使用caspase-3免疫组织化学法。在细胞凋亡信号转导级联的最后，caspase-9将caspase-3(半胱氨酸蛋白酶)活化，因此caspase-3是处于细胞凋亡涉及点的下游的细胞标记。广泛平行地进行银染色的所述免疫组织化学法作为神经细胞凋亡的合适标记发挥作用，对于生理学上的细胞死亡的定量化目的和特性确定这两方面而言都是优良的(Olney等,2002b,Neurobiology of Disease9:205-219)。caspase-3为细胞质酶，因此用活化caspase-3染色后的细胞整体被染色，定量化比较容易。

本发明中，通过TUNEL法使细胞凋亡初期中的DNA的片段化可视化。DNA的片段化由双链的断裂和单链的断裂构成。任一断裂类型都能够通过使用标记核苷酸的酶反应对其片段的自由3’-OH末端进行标记而检测。TUNEL法作为高灵敏度的细胞凋亡检测法使用。

实施例

接着，举出实施例对本发明进行更具体的说明，但本发明不受这些实施例的任何限定，在本发明的技术构思内在本领域中具有一般知识的技术人员能够做出大量变形。

以下实施例中的统计分析使用GraphPad Prism5(GraphPadSoftware Inc.,La Jolla,CA)来进行。各组的平均值的比较通过单因素方差分析和双因素方差分析来实施，然后分别对它们实行Newman-Keuls和Bonferroni的事后检验。Y字型迷宫试验中，与组间的随机行为有关的行动的比较通过使用双侧的单样品t检验来进行。将P＜0.05设为统计上具有显著性差异。值以平均值的标准误差表示。

全部实验按照防卫医科大学的动物实验用伦理指南来实行，由防卫医科大学动物实验委员会(所泽市、埼玉县、日本)认可。

[实施例1]

动物：该研究中使用的C57BL/6小鼠在12小时的明暗周期(照明的亮灯时间为7点～19点)和22±2℃的室温条件下进行管理。小鼠在自由摄食和自由摄水条件下饲养。该研究中使用的全部小鼠为同龄的同窝仔。

麻醉药和氢处理：将处于脑的发育期的6日龄(P6)的小鼠从母亲所在的笼子中移出后，马上将小鼠置于带有操作手套的湿度大的室中。将混合空气、氧(空气之外的)、氢、七氟烷而最终制备的氧30％、氢1.3％、七氟烷3％的麻醉药混合气体向上述小鼠吸入给药。气体的总流量为2L/分钟、麻醉药的给药时间为6小时。氧和麻醉药的百分率通过使用气体分析系统(Capnomac Ultima,GE Healthcare,东京都、日本)来测定。氢气浓度通过在企业(Breath Lab CO.,奈良县、日本)使用气相色谱来测定。在暴露于麻醉药的过程中，将小鼠在加温至38±1℃的垫上进行保温。

[实施例2]

将空气、氧(空气之外的)、氢和七氟烷混合，制备最终氧为30％、氢为0.6％、七氟烷(3％)的麻醉药混合气体，除此以外与实施例1同样地进行。

[实施例3]

将空气、氧(空气之外的)、氢和七氟烷混合，制备最终氧为30％、氢为0.3％、七氟烷(3％)的麻醉药混合气体，除此以外与实施例1同样地进行。

[实施例4]

将空气、氧(空气之外的)、氢和地氟烷混合，制备最终氧为30％、氢为1.3％、地氟烷(5.7％)的麻醉药混合气体，除此以外与实施例1同样地进行。

[实施例5]

将空气、氧(空气之外的)和氢混合，一边使氧为30％、氢为1.3％的混合气体与麻醉药同时吸入，一边与异丙酚(100mg/kg ip)的腹腔内给药同时并用来吸入给药，除此以外与实施例1同样地进行。

[实施例6]

将空气、氧(空气之外的)、氢和七氟烷混合，制备最终氧为30％、氢为1.3％、七氟烷(2％)的麻醉药混合气体，除此以外与实施例1同样地进行。

[比较例1]

将空气、氧(空气之外的)和七氟烷混合，制备最终氧为30％、七氟烷(3％)的麻醉药混合气体，除此以外与实施例1同样地进行。

[比较例2]

将空气、氧(空气之外的)和地氟烷混合，制备最终氧为30％、地氟烷(5.7％)的麻醉药混合气体，除此以外与实施例1同样地进行。

[比较例3]

将空气和氧(空气之外的)混合，一边使氧为30％的混合气体与麻醉药同时吸入，一边与异丙酚(100mg/kg ip)的腹腔内给药同时并用吸入给药，除此以外与实施例1同样地进行。

[试验例1-A]

蛋白提取物的纯化：蛋白提取物的制备按照Kodama M.等,Anesthesiology,2011；115:979-991中记载，通过蛋白质印迹法来实施。以下简单记载该方法。将小鼠的前脑迅速取出，并在含有50mM的tris-HCl、pH7.4、150mM的NaCl、1％的NP-40、0.5％的脱氧胆酸钠、蛋白酶抑制剂混合物(Complete；Roche Diagnostics,潘茨堡,德国)和磷酸酶抑制剂(20mM的甘油磷酸、1mM的Na₃VO₄、2mM的NaF)的、4倍量的匀浆缓冲液中均质化。接着，在15000g、30分钟、4℃的条件下对匀浆进行离心分离。分离上清液，在-80℃下保存直至使用时。各试样的蛋白浓度通过使用二喹啉甲酸蛋白定量试剂盒(Pierce,Rockford,IL)来测定。

蛋白质印迹分析：蛋白质印迹法按照Kodama M.等,Anesthesiology,2011；115:979-991中记载的方法来实施。以下简单记载该方法。将匀浆供于十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳。然后，将蛋白转印到聚偏二氟乙烯膜(Immobilon-P；Millipore,Bedford,MA)上。印迹与抗-聚-(腺苷二磷酸核糖)-聚合酶(抗-PARP)(兔多克隆；Cell SignalingTechnology)或抗-β-肌动蛋白(小鼠单克隆；Sigma,St.Louis,MO)抗体进行免疫反应。接着，加入过氧化物酶复合型二次抗体，对印迹进行孵育。蛋白条带通过使用化学发光检测器(SuperSignal West Pico；Pierce)来可视化。分解PARP条带的定量用β-肌动蛋白来标准化。使用双因素方差分析和其后的Bonferroni的事后检验(每一组中，n＝3-6小鼠)来实施比较。

对于所述前脑的提取物，使用分解PARP(凋亡性细胞死亡的生物标记)的抗体来实施蛋白质印迹分析。分析结果如图1A所示。分解PARP条带的定量化的结果如图1B所示。从图1A和B可知，仅曝露于含有氧30％的气体、或含有氧30％和氢1.3％的气体的小鼠脑的分解PARP的免疫活性为检测下限以下，但对于含有氧30％和七氟烷3％的气体中曝露6小时后的小鼠(比较例1)而言，分解PARP的生成反应被诱导。另一方面，对于在含有氧30％、氢1.3％和七氟烷3％的气体中曝露后小鼠(实施例1)而言，与在含有氧30％的气体中的七氟烷中曝露后的小鼠相比，观察到对分解PARP的免疫活性的显著下降(即、氢气抑制了PARP的分解)，确认了1.3％的氢气可抑制新生小鼠的由七氟烷曝露引起的神经细胞凋亡。利用双因素方差分析(two-way ANOVA)确认了它们的显著性差异，显示出氢吸入的主要效果(F＝12.17、P＜0.01)、七氟烷给药的主要影响(F＝45.66、P＜0.0001)、和相互作用(氢给药×七氟烷给药；F＝15.28、P＜0.01)。

将比较例1的分解PARP的定量值设为100％时，实施例1～3的分解PARP的相对定量值分别为：实施例1减少约45％、实施例2减少约50％、实施例3减少约55％，分解PARP的定量值显著减少了。实施例6中也与实施例1同样地神经细胞凋亡显著减少了。这些情况显示出，本发明与未使用氢的情况相比，能够将由七氟烷的曝露引起的神经细胞凋亡抑制40％以上。

[试验例1-B]

与[试验例1-A]同样地，对实施例4和比较例2进行评价。将比较例2的分解PARP的定量值设为100％时，实施例4的分解PARP的相对定量值减少47.7％，分解PARP的定量值显著减少了。该情况显示出，本发明也将由地氟烷曝露引起的神经细胞凋亡抑制了45％以上。

[试验例1-C]

与[试验例1-A]同样地对实施例4和比较例3进行评价。将比较例3的分解PARP的定量值设为100％时，实施例5的分解PARP的相对定量值减少55.1％，分解PARP的定量值显著减少了。该情况显示出，本发明也将由异丙酚曝露引起的神经细胞凋亡抑制了50％以上。

[试验例2]

病理组织学研究：免疫组织化学的染色按照Kodama M.等,Anesthesiology,2011；115:979-991和SatohY.等,J Neurosci,2011；31:11953-11967中记载的方法来实施。以下简单记载该方法。用含有4％低聚甲醛的0.1M磷酸缓冲液经心脏灌流小鼠。打开头盖骨，将头部在相同缓冲液中浸渍至少2小时。然后，将脑从头盖骨取出，使用石蜡包埋后的切片(5μm厚)进行病理组织学分析。对于切片，按照确立的方法在二甲苯中将石蜡剥离，使用梯度乙醇系列(graded ethanol series)进行水和。抗原活化处理通过使用抗原活化溶液(Antigen UnmaskingSolution；Vector Laboratories,Burlingame,CA)在高压釜中加热5分钟(121℃)来实施。然后，为了使背景染色变淡，将切片用封闭试剂(ProteinBlock,Serum-Free；Dako,Glostrup,丹麦)处理30分钟。接着，将切片与一次抗体一起在湿度大的室中在4℃下孵育一夜。该研究中使用的一次抗体为抗-活性Caspase-3(兔多克隆；Cell Signaling Technology,Beverly,MA)和抗-4-羟基-2-壬烯醛(anti-4-HNE)(小鼠单克隆；日本老化调控研究所、静冈县、日本)抗体。

为了进行明视野染色，加入过氧化物酶复合型二次抗体(DakoEnVision+system；Dako)后对切片进行恒温处理。免疫反应性通过按照制造商的操作规程使用3,3-二氨基联苯胺四盐酸盐(DAB,VectorLaboratories)来检测。最后，用苏木精对切片进行对比染色。荧光染色中加入Alexa-Fluor 546-复合型-抗小鼠IgG抗体(Life Technologies,Eugene,OR)对切片进行孵育。

如Kodama M.等,Anesthesiology,2011；115:979-991中所记载的那样，按照制造商的操作规程，使用原位细胞凋亡检测试剂盒(ApopTag；Chemicon,Temecula,CA)，来实施使用了末端脱氧核苷酸转移酶的缺口末端标记(TUNEL)法。为了检测活性而使用DAB。用苏木精对切片进行对比染色。

每一个组中，将从8至10只小鼠采集的样品供于各自的试验，所述小鼠在与实施例1和比较例1相同的条件下暴露于麻醉。活性caspase3阳性或TUNEL阳性细胞数目的计数由不知道处理条件的试验者来实施。

使用活性caspase-3(凋亡性细胞死亡的另一生物标记)的抗体来实施组织学分析(图2)。为了研究caspase-3的活性，对切片进行免疫化学染色。在蛋白质印迹分析中，如上述内容所记载，在含有氧30％和氢1.3％的气体中曝露的小鼠的细胞凋亡显示出与在含有氧30％的气体中曝露的小鼠相同的水平，因此仅对3个组实施了组织学定量：(i)含有氧30％的气体(以下示为对照)、(ii)含有氧30％和七氟烷3％的气体(以下示为七氟烷)(比较例1)、和(iii)含有氧30％、氢1.3％和七氟烷3％的气体(以下示为七氟烷+氢)(实施例1)。将刚施加完6小时麻醉后的脑的某区域作为模拟对照进行比较时，通过6小时的七氟烷曝露(比较例1)，诱发了活性caspase-3阳性的细胞数的显著增加(图2B)。另一方面，与仅七氟烷曝露相比，七氟烷+氢的曝露(实施例1)中，小鼠的活性caspase-3阳性的细胞数显著地少(图2和图3)。从图2和图3可知，由七氟烷引起的、发育期的脑中的神经细胞凋亡被氢气缓和。发明人另外将TUNEL法作为细胞水平的凋亡性细胞死亡的测定法进行了实施(图4)。麻醉6小时后的TUNEL染色的图案与活性caspase-3的染色图案相似。这些结果显示出，1.3％氢使新生小鼠的由七氟烷曝露引起的神经细胞凋亡显著下降。

羟基自由基作用于脂质时，形成脂质过氧化物而产生4-HNE。因此，4-HNE被广泛用作脂质的过氧化和氧化应激的标记。图5示出将神经元暴露于七氟烷6小时后(图5B、比较例1)，与模拟对照(图5A)相比，诱发了更多的脂质过氧化。另一方面，暴露于七氟烷+氢的小鼠(实施例1)的脑的4-HNE的染色(图5C)与仅暴露于七氟烷的情况(图5B)相比显著减少了。从这些的结果可以确认，新生小鼠的3％七氟烷暴露可诱发脑内的氧化应激，但氢使氧化应激减少。

[试验例3]

行为学试验：供于行为学研究的小鼠全部为在与实施例1和比较例1相同的条件下暴露于麻醉的同龄、同窝仔的雄性。将3周龄的小鼠与母亲分离，收容到有3或4只小鼠的笼子中。在规定的年龄对它们进行行为学试验(为了评价麻醉药的影响，进行了作为长期记忆障碍评价的对照的旷场试验、用于评价短期记忆障碍的Y字型迷宫中的自发性交替行为学试验、用于评价长期记忆障碍的条件性恐惧试验、社会性试验。对于社会性试验，除社会性相互作用试验外，作为其对照而进行了新物体试验和嗅觉试验)。观察各小鼠的行动，使用计算机控制录像追跡系统(SMART；巴塞罗那、西班牙)进行分析。试验中，使用具有臂的装置，对小鼠的4只脚全部进入臂的数目进行计数。装置在每次试验时进行打扫。该研究中使用的装置全部为O’Hara&Co.,LTD(东京都、日本)制。相同的小鼠的组供于全部试验。

旷场试验：使用Satoh Y.等,J Neurosci,2011；31:11953-11967中记载的方法，通过旷场试验就对新环境的情绪反应进行测定。行动以10分钟的总移动距离(米)来测定。试验对12周龄的小鼠实施。结果如图6A所示。

Y字型迷宫中的自发性交替行为学试验：为了评价空间工作记忆，按照Satoh Y.等,J Neurosci,2011；31:11953-11967中记载的方法实施了Y字型迷宫试验。左右对称的亚力克制的Y字型迷宫由在120℃下分开的3条臂(25×5cm)构成，由高度15cm的透明的壁包围。将小鼠分别置于Y字型迷宫的中央，并使其自由探索8分钟，记录侵入臂的连续次数或总次数。交替反应(alternation)的比例是用连续的3次进入为全部3条臂的进入时的次数除以交替反应的最大可能数(对臂的总进入次数减去2而得的值)后，乘以100而得的数。试验对12周龄的小鼠实施。结果如图6B所示。

条件性恐惧试验：按照Satomoto M.等,Anesthesiology 2009；110:628-637中记载的方法实施条件性恐惧试验。以下简单记载该方法。将小鼠装入特殊的笼子，播放20秒80dB的白噪音。在第20秒施加1秒的1mA的足底电击(foot shock)，将该刺激以1分钟周期重复3次。在刺激24小时后将施加了足底电击的小鼠放回笼子，对小鼠木僵(1秒的持续时间中身体的任何部分都不动的状态)的时间测量5分钟(条件性恐惧试验场景试验)。在48小时后将小鼠放入完全不同的场所的不同形状的笼子中，仅播放白噪音，对小鼠木僵的时间测量3分钟(条件性恐惧试验噪音试验)。木僵反应用录像追跡系统进行记录，作为恐惧记忆的指数。试验对13周龄的小鼠实施。供于该试验的小鼠不再用于之后的任一试验(将与用于旷场试验和Y字型迷宫中的自发性交替行为学试验的小鼠相同的小鼠的组供于试验)。在施加条件24小时后，将小鼠放入进行过施加条件的室中，测定木僵(基于场景的恐惧反应)的结果如图6C所示。在施加条件训练48小时后，将小鼠放入完全不同的场所的不同形状的笼子中，仅播放白噪音并测定木僵的结果如图6D所示。

社会性试验：确认社会性的测试中进行社会性相互作用试验、新物体试验、嗅觉试验这3个试验。

为了试验对社会性相互作用的能力，按照Satoh Y.等,J Neurosci,2011；31:11953-11967中记载的方法实施了社交性试验。对于是优先选择生物靶(放入笼子中的成体小鼠)还是非生物靶(放入笼子中的仿制小鼠)，作为相互作用的目标，在旷场室中实施了试验。将生物或非生物的标靶放置在圆柱型的笼子中，使得虽然能够闻到气味但只能进行最小限的接触。圆柱型的笼子高度10cm、直径为9cm，栅的间隔为7mm。在70lux的照明条件下观察10分钟直接闻笼子的气味的动作并计数。试验对12周龄的小鼠实施(对照：n＝18；七氟烷：n＝20；七氟烷+氢：n＝19)。全部生物靶使用野生型的雄性小鼠。结果如图7A所示。

嗅觉试验：对Satoh Y.等,J Neurosci,2011；31:11953-11967中记载的方法施加一些变更后实施嗅觉试验。以下简单记载该方法。使小鼠在第一天习惯新食物(蓝莓芝士)的香味。在48小时的摄食限制后，测定直至找到被掩埋的食物为止所需要的时间：将蓝莓芝士的碎片埋藏在清洁的笼子中的敷草的2cm下。试验对12周龄的小鼠实施(将与在社会性试验中使用的小鼠相同的小鼠的组供于试验)。结果如图7B所示。

新物体试验：按照Satoh Y.等,J Neurosci,2011；31:11953-11967中记载的方法实施新物体试验。将小鼠单独收容，测定在10分钟内与非生物的新物体(小的红色管)互动的时间的合计。试验对12周龄的小鼠实施(将与在社会性试验和嗅觉试验中使用的小鼠相同的小鼠的组供于试验)。结果如图7C所示。

就用于评价对新环境的情绪反应而实施的旷场试验中的10分钟总移动距离而言，在组间不存在统计学上的显著性差异(对照：n＝18；七氟烷：n＝20；七氟烷+氢：n＝19)(图6A)。因此，显示出全身麻醉药不影响情绪反应。

工作记忆是用于完成复杂的认知工作的、将信息保持一段时间的能力(Saxe MD等,Proc Natl Acad Sci USA 2006；103:17501-17506、JonesMW,Curr Mol Med 2002；2:639-647)。在为了评价空间工作记忆而实施的Y字型迷宫试验中(图6B)，未在组间观察到统计学上显著性差异(将与在旷场试验中使用的小鼠相同的小鼠的组供于试验)。因此，显示出全身麻醉药不影响短期记忆。

为了评价氢对新生仔的由七氟烷曝露引起的长期记忆损伤的影响，对曝露于有氢同时给药(实施例1)或无氢同时给药(比较例1)的七氟烷后的小鼠，在成为成体的阶段进行条件性恐惧试验(图6C和D)。在条件恐惧场景试验中(图6C)，曾曝露于七氟烷的小鼠(比较例1)的、在接受刺激起24小时后的木僵(畏缩行动)与对照动物相比，在场景学习方面显著下降(单因素方差分析、F＝7.22、P＝0.0017；在对照与七氟烷的比较中，Newman-Keuls事后检验、P＜0.01)，显示出新生仔的七氟烷曝露对成体的长期记忆造成损伤。与此形成对照的是，曾曝露于七氟烷+氢的小鼠(实施例1)与仅曾给药七氟烷的小鼠(比较例1)相比，行动得到改善(在七氟烷与七氟烷+氢的比较中，Newman-Keuls事后检验、P＜0.01)，显示出与对照几乎同等的表现(在对照与七氟烷+氢的比较中，Newman-Keuls事后检验、P＜0.05)。另外，在条件恐惧噪音试验中(图6D)，与对照相比，七氟烷曝露的小鼠(比较例1)在施加条件训练48小时后的噪音试验中的木僵也显著下降(单因素方差分析、F＝12.08、P＝0.0001；在对照与七氟烷的比较中，Newman-Keuls事后检验、P＜0.001)。另一方面，曾曝露于七氟烷+氢的小鼠(实施例1)与仅曝露于七氟烷的小鼠(比较例1)相比，显示出更优秀的行动(在七氟烷与七氟烷+氢的比较中，Newman-Keuls事后检验、P＜0.001)，显示出与对照几乎同等的表现(在对照与七氟烷+氢的比较中，Newman-Keuls事后检验、P＜0.05)。

这些结果显示出，新生仔的由全身麻醉药曝露引起的记忆障碍的种类是长期记忆障碍，氢可预防和/或减轻所述记忆障碍。

小鼠是具有社交性的物种，显示出社会性相互作用行为(Kamsler A等,Mol Neurobiol 2004；29:167-178)。发明人以前曾经报导了新生仔时期曝露于七氟烷的小鼠在成为成体时显示出社会性行动缺陷(SatomotoM.等,Anesthesiology 2009；110:628-637)。本实验中，为了研究氢是否能够抑制新生儿的由七氟烷曝露引起的社会性行动缺陷，而实施了小鼠的社交性试验(图7)。

在将生物或非生物作为标靶的相互作用试验中，全部组花费与非生物相比显著多的时间与生物进行互动(t检测、全部P＜0.001)。但是，与对照相比，在新生仔时期曾曝露于七氟烷的小鼠(比较例1)与生物靶交流的时间减少。被同时给药氢的小鼠(实施例1)显示出与对照几乎同等的行动，显示出由七氟烷引起的社会性行动缺陷能够通过将氢与七氟烷同时给药来预防(图7A)。通过单因素方差分析证实了这些结果(F＝6.12、P＝0.004、Newman-Keuls事后检验、在对照与七氟烷的比较中P＜0.01、在对照与七氟烷+氢的比较中P＜0.05)。嗅觉试验(单因素方差分析、F＝0.50、P＝0.71、图7B)和新物体试验(单因素方差分析、F＝0.04、P＝0.96、图7C)中，在仅给药七氟烷(比较例1)和给药七氟烷+氢(实施例1)的组间，无法检测到显著不同，因此不能说上述社会性相互作用的不同起因于嗅觉的损伤、或对新物体兴趣的丧失。因此可以说，氢能够抑制新生仔的由七氟烷曝露引起的社会性行动缺陷。

产业上的可利用性

根据本发明，能够提供通过将全身麻醉药与氢组合使用来预防和/或减轻脑(例如发育期)的麻醉诱发性神经障碍的药品。另外，本发明简便、无副作用，有效地发挥作用，并且廉价，因此例如在产科和儿科医疗中能够提供有效的药品。

Claims

1.一种用于人或人以外的动物的药品，将全身麻醉药与氢组合而成。

2.一种用于人或人以外的动物的全身麻醉的药品，其特征在于，并用全身麻醉药和氢来给药。

3.如权利要求1或2所述的药品，其用于预防和/或减轻麻醉药诱发性神经障碍。

4.如权利要求3所述的药品，其中，麻醉药诱发性神经障碍是伴随神经细胞凋亡发生的。

5.一种含有全身麻醉药的用于预防和/或减轻麻醉药诱发性神经障碍的药品，其特征在于，全身麻醉药以与氢并用的方式使用。

6.如权利要求1～5中任一项所述的药品，其中，全身麻醉药为吸入麻醉药或液态的静脉麻醉药，氢为氢气。

7.如权利要求6所述的药品，其中，氢气浓度在药品中为0.15～7％(v/v)。

8.如权利要求1～7中任一项所述的药品，其以胎儿、新生儿、婴儿、幼儿、儿童或老年人为对象。

9.如权利要求1～8中任一项所述的药品，其中，全身麻醉药为选自由一氧化二氮、异氟烷、安氟醚、甲氧氟烷、七氟烷、地氟烷、乙醚、异丙酚和咪达唑仑组成的组中的一种以上的麻醉药。

10.如权利要求3、5～9中任一项所述的药品，其中，麻醉药诱发性神经障碍为神经运动障碍、神经认知障碍、精神认知障碍或自闭症。

11.一种药品的制备方法，为了预防和/或减轻麻醉药诱发性神经障碍而并用全身麻醉药和氢。

12.如权利要求11所述的制备方法，其特征在于，麻醉药诱发性神经障碍是伴随神经细胞凋亡发生的。

13.如权利要求11或12所述的制备方法，其中，全身麻醉药为吸入麻醉药或液态的静脉麻醉药，氢为氢气。

14.如权利要求13所述的制备方法，其中，氢气浓度在药品中为0.15～7％(v/v)。

15.如权利要求11～14中任一项所述的制备方法，其中，药品以胎儿、新生儿、婴儿、幼儿、儿童或老年人为对象。

16.全身麻醉药在制造与氢组合使用的全身麻醉剂中的应用。

17.全身麻醉药与氢在制造全身麻醉药与氢组合而成的药品中的应用。

18.全身麻醉药与氢在制造用于预防和/或减轻麻醉药诱发性神经障碍的药品中的应用。

19.如权利要求18所述的应用，其中，麻醉药诱发性神经障碍是伴随神经细胞凋亡发生的。

20.如权利要求16～18中任一项所述的应用，其中，全身麻醉药为吸入麻醉药或液态的静脉麻醉药，氢为氢气。

21.如权利要求20所述的应用，其中，氢气浓度在药品中为0.15～7％(v/v)。

22.如权利要求16～18中任一项所述的应用，以胎儿、新生儿、婴儿、幼儿、儿童或老年人为对象。

23.如权利要求16～18中任一项所述的应用，其中，全身麻醉药为选自由一氧化二氮、异氟烷、安氟醚、甲氧氟烷、七氟烷、地氟烷、乙醚、异丙酚和咪达唑仑组成的组中的一种以上的麻醉药。

24.如权利要求18所述的应用，其中，麻醉药诱发性神经障碍为神经运动障碍、神经认知障碍、精神认知障碍或自闭症。

25.一种预防和/或减轻麻醉药诱发性神经障碍的方法，其具有并用全身麻醉药和氢而向对象给药的步骤。

26.如权利要求25所述的方法，其中，全身麻醉药为吸入麻醉药或液态的静脉麻醉药，氢为氢气。

27.如权利要求26所述的方法，其中，氢气浓度在药品中为0.15～7％(v/v)。

28.如权利要求25所述的方法，其中，给药对象为胎儿、新生儿、婴儿、幼儿、儿童或老年人。

29.如权利要求25所述的方法，其中，全身麻醉药为选自由一氧化二氮、异氟烷、安氟醚、甲氧氟烷、七氟烷、地氟烷、乙醚、异丙酚和咪达唑仑组成的组中的一种以上的麻醉药。

30.如权利要求25所述的方法，其中，麻醉药诱发性神经障碍为神经运动障碍、神经认知障碍、精神认知障碍或自闭症。

31.如权利要求25所述的方法，其中，麻醉药诱发性神经障碍是伴随神经细胞凋亡发生的。