CN104388590B - 用于检测施马伦贝格病毒的套式rt-pcr引物组及试剂盒 - Google Patents

用于检测施马伦贝格病毒的套式rt-pcr引物组及试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN104388590B
CN104388590B CN201410670115.1A CN201410670115A CN104388590B CN 104388590 B CN104388590 B CN 104388590B CN 201410670115 A CN201410670115 A CN 201410670115A CN 104388590 B CN104388590 B CN 104388590B
Authority
CN
China
Prior art keywords
primer
shellfish lattice
maron shellfish
test kit
detection
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201410670115.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104388590A (zh
Inventor
杨素
黄海超
陈轩
陶旻
徐海聂
许彩芸
沙才华
廖秀云
罗宝正
薄清如
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
ZHUHAI ENTRY-EXIT INSPECTION AND QUARANTINE BUREAU OF PRC
Original Assignee
ZHUHAI ENTRY-EXIT INSPECTION AND QUARANTINE BUREAU OF PRC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ZHUHAI ENTRY-EXIT INSPECTION AND QUARANTINE BUREAU OF PRC filed Critical ZHUHAI ENTRY-EXIT INSPECTION AND QUARANTINE BUREAU OF PRC
Priority to CN201410670115.1A priority Critical patent/CN104388590B/zh
Publication of CN104388590A publication Critical patent/CN104388590A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104388590B publication Critical patent/CN104388590B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C12Q1/701—Specific hybridization probes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种用于检测施马伦贝格病毒的套式RT‑PCR引物组及试剂盒，所述引物组的序列如SEQ ID NO.1～4所示，所述试剂盒中含有该引物组及RNA提取试剂、反转录试剂、施马伦贝格病毒阳性对照和阴性对照。本发明建立的试剂盒具有特异、敏感、重复性好、快速、费用低廉等优点，可用于施马伦贝格病毒的快速初筛。

Description

用于检测施马伦贝格病毒的套式RT-PCR引物组及试剂盒
技术领域
本发明属于分子生物学检测领域，特别涉及一种用于检测施马伦贝格病毒的套式RT-PCR引物组及试剂盒。
背景技术
施马伦贝格病(Schmallenberg，SB)是2011年11月在德国北莱茵-威斯特法伦州施马伦贝格镇牛羊中发现的一种新的病毒性动物传染病，该病的主要临床特征是：受感染母羊流产、死胎，新生羔羊畸形、成活率下降，感染牛表现为腹泻、发热、产奶量下降等，对畜牧业造成了较大危害。
目前SB的实验室诊断方法主要包括细胞培养分离病毒等病原检测方法，以及酶联免疫吸附试验（ELISA）、间接免疫荧光试验（IFA）和中和试验（NT）等血清学方法。病毒分离通常是确诊疫病的金标准，但由于成年患病动物常不表现临床症状，难以掌握病毒血症的具体时期，且费时费力，因此病毒分离的实施受到一定的限制，不适应快速检测的需要。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于检测施马伦贝格病的套式RT-PCR引物组及试剂盒。
本发明的另一个目的在于提供上述RT-PCR引物组及试剂盒在检测施马伦贝格病上的应用。
本发明所采取的技术方案是：
一组用于检测施马伦贝格病的套式RT-PCR引物， 其是根据施马伦贝格病毒核衣壳蛋白基因序列的高度保守区域设计的。其核苷酸序列如下所示：
外引物P1：5’- TACATAAGACGGCACAAC C -3’（SEQ ID NO.1）；
外引物P2：5’- GCATCAAGGAACATTTCG -3’（SEQ ID NO.2）；
内引物P1：5’-TGGGCCGATGGTTATACAATG -3’（SEQ ID NO.3）；
内引物P2：5’- TTGGCGGAGGACTTTTTTCA-3’（SEQ ID NO.4）。
一种用于检测施马伦贝格病的套式RT-PCR试剂盒，其含有如上所述的引物组。
上述试剂盒中还含有RNA提取试剂、反转录试剂、施马伦贝格病毒阳性对照和阴性对照。
所述的RNA提取试剂包括样品裂解液、氯仿、DEPC-乙醇、异丙醇和DEPC-H2O中的一种或多种；所述的反转录试剂包括反转录缓冲液、MgCl2、dNTP、RNA酶抑制剂、随机引物、AMV、反转录酶和DEPC-H2O中的一种或多种；所述的施马伦贝格病毒阳性对照为施马伦贝格病毒阳性样板的cDNA，所述阴性对照为所述阴性对照为无菌采取澳洲进口牛血清，经检测BSV、BTV、EHDV、AKV、BVDV、IBRV为阴性。
以上所述的试剂盒在施马伦贝格病检测中的应用。
本发明的有益效果是：本发明建立的套式RT-PCR试剂盒具有特异、敏感、重复性好、快速、费用低廉等优点，可大范围用于施马伦贝格病的快速初筛。
附图说明
图1为一步式RT-PCR电泳结果图（M：DNA Marker DL-2000；1：pMD-SBV质粒；N：阴性对照；B：空白对照）；
图2 为套式PCR检测结果图（M：DNA Marker DL-2000；P：阳性对照；1：被检样品；N：阴性对照；B：空白）；
图3为外引物特异性试验电泳图（M：DNA Marker DL-2000；P：阳性对照 N：阴性对照；1：BTV；2：EHDV；3：AKV；4：BVDV；5：IBRV；6：SBV； B：空白对照）；
图4为内引物特异性试验电泳图（M：DNA Marker DL-2000；P：阳性对照 N：阴性对照；1：BTV；2：EHDV；3：AKV；4：BVDV；5：IBRV；6：SBV； B：空白对照）；
图5为外引物敏感性试验电泳图（M：DNA Marker DL-2000；P：阳性对照；N：阴性对照；B：空白对照；1：10-1稀释；2：10-2稀释；3：10-3稀释；4：10-4稀释；5：10-5稀释；6：10-6稀释7：10-7稀释；8：10-8稀释；9：10-9稀释）；
图6为内引物敏感性试验电泳图（M：DNA Marker DL-2000；P：阳性对照；N：阴性对照；B：空白对照；1：10-1稀释；2：10-2稀释；3：10-3稀释；4：10-4稀释；5：10-5稀释；6：10-6稀释7：10-7稀释；8：10-8稀释；9：10-9稀释）。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。
实施例1 引物设计
从Genebank下载多个施马伦贝格病（SBV）的核衣壳蛋白基因序列，用DNASTAR5.07软件进行比对，寻找高度保守的区域，然后选取适当的基因序列，设计特异性检测SBVS基因的套式RT-PCR引物（见表1），送大连宝生物技术有限公司合成，用DEPC处理水溶解，-80℃避光保存。
表1 施马伦贝格病毒套式RT-PCR引物
实施例2 试剂盒组成
1、引物组：如表1所示。
2、酶
反转录酶Reverse Transcriptase XL（以下简称AMV）、TaKaRa Ex TaqTM DNA聚合酶（以下简称Ex TaqTM）、PrimeScript 1step Enzyme Mix、2×1Step Buffer为宝生物工程（大连）有限公司产品。
3、RNA提取试剂
总RNA纯化试剂（Trizol）为美国Invitrogen公司产品。
4、反转录试剂
1×RT-PCR缓冲液、MgCl2、dNTP、DTT、甘油、AMV、Tap酶
5、施马伦贝格病阳性对照和阴性对照。
阳性对照：将外引物扩增的SBV 核衣壳蛋白基因的PCR产物送宝生物工程（大连）有限公司，制备目的片段重组质粒pMD-SBV，在含Amp的LB细菌培养液中进行培养，收获菌液作为阳性对照。
阴性对照：所述阴性对照为无菌采取澳洲进口牛血清，经检测BSV、BTV、EHDV、AKV、BVDV、IBRV为阴性。
实施例3套式RT-PCR 反应体系与反应程序的建立
1、病毒RNA提取
（1） 取n个灭菌的1.5 mL Eppendorf 管，其中n为被检样品、阳性对照与阴性对照的和（阳性对照、阴性对照在试剂盒中已标出），编号。
（2）每管加入600 µL 裂解液，分别加入被检样本、阴性对照、阳性对照各200 µL，再加入200 µL 氯仿，混匀器上振荡混匀5 s（不能过于强烈，以免产生乳化层，也可以用手颠倒混匀）。于4 ℃、12 000 r/min 离心15 min。
（3）取与 (1) 相同数量灭菌的1.5 mL Eppendorf 管，加入400 µL 异丙醇（-20℃ 预冷），做标记。吸取本标准(2) 各管中的上清液转移至相应的管中，上清液应至少吸取500µL，不能吸出中间层，颠倒混匀。
（4）于4 ℃、12 000 r/min 离心15 min（Eppendorf 管开口保持朝离心机转轴方向放置），小心倒去上清，倒置于吸水纸上，沾干液体；加入600 µL 75％乙醇，颠倒洗涤。
（5） 于4℃、12 000 r/min 离心10 min（Eppendorf 管开口保持朝离心机转轴方向放置），小心倒去上清，倒置于吸水纸上，尽量沾干液体。
（6） 4 000 r/min 离心10 s（Eppendorf 管开口保持朝离心机转轴方向放置），将管壁上的残余液体甩到管底部，小心倒去上清，用微量加样器将其吸干，吸头不要碰到有沉淀一面，室温干燥5～10 min。
（7） 加入11 µL DEPC 水，溶解管壁上的RNA，2 000 r/min 离心5 s，冰上保存备用。若需长期保存须放置-70 ℃ 冰箱。
、一步法RT-PCR
按表2和表3的反应体系和参数进行一步法RT-PCR，将外引物及各反应组份于Eppendoff管中充分混匀后加入0.2mL PCR管中，并在管上用记号笔标记每一个管对应的样品名称，放入PCR仪中进行一步法RT-PCR。扩增结束后，制备1%琼脂糖凝胶板，将样品及阴阳性对照的RT-PCR产物按编号加入到对应的凝胶孔中，凝胶板的边孔中加入分子量标准（DNAMarker），于80V衡定电压下电泳1 h后，用紫外凝胶成像管理系统观察结果照像，判定结果。
表2 RT-PCR 反应液体系
表3 RT-PCR反应参数
以SBV 核衣壳蛋白基因质粒为模板，用外引物进行RT-PCR，扩增出约为301bp的目的条带，与预期大小相符（见图1）。
回收纯化RT-PCR产物进行测序，用DNASTAR（5.07）基因分析软件对测序结果进行分析后表明，扩增目的片段的长度为301bp，与引物设计时的预计扩增长度相符，测序结果如SEQ ID NO.5所示。
TACATAAGACGGCACAACCAAGTGTCGATCTTACTTTTGGTGGGGTCAAATTTACAGTGGTTAATAACCATTTTCCCCAATATGTCTCAAATCCTGTGCCAGACAATGCCATTACACTTCACAGGATGTCAGGATATCTAGCACGTTGGATTGCTGATACATGCAAGGCTAGTGTCCTCAAACTAGCTGAAGCTAGTGCTCAGATTGTCATGCCCCTTGCTGAGGTTAAGGGATGCACCTGGGCCGATGGTTATACAATGTATCTTGGATTTGCACCTGGGGCCGAAATGTTCCTTGATGC（SEQ IDNO.5）
3、套式PCR
按表4和表5的反应体系和参数进行套式PCR，以一步法RT-PCR产物为模板，将内引物及各反应组份于Eppendoff管中充分混匀后加入0.2mL PCR管中，并在管上用记号笔标记每一个管对应的样品名称，放入PCR仪中进行套式PCR。扩增结束后，制备1%琼脂糖凝胶板，将样品及阴阳性对照的PCR产物按编号加入到对应的凝胶孔中，凝胶板的边孔中加入分子量标准（DNA Marker），于80V衡定电压下电泳1 h后，用紫外凝胶成像管理系统观察结果照像，判定结果。
表4 套式PCR反应体系
表5 套式PCR反应参数
以SBV 核衣壳蛋白基因质粒RT-PCR反应产物为模板，按套式PCR反应体系配制反应混合物放入PCR仪中，按表5的参数设置套式PCR反应条件，进行套式PCR，反应结束后进行凝胶电泳，判定结果(见图2)。在150bp处出现目的条带的被检样品，判为阳性；在150bp处未出现目的条带的被检样品，判为阴性。
实施例4 特异性实验
分别提取SBV（施马伦贝格病毒）、BTV（蓝舌病病毒）、EHDV（鹿流行性出血热病毒）、AKV（赤羽病病毒）、BVDV（牛病毒性腹泻病毒）、IBRV(牛传染性鼻气管炎病毒)等病毒核酸，按实施例3的方法进行特异性试验，同时设阳性对照（重组质粒pMD-SBV）和阴性对照（H2O）。
其中SBV由德国动物健康研究院（FLI, Germany）惠赠，BTV、EHDV由云南出入境检验检疫局技术中心动物检疫实验室赠送，AKV、BVDV、IBRV由本实验室保存。
外引物和内引物检测BTV、EHDV、AKV、BVDV、IBRV、阴性对照和空白对照均未观察到与阳性对照相同大小的条带，而SBV和阳性对照分别在301bp和150均处出现目的片段，即BTV、EHDV、AKV、BVDV、IBRV、阴性对照和空白对照套式RT-PCR结果为阴性，SBV和阳性对照套式RT-PCR结果为阳性，实验结果表明，外引物和内引物均具有特良好的异性。试验结果见图3、图4。
实施例5 灵敏度实验
提取阳性克隆质粒，经测定浓度为44.70 ng/µL。10倍梯度稀释到10-9，对梯度稀释的样本进行套式RT-PCR检测。试验结果表明，外引物和内引物分别可以检测到阳性质粒的最低稀释倍数为10-7和10-8，经换算为6.65×103copies/µL和6.65×102copies/µL，结果见图5、图6。
以上实验表明：本发明建立的套式RT-PCR方法具有特异、敏感、重复性好、费用低廉等优点，是施马伦贝格病毒快速初筛的良好方法。
本发明的检测方法核酸提取需要60 min左右，一步法实时荧光RT-PCR需要120min左右，而进行套式PCR检测需要80分钟，凝胶电泳30分钟。因此从收到样品到得到检验结果的时间仅为5 h，而传统的病毒分离鉴定需要将近14天，大大节省了检测时间。
以上实施例仅为介绍本发明的优选案例，对于本领域技术人员来说，在不背离本发明精神的范围内所进行的任何显而易见的变化和改进，都应被视为本发明的一部分。
<110> 中华人民共和国珠海出入境检验检疫局
<120> 用于检测施马伦贝格病毒的套式RT-PCR引物组及试剂盒
<130>
<160> 5
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
tacataagac ggcacaacc 19
<210> 2
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
gcatcaagga acatttcg 18
<210> 3
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
tgggccgatg gttatacaat g 21
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
ttggcggagg acttttttca 20
<210> 5
<211> 301
<212> DNA
<213> 施马伦贝格病毒
<400> 5
tacataagac ggcacaacca agtgtcgatc ttacttttgg tggggtcaaa tttacagtgg 60
ttaataacca ttttccccaa tatgtctcaa atcctgtgcc agacaatgcc attacacttc 120
acaggatgtc aggatatcta gcacgttgga ttgctgatac atgcaaggct agtgtcctca 180
aactagctga agctagtgct cagattgtca tgccccttgc tgaggttaag ggatgcacct 240
gggccgatgg ttatacaatg tatcttggat ttgcacctgg ggccgaaatg ttccttgatg 300
c 301

Claims (4)

1.一组用于检测施马伦贝格病毒的套式RT-PCR引物， 其特征在于，所述引物是根据施马伦贝格病毒核衣壳蛋白基因序列的高度保守区域设计的，
其核苷酸序列如下所示：
外引物P1：5’- TACATAAGACGGCACAACC -3’（SEQ ID NO.1）；
外引物P2：5’- GCATCAAGGAACATTTCG -3’（SEQ ID NO.2）；
内引物P1：5’-TGGGCCGATGGTTATACAATG -3’（SEQ ID NO.3）；
内引物P2：5’- TTGGCGGAGGACTTTTTTCA-3’（SEQ ID NO.4）。
2.一种用于检测施马伦贝格病毒的套式RT-PCR试剂盒，其含有权利要求1所述的引物组。
3.根据权利要求2所述的用于检测施马伦贝格病毒的套式RT-PCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还含有RNA提取试剂、反转录试剂、施马伦贝格病毒阳性对照和阴性对照。
4.根据权利要求3所述的用于检测施马伦贝格病毒的套式RT-PCR试剂盒，其特征在于，所述的RNA提取试剂包括样品裂解液、氯仿、DEPC-乙醇、异丙醇和DEPC-H2O中的一种或多种；所述的反转录试剂包括反转录缓冲液、MgCl2、dNTP、RNA酶抑制剂、随机引物、反转录酶和DEPC-H2O中的一种或多种；所述的施马伦贝格病毒阳性对照为施马伦贝格病毒cDNA的质粒，所述阴性对照为无菌采取澳洲进口牛血清，经检测BSV、BTV、EHDV、AKV、BVDV、IBRV为阴性。
CN201410670115.1A 2014-11-20 2014-11-20 用于检测施马伦贝格病毒的套式rt-pcr引物组及试剂盒 Active CN104388590B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410670115.1A CN104388590B (zh) 2014-11-20 2014-11-20 用于检测施马伦贝格病毒的套式rt-pcr引物组及试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410670115.1A CN104388590B (zh) 2014-11-20 2014-11-20 用于检测施马伦贝格病毒的套式rt-pcr引物组及试剂盒

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104388590A CN104388590A (zh) 2015-03-04
CN104388590B true CN104388590B (zh) 2016-09-21

Family

ID=52606546

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410670115.1A Active CN104388590B (zh) 2014-11-20 2014-11-20 用于检测施马伦贝格病毒的套式rt-pcr引物组及试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104388590B (zh)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103305632A (zh) * 2013-06-05 2013-09-18 中国检验检疫科学研究院 用于检测施马伦贝格病毒的荧光定量rt-pcr引物和探针
CN103397110A (zh) * 2013-08-21 2013-11-20 天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心 施马伦贝格病毒等温扩增快速检测方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103305632A (zh) * 2013-06-05 2013-09-18 中国检验检疫科学研究院 用于检测施马伦贝格病毒的荧光定量rt-pcr引物和探针
CN103397110A (zh) * 2013-08-21 2013-11-20 天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心 施马伦贝格病毒等温扩增快速检测方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
A sensitive nested real-time RT-PCR for the detection of shuni virus;Eeden CV et al.;《Journal of virological methods》;20131014;第195卷;100-105 *
Aebischer A et al..Rapid genome detection of schmallenberg virus and bovine viral diarrhea virus by use of isothermal ampli&#64257 *
cation methods and high-speed real-time reverse transcriptase PCR.《J Clin Microbiol》.2014,第52卷(第6期),摘要，材料和方法，结果，讨论，表1-2. *
检测施马伦贝格病毒核酸的荧光定量RT-PCR方法;张永宁等;《畜牧兽医学报》;20131015;第44卷(第10期);1629-1636 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN104388590A (zh) 2015-03-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Kraberger et al. Characterisation of a diverse range of circular replication-associated protein encoding DNA viruses recovered from a sewage treatment oxidation pond
Dare et al. Screening pneumonia patients for mimivirus
CN103388033B (zh) 一种肠道病毒71型(ev71)实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒
US11946037B2 (en) Method for digesting nucleic acid in a sample
CN104745730A (zh) 非洲猪瘟病毒cp204l基因的荧光pcr检测试剂及其制备方法与用途
CN105671210A (zh) 基于lamp技术检测李痘病毒的引物、试剂盒及检测方法
CN105273065B (zh) 一种1型鸭甲肝病毒vp2重组蛋白、elisa试剂盒及其制备方法
CN108998577A (zh) 一种用于检测猪圆环病毒2型和3型的试剂盒、引物对、探针及方法
Gou et al. The colorimetric isothermal multiple-self-matching-initiated amplification using cresol red for rapid and sensitive detection of porcine circovirus 3
CN104774953A (zh) 非洲猪瘟病毒cp530r基因的荧光pcr检测试剂及其制备方法与用途
CN110592278A (zh) PRoV、PoSaV和PAstV的多重RT-PCR试剂盒
CN104498623A (zh) 猪流行性腹泻病毒强毒株和弱毒株鉴别诊断用引物及其检测试剂盒
CN104404169B (zh) 用于检测施马伦贝格病毒的rt-lamp引物组及试剂盒
CN103146846A (zh) 一种基于单一标准品的四色荧光定量pcr方法和试剂盒
CN103388032B (zh) 一种柯萨奇病毒a16型(ca16)实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒
CN108265125A (zh) 一种猪瘟病毒（csfv）实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒
CN104388590B (zh) 用于检测施马伦贝格病毒的套式rt-pcr引物组及试剂盒
CN103215389B (zh) 猪繁殖与呼吸综合症和猪乙型脑炎双重一步法rt-pcr诊断试剂盒
CN106521030A (zh) 猪瘟病毒、牛病毒性腹泻病毒双重荧光定量rt‑pcr检测方法
CN107574263A (zh) 一种用于pcr快速检测猪圆环病毒3型的试剂盒和方法
CN106521029A (zh) 一种鉴别prrsv的多重rt‑pcr检测试剂盒
Li et al. Establishment of a multiplex RT-PCR assay for identification of atmospheric virus contamination in pig farms
CN103525945B (zh) 甲型h1n1流感病毒(2009)实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒
CN104774972A (zh) 尼帕病毒m基因的荧光rt-pcr检测试剂及其制备方法与用途
JP2020080806A (ja) Ｒｎａウイルス検出方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant