CN104379587A - 用于治疗病毒感染的方法和组合物 - Google Patents

用于治疗病毒感染的方法和组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN104379587A
CN104379587A CN201380032065.8A CN201380032065A CN104379587A CN 104379587 A CN104379587 A CN 104379587A CN 201380032065 A CN201380032065 A CN 201380032065A CN 104379587 A CN104379587 A CN 104379587A
Authority
CN
China
Prior art keywords
group
optionally replaced
alkynyl
aryl
cycloalkyl
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201380032065.8A
Other languages
English (en)
Inventor
R·K·郗能治
丹娜·G·沃尔夫
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hong Kong University of Science and Technology HKUST
Hadasit Medical Research Services and Development Co
Original Assignee
Hong Kong University of Science and Technology HKUST
Hadasit Medical Research Services and Development Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hong Kong University of Science and Technology HKUST, Hadasit Medical Research Services and Development Co filed Critical Hong Kong University of Science and Technology HKUST
Publication of CN104379587A publication Critical patent/CN104379587A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/357—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having two or more oxygen atoms in the same ring, e.g. crown ethers, guanadrel
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A61K31/52—Purines, e.g. adenine
    • A61K31/522—Purines, e.g. adenine having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. hypoxanthine, guanine, acyclovir
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/54—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one sulfur as the ring hetero atoms, e.g. sulthiame
    • A61K31/541—Non-condensed thiazines containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
    • C07D493/12—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D493/18—Bridged systems

Abstract

本发明提供用于治疗、预防和抑制病毒复制、病毒感染和病毒性疾病和紊乱的组合物和方法，包括具有抗病毒活性的青蒿素衍生物的使用。

Description

用于治疗病毒感染的方法和组合物
发明领域
本发明涉及用于抑制病毒复制和治疗病毒感染、疾病和紊乱的组合物和方法，包括具有抗病毒活性的青蒿素(artemisinin)衍生物的使用。
发明背景
化合物青蒿素，也被称作青蒿素(III)(qinghaosu(III))，是黄花蒿(Artemisia annua)中存在的四环的1,2,4-三噁烷并且在授予McChesney等人的美国专利4,920,147中被描述。如在授予Scheiwe的美国专利6,306,896所描述的，青蒿素及其衍生物二氢青蒿素(DHA)(IV)、青蒿素甲醚(artemether)(V)和青蒿琥酯(artesunate)(VI)(图1)已被首先用于治疗疟疾。
对青蒿素及其合成衍生物的化学研究指出，不稳定性的原因是青蒿素中或其衍生的二氢青蒿素中的三噁烷部分容易开环。开环提供了易于还原的游离过氧化氢。该基团的除去确保了药物活性的破坏，还原产物被转化成脱氧代谢产物(desoxo metabolites)。为了使开环不太容易，C-10处的氧原子可以要么被除去以提供10-脱氧二氢青蒿素，要么被其它基团取代。这为通常作为10-脱氧青蒿素衍生物的所谓的“第二代”化合物提供了基础。另外，也已制备出在C-9处具有多种取代基的青蒿素的衍生物。
已生产出其中C-10处的氧原子被胺基取代的青蒿素衍生物。例如，Yang等人(Biorg.Med.Chem.Lett.,1995,5,1791-1794)合成了十种其中C-10处的氧原子被–NHAr取代的新的青蒿素衍生物，其中Ar代表苯基、3-氯苯基、4-氯苯基、3-溴苯基、4-溴苯基、4-碘苯基、4-甲基苯基、4-甲氧基苯基、3-羧基苯基或4-羧基苯基。针对伯氏疟原虫(Plasmodium berohei)的K173株测试这些化合物的体内活性并且发现是有活性的。
美国专利6,984,640和美国专利申请2005/0119232公开了某些C-10取代的青蒿素衍生物，这些C-10取代的青蒿素衍生物被公开为在治疗由下列寄生虫感染引起的疾病中是有效的：分别引起疟疾、新孢子虫病和球虫病的疟原虫属(Plasmodium)、新孢子虫属(Neospora)或艾美球虫属(Eimeria)、特别是恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)、犬新孢子虫(Neospora caninum)和柔嫩艾美球虫(Eimeria tenella)。所公开的化合物是通式I的化合物：
或其盐，其中Y代表卤素原子、任选地取代的环烷基、芳基、C-连接的杂芳基或杂环烷基或基团-NR1R2；其中R1代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基或炔基；R2代表任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；或者R1和R2以及中间的氮原子一起代表任选地取代的杂环基团或衍生自任选地取代的氨基酸酯的氨基；用于治疗和/或预防由寄生虫感染引起的疾病。
青蒿素衍生物、青蒿酮且特别是artemiside已被Dunay等人(AntimicrobAgents Chemother.2009,53(10),4450-4456)示出表现出对刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)的增强的抑制，且被Guo等人(Antimicrob AgentsChemother.2012,56(1),163-173)示出对恶性疟原虫具有显著效果。青蒿酮不同于目前使用的临床青蒿素，因为它在临床前的体外和体内筛查中未引起神经毒性。在耐受性中试试验(pilot tolerability test)中，用50mg/kg的青蒿酮处理雄性大鼠14天与对照相比无效果。涉及人类内皮细胞的增殖和新血管的生成的研究指出，青蒿酮相比二氢青蒿素抗血管生成性明显较低，表明在妊娠期间使用青蒿酮可能是安全的(D’Alessandro等人，Toxicology,2007,241,66-74)。包含尿素衍生物RW177的更新的极性衍生物已被示出针对疟疾寄生虫具有亚纳摩尔(sub-nanomolar)活性(衍生物的结构参见图1)。
本发明的一个发明人的美国专利6,649,647公开了含有三噁烷部分的、具有细胞毒性活性和抗肿瘤活性的化合物，特别是某些青蒿素衍生物；以及它们在肿瘤治疗中的用途。这些化合物的一些包含能够与核酸结合的配体和含有能够充当自由基来源的三噁烷部分的基团，该自由基能够与核酸进行化学相互作用。还提供了用于制备此类化合物和含有此类化合物的药物组合物的方法。
病毒感染在世界范围内引起非常大部分的传染病死亡和发病。巨细胞病毒(CMV)例如β疱疹病毒，是免疫系统受损的个体的发病和死亡的主要原因，所述免疫系统受损的个体包括AIDS患者和造血干细胞移植(HSCT)或实体器官移植的受体。CMV也是先天性感染的主要原因，影响～1％的活产(live birth)，伴有产生的神经损伤和听力损失。尽管存在先天性CMV的相当多的公共卫生负担，但是没有可用的已确定的产前抗病毒治疗。
在移植环境中，预防性抗病毒治疗的广泛应用已减少了早期CMV疾病的发生；然而，晚期疾病的发展也日益被确定。预防性抗病毒策略包括(a)抢先治疗在移植之后对血液中CMV抗原或CMV DNA呈阳性的患者和(b)对植入且持续到移植后100天的时候所有处于危险中的患者进行普遍预防。
所有目前可用的抗CMV药物包括更昔洛韦、膦甲酸和西多福韦，靶向病毒的DNA聚合酶。虽然这些药物是有效的，但是它们的用途受到毒性、低的口服生物利用度、高成本和致畸性的限制。另外，长时期的或重复的抗病毒治疗可能导致药物耐受性和偶尔对多种药物的交叉耐受性的形成。
青蒿素衍生物已被建议用于治疗病毒感染。美国专利申请2008/0161324表明青蒿素可以与其它试剂组合用于治疗病毒性疾病。青蒿琥酯被示出抑制巨细胞病毒(CMV)的复制(Efferth等人，J.Mol.Med.,2002,80(4),233-242)并且已被用于治疗CMV感染(Shapira等人，Clin.Infect.Dis.,2008,46(9),1455-1457)。
上述参考文件的任一个都没有公开或表明10-烷基氨基青蒿素衍生物在治疗病毒感染或由其产生的疾病时的用途。
因此，对具有高口服生物利用度的有效且安全的抗CMV药物存在明确需求。另外，对治疗病毒感染的新治疗模式仍存在关键且未满足的医学需求。
发明概述
本发明提供用于治疗、减轻或抑制病毒复制、病毒感染和病毒性疾病和紊乱的组合物和方法，包括具有抗病毒活性的青蒿素衍生物的使用。
本发明部分地基于意料之外的发现：单独的或者与其它抗病毒药物组合的若干青蒿素衍生物提供增强的治疗CMV的功效。在不受到任何理论或作用机理的束缚的情况下，本发明的青蒿素衍生物能够抑制人CMV病毒的立即早期(IE)基因表达。
在一个实施方式中，本发明提供在需要其的受治疗者中治疗病毒感染的方法，所述方法包括对受治疗者施用药物组合物的步骤，所述药物组合物包含治疗上有效量的式I的具有抗病毒活性的化合物：
或其盐或溶剂合物，其中Y代表基团-NR1R2；其中
(i)R1代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基或炔基；并且R2代表任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；
(ii)R1和R2以及处于之间的氮原子一起代表杂环基团或衍生自任选地取代的氨基酸酯的氨基；或者
(iii)R1代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；并且R2代表-X(＝Z)-A基团，其中
X代表碳原子、硫原子、亚砜基团S＝O、或者基团PR3、P-O-R3或P-N(R4)-R3，其中R3和R4各自独立地代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；
Z代表氧原子、硫原子或基团NR5，其中R5代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；并且
A代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基、或者选自N(R6)2、NHNH2、NR6NHR6、NR6N(R6)2、OR6、SR6、10α-二氢青蒿素基、OR7和NR6R7的基团，其中每个R6独立地代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基，并且R7代表作为取代基与R5或R1连接的键，所述取代基与R5或R1连同处于之间的基团一起代表任选地取代的杂环基团。
每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。
在一些实施方式中，本发明提供一种药物组合物，包含治疗上有效量的如本文中所定义的式I的、具有抗病毒活性的化合物，其用于治疗病毒感染。
在另一个实施方式中，本发明提供一种如本文中所定义的式I的、具有抗病毒活性的化合物在用于治疗病毒感染的药物的制备中的用途。
在一个实施方式中，如本文中所定义的式I的化合物的抗病毒活性是抗巨细胞病毒活性。在具体的实施方式中，本发明的具有抗巨细胞病毒活性的化合物抑制IE基因的表达。
在某些实施方式中，病毒感染是疱疹病毒感染。在另外的实施方式中，疱疹病毒选自单纯性疱疹病毒(HSV)和EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)。每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。在其它实施方式中，病毒感染是黄病毒感染。在具体的实施方式中，黄病毒是牛病毒性腹泻病毒(Bovine Viral Diarrhea virus，BVDV)。在又一些实施方式中，病毒感染是乙肝病毒(HBV)感染或丙肝病毒(HCV)感染。每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。在示例性实施方式中，病毒感染是巨细胞病毒感染，特别是人巨细胞病毒。在具体的实施方式中，巨细胞病毒是抵抗已知抗病毒药物的株。在其它实施方式中，本发明的药物组合物在先天性感染的情况下是有效的。在某些实施方式中，本发明的药物组合物在治疗、减弱或抑制免疫系统受损的患者的CMV感染中是有效的，所述免疫系统受损的患者包括特别是移植接受者。
在一些实施方式中，本发明提供用于阻抑病毒复制的方法，该方法包括对需要其的受治疗者施用药物组合物的步骤，所述药物组合物包含治疗上有效量的式I的、具有抗病毒活性的化合物：
或其盐或溶剂合物，其中Y代表基团-NR1R2；其中
(i)R1代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基或炔基；并且R2代表任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；
(ii)R1和R2以及处于之间的氮原子一起代表杂环基团或衍生自任选地取代的氨基酸酯的氨基；或者
(iii)R1代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；并且R2代表-X(＝Z)-A基团，其中
X代表碳原子、硫原子、亚砜基团S＝O、或者基团PR3、P-O-R3或P-N(R4)-R3，其中R3和R4各自独立地代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；
Z代表氧原子、硫原子或基团NR5，其中R5代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；并且
A代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基、或者选自N(R6)2、NHNH2、NR6NHR6、NR6N(R6)2、OR6、SR6、10α-二氢青蒿素基、OR7和NR6R7的基团，其中每个R6独立地代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基，并且R7代表作为取代基与R5或R1连接的键，所述取代基与R5或R1连同处于之间的基团一起代表任选地取代的杂环基团。
每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。
在特定的实施方式中，抑制病毒复制的方法是包括在细胞中或在器官培养物中抑制病毒复制的离体方法。
在其它实施方式中，本发明提供一种药物组合物，包含治疗上有效量的如本文中所定义的式I的结构表示的、具有抗病毒活性的化合物，其用于抑制病毒复制。
在多个实施方式中，本发明提供如本文中所定义的式I的、具有抗病毒活性的化合物在用于抑制病毒复制的药物的制备中的用途。
在一个实施方式中，如本文中所定义的式I的化合物的抗病毒活性是抗巨细胞病毒活性。在具体的实施方式中，本发明的具有抗巨细胞病毒活性的化合物抑制IE基因的表达。
在某些实施方式中，病毒复制是疱疹病毒复制。在其它实施方式中，病毒复制是黄病毒复制。在一个实施方式中，病毒复制是巨细胞病毒复制，特别是人巨细胞病毒复制。在具体的实施方式中，巨细胞病毒是抵抗已知抗病毒药物的株。
在一些实施方式中，本发明的具有抗病毒活性的化合物由式VII的结构表示：
其中R1和R2以及处于之间的氮原子一起表示非芳香族的杂环基团。
在一些实施方式中，本发明的具有抗病毒活性的化合物是由式VIII的结构表示的10α-(4'-(S,S-二氧硫代吗啉-1'-基)-10-脱氧-10-二氢青蒿素：
在又一些实施方式中，本发明的具有抗病毒活性的化合物由式IX的结构表示：
在其它实施方式中，本发明的具有抗病毒活性的化合物由式X的结构表示：
其中R1代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；
X代表碳原子、硫原子、亚砜基团S＝O或者基团PR3、P-O-R3或P-N(R4)-R3，其中R3和R4各自独立地代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；
Z代表氧原子、硫原子或基团NR5，其中R5代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；并且
A代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基、或者选自N(R6)2、NHNH2、NR6NHR6、NR6N(R6)2、OR6、SR6、10α-二氢青蒿素基、OR7和NR6R7的基团，其中每个R6独立地代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基，并且R7代表作为取代基与R5或R1连接的键，所述取代基与R5或R1连同处于之间的基团一起代表任选地取代的杂环基团。
在又一些实施方式中，本发明的具有抗病毒活性的化合物由式X的结构表示，其中R1代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；X代表碳原子、硫原子或亚砜基团S＝O；Z代表氧原子或硫原子；并且A代表N(R6)2、NHNH2、NR6NHR6或NR6N(R6)2基团，其中每个R6独立地代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基。
在其它实施方式中，本发明的具有抗病毒活性的化合物在pH 7.2下具有大于40mg/L的水溶解度。在一些实施方式中，本发明的具有抗病毒活性的化合物具有约2.0-3.0范围内的log P。在特定的实施方式中，本发明的具有抗病毒活性的化合物不能在体内被大量转化成二氢青蒿素。
在一个实施方式中，本发明的药物组合物还包含药学上可接受的载体或赋形剂。
在多个实施方式中，本发明的药物组合物适于经由选自由以下组成的组的途径来施用：口服的、直肠的、肌内的、皮下的、静脉内的、腹膜内的、鼻内的、动脉内的、囊泡内(intravesicle)的、眼内的、经皮的和局部的。每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。
根据一些方面和实施方式，本发明的药物组合物是选自由片剂、丸剂、胶囊、小球、颗粒、粉末、锭剂、囊剂(sachet)、扁囊剂、酏剂、混悬剂、分散体、乳剂、溶液、糖浆剂、气溶胶、软膏剂、软明胶胶囊和硬明胶胶囊、栓剂、无菌注射液和无菌包装粉末组成的组的形式。每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。
在另外的实施方式中，本发明的具有抗病毒活性的化合物以与至少一种其它抗病毒药物组合被共同施用。示例性和非限制性实施方式包括共同施用本发明的具有抗病毒活性的化合物与选自由更昔洛韦、缬更昔洛韦、膦甲酸、西多福韦、阿昔洛韦和伐昔洛韦组成的组的抗病毒药物。每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。
在特定的实施方式中，本发明的具有抗病毒活性的化合物和至少一种其它的抗病毒药物一起提供至少加和的治疗性抗病毒效果。
在又一些实施方式中，本发明的具有抗病毒活性的化合物和至少一种其它的抗病毒药物的共同施用是按选自以下的方案进行：整个组合的组合物、大体上同时施用单独的个体组分和依据单独的时间表施用单独的个体组分。每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。
在又其它实施方式中，本发明提供一种在需要其的受治疗者中治疗与肿瘤的发展有关的、具有肿瘤调制活性(oncomodulatory activity)的病毒感染的方法，该方法包括向受治疗者施用包含治疗上有效量的如本文中所定义的式I的、具有抗病毒活性的化合物的药物组合物的步骤。
在另外的实施方式中，本文中提供的是一种药物组合物，其包含治疗上有效量的如本文中所定义的式I的、具有抗病毒活性的化合物，其用于治疗与肿瘤的发展有关的、具有肿瘤调制活性的病毒感染。
在又一些实施方式中，本发明提供如本文中所定义的式I的、具有抗病毒活性的化合物在用于治疗与肿瘤的发展有关的、具有肿瘤调制活性的病毒感染的药物的制备中的用途。
在特定的实施方式中，肿瘤是与巨细胞病毒感染有关的恶性胶质瘤。在另一个实施方式中，肿瘤是与巨细胞病毒感染有关的结肠癌或前列腺癌。在其它实施方式中，肿瘤是与EB病毒(EBV)感染有关的伯基特淋巴瘤。在另一个实施方式中，肿瘤是与EBV感染有关的霍奇金淋巴瘤。在另一个实施方式中，肿瘤是与EBV感染有关的移植后淋巴增生性障碍(PTLD)。在又另一个实施方式中，肿瘤是与EBV感染有关的鼻咽癌。每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。
本发明的其它目的、特征和优势将依据下列描述和附图而变得清晰。
附图简述
图1：若干青蒿素衍生物的分子结构。
图2A-2B：图2A.青蒿酮剂量反应曲线，其示出利用青蒿酮孵育之后CMV斑块形成的抑制。该测定的青蒿酮IC50值是1.2μM。图2B.青蒿酮剂量反应曲线，其示出利用青蒿酮孵育之后CMV DNA累积的抑制。
图3A-3B：图3A.示出青蒿琥酯剂量反应曲线，其示出利用青蒿琥酯孵育后CMV斑块形成的抑制。该测定的青蒿酮IC50值是15μM。图3B.青蒿琥酯剂量反应曲线，其示出利用青蒿琥酯孵育之后CMV DNA累积的抑制。
图4：感染后24和72小时(hpi)的CMV立即-早期(IE)和早期-晚期(pp65)病毒基因表达的免疫荧光显微镜图。
图5A-5B：图5A.对照的未被处理的感染的细胞中与药物处理的感染细胞中相比的HCMV IE抗原-阳性的细胞。图5B.对照的未被处理的感染的细胞中与药物处理的感染细胞中相比的HCMV pp65抗原-阳性的细胞。为了比较，将对照-未感染的细胞中中抗原-阳性的细胞表示为100％。
图6A-6F：HCMV感染的和未感染的蜕膜器官培养物的组织病理学分析。图6A-6B.在设立(institution)时和在培养第8天时制备的未感染的蜕膜培养物的H&E染色切片(5微米)。箭指向蜕膜的表面上皮。图6C-6D.在6dpi获得的用HCMV株PT30(104PFU/孔)感染的培养物的两个不同切片，且其经历H&E染色。黑色箭指示具有“猫头鹰眼(owl’s eye)”包涵体的感染细胞；白色箭指示颗粒状细胞质包涵物；并且黑色箭头指示不规则的过染色细胞核。图6E-6F.在6dpi获得的用HCMV株PT30(104PFU/孔)感染的培养物的切片，且其经历针对病毒立即-早期(IE)(示出细胞核染色)和早期-晚期(pp65)(主要示出细胞质染色)蛋白质的免疫组织化学分析。
图7A-7D：蜕膜培养物中的HCMV感染动力学。用CMV(104PFU/孔)感染蜕膜器官培养物。通过共聚焦显微镜所检测的活组织中的株PT30-感染细胞的图像：图7A.模拟感染的细胞；图7B.第2天；图7C.第3天；和图7D.第5天。
图8：蜕膜培养物中的HCMV感染动力学。利用所指示的病毒株感染之后的组织裂解物中的病毒的DNA累积，其由核糖核酸酶P基因DNA拷贝标准化。PT30：◆；TB40/E：■；AD169：△；和CI851：×。
图9：感染的蜕膜培养物中的HCMV的细胞趋向性。在10dpi时，由用表达UL83(pp65)-融合GFP的HCMV株TB40/E感染的蜕膜培养物制备冷冻切片，针对所指示的细胞类型利用单克隆抗体染色，并利用DAPI复染色以使细胞核可视化。通过共聚焦显微镜来分析病毒(用GFP标记的)与特异性细胞标志物的共定位。箭指向展示共定位的细胞、与特异性细胞标志物不具有共定位的感染细胞；和染色的未感染细胞。CK7，细胞角蛋白7；vWF，血管性血友病因子；Vim，波形蛋白。
图10：抗病毒药物对蜕膜器官培养物中HCMV感染的抑制(GCV：●；ACV：■)。结果表示为存在于未处理的培养物中的标准化的HCMV DNA的量的百分比±标准误差。误差线由于标准误差的低值而不容易看见。处理的和未处理的蜕膜培养物之间发现显著差异(通过双尾成对的t检验，P<0.05)。
图11A-11B：通过HCMV超免疫球蛋白(HIG)对在蜕膜器官培养物中HCMV感染的中和和吸附后抑制。图11A.在感染前将所指示的HCMVHIG的稀释物与105PFU的HCMV株TB40/E一起孵育1小时，以便检验病毒中和。图11B.在吸附后24小时继充分洗涤受感染的组织之后将所指示的HCMV HIG的稀释物添加至受感染的蜕膜培养物(105PFU/皿)的培养基中。在8dpi时测量蜕膜组织裂解物中病毒DNA的数量，并且值通过核糖核酸酶P DNA拷贝来标准化。结果表示为存在于未处理的培养物中标准化的HCMV DNA的量的百分比。星号表示处理的和未处理的蜕膜培养物之间存在显著差异(通过双尾成对的t检验，P<0.05)。
发明详述
本发明提供用于治疗、预防、减轻和抑制病毒复制、病毒感染和病毒性疾病和紊乱的组合物和方法，包括具有抗病毒活性、特别是抗CMV活性的青蒿素衍生物的使用。
HCMV基因表达通过涉及三个通用类别的病毒基因的事件的高度协调级联(highly coordinated cascade)而发生：立即早期(IE；主要是IE1和IE2)基因；延迟-早期基因，包括在病毒DNA合成中起作用的主要基因；以及晚期病毒基因-编码病毒粒子结构部分。虽然HCMV的复制周期缓慢，需要48至72小时以引发后代的释放，IE基因产物的表达在病毒进入之后立即开始并且可以在感染后24小时被明确地检测到。早期表达的病毒功能在感染的较晚期起调节作用。从早期阶段到晚期阶段的转换被拖延至感染后24至36小时，并且在病毒DNA合成时发生，晚期基因表达的最大水平在感染后72至96小时。
包括更昔洛韦的所有目前核准的抗-HCMV药物抑制病毒DNA聚合酶，并且由此不抑制IE基因表达，而是抑制晚期基因表达。
本发明部分地基于意料之外的发现：若干10-氨基青蒿素衍生物能够阻断早期阶段和晚期阶段的HCMV复制。令人惊异的是，本发明的化合物被示出有效地抑制病毒IE基因的表达，病毒IE基因为在感染后表达的第一类基因。抑制早期基因表达的能力提供超越仅影响晚期病毒基因表达的迄今已知的抗病毒试剂的显著优势。
因此，本发明提供用于在需要其的受治疗者中治疗病毒感染的方法，该方法包括对受治疗者施用治疗上有效量的式I的、具有抗病毒活性的化合物：
或者其盐或溶剂合物，从而治疗患者的病毒感染的步骤，其中Y代表基团-NR1R2。
在一些方面和实施方式中，R1代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基或炔基；并且R2代表任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基。
在其它方面和实施方式中，R1和R2以及处于之间的氮原子一起代表杂环基团或衍生自任选地取代的氨基酸酯的氨基。
在又其它方面和实施方式中，R1代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；且R2代表-X(＝Z)-A基团，其中
X代表碳原子、硫原子、亚砜基团S＝O、或者基团PR3、P-O-R3或P-N(R4)-R3，其中R3和R4各自独立地代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；
Z代表氧原子、硫原子或基团NR5，其中R5代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；并且
A代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基、或者选自N(R6)2、NHNH2、NR6NHR6、NR6N(R6)2、OR6、SR6、10α-二氢青蒿素基、OR7和NR6R7的基团，其中每个R6独立地代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基，并且R7代表作为取代基与R5或R1连接的键，所述取代基与R5或R1连同处于之间的基团一起代表任选地取代的杂环基团。
每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。
在多个实施方式中，本发明的具有抗病毒活性的化合物由下面的如本文中所定义的式VII、VIII、IX或X的任一个来表示：
其中R1和R2以及处于之间的氮原子一起代表非芳香族的杂环基团；
其中R1代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；
X代表碳原子、硫原子、亚砜基团S＝O或基团PR3、P-O-R3或P-N(R4)-R3，其中R3和R4各自独立地代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；
Z代表氧原子、硫原子或基团NR5，其中R5代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；并且
A代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基、或者基团N(R6)2、NHNH2、NR6NHR6或NR6N(R6)2、或基团OR6或SR6，其中每个R6独立地代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基或者10α-二氢青蒿素基，或者A代表基团OR7或NR6R7，其中R6代表如上所定义的基团并且R7代表作为取代基与R5连接的键，所述取代基与R5连同处于之间的基团-X(＝Z)-一起形成任选地取代的杂环基团，其中Z代表基团NR5，或者R7代表作为取代基与R1连接的键，所述取代基与R1连同处于之间的基团-N-X(＝Z)-一起形成任选地取代的杂环基团。
每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。
本文中所公开的是式I、VII、VIII、IX或X的任一种的、具有抗病毒活性的化合物用于制备治疗病毒感染的药物的用途。本发明还提供式I、VII、VIII、IX或X的任一种的、具有抗病毒活性的化合物或者用于治疗病毒感染的、包含该化合物的药物组合物。
如本文中所使用的术语“治疗”包括降低、减轻或改善与被治疗的状态、紊乱或疾病相关的或由被治疗的状态、紊乱或疾病引起的至少一种症状。在一些实施方式中，如本文中所使用的术语“治疗”指伴有病毒载量减少的病毒复制的抑制。因此，术语“治疗”还涵盖预防或抢先治疗，即预防还未感染的患者或感染的无症状患者的感染和疾病。在一个实施方式中，治疗受离体影响。如本文中所使用的术语“治疗上有效量”指在单一或多剂量施用给受治疗者后有效地为受治疗者提供治疗益处。在一个实施方式中，治疗益处是抑制病毒活性。如本文中所使用的术语“施用”指与本发明的化合物或组合物取得接触。可以针对细胞或组织、或者针对活体例如哺乳动物、特别是人类来完成施用。
在本发明的范围内的是用于抑制病毒复制的方法，该方法包括施用式I、VII、VIII、IX或X的任一个的、具有抗病毒活性的化合物或者包含所述化合物和药学可接受的载体或赋形剂的组合物的步骤。另外的实施方式提供式I、VII、VIII、IX或X的任一个的、具有抗病毒活性的化合物用于制备抑制病毒复制的药物的用途。根据一些方面和实施方式，本发明提供一种式I、VII、VIII、IX或X的任一个的、具有抗病毒活性的化合物或者包含该化合物的药物组合物用于抑制病毒复制。在特定的实施方式中，本文中所提供的方法和用途涉及于细胞中或于器官培养物中抑制病毒复制，包括使细胞或器官培养物与式I、VII、VIII、IX或X的任一个的、具有抗病毒活性的化合物或者包含所述化合物和药学可接受的载体或赋形剂的组合物接触的步骤。
在一些实施方式中，式I中由R1代表的烷基、烯基或炔基被取代。在另一个实施方式中，烷基、烯基或炔基未被取代。每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。
在一些实施方式中，式I中由R1或R2代表的或者式X中由R1、A或Z代表的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基被取代。在另一个实施方式中，烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基未被取代。每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。
如本文中所提供的，10-氨基青蒿素衍生物表现出极其高的抗病毒功效。这种性质与它们的优异的安全性和耐受性谱结合使它们成为用于治疗病毒感染和由此产生的疾病和紊乱的有吸引力的选择。
在另一个实施方式中，式I的Y代表基团-NR1R2，其中R1和R2以及处于之间的氮原子形成非芳香族的杂环基团。在另一个实施方式中，非芳香族的杂环基团被取代。在另一个实施方式中，非芳香族的杂环基团未被取代。每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。
在另一个实施方式中，非芳香族的杂环基团被极性部分取代。
在另一个实施方式中，非芳香族的杂环基团是哌嗪。在某些实施方式中，非芳香族的杂环基团是吗啉。在另一个实施方式中，非芳香族的杂环基团是硫代吗啉。在另一个实施方式中，非芳香族的杂环基团是吗啉代砜。在另一个实施方式中，非芳香族的杂环基团是选自由哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基和吗啉代磺酰基组成的组。每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。
在特定的实施方式中，本发明的化合物是青蒿酮(式VIII)。青蒿酮，也被称作“10α-(4'-(S,S-二氧硫代吗啉-1'-基)-10-脱氧-10-二氢青蒿素”和“BAY 44-9585”，可获得自拜耳公司(Bayer AG)(德国)。
在另一个实施方式中，本发明的化合物是10α-(4'-苄基哌嗪-1'-基)-10-脱氧-10-二氢青蒿素。
在另一个实施方式中，本发明的化合物是10α-(吗啉代)10-脱氧-10-二氢青蒿素。
在另一个实施方式中，本发明的化合物是10α-(1-(2-嘧啶基)-哌嗪基)-10-脱氧-10-二氢青蒿素。
在另一个实施方式中，本发明的化合物是10α-(磺胺基)-二氢青蒿素。
在一些实施方式中，本发明的化合物由式X的结构表示，其中R1代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；X代表碳原子、硫原子或亚砜基团S＝O；Z代表氧原子或硫原子；并且A代表N(R6)2、NHNH2、NR6NHR6或NR6N(R6)2基团，其中每个R6独立地代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基。
在特定的实施方式中，本发明的化合物由式I的结构表示，其中Y代表-NR1R2基团，其中R1代表氢原子并且R2代表–X(＝Z)–基团，其中X代表亚砜基团S＝O，Z代表氧原子，并且A代表NH2基团。
除另有具体说明，任何烷基、烯基或炔基可以是直链的或支链的并且可以含有高至12、高至6或高至4个碳原子。烷基的非限制性示例是甲基、乙基、丙基和丁基。在一些实施方式中，烯基或炔基不是1-烯基或1-炔基。根据这些实施方式，在形成一部分C-C双键或三键的碳原子和与基团连接的氮原子之间形成具有至少一个亚甲基-CH2-或相似的sp3-杂化中心。烯基和炔基的非限制性示例包括丙烯基、丁烯基、丙炔基和丁炔基。当烷基部分形成一部分另一种基团例如芳烷基的烷基部分，它可以含有高至6个或高至4个碳原子。示例性的烷基部分是甲基和乙基。
芳基可以是芳烃基团并且可以含有从6至24、优选6至18、更优选6至16、且特别是6至14个碳原子。芳基的非限制性示例包括苯基、萘基、蒽基、菲基和吡喃基(pyryl)，特别是苯基或萘基，且尤其是苯基。当芳基部分形成一部分另一种基团例如芳烷基的芳基部分时，它可以是苯基、萘基、蒽基、菲基或吡喃基，特别是苯基或萘基，且尤其是苯基部分。
芳烷基可以是被芳基取代的任何烷基。合适的芳烷基含有7至30、特别是7至24且尤其是7至18个碳原子。芳烷基的非限制性示例包括苄基、萘基甲基、蒽基甲基、菲基甲基和吡喃基甲基。示例性芳烷基是苄基。
环烷基可以是任何饱和的环烃基团并且可以含有3至12、例如3至8、且尤其是3至6个碳原子。环烷基的非限制示例是环丙基、环戊基和环己基。
杂芳基可以是含有至少一个杂原子的任何芳香族的单环或多环的环体系。通常，杂芳基是含有选自氧原子、硫原子和氮原子的至少一个杂原子的5-18元的、特别是5-14元的、且尤其是5-10元的芳香族环体系。非限制性杂芳基包括吡啶基、吡喃鎓、硫代吡喃鎓、吡咯基、呋喃基、噻吩基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基、中氮茚基(indolizinyl)、咪唑基、吡啶酮基、吡喃酮基、嘧啶基、吡嗪基、噁唑基、噻唑基、嘌呤基、喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基、哒嗪基、苯并呋喃基、苯并噁唑基和吖啶基。C-连接的杂芳基是如上所定义的杂芳基，其经由杂芳环体系中的碳原子与本发明的化合物的四环1,2,4-三噁烷部分连接。
杂环基团可以是含有至少一个杂原子的且可以是不饱和的或者部分饱和的或完全饱和的任何单环或多环的环体系。因此，术语“杂环”包括如上所定义的杂芳基以及非芳香族的杂环基团。通常，杂环基团是含有选自氧原子、硫原子和氮原子的至少一个杂原子的3-18元的、特别是3-14元的、尤其是5-10元的环体系。杂环基团的非限制性示例包括上文命名的具体的杂芳基以及吡喃基、哌啶基、吡咯烷基、二噁烷基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、吗啉代磺酰基、四氢异喹啉基和四氢呋喃基。
杂环烷基可以是被杂环基团取代的任何烷基。通常，杂环部分是如上所定义的3-18元的、特别是3-14元的、且尤其是5-10元的杂环基团且烷基部分是C1-6烷基或C1-4烷基，例如甲基。
氨基酸可以是任何α-氨基酸，例如甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、蛋氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、赖氨酸、羟赖氨酸、精氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸或苯基甘氨酸，并且同时包括D-和L-构型。氨基酸酯可以是这种氨基酸的任何酯，例如烷基酯诸如C1-4烷基酯之类。
当任何前述取代基被指定为被任选地取代时，任选地存在的取代基基团可以是在药物化合物的研发中和/或此类化合物的改性中所惯常采用以影响它们的结构/活性、稳定性、生物利用度或其它性能的那些中的任何一种或更多种。此类取代基的具体示例包括：例如，卤素原子、硝基、氰基、羟基、环烷基、烷基、烯基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、甲酰基、烷氧基羰基、羧基、烷酰基、烷硫基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、烷基磺酸酯(alkylsulphonato)、芳基亚磺基、芳基磺酰基、芳基磺酸酯(arylsulphonato)、氨基甲酰基、烷基胺基、芳基、芳烷基、任选地取代的芳基、杂环基和烷基或芳基取代的杂环基团。当任何前述取代基代表或含有烷基或烯基取代基基团时，它可以是直链或支链的并且可以含有高至12、高至6且特别地高至4个碳原子。环烷基可以含有3至8、例如3至6个碳原子。芳基基团或芳基部分可以含有6至10个碳原子，例如苯基。杂环基团或杂环部分可以是如上所定义的5-10元的环体系。卤素原子可以是氟原子、氯原子、溴原子或碘原子和含有卤代部分的任何基团，例如含有这些卤素原子的任何一种或更多种的卤代烷基。
在一个方面，Y可以代表卤素原子、特别是氟原子或溴原子、且尤其是氟原子。
在另一个方面，Y可以代表C3-8环烷基、C6-18芳基、5-10元的C-连接的杂芳基或5-10元的杂环基-C1-6烷基，每个基团任选地被选自由以下组成的组的一种或更多种取代基取代：卤素原子、羟基、C1-4烷基、C2-4烯基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基、氨基、C1-4烷基氨基、二(C1-4烷基)氨基、羧基、C6-10芳基、5-10元的杂环基团和C1-4烷基或苯基取代的5-10元的杂环基团。每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。根据一些方面和实施方式，Y可以代表任选地被选自由以下组成的组的一种或更多种取代基取代的C6-18芳基：卤素原子、羟基、C1-4烷基、C2-4烯基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷氧基、氨基、C1-4烷基氨基、二(C1-4烷基)氨基和羧基。每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。特别地，Y可以代表苯基、萘基、蒽基或菲基，每个基团任选地被选自由以下组成的组的一种或更多种取代基取代：卤素原子和羟基、甲基、乙烯基、C1-4烷氧基和羧基。每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。
在另一个亚组的化合物中，Y可以代表苯基、氟苯基、氯苯基、溴苯基、三乙基苯基、乙烯基苯基、甲氧基苯基、二甲氧基苯基、三甲氧基苯基、羧基苯基、萘基、羟基萘基、甲氧基萘基、蒽基或菲基。每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。其中Y可以代表苯基或三甲氧基苯基的化合物也被包含在本发明的范围内。
在又一个方面，Y可以代表基团-NR1R2，其中R1代表氢原子或C1-6烷基且R2代表C1-6烷基、C3-4环烷基、C6-10芳基或C7-16芳烷基，或者R1和R2以及处于之间的氮原子一起代表5-10元的杂环基团或衍生自氨基酸的C1-6烷基酯的氨基，每个基团任选地被选自由卤素原子、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-6烷氧基羰基、苯基、卤苯基、C3-4烷基苯基、C1-4卤烷基苯基、C1-4烷氧基苯基、苄基、吡啶基和嘧啶基组成的组的一个或更多个取代基取代。每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。特别地，Y可以代表基团-NR1R2，其中R1代表氢原子或C1-4烷基，且R2代表C1-4烷基、C3-6环烷基、苯基或苄基，或者R1和R2以及处于之间的氮原子一起代表6-10元的杂环基团或衍生自氨基酸的C1-4烷基酯的氨基，每个基团任选地被选自由卤素原子、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基羰基、苯基、卤苯基、C1-4烷基苯基、C1-4卤烷基苯基、C1-4烷氧基苯基、苄基、吡啶基和嘧啶基组成的组的一个或更多个取代基取代。每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。
在这些化合物的另一个亚组中，Y代表丙基氨基、环戊基氨基、环己基氨基、苯基氨基、氟苯基氨基、氯苯基氨基、溴苯基氨基、碘苯基氨基、甲氧基羰基苯基氨基、联苯基氨基、苄基氨基、氟苄基氨基、双(三氟甲基)-苄基氨基、苯基乙基氨基、苯基甲氧基羰基甲基氨基、二乙基氨基、吗啉基、硫代吗啉基、吗啉代磺酰基、二氢吲哚基、四氢异喹啉基、苯基哌嗪基、氟苯基哌嗪基、氯苯基哌嗪基、甲基苯基哌嗪基、三氟甲基苯基哌嗪基、甲氧基苯基哌嗪基、苄基哌嗪基、吡啶基哌嗪基和嘧啶基哌嗪基。示例性化合物包括但不限于其中Y代表丙基氨基、苯基氨基、溴苯基氨基、碘苯基氨基、联苯基氨基、苄基氨基、双(三氟甲基)苄基氨基、苯基乙基氨基、苯基-甲氧基羰基甲基氨基或吗啉基的化合物。每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。
在另一个实施方式中，本发明的方法使用如上定义的通式I的化合物，条件是，当Y是基团-NR1R2且R2代表苯基、3-氯苯基、4-氯苯基、3-溴苯基、4-溴苯基、4-碘苯基、4-甲基苯基、4-甲氧基苯基、3-羧基苯基或4-羧基苯基时，则R1是任选地取代的烷基。
本发明的化合物的一个或更多个可以以盐存在。本发明的青蒿素衍生物的合适的盐包括碱加成盐和酸加成盐两者。在特定的实施方式中，本发明涵盖可以通过式I、VII、VIII、IX或X的合适化合物与诸如有机酸或无机酸之类的合适的酸反应形成的酸加成盐。根据本发明的原理，通过与无机酸反应形成的酸加成盐是合适的，特别是通过与盐酸或氢溴酸反应形成的盐。其中Y代表基团-NR1R2的式I的化合物特别适用于此类酸加成盐的形成，其中R1和R2如上所定义。
还应当认识到，通式I、VII、VIII、IX或X的化合物能够作为不同的几何异构体和光学异构体存在。因此，本发明包括单独的异构体和此类异构体的混合物两者。本发明还包括本发明的化合物的溶剂合物和如本文中所描述的盐的溶剂合物。“溶剂合物”意指本发明的化合物与一种或更多种溶剂分子的物理缔合。这种物理缔合涉及不同程度的离子键合和共价键合，包含氢键合。“溶剂合物”涵盖溶液相和可隔离的溶剂合物。合适的溶剂合物的非限制性示例包含乙醇盐、甲醇盐及诸如此类。“水合物”是溶剂合物，其中溶剂分子是水。
本发明还包括本发明的化合物的多晶型物及其盐。术语“多晶型物”指物质的特定结晶状态或无定形状态，其可以通过诸如X-射线衍射、IR或拉曼光谱、熔点及诸如此类的特定的物理性能来表征。
制造本发明的化合物的方法在本领域中是已知的，并且尤其在美国专利6,984,640和美国专利申请2005/0119232中被描述，其内容通过引用被并入本文。
在另一个实施方式中，本发明的化合物在pH7.2下表现出大于40mg/L的水溶解度。在其它实施方式中，水溶解度在约40-1000mg/L的范围内。在又其它实施方式中，水溶解度在约30-1000mg/L的范围内。在又一个实施方式中，水溶解度在约50-1000mg/L的范围内。在另外的实施方式中，水溶解度在约60-1000mg/L的范围内。在多个实施方式中，水溶解度在约40-800mg/L的范围内。在某些实施方式中，水溶解度在约40-600mg/L的范围内。在一些实施方式中，水溶解度在约40-400mg/L的范围内。在其它实施方式中，水溶解度在约40-2000mg/L的范围内。在特定的实施方式中，水溶解度在约20-1000mg/L的范围内。在又另一个实施方式中，水溶解度在约20-800mg/L的范围内。每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。
根据一些方面和实施方式，本发明的化合物表现出约2.0-3.0(包含端点)之间的log P。如本文中所使用的log P指辛醇-水分配系数。在某些实施方式中，log P在约2.1-2.9(包含端点)之间。在另一个实施方式中，log P在约2.2-2.8(包含端点)之间。在又另一个实施方式中，log P在约2.3-2.7(包含端点)之间。在另外的实施方式中，log P在约2.1-3.0(包含端点)之间。在又一些实施方式中，log P在约2.2-3.0(包含端点)之间。在其它实施方式中，log P在约2.0-2.9(包含端点)之间。在某些实施方式中，log P在约2.0-2.8(包含端点)之间。在特定的实施方式中，log P在约2.4-2.8(包含端点)之间。每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。
根据一些方面和实施方式，本发明的化合物不能在体内被大量转化成二氢青蒿素。预期该性能通过降低已经很低的神经毒性的可能性来提高这些化合物的安全性。如本文中所使用的“大量转化”指在体内向二氢青蒿素的转化达通过标准代谢归宿分析(standard metabolic fate assay)可检测的程度。代谢归宿分析在本领域中是公知的，并且包括：例如将14C或2H标记的本发明的化合物施用至人类肝微粒体，接下来识别由1D和2D核磁共振(NMR)产生的代谢物(Haynes等人，Angew.Chem.Int.Ed.,2006,45,2082-2088)。在另一个实施方式中，使用本领域中已知的任何其它代谢归宿分析。每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。
在某些实施方式中，通过本发明的方法被治疗、抑制、减弱或抑制的病毒感染是疱疹病毒感染。在另一个实施方式中，疱疹病毒选自由单纯性疱疹病毒(HSV)1型、HSV2型、水痘-带状疱疹病毒、巨细胞病毒、EB病毒(EBV)、人疱疹病毒6型、人疱疹病毒7型和人疱疹病毒8型(卡波济氏肉瘤相关的疱疹病毒)组成的组。每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。如本文中所使用的人疱疹病毒6型涵盖变体A和B二者。每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。在另一个实施方式中，病毒感染是α疱疹病毒感染。在某些实施方式中，病毒感染是β疱疹病毒感染。在另一个实施方式中，病毒感染是γ疱疹病毒感染。在又另一个实施方式中，病毒感染是巨细胞病毒感染。在示例性实施方式中，病毒感染是人巨细胞病毒感染。在另一个实施方式中，病毒感染是黄病毒感染。在特定的实施方式中，黄病毒感染是牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染。在其它实施方式中，病毒感染是乙肝病毒(HBV)感染或丙肝病毒(HCV)感染。每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。在又一些实施方式中，病毒感染是本领域中已知的任何其它类型的病毒感染。
本领域那些技术人员将理解，本发明的组合物和方法具有不仅用于治疗病毒感染自身而且用于治疗受病毒感染产生的疾病和紊乱的效用。因此，例如，本发明提供在需要其的受治疗者中治疗对肿瘤具有肿瘤调制活性的病毒感染的方法，该方法包括向所述受治疗者施用治疗上有效量的如本文所定义的式I、VII、VIII、IX或X的任一个的、具有抗病毒活性的化合物或包含所述化合物和药学上可接受的载体或赋形剂的药物组合物。例如，存在HCMV可以调节恶性胶质瘤中的恶性表型的某种证据，其中HCMV序列和病毒基因表达存在于大部分(如果不是全部的话)恶性胶质瘤中(Dziurzynski等人，2012,Neuro-Oncology,doi:10.1093/neuonc/nor227)。因此，根据一些方面和实施方式，本发明提供在需要其的受治疗者中治疗对肿瘤、特别是与巨细胞病毒相关的恶性胶质瘤具有肿瘤调制活性的病毒感染的方法，该方法包括向所述受治疗者施用治疗上有效量的如本文所定义的式I、VII、VIII、IX或X任一个的、具有抗病毒活性的化合物或包含所述化合物和药学上可接受的载体或赋形剂的药物组合物。本发明的方法涵盖恶性胶质瘤患者中巨细胞病毒的直接靶向或者可选择地调节恶性胶质瘤患者中的转化的表型。每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。在一些实施方式中，本发明的化合物预防或降低受到巨细胞病毒折磨的受治疗者的发展恶性胶质瘤的可能性。
本发明进一步涵盖的是：CMV感染的治疗，其中CMV与诸如但不限于结肠癌、前列腺癌以及诸如此类的的肿瘤相关；和EBV的治疗，其中EBV与诸如但不限于伯基特淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、移植后淋巴增生性障碍(PTLD)和鼻咽癌的肿瘤相关。每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。
本领域中那些技术人员还将理解，本发明的化合物对预防、减弱或治疗和控制人类和动物的病毒感染而言是有用的。在一些实施方式中，在先天性感染的情况下该治疗是有效的。在另外的实施方式中，在包括移植接受者的免疫抑制的患者中的CMV感染的情况下该治疗是有效的。在特定实施方式中，该治疗在离体(ex-vivo)下是有效的。在本发明的范围内的是受到HCMV感染的新生儿、受到HCMV感染的孕妇和移植受体的治疗。每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。
根据某些方面和实施方式，本发明提供包含本发明的化合物和至少一种其它抗病毒药物的联合治疗。在一个实施方式中，本发明的化合物与病毒DNA聚合酶抑制剂联合使用。在另一个实施方式中，病毒DNA聚合酶抑制剂选自由更昔洛韦、膦甲酸和西多福韦组成的组。每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。在又另一个实施方式中，病毒DNA聚合酶抑制剂是本领域中那些技术人员已知的任何其它的病毒DNA聚合酶抑制剂。在某些实施方式中，本发明的化合物与包括但不限于更昔洛韦、缬更昔洛韦、膦甲酸、西多福韦、阿昔洛韦、伐昔洛韦和本领域中已知的任何其它抗病毒药物的抗病毒药物联合使用。每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。在另外的实施方式中，本发明的化合物与马立巴韦、letermovir(也被称作AIC246)、CMX-001、CMV超免疫球蛋白和CMV单克隆抗体的任一种联合使用。每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。
如果本发明的组合物应当与另外的治疗剂(例如，其它抗病毒剂)作为联合治疗而施用，该治疗可以按任何次序循序地进行、同时地进行或其组合。例如，本发明的化合物的施用可以在另外的治疗剂之前、之后或与其同时进行。例如，可以针对本发明的化合物来决定总治疗期间。另外的剂可以在用本发明的化合物治疗开始之前或用本发明的化合物治疗之后施用。另外，另外的剂可以在施用本发明的化合物的期间被施用，但是不需要横跨整个治疗期间来进行。在另一个实施方式中，治疗方案包括用一种剂预治疗，然后添加另一种剂或多种试剂。也考虑施用的交错顺序。交错施用包括施用本发明的化合物，然后是另外的剂，接下来是本发明的化合物等等。本发明的化合物和另外的剂的联合的治疗效果是至少加和的。在一些实施方式中，治疗效果是协同的，即每一种成分的整体剂量可能较低，因此导致显著降低了患者所经历的副作用，然而尽管如此仍实现了充分的抗病毒作用。
在另一个实施方式中，包含如本文中所定义的式I、VII、VIII、IX或X的任一种的、具有抗病毒活性的化合物作为活性成分的药物组合物还可以包含药学上可接受的载体或赋形剂。
药学上可接受的载体或赋形剂可以是与活性成分一起配制以促进施用的任何材料。载体或赋形剂可以是固体或液体，包括一般呈气态但已被压缩以形成液体的材料，以及一般用于配制药物组合物的任何载体或赋形剂。通常，根据本发明的组合物含有按重量计0.5％至95％的活性成分。
本发明的化合物可以被配制成，例如，片剂、丸剂、胶囊、小球、颗粒、粉末、锭剂、囊剂、扁囊剂、酏剂、混悬剂、分散体、乳剂、溶液、糖浆剂、气溶胶、软膏剂、软明胶胶囊和硬明胶胶囊、栓剂、无菌注射液和无菌包装粉末。每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。这些制剂可以使用常规固体载体或赋形剂或液体载体通过已知方法来生产，固体载体或赋形剂诸如例如，乳糖、淀粉或滑石，液体载体诸如例如，水、脂肪油或液体石蜡。可以使用的其它载体或赋形剂包括但不限于：衍生自动物蛋白质或植物蛋白质的材料，诸如明胶、糊精和大豆、小麦和车前草种子蛋白质；树胶，诸如阿拉伯胶、瓜儿胶、琼脂和黄原胶；多糖；海藻酸盐；羧基甲基纤维素；角叉菜胶；葡聚糖；果胶；诸如聚乙烯吡咯烷酮的合成聚合物；多肽/蛋白质或多糖复合物，诸如明胶-阿拉伯胶复合物；糖，诸如甘露醇、右旋糖、半乳糖和海藻糖；诸如环糊精之类的环糖(cyclic sugars)；无机盐，诸如磷酸钠、氯化钠和硅酸铝；和具有2至12个碳原子的氨基酸及其衍生物，诸如但不限于甘氨酸、L-丙氨酸、L-天冬氨酸、L-谷氨酸、L-羟脯氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸和L-苯丙氨酸。每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。
辅助成分，诸如药片崩解剂、增溶剂、防腐剂、抗氧化剂、表面活性剂、增粘剂、着色剂、调味剂、pH改性剂、甜味剂或掩味剂，也可以被并入组合物。合适的着色剂包括但不限于红色、黑色和黄色的氧化铁和诸如可获得自Ellis&Everard的FD&C蓝2号和FD&C红40号的FD&C染料。合适的调味剂包括但不限于薄荷、覆盆子、甘草、橙子、柠檬、葡萄柚、焦糖、香草、樱桃和葡萄的味道及其任何组合。合适的pH改性剂包括但不限于柠檬酸、酒石酸、磷酸、盐酸和马来酸。合适的甜味剂包括但不限于阿斯巴甜(aspartame)、安赛蜜K(acesulfame K)和索马甜(thaumatin)。合适的掩味剂包括但不限于碳酸氢钠、离子交换树脂；环糊精包合物、被吸附物或微胶囊化的活性物。每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。
在某些实施方式中，使用运载媒介。用于本发明的药物组合物的示例性的运载媒介是脂质体。脂质体能够在受治疗者中保持稳定持续足以将本发明的化合物递送至患者的时间。本发明的范围内的脂质体优选在已经被施用至少约30分钟、更优选至少约1小时和甚至更优选至少约24小时的受治疗者中是稳定的。
本发明的化合物和组合物的合适的施用途径包含例如，口服的、直肠的、经皮的、局部的、经粘膜的，特别是经鼻的、肠的或肠胃外的递送，包含肌内的、皮下的和髓内的注射以及鞘内的、直接心室内的、静脉内的、腹膜内的、鼻内的、动脉内的、囊泡内的(进入膀胱的)或眼内的注射。每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。
根据某些方面和实施方式，本发明的化合物和组合物特别适于口服施用。预期通过口服施用本发明的化合物和组合物，可以实现全身作用。在一个实施方式中，本发明的化合物和组合物通过鼻呼吸途径施用。药学上可接受的溶剂中的组合物可以利用惰性气体被雾化。雾化溶液可以从雾化设备直接吸入或者可以将雾化设备附接至面罩帷罩(face masks tent)或间歇正压呼吸机。可以从按适当方式从递送组合物的设备口服或经鼻地施用组合物溶液、混悬剂或粉末。
用于肠胃外、皮内或皮下应用的溶液或混悬剂通常包含下列成分：诸如注射用水、盐溶液、不挥发油、聚乙二醇、甘油、丙二醇(或其它合成溶剂)的无菌稀释剂、抗菌剂(例如，苄醇、甲基对羟基苯甲酸甲酯)、抗氧化剂(例如，抗坏血酸、亚硫酸氢钠)、螯合剂(例如，乙二胺四乙酸)、缓冲液(例如，乙酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐)和调节张度的剂(例如，氯化钠、右旋糖)。例如，可以用诸如盐酸或氢氧化钠的酸或碱调节pH。肠胃外的制剂可以被封装在安瓿、一次性注射器或多剂量玻璃瓶或塑料瓶中。
适于肠胃外施用的药物组合物包括但不限于含水性的和无水的无菌注射溶液或混悬剂，其可以包含抗氧化剂、缓冲液、抑菌剂和使组合物与预期的受体的血液大体上等渗的溶质。例如，此类化合物还可以包含水、醇、多元醇、甘油和植物油。临时注射溶液和混悬剂可以由无菌粉末、颗粒和片剂来制备。此类组合物优选包含治疗上有效量的本发明的化合物和/或其它治疗剂以及合适量的载体，以便提供用于为患者适当施用的形式。
施用方案可以取决于感染和状况的严重性、患者群体、年龄、重量等等通过有技能的技术人员来确定。本发明的化合物的有效治疗包括HCMV的特定的紊乱或状况的量将取决于紊乱或状况的性质，并且可以通过标准的临床技术来确定。另外，可以任选地采用下文中所描述的体外测定、动物测定(例如，豚鼠经胎盘的传递模型和新生小鼠模型)和离体测定以帮助确定最佳剂量范围。待采用的精确的剂量还取决于施用的途径和疾病或紊乱的进展，并且应当根据执业医生的判断和每个患者的情况来决定。通常，可以使用0.01-1000mg/kg体重、0.1mg/kg至100mg/kg、1mg/kg至100mg/kg、10mg/kg至75mg/kg等等的范围内的剂量。本发明的化合物的示例性的、非限制性的量包括0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、75mg/kg和100mg/kg。每种可能性都代表本发明的单独的实施方式。可选择地，施用的量可以被测量并表示为施用化合物的摩尔浓度。通过例证和非限制的方式，本发明的化合物(例如，式I、VII、VIII、IX或X的任一个的化合物)可以在0.1μM至10mM的范围内施用，例如约0.1μM、10μM、100μM、1mM和10mM。可选择地，施用的量可以被测量并表示为mg/ml、μg/ml或ng/ml。通过例证和非限制的方式，抗病毒剂可以按1ng/ml至1000mg/ml的量进行施用，例如1-1000ng/ml、1-100ng/ml、1-1000μg/ml、1-100μg/ml、1-1000mg/ml、1-100mg/ml等等。有效剂量可以依据由体外、动物模型或离体模型测试生物测定或系统得到的剂量反应曲线进行推断。
施用方案可以每日一次、每日两次、每日三次、每周一次、每周两次、每周三次、每月一次、每月两次、每月三次或对本领域的那些技术人员而言已知的任何其它施用方案进行。另外，施用可以是连续的，即，每天，或者是间歇的。如本文中所使用的术语“间歇的”或“间歇地”意指以规则间隔或不规则间隔停止和开始。例如，间歇施用可以每周一至六天施用或者它可以意指循环施用(例如，每日施用持续二至8个连续周，然后是持续高至一周不施用的休息时间)或者它可以意指隔日施用。
存在下列实施例以便更充分地例示本发明的一些实施方式。然而，它们决不应当被理解为限制本发明的范围。
实验细节部分
实施例1：通过噬菌斑减少测定(plaque reduction assay)所鉴定的青蒿酮和化合物IX的高度有效的抗病毒活性
材料和实验方法
病毒、细胞和测试化合物
所使用的CMV株是：AD169(获得自美国典型培养物保藏中心)和TB40/E。另外，一些实验使用在哈达沙临床病毒学实验室(Hadassah ClinicalVirology Laboratory)从先天性感染的新生儿的尿液回收的并且繁殖3-5代的低代临床分离株CI704和CI893。所有的CMV株在人包皮成纤维(HFF)细胞中进行繁殖和滴定。在-70℃下保持无细胞病毒储液和结合细胞的临床分离株。病毒储液在含有用琼脂糖培养基覆盖的HFF单层的24-孔组织培养板中通过连续的10-倍稀释液来滴定。在孵育7至10天之后，计数噬菌斑，并且依据每毫升(ml)噬菌斑形成单位(PFU)来测定病毒滴度。在DMSO中以10mM浓度新制备青蒿酮、Artemiside、RW177、化合物IX和青蒿琥酯的储液。作为10mM储液储存的更昔洛韦用于对比测定。
噬菌斑减少测定
在24-孔培养板中用每孔0.2ml含有60至100PFU的病毒悬浮液接种细胞单层。在37℃下吸附60分钟之后，移除接种物，并且用含有测试药物的琼脂糖培养基覆盖物替换培养基。使用下列最终药物浓度：青蒿酮：0、0.1、1、5、10、25和50μM；青蒿琥酯：0、1、5、10、25、50和100μM；更昔洛韦、Artemiside、化合物IX和RW177：0、0.1、1、5、10、25和50μM。在5％CO2培养箱中在37℃下孵育板10天。然后用显微镜计数噬菌斑。计算将噬菌斑的数量减少至对照值(IC50)的50％所需要的药物浓度。
结果
利用标准噬菌斑减少测定，通过将多种药物浓度施加至细胞培养物中生长的病毒来测定青蒿酮的抗病毒活性。平行测试已知具有显著的抗病毒活性的化合物青蒿琥酯。更昔洛韦用作另外的阳性对照。算出每种药物和病毒的至少三个独立实验的IC50值的平均数，并且结果报告为平均偏差值±标准偏差值。分别在图2A和图3A中描绘了青蒿酮和青蒿琥酯的噬菌斑减少实验的代表性曲线。青蒿酮表现出与更昔洛韦相似的抗病毒活性(0.9±0.3μM)，同时证明无细胞毒性。通过比较，青蒿琥酯的平均IC50值是10.8±4.2μM。因此，青蒿酮具有远优于青蒿琥酯的提高的抗病毒效果。重要地，青蒿酮展示了针对源于实验室的CMV株和低传代CMV临床分离株二者的宽的CMV抗病毒活性。在视网膜上皮细胞(RPE)的另外的细胞类型培养系统中也证明了青蒿酮与青蒿琥酯相比优越的抗病毒活性。还发现化合物IX的CMV抗病毒活性是优越的，具有2.1±0.6μM的IC50值。因此，本发明的化合物IX还可以用作有效的抗CMV剂。
相比之下，针对寄生虫具有提高的活性的10-烷基氨基青蒿素衍生物Artemiside和RW177(图1)具有明显次优的抗病毒活性(IC50值>40μM)，这突显了青蒿酮和化合物IX的提高的和令人惊异的抗病毒活性。
实施例2：通过病毒DNA定量来证实青蒿酮的高度有效的抗病毒活性
材料和实验方法
病毒DNA的定量
在从细胞提取DNA之后，利用源自CMV gB基因的引物和探针通过实时PCR测定来测定在具有和不具有新增的药物的情况下感染细胞中的病毒DNA数量(表示为基因组拷贝/孔)。已知该测定证明在6-log范围(logrange)的线性定量，具有50拷贝/ml的灵敏度。
结果
通过使用实时PCR定量病毒DNA来证实实施例1的结果。这些测定证实了青蒿酮具有远优于青蒿琥酯的提高的抗病毒效果。青蒿酮和青蒿琥酯的病毒DNA累积的代表性曲线分别在图2B和图3B中描绘。
因此，抗病毒敏感性和病毒DNA定量测定揭示了青蒿酮是CMV复制和病毒DNA合成的高度有效的抑制剂。
实施例3：青蒿酮有效地抑制CMV立即早期(IE)基因表达
材料和实验方法
病毒基因表达的分析
利用HCMV株AD169感染人包皮成纤维细胞(HFF)。在感染后1小时(hpi)，将青蒿酮(25μM)或更昔洛韦(25μM)添加至生长培养基，并且在药物的存在下进一步孵育细胞，直到在24和72hpi时被制备用于免疫荧光分析，以分别分析IE和pp65的表达。平行分析对照未治疗的感染细胞和模拟的感染细胞。
免疫荧光测定
以0.1PFU/细胞的感染复数(moi)感染在8-孔载玻片上生长的细胞。在24和72hpi时移除上清液，并且用PBS洗涤细胞3次并在室温下用3.7％甲醛固定30分钟。细胞利用PBS+1％NH4Cl洗涤5次、利用0.1％TX100透性化5分钟，并用PBS+1％NH4Cl洗涤5次。在使用在PBS中的1％BSA封闭1小时之后，将所指示的单克隆一抗(IE1/2或pp65)添加至在PBS中的0.5％BSA中适当稀释的细胞中，并且在室温下孵育2小时或者在4℃孵育过夜。在室温下将二抗添加至在含有0.5％BSA的PBS中适当稀释的细胞中持续30分钟并用PBS洗涤。
利用商用封固介质进行封固，然后添加4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)核染剂(在所有细胞中产生核蓝色染色)，通过荧光显微镜分析该细胞。针对至少3个独立实验来监测结果，对每个治疗组至少5个视野区(每个区在500和800个细胞之间)进行评分。
结果
图4中描述了青蒿酮和更昔洛韦-处理的感染细胞中得到的代表性的免疫荧光图像。青蒿酮处理在24hpi时得到了病毒IE基因表达的显著降低。这与当用更昔洛韦处理时所得到的结果相比是对比鲜明的，更昔洛韦处理时未抑制IE基因表达(表1；图5A)。
与IE基因表达减少一致，青蒿酮处理，如同更昔洛韦一样，导致了高度有效的病毒晚期(pp65)基因表达的降低(表1；图4、图5B)。
表1.总的和HCMV抗原-阳性细胞的细胞计数结果。
*在每个实验中计数至少5个视野区。
更昔洛韦不抑制HCMV立即早期(IE)基因表达，而青蒿酮有效地抑制IE基因表达并且青蒿酮和更昔洛韦二者有效地抑制HCMV晚期基因表达。因此，在不受理论或作用机理束缚的情况下，认为青蒿酮展示了与更昔洛韦不同的新的作用机理，该新的作用机理包括抑制在病毒DNA合成之前的非常早期的病毒复制的步骤。
实施例4：利用青蒿酮联合治疗
为了调查青蒿酮处理对常规抗-HCMV药物的功效的影响，利用青蒿酮和更昔洛韦的组合来处理HCMV-感染细胞。使用中等浓度的更昔洛韦(1μM)，与青蒿酮的联合治疗导致对HCMV复制的加和性抑制效果。
实施例5：评价治疗效果
为了评价本发明的抗CMV化合物的治疗效果，使用在母体蜕膜(maternal deciduas)中HCMV感染的离体模型，如J.Virol.，2011；85：13204-13213中描述的，其内容整体并入本文。特别地，HCMV传递和发病机理的研究由于不存在用于HCMV感染的动物模型而大大地受到限制。豚鼠经胎盘的传递模型和新生小鼠模型对疫苗和病毒引起的脑部病变的实验评价而言已被证实是非常有价值的，而HCMV的种特异性已排除先天人感染的实验模型。离体感染的蜕膜培养物可以充当用于筛选治疗处理的独有的替代性人模型。使用离体模型，可以监测响应于利用本发明的青蒿素衍生物的治疗发生的多种生理学过程和病理学过程，从而使能够测定治疗的功效。
材料和实验方法
细胞和病毒
使用原代人包皮成纤维细胞(HFF)繁殖和分离HCMV株，如在Wolf等人的PNAS,2001,98,1895-900和Wolf等人的J.Clin.Invest.,1995,95,257-63中所描述的，其内容整体并入本文。HFF在补充有10％胎牛血清、2mM谷氨酰胺、100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素(Biological industries，Beit Haemek，以色列)和0.25μg/ml两性霉素(Invitrogen，CA，USA)的杜氏改良的Eagle培养基(Dulbecco's Modified Eagle’s Medium，DMEM)中生长。所使用的HCMV株是AD169(获得自美国典型培养物保藏中心)、TB40/E株表达的UL32-融合的GFP(由德国的C.Sinzger提供)、表达UL83-融合的GFP的TB40/E株(株RV1305；由德国的M.Winkler提供)和CMVPT30-gfp，临床上来源的表达GFP的无细胞的HCMV株(PT30)。这些病毒株被作为无细胞病毒储液保持。另外，使用在哈达沙临床病毒学实验室从先天性感染的新生儿的尿液回收的并且繁殖3-5代的低代临床分离株CI851作为结合细胞的病毒。CI851的无细胞储液通过超声处理感染细胞、然后除去沉淀的细胞碎屑来制备。通过在HFF上的标准噬菌斑测定来确定澄清的上清液的病毒效价。
蜕膜器官培养物的制备和感染
通过深刮从经历前三个月选择性终止妊娠的妇女获得蜕膜组织以获得来自包含具有间质滋养层侵袭的蜕膜的基板(basal plate)和胎盘床的母体组织。该研究被哈达萨医疗中心机构审查委员会认可，并根据以色列卫生部的赫尔辛基宣言、良好的临床实践指南和人类实验指南进行。所有供体给出书面知情同意书。手术之后4小时内递送的组织被保持在冰上直到切片。对蜕膜器官培养物的制备而言，用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤组织、通过超薄切片机(组织分段器，TC-2，Sorvall公司)切割成包含～10细胞层的薄片(250μm厚度)，并在具有25％酸溶血的F12、10％胎牛血清、5mMHEPES、2mM谷氨酰胺、100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素(Biologicalindustries，Beit Haemek，以色列)和0.25μg/ml两性霉素的DMEM中，在37℃，5％CO2下培养。
对蜕膜器官培养物的感染而言，在切片之后立即将组织放置在48孔板(～5片/孔以维持最佳成活力)并用指示的病毒接种(104噬菌斑形成单位/孔，除另有说明之外)12小时以允许有效的病毒吸附。继病毒吸附之后，充分洗涤培养物并进一步孵育持续实验的期间，每2-3天更换培养基。
组织成活力监测
线粒体脱氢酶(MTT)分析：在37℃下用MTT底物(3-[4,5-二甲基噻唑-2-基-2,5-二苯基溴化四唑])(Sigma，以色列)孵育组织切片1小时并且接下来在PBS中洗涤，然后添加100％乙醇以溶解产物着色的晶体。使用ELISA酶标仪(Organon Teknika，荷兰)在540nm的波长处，以650nm为参考波长，读取四个重复样品的吸收率。成活力通过标准化按照Bradford测定所测试的每个提取物的蛋白质含量的吸光率值来测定(Kolodkin-Gal等人，2008,J.Virol.、82、999-1010)。
葡萄糖消耗测定：通过Accu-checkTM血糖传感装置(Roche，德国)在培养48小时之后监测经孵育的组织的培养基中的葡萄糖水平。
组织学分析和免疫组织化学分析
将蜕膜组织固定在37％福尔马林中、包埋在石蜡中并切割成5μm切片。将切片在二甲苯中脱蜡，再水化并用苏木精和曙红(H&E)染色。
对HCMV抗原的免疫组织化学检测而言，将组织切片放置在0.01M柠檬酸盐缓冲液中并在水浴中升温至90℃持续15分钟，允许冷却至室温，然后用抗在CAS-Block(Zymed Laboratories，CA，USA)中稀释的HCMV的小鼠单克隆一抗(mAbs)、立即早期(IE)、pp65或gB抗原(1：1000稀释；Virusys公司，坦尼城，马里兰州，USA)或不含有一抗以充当阴性对照的CAS-Block来孵育。然后洗涤切片并用HRP结合的山羊抗小鼠二抗(BiocareMedical，CA，USA)孵育。再次洗涤切片，并通过HRP底物3,3'二氨基联苯胺(DAB)检测HCMV抗原，然后用苏木精复染色。
免疫荧光
将用于免疫荧光染色的组织样本固定在4％多聚甲醛中、包埋在OCT中、在液氮中急速冷冻并切割成10μm切片。用CAS-Block处理冷冻切片以便避免非特异性抗体结合，并且仅用CAS-Block或含有下列用于特异性细胞标志物的抗体的CAS-Block孵育冷冻切片：抗细胞角蛋白7(1：300稀释，Dako Glostrup，丹麦)的mAbs，用于检测CTB；抗波形蛋白(1：100稀释，达科)的mAb，用于检测蜕膜基质细胞；抗CD11c(1：50稀释，Biolegend，CA，USA)的mAb，用于检测树突细胞；抵抗CD68(1：200稀释，Abcam，剑桥，UK)的mAb，用于检测巨噬细胞；以及抵抗血管性血友病因子(1：800稀释，达科)的兔多克隆抗体，用于检测内皮细胞。将切片洗涤并用cy5结合的山羊抗小鼠或cy5结合的山羊抗兔二抗(1：200稀释，杰克逊免疫研究，PA，USA)孵育，并在含有4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)核染剂的Vectashield封固介质(Vector Laboratories，伯林盖姆，CA)中封固。使用Zeiss LSM710Axio Observer.z1.共聚焦显微镜使玻片可视化，并使用Zen 2009软件来分析。
HCMV DNA和RNA定量
充分洗涤感染的蜕膜组织和HFF细胞培养物并将其连同它们相应的上清液一起在-70℃下储存(在最后的培养基更换之后2天收获)。
根据制造商的说明，分别使用QIAamp DNA Mini Kit提取试剂盒和RNeasy Mini Kit(QIAGEN，希尔登，德国)从样品提取DNA和RNA。按照Boeckh等人,2004,J.Clin.Microbiol.,42,1142-1148中所描述的，使用源自HCMV糖蛋白B(gB)的引物和探针，使经纯化的DNA样品在7900HT实时PCR系统(Applied Biosystems，福斯特城，CA，USA)经历实时定量PCR反应。该测定展示了在6-log范围的线性定量。利用GoScriptTM(Promega，麦迪逊，USA)使经纯化的RNA样品经历反转录，然后经历晚期HCMV R160461剪接的mRNA的定量的实时PCR，如在White等人的2004,J.Virol.,78、1817-1830中所述的。对对比分析和动力学分析而言，组织和HFF细胞培养物中的病毒DNA拷贝数通过细胞的单一拷贝基因核糖核酸酶P来标准化。根据制造商的说明使用Taqman核糖核酸酶P试剂盒(Applied Biosystems)来定量核糖核酸酶P。病毒mRNA拷贝数通过细胞持家基因G6PD来标准化。
抗病毒处理和测定
以25μM、50μM、250μM和500μM的浓度使用抗病毒药物更昔洛韦和阿昔洛韦(Sigma)。在病毒吸附之后将药物添加至培养基。
为了测量抗体的中和作用，在室温下用以1：10、1：100和1：1000稀释的HCMV HIG(Megalotect；100mg蛋白质/50IU/ml；生物监测，德国)预孵育所指示的病毒株1小时，然后在组织上孵育经预孵育的病毒抗体混合物。
在吸附后处理实验中，在病毒吸附之后24小时之时将HCMV HIG的相同稀释物添加至培养基，然后充分洗涤以除去松散地结合的病毒。
在药物或抗体的存在下进一步孵育组织持续实验的时期。在更换培养基时再次补充药物或抗体。
通过测定将标准化的组织病毒DNA拷贝数降低50％所需的药物浓度(IC50)来测试抗病毒药物敏感性，每种药物采用至少5个独立的重复实验。
结果
蜕膜器官培养物的确立
将新的前三个月的蜕膜组织切片成薄片(250μm厚度)，以确保营养物的可达性。在切片之后立即将蜕膜器官培养物放置在48孔培养板(～5片/孔)中、在富集的DMEM中孵育并经历频繁的培养基更换以维持最佳成活力。如通过MTT和葡萄糖消耗测定二者所监测的蜕膜组织成活力被维持持续离体培养至少12天。此外，在设立时(第0天)和培养第8天得到的切片的组织学检查展示了典型的蜕膜形态特征的保持，不具有细胞死亡的可见信号(图6A-6B)。因此，蜕膜外植体在需要支撑并监测通常发生在4-7天内的HCMV感染和传播的时间内保持可见并且保留自然形态。
蜕膜物中的HCMV感染动力学
为了评价蜕膜器官培养物对HCMV的敏感性，蜕膜培养物受到表达GFP的临床上来源的无细胞株PT30的感染(Fox-Canale等人的2007,Virology,369,55-68)。该株被示出维持对HFF、脐静脉内皮细胞和视网膜上皮细胞所示出的宽的细胞趋向性，选择该株以代表HCMV的宽的体内细胞趋向性并提供感染的可视化监测。
为了评价离体感染的蜕膜物的组织病理学特征，感染的组织的组织切片在6dpi时进行检查。离体感染的组织的组织切片表现出自然HCMV感染的典型的组织病理学特性，出现具有“猫头鹰眼”包涵体、颗粒状内含物和不规则的过染色细胞核的巨噬细胞(图6C-6D)。
感染的切片的免疫组织化学分析揭示了立即早期和pp65早期-晚期病毒基因(图6E-6F)以及gB(已知在感染之后晚期表达)的表达。包含模拟感染的切片和仅与二抗反应的感染的切片的所有的对照组织通过免疫组织化学染色是阴性的。这些发现表明HCMV在感染的蜕膜组织中经历完整的复制周期。
为了了解蜕膜物中的病毒传播动力学，通过共聚焦显微镜每天监测PT30感染的活组织的GFP表达细胞。如图7A-图7D所示，在感染后2天(dpi)首次检测到个体细胞中出现的GFP表达。在3-7dpi时，观察到了伴随着感染细胞的噬菌斑状集簇形成的逐渐的感染进展(图7A-7D)。器官培养物感染的这种动力学模式在获得自不同受治疗者的多于80个蜕膜组织中被一致地观察到，并且可以在用表达融合至晚期结构蛋白质pp150的GFP的内皮趋向性(endotheloitropic)株TB40/E感染之后被类似地监测。
为了进一步定量随着时间推移的感染进展，在用株PT30、TB40/E、AD169和低代临床株CI851感染之后(104PFU/孔)通过实时PCR测量感染的蜕膜培养物中病毒DNA的累积。如图8所示，组织相关的病毒DNA与时间存在一致的增长(在感染后的早期所检测到的剩余的输入DNA的水平之上)，这针对所有病毒株而被证实：对所有株而言在2-9dpi之间时观察到病毒DNA累积的1.3-log至2-log增长，这反映了在感染的组织内的活跃的DNA合成。而且，对TB40/E和AD169两者，HCMV真实-晚期RNAR160461的定量分析均展示在7dpi之内的1.9-log增长。这些发现以及GFP表达的散布模式(针对2种不同的GFP表达的病毒株而被独立地展示的)和晚期病毒蛋白质的表达支持了在蜕膜器官培养物中活跃的病毒复制。
HCMV在蜕膜物中感染宽范围的细胞
尽管HCMV在体内被鉴定为宽的细胞趋向性，体外研究通常受限于单一细胞类型的培养物。为了界定蜕膜物内HCMV的细胞趋向性，鉴定感染细胞的类型。检查被临床来源的株TB40/E和PT30(由宽的细胞趋向性表征)和弱内皮趋向性株AD169感染的蜕膜组织。通过共聚焦免疫荧光使用特异性细胞标志物来分析HCMV感染的组织的冷冻切片。图9示出株TB40/E与侵袭性细胞滋养层(细胞角蛋白7)、内皮细胞(血管性血友病因子)、蜕膜细胞(波形蛋白)、树突细胞(CD11c)和巨噬细胞(CD68)的标记物的病毒共定位。PT30显示出类似的细胞趋向性，指示HCMV对所有主要的蜕膜细胞类型的离体感染。在用株AD169感染之后的平行实验中，可以展示仅与波形蛋白阳性蜕膜基质细胞的病毒共定位。
蜕膜器官培养物的HCMV感染的抑制
最近的研究已表明了产前抗病毒干预在预防母婴传播和先天性疾病中的潜在应用(Jacquemard等人，2007BJOG,114,1113-1121；和Nigro等人，2005,N.Engl.J.Med.,353,1350-1362)。虽然所有目前可用的抗-HCMV药物(即，更昔洛韦、膦甲酸和西多福韦)被认为是致畸性的，已研究出新的且替代性的抗病毒选择，包括阿昔洛韦和HCMV HIG。
为了评价蜕膜器官培养物用于评价抗病毒活性的功效，并且为了检查抗病毒药物对腹膜内HCMV复制的离体影响，用不同浓度的更昔洛韦和阿昔洛韦孵育感染的蜕膜培养物。蜕膜培养物用HCMV株TB40/E(105PFU/孔)感染并且用递增浓度的更昔洛韦(GCV)或阿昔洛韦(ACV)孵育。在8dpi时测定处理和未处理的蜕膜组织裂解物中的病毒DNA的数量并且通过核糖核酸酶P DNA拷贝使值标准化。
图10示出两种抗病毒药物抑制蜕膜培养物中的HCMV复制，如通过感染的组织中病毒DNA累积的剂量依赖性减少所测量的。更昔洛韦当与阿昔洛韦比较时表现出较高的抗病毒功效(1.5μM的IC50对比18.3μM的IC50)。这些发现证实了，离体感染的蜕膜培养物可以用于研究抗病毒干预的效果并且用于预估本发明的化合物的治疗功效。
检查感染的蜕膜培养物中HCMV HIG的抗病毒效果。中和活性研究示出HCMV HIG制剂当用病毒预孵育时能够中和蜕膜的HCMV感染(图11A)。用于50％病毒中和的经计算的HIG浓度是36μg/ml。HCMV IgG阴性血清未观察到抗病毒效果。该发现可能与HIG在预防体内母婴传播中的预防作用有关。应注意，蜕膜培养物中HCMV HIG的中和活性比成纤维细胞培养物中的中和活性高。在对比实验中，蜕膜培养物中的HCMV HIG的中和效价比HFF细胞培养物中的中和效价低多于10倍。为了进一步检查HIG的潜在治疗效果，检查当在病毒吸附之后添加HIG时其抗病毒活性。在24吸附后小时，在将递增的HIG稀释物添加至培养基之前充分洗涤组织。清晰地表示出HCMV复制的显著剂量依赖性抑制，具有652μg/ml的IC50(图11B)。通过在感染后晚期噬菌斑状集簇传播的减少表明当在吸附后添加HIG时HIG的抑制效果也是明显的。相比之下，在HFF细胞培养物中未观察到吸附后的抑制效果。这些研究揭示了蜕膜中HCMV HIG的联合的中和与吸附后抗病毒效果。
因此，组织中活跃的病毒复制通过以下来证实1)感染后2-9天的间隔内，用GFP表达的HCMV株感染之后的GFP表达的细胞病灶的逐渐发展，其伴随着病毒DNA的一致增长；2)感染的器官培养物中立即早期及真实晚期两种病毒RNA和蛋白质的表达；3)自然感染的典型组织病理学特征的出现；和4)抗病毒DNA聚合酶抑制剂更昔洛韦对病毒传播和DNA累积的剂量依赖性抑制。这些联合的发现表明离体感染的蜕膜器官培养物解决病毒趋向性和传播的动力方面的能力。
确定了蜕膜中受到HCMV临床衍生的株感染的宽范围的细胞，包括侵袭性CTB、内皮细胞、巨噬细胞、蜕膜基质细胞和树突细胞。该发现反映了蜕膜的独有的多细胞型性质。蜕膜中的感染细胞代表病毒进入的两个不同的途径，即，融合(在细胞表面处)和内吞介导的，如分别在成纤维细胞和上皮细胞/内皮细胞中所鉴定到的。HCMV内吞介导的进入已被示出需要病毒gH/gL/UL128-131复合体，而UL128-131蛋白质对HCMV融合介导的进入而言不是必要的。
HCMV HIG的联合的病毒中和与感染后效果表明蜕膜器官培养物中离体模型评价母-胎界面(maternal-fetal interface)中新的抗病毒干预的效果的能力。例如，感染的蜕膜器官培养物可以提供用于评价抗-HCMV药物的产前预防和治疗应用的临床试验的机理基础。新的蜕膜器官培养物中HCMV感染的离体模型揭示了与临床来源的病毒株和实验室来源的病毒株二者的细胞对细胞模式传播一致的宽的靶细范围。该模型可以用于评价本发明的化合物作为新的、有效的和不致畸的抗-HCMV药物的功效。
前述具体实施方式的说明如此完整地揭示本发明的一般性质，以致在无过度实验和不背离一般概念的情况下其他人可以通过应用现有知识容易地修改和/或适应于此类具体实施方式的各种应用，而且，因此，此类适应和修改应当且意图在所公开的实施方式的等同物的含义和范围内被领会。应理解，本文中所采用的措辞或术语是出于说明的目的而不是限制的目的。在不背离本发明的情况下，用于实施各种所公开的功能的装置、材料和步骤可以采用多种可替换形式。
应当理解的是，虽然指出了本发明的优选实施方式，详细的说明和具体实施例仅是通过例证给出的，因为依据该详细的说明本发明的精神和范围内的各种变化和修改对本领域的那些技术人员而言将是显然的。

Claims (49)

1.一种药物组合物，其包含治疗上有效量的由式I的结构表示的、具有抗病毒活性的化合物：
或其盐或溶剂合物，其中Y代表基团-NR1R2；其中
(i)R1代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基或炔基；且R2代表任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；
(ii)R1和R2以及处于之间的氮原子一起代表杂环基团或衍生自任选地取代的氨基酸酯的氨基；或者
(iii)R1代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；且R2代表-X(＝Z)-A基团，其中
X代表碳原子、硫原子、亚砜基团S＝O、或者基团PR3、P-O-R3或P-N(R4)-R3，其中R3和R4各自独立地代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；
Z代表氧原子、硫原子或基团NR5，其中R5代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；且
A代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基、或者选自N(R6)2、NHNH2、NR6NHR6、NR6N(R6)2、OR6、SR6、10α-二氢青蒿素基、OR7和NR6R7的基团，其中每个R6独立地代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基，且R7代表作为取代基与R5或R1连接的键，所述取代基与R5或R1连同处于之间的基团一起代表任选地取代的杂环基团，
其用于治疗病毒感染或抑制病毒复制。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中Y代表基团–NR1R2，其中R1和R2以及处于之间的氮原子一起代表非芳香族的杂环基团。
3.根据权利要求2所述的药物组合物，其中所述非芳香族的杂环基团被取代。
4.根据权利要求2所述的药物组合物，其中所述非芳香族的杂环基团选自由哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基和吗啉代磺酰基组成的组。
5.根据权利要求4所述的药物组合物，其中所述化合物由式VIII的结构表示：
6.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述化合物由式X的结构表示：
其中R1代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；
X代表碳原子、硫原子、亚砜基团S＝O或者基团PR3、P-O-R3或P-N(R4)-R3，其中R3和R4各自独立地代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；
Z代表氧原子、硫原子或基团NR5，其中R5代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；且
A代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基、或者选自N(R6)2、NHNH2、NR6NHR6、NR6N(R6)2、OR6、SR6、10α-二氢青蒿素基、OR7和NR6R7的基团，其中每个R6独立地代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基，且R7代表作为取代基与R5或R1连接的键，所述取代基与R5或R1连同处于之间的基团一起代表任选地取代的杂环基团。
7.根据权利要求6所述的药物组合物，其中R1代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；X代表碳原子、硫原子或亚砜基团S＝O；Z代表氧原子或硫原子；且A代表N(R6)2、NHNH2、NR6NHR6或NR6N(R6)2基团，其中每个R6独立地代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基。
8.根据权利要求7所述的药物组合物，其中所述化合物由式IX的结构表示：
9.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述病毒感染或复制是疱疹病毒感染或复制。
10.根据权利要求9所述的药物组合物，其中所述病毒感染或复制是巨细胞病毒感染或复制。
11.根据权利要求10所述的药物组合物，其中所述病毒感染或复制是人巨细胞病毒感染或复制。
12.根据权利要求1所述的药物组合物，还包含药学上可接受的载体或赋形剂。
13.根据权利要求12所述的药物组合物，呈选自由片剂、丸剂、胶囊、小球、颗粒、粉末、锭剂、囊剂、扁囊剂、酏剂、混悬剂、分散体、乳剂、溶液、糖浆剂、气溶胶、软膏剂、软明胶胶囊和硬明胶胶囊、栓剂、无菌注射液和无菌包装粉末组成的组的形式。
14.根据权利要求12所述的药物组合物，适于经由选自由以下组成的组的途径来施用：口服的、直肠的、肌内的、皮下的、静脉内的、腹膜内的、鼻内的、动脉内的、囊泡内的、眼内的、经皮的和局部的。
15.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述化合物适于与至少一种其它抗病毒药物组合共同施用。
16.根据权利要求15所述的药物组合物，其中所述至少一种其它抗病毒药物选自由更昔洛韦、缬更昔洛韦、膦甲酸、西多福韦、阿昔洛韦、和伐昔洛韦组成的组。
17.根据权利要求15所述的药物组合物，其中治疗剂的共同施用按选自以下的方案进行：整个组合的组合物、大体上同时施用单独的个体组分和依据单独的时间表施用单独的个体组分。
18.一种药物组合物，其包含治疗上有效量的由式I的结构表示的、具有抗病毒活性的化合物：
或其盐或溶剂合物，其中Y代表基团-NR1R2；其中
(i)R1代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基或炔基；且R2代表任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；
(ii)R1和R2以及处于之间的氮原子一起代表杂环基团或衍生自任选地取代的氨基酸酯的氨基；或者
(iii)R1代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；且R2代表-X(＝Z)-A基团，其中
X代表碳原子、硫原子、亚砜基团S＝O、或者基团PR3、P-O-R3或P-N(R4)-R3，其中R3和R4各自独立地代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；
Z代表氧原子、硫原子或基团NR5，其中R5代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；且
A代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基、或者选自N(R6)2、NHNH2、NR6NHR6、NR6N(R6)2、OR6、SR6、10α-二氢青蒿素基、OR7和NR6R7的基团，其中每个R6独立地代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基，且R7代表作为取代基与R5或R1连接的键，所述取代基与R5或R1连同处于之间的基团一起代表任选地取代的杂环基团，
其用于治疗对肿瘤的发展具有肿瘤调制活性的病毒感染。
19.根据权利要求18所述的药物组合物，其中Y代表基团–NR1R2，其中R1和R2以及处于之间的氮原子一起代表非芳香族的杂环基团。
20.根据权利要求19所述的药物组合物，其中所述非芳香族的杂环基团被取代。
21.根据权利要求19所述的药物组合物，其中所述非芳香族的杂环基团选自由哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基和吗啉代磺酰基组成的组。
22.根据权利要求21所述的药物组合物，其中所述化合物由式VIII的结构表示：
23.根据权利要求18所述的药物组合物，其中所述化合物由式X的结构表示：
其中R1代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；
X代表碳原子、硫原子、亚砜基团S＝O或者基团PR3、P-O-R3或P-N(R4)-R3，其中R3和R4各自独立地代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；
Z代表氧原子、硫原子或基团NR5，其中R5代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；且
A代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基、或者选自N(R6)2、NHNH2、NR6NHR6、NR6N(R6)2、OR6、SR6、10α-二氢青蒿素基、OR7和NR6R7的基团，其中每个R6独立地代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基，且R7代表作为取代基与R5或R1连接的键，所述取代基与R5或R1连同处于之间的基团一起代表任选地取代的杂环基团。
24.根据权利要求23所述的药物组合物，其中R1代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；X代表碳原子、硫原子或亚砜基团S＝O；Z代表氧原子或硫原子；而A代表N(R6)2、NHNH2、NR6NHR6或NR6N(R6)2基团，其中每个R6独立地代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基。
25.根据权利要求24所述的药物组合物，其中所述化合物由式IX的结构表示：
26.根据权利要求18所述的药物组合物，其中所述肿瘤是与巨细胞病毒相关的恶性胶质瘤。
27.根据权利要求18所述的药物组合物，还包含药学上可接受的载体或赋形剂。
28.根据权利要求27所述的药物组合物，呈选自由片剂、丸剂、胶囊、小球、颗粒、粉末、锭剂、囊剂、扁囊剂、酏剂、混悬剂、分散体、乳剂、溶液、糖浆剂、气溶胶、软膏剂、软明胶胶囊和硬明胶胶囊、栓剂、无菌注射液和无菌包装粉末组成的组的形式。
29.根据权利要求27所述的药物组合物，适于经由选自由以下组成的组的途径来施用：口服的、直肠的、肌内的、皮下的、静脉内的、腹膜内的、鼻内的、动脉内的、囊泡内的、眼内的、经皮的和局部的。
30.一种治疗病毒感染或抑制病毒复制的方法，包括对受治疗者施用药物组合物的步骤，所述药物组合物包含治疗上有效量的由式I的结构表示的、具有抗病毒活性的化合物：
或其盐或溶剂合物，其中Y代表基团-NR1R2；其中
(i)R1代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基或炔基；且R2代表任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；
(ii)R1和R2以及处于之间的氮原子一起代表杂环基团或衍生自任选地取代的氨基酸酯的氨基；或者
(iii)R1代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；且R2代表-X(＝Z)-A基团，其中
X代表碳原子、硫原子、亚砜基团S＝O、或者基团PR3、P-O-R3或P-N(R4)-R3，其中R3和R4各自独立地代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；
Z代表氧原子、硫原子或基团NR5，其中R5代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；且
A代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基、或者选自N(R6)2、NHNH2、NR6NHR6、NR6N(R6)2、OR6、SR6、10α-二氢青蒿素基、OR7和NR6R7的基团，其中每个R6独立地代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基，且R7代表作为取代基与R5或R1连接的键，所述取代基与R5或R1连同处于之间的基团一起代表任选地取代的杂环基团。
31.根据权利要求30所述的方法，其中Y代表基团-NR1R2，其中R1和R2以及处于之间的氮原子一起代表非芳香族的杂环基团。
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述非芳香族的杂环基团被取代。
33.根据权利要求31所述的方法，其中所述非芳香族的杂环基团选自由哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基和吗啉代磺酰基组成的组。
34.根据权利要求33所述的方法，其中所述化合物由式VIII的结构表示：
35.根据权利要求30所述的方法，其中所述化合物由式X的结构表示：
其中R1代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；
X代表碳原子、硫原子、亚砜基团S＝O或者基团PR3、P-O-R3或P-N(R4)-R3，其中R3和R4各自独立地代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；
Z代表氧原子、硫原子或基团NR5，其中R5代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；并且
A代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基、或者选自N(R6)2、NHNH2、NR6NHR6、NR6N(R6)2、OR6、SR6、10α-二氢青蒿素基、OR7和NR6R7的基团，其中每个R6独立地代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基，且R7代表作为取代基与R5或R1连接的键，所述取代基与R5或R1连同处于之间的基团一起代表任选地取代的杂环基团。
36.根据权利要求35所述的方法，其中R1代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；X代表碳原子、硫原子或亚砜基团S＝O；Z代表氧原子或硫原子；且A代表N(R6)2、NHNH2、NR6NHR6或NR6N(R6)2基团，其中每个R6独立地代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基。
37.根据权利要求36所述的方法，其中所述化合物由式IX的结构表示：
38.根据权利要求30所述的方法，其中所述病毒感染或复制是疱疹病毒感染或复制。
39.根据权利要求38所述的方法，其中所述病毒感染或复制是巨细胞病毒感染或复制。
40.根据权利要求39所述的方法，其中所述病毒感染或复制是人巨细胞病毒感染或复制。
41.根据权利要求30所述的方法，其中所述药物组合物还包含药学上可接受的载体或赋形剂。
42.根据权利要求41所述的方法，其中所述药物组合物呈选自由片剂、丸剂、胶囊、小球、颗粒、粉末、锭剂、囊剂、扁囊剂、酏剂、混悬剂、分散体、乳剂、溶液、糖浆剂、气溶胶、软膏剂、软明胶胶囊和硬明胶胶囊、栓剂、无菌注射液和无菌包装粉末组成的组的形式。
43.根据权利要求30所述的方法，其中施用的所述步骤经由选自由以下组成的组的途径来进行：口服的、直肠的、肌内的、皮下的、静脉内的、腹膜内的、鼻内的、动脉内的、囊泡内的、眼内的、经皮的和局部的。
44.根据权利要求30所述的方法，还包括共同施用所述化合物与至少一种其它抗病毒药物。
45.根据权利要求44所述的方法，其中所述至少一种其它抗病毒药物选自由更昔洛韦、缬更昔洛韦、膦甲酸、西多福韦、阿昔洛韦、和伐昔洛韦组成的组。
46.根据权利要求44所述的方法，其中所述化合物和所述至少一种其它抗病毒药物按选自由以下组成的组的方案进行施用：整个组合的组合物、大体上同时施用单独的个体组分和依据单独的时间表施用单独的个体组分。
47.一种治疗对肿瘤的发展具有肿瘤调制活性的病毒感染的方法，包括对受治疗者施用药物组合物的步骤，所述药物组合物包含治疗上有效量的由式I的结构表示的、具有抗病毒活性的化合物：
或其盐或溶剂合物，其中Y代表基团-NR1R2；其中
(i)R1代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基或炔基；且R2代表任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；
(ii)R1和R2以及处于之间的氮原子一起代表杂环基团或衍生自任选地取代的氨基酸酯的氨基；或者
(iii)R1代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；且R2代表-X(＝Z)-A基团，其中
X代表碳原子、硫原子、亚砜基团S＝O、或者基团PR3、P-O-R3或P-N(R4)-R3，其中R3和R4各自独立地代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；
Z代表氧原子、硫原子或基团NR5，其中R5代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；和
A代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基、或者选自N(R6)2、NHNH2、NR6NHR6、NR6N(R6)2、OR6、SR6、10α-二氢青蒿素基、OR7和NR6R7的基团，其中每个R6独立地代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基，且R7代表作为取代基与R5或R1连接的键，所述取代基与R5或R1连同处于之间的基团一起代表任选地取代的杂环基团。
48.根据权利要求47所述的方法，其中所述肿瘤是与巨细胞病毒相关的恶性胶质瘤。
49.一种具有抗病毒活性的化合物或者其盐或溶剂合物在制备用于治疗病毒感染或抑制病毒复制的药物中的用途，所述化合物由式I的结构表示：
其中Y代表基团–NR1R2；其中
(i)R1代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基或炔基；且R2代表任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；
(ii)R1和R2以及处于之间的氮原子一起代表杂环基团或衍生自任选地取代的氨基酸酯的氨基；或者
(iii)R1代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；且R2代表-X(＝Z)-A基团，其中
X代表碳原子、硫原子、亚砜基团S＝O、或者基团PR3、P-O-R3或P-N(R4)-R3，其中R3和R4各自独立地代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；
Z代表氧原子、硫原子或基团NR5，其中R5代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基；且
A代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基、或者选自N(R6)2、NHNH2、NR6NHR6、NR6N(R6)2、OR6、SR6、10α-二氢青蒿素基、OR7和NR6R7的基团，其中每个R6独立地代表氢原子或任选地取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或芳烷基，且R7代表作为取代基与R5或R1连接的键，所述取代基与R5或R1连同处于之间的基团代表任选地取代的杂环基团。
CN201380032065.8A 2012-04-18 2013-04-17 用于治疗病毒感染的方法和组合物 Pending CN104379587A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261625701P 2012-04-18 2012-04-18
US61/625,701 2012-04-18
PCT/IL2013/050335 WO2013157005A1 (en) 2012-04-18 2013-04-17 Methods and compositions for treating viral infections

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN104379587A true CN104379587A (zh) 2015-02-25

Family

ID=49383023

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201380032065.8A Pending CN104379587A (zh) 2012-04-18 2013-04-17 用于治疗病毒感染的方法和组合物

Country Status (11)

Country Link
US (2) US9616067B2 (zh)
EP (1) EP2838903B1 (zh)
JP (1) JP6335877B2 (zh)
CN (1) CN104379587A (zh)
AU (1) AU2013250714A1 (zh)
BR (1) BR112014026158A2 (zh)
DK (1) DK2838903T3 (zh)
ES (1) ES2650962T3 (zh)
PL (1) PL2838903T3 (zh)
PT (1) PT2838903T (zh)
WO (1) WO2013157005A1 (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3768273A4 (en) * 2018-03-22 2022-02-16 Hadasit Medical Research Services and Development Ltd. SYNERGIC METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF VIRAL INFECTIONS
GB201805665D0 (en) * 2018-04-05 2018-05-23 Univ Nottingham Antiviral Compounds And Methods

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1122806A (zh) * 1994-11-09 1996-05-22 中国科学院上海药物研究所 含苯基和杂环基的青蒿素衍生物及其制备方法
CN1317006A (zh) * 1998-07-14 2001-10-10 拜尔公司 抗寄生虫青蒿素衍生物(内过氧化物)
CN1649874A (zh) * 2002-03-08 2005-08-03 拜耳商业服务有限责任公司 抗寄生虫药青蒿素衍生物(内过氧化物)
US20050282804A1 (en) * 2004-06-08 2005-12-22 Hoelzer Bettina Process for preparing 10alpha-[4'-(S,S-dioxothiomorpholin-1'-yl)]-10-deoxo-10-dihydroartemisinin

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4920147A (en) 1989-03-28 1990-04-24 Mcchesney James D Deoxoartemisinin: new compound and composition for the treatment of malaria
CH692321A5 (de) 1997-11-03 2002-05-15 Mepha Ag Pharmazeutisch wirksame Zusammensetzung, welche eine gegen Malariaparasiten wirksame Substanz enthält.
WO2000004026A1 (en) 1998-07-14 2000-01-27 The Hong Kong University Of Science & Technology Trioxane derivatives
US7842719B2 (en) * 2002-10-31 2010-11-30 Kemin Foods, L.C. Use of endoperoxides for the treatment of infections caused by flaviviridae, including hepatitis C, bovine viral diarrhea and classical swine fever virus
ATE485039T1 (de) 2003-02-12 2010-11-15 Univ Georgetown Verwendung von artemisinin zur behandlung von durch onkogene viren gebildeten tumoren und zur behandlung von viralen infektionen
WO2007040469A2 (en) 2005-09-15 2007-04-12 Kosak Ken M Chloroquine coupled compositions and methods for their synthesis
US20080161324A1 (en) 2006-09-14 2008-07-03 Johansen Lisa M Compositions and methods for treatment of viral diseases
US8883765B2 (en) 2009-12-08 2014-11-11 The John Hopkins University Anti-cytomegalovirus activity of artemisinin-derived dimers

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1122806A (zh) * 1994-11-09 1996-05-22 中国科学院上海药物研究所 含苯基和杂环基的青蒿素衍生物及其制备方法
CN1317006A (zh) * 1998-07-14 2001-10-10 拜尔公司 抗寄生虫青蒿素衍生物(内过氧化物)
CN1649874A (zh) * 2002-03-08 2005-08-03 拜耳商业服务有限责任公司 抗寄生虫药青蒿素衍生物(内过氧化物)
US20050282804A1 (en) * 2004-06-08 2005-12-22 Hoelzer Bettina Process for preparing 10alpha-[4'-(S,S-dioxothiomorpholin-1'-yl)]-10-deoxo-10-dihydroartemisinin

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KRISHNA S等: "Artemisinins:their growing importance in medicine", 《TRENDS IN PHARMACOLOGICAL SCIENCES》 *
SUZANNE J.F. KAPTEIN等: "The anti-malaria drug artesunate inhibits replication of cytomegalovirus in vitro and in vivo", 《ANTIVIRAL RESEARCH》 *
THOMAS EFFERTH等: "Antiviral activity of artesunate towards wild-type, recombinant,and ganciclovir-resistant human cytomegaloviruses", 《JOURNAL OF MOLECULAR MEDICINE》 *

Also Published As

Publication number Publication date
JP2015514748A (ja) 2015-05-21
ES2650962T3 (es) 2018-01-23
DK2838903T3 (en) 2017-12-11
PT2838903T (pt) 2017-12-13
US9616067B2 (en) 2017-04-11
WO2013157005A1 (en) 2013-10-24
PL2838903T3 (pl) 2018-04-30
AU2013250714A1 (en) 2014-11-27
BR112014026158A2 (pt) 2017-06-27
EP2838903A4 (en) 2015-11-04
EP2838903A1 (en) 2015-02-25
US20170071952A1 (en) 2017-03-16
US10111884B2 (en) 2018-10-30
JP6335877B2 (ja) 2018-05-30
US20150072979A1 (en) 2015-03-12
EP2838903B1 (en) 2017-09-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Li et al. Antiviral activity of arbidol hydrochloride against herpes simplex virus I in vitro and in vivo
McDonagh et al. Identification and characterisation of small molecule inhibitors of feline coronavirus replication
Alvarez et al. Cetylpyridinium chloride blocks herpes simplex virus replication in gingival fibroblasts
Melnik et al. Peptide inhibition of human cytomegalovirus infection
AU2021268164A1 (en) Methods and compositions for the treatment of SARS-CoV-2
US11666575B2 (en) Pyrazolo[1,5]pyrimidine-based compounds and methods of their use to treat viral infections
US11730723B2 (en) Compounds and methods for treating viral infections
WO2018049400A1 (en) Use of atr and chk1 inhibitor compounds
US10111884B2 (en) Methods and compositions for treating viral infections
Piperi et al. Management of oral herpes simplex virus infections: The problem of resistance. A narrative review
Dohme et al. Broad-spectrum antiviral diazadispiroalkane core molecules block attachment and cell-to-cell spread of herpesviruses
US11865111B2 (en) Antiviral drugs targeting the N-terminal domain (NTD) of the coronavirus spike receptor binding domain (RBD)
CN113288892B (zh) 聚adp核糖聚合酶抑制剂在抗冠状病毒中的应用
CN113143924A (zh) 硫代咪唑烷酮药物在治疗covid-19疾病中的用途
EP3235511B1 (en) Sulphonamide compounds for use in the treatment of hhv-8-associated diseases
US9526729B2 (en) Medicament for treating peripheral neuropathies
Rybachuk Antiviral chemotherapeutic agents against equine herpesvirus type 1: the mechanism of antiviral effects of porphyrin derivatives
US20230241074A1 (en) Inhibitors of porcine reproductive and respiratory syndrome virus
Cwick Evaluation of conditions and mechanisms of alphaherpesvirus superinfection exclusion
Irribarra THE ENZYME HEME OXYGENASE-1 INHIBITS HERPES SIMPLEX VIRUS REPLICATIVE CYCLE AND PROTECTS AGAINST INFECTIOUS SKIN DISEASE IN A MOUSE MODEL
Pennington Repurposing the human immunodeficiency virus (HIV) integrase inhibitor raltegravir for the treatment of felid alphaherpesvirus 1 (FHV-1) ocular infection
Cohen Exploiting Small Molecule Drugs to Study Cytomegalovirus Infection
Hovingh Viruses and autophagy
EP3223816A1 (en) Methods for treating a cytomegalovirus infection

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20150225