CN104356192B

CN104356192B - 新型甾体类雄激素受体抑制剂、其制备方法及其医药用途

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Publication number: CN104356192B
Application number: CN201410667469.0A
Authority: CN
Inventors: 向华; 劳可静; 何聪慧; 唐郑普; 严明; 肖红; 尤启冬
Original assignee: China Pharmaceutical University
Current assignee: China Pharmaceutical University
Priority date: 2014-11-18
Filing date: 2014-11-18
Publication date: 2017-01-11
Anticipated expiration: 2034-11-18
Also published as: CN104356192A

Abstract

本发明涉及药物化学领域，具体涉及一系列甾体类雄激素受体抑制剂、它们的制备方法以及它们的医药用途，特别是作为预防或治疗雄激素受体相关疾病，如前列腺癌的药物的用途。

Description

新型甾体类雄激素受体抑制剂、其制备方法及其医药用途

技术领域

本发明涉及药物化学领域，具体涉及一系列甾体类雄激素受体抑制剂、它们的制备方法以及它们的医药用途，特别是用于制备治疗雄激素受体相关疾病如前列腺癌的药物。

背景技术

雄激素受体(Androgenic Receptor，AR)属于核受体家族，包含有四个主要区域：N端活性转录控制区域(NTD)，DNA结合区域(DBD)，铰链区及配体结合区(LBD)。AR主要在雄激素靶组织例如前列腺、骨骼肌、肝脏和中枢神经系统(CNS)中表达。在前列腺、肾上腺和附睾中观察到最大表达水平。AR可以由包括睾酮和5α-二氢睾酮(5α-DHT)在内的内源性雄激素的结合来激活。

前列腺癌(Prostate cancer，PCa)是发生于男性前列腺组织中的恶性肿瘤，是前列腺腺泡细胞异常无序生长的结果。前列腺癌的发病率具有明显的地理和种族差异。在欧美等发达国家和地区，它是男性最常见的恶性肿瘤，其死亡率居各种癌症的第二位；在亚洲，其发病率低于西方国家，但近年来呈迅速上升趋势。目前我国的前列腺癌发病率呈逐年上升趋势，且发现时以多呈中晚期。

PCa的发生、发展与雄激素密切相关，内分泌治疗是目前晚期前列腺癌的主要治疗方法。大多数患者起初都对去势(手术或药物)或联合雄激素阻断治疗有效，但经过14～30个月的中位时间后，几乎所有患者病变都将逐渐发展为去势抵抗性前列腺癌(CRPC)。研究显示AR的过度表达与去势抵抗密切相关。约有三分之一的CPRC患者出现AR基因序列的扩增，进而引起AR表达增加。而主要发生在AR配体结合区的突变不仅导致雌激素等非AR活性物质发生激动作用，更严重的是导致比卡鲁胺等雄激素受体抑制剂产生激动活性，从而发生抵抗。最后，有研究发现CPRC患者前列腺中的雄激素水平仍为正常血清雄激素水平的25％。这可能是由于体内雄激素合成相关酶表达的增加进而引起内源性过度合成雄激素。因此，抑制雄激素受体活性和抑制雄激素合成成为是治疗CPRC的重要方法。

发明内容

本发明公开了具有通式一结构的甾体类抗雄激素化合物。经药理实验证明该类化合物具有良好的抗前列腺癌活性。

通式一：

其中X表示-NH-或-NH-CO-；

R₁表示H或C₁-C₄的取代烷基；

R₂表示H，C₁-C₄的取代烷基；

或R₁、R₂相连成四氢吡咯基；

R₃表示-OEt或-COOEt；

本发明的部分化合物结构如下：

I：X＝-NH-CO-

II：X＝-NH-

药理实验及实施例中化合物的代号等同于以上代号所对应的化合物结构。

本发明通式一的化合物可以由以下方法制备：

I-6A～I-6F

其中R为通式一中所述取代氨基；

反应物和反应条件：a)NaOH，无水乙醇；b)无水乙醇，盐酸羟胺，乙酸铵，回流；c)甲醇，硼氢化钠，六水合氯化镍；d)二氯甲烷，EDCI，HOBt；e)二氯甲烷，间氯过氧苯甲酸，碳酸钠，0℃；f)N，N-二甲基甲酰胺，取代胺，碳酸钾；g)甲醇，碳酸钾；h)甲苯，环己酮，异丙醇铝。

II

其中R为通式一中所述取代氨基；

反应物和反应条件：i)N，N-二甲基甲酰胺，碳酸钾；e)二氯甲烷，间氯过氧苯甲酸，碳酸钠，0℃；f)N，N-二甲基甲酰胺，取代胺，碳酸钾；g)甲醇，碳酸钾；h)甲苯，环己酮，异丙醇铝

下面是本发明的部分化合物的药理活性检测

MTT法测药物对前列腺癌细胞株(PC-3，LNCaP)增殖能力的抑制情况

1材料和方法

1.1实验材料

1)细胞系

前列腺癌细胞PC-3(南京凯基生物技术公司)。

2)试剂

筛选化合物由中国药科大学药化教研室提供。

RPMI1640培养基、双抗(Gibco)，优级胎牛血清(天津灏洋，TBD)；3-(4，5)-2噻唑-(2，5)-二甲基溴化四氢唑蓝(MTT)(南京生兴生物公司)；DMSO(Amresco)；其他试剂均为国产分析纯。

3)主要实验仪器

CO₂培养箱(美国Revco)；全自动酶标仪(Labsystems Multiskan Ascent)；40CFL型荧光倒置显微镜(德国Carl Ziess Axiovert)。

1.2溶剂的配置方法

D-Hanks：NaCl 8.0g，KCl 0.4g，Na₂HPO₄·12H₂O 0.13g，KH₂PO₄ 0.06g，NaHCO₃0.35g，加1mL蒸馏水溶解，调pH至7.4，高压灭菌，4℃保存。

0.25％胰酶消化液：胰蛋白酶0.25g，加D-Hanks 100mL溶解，0.22μm滤器过滤，-20℃保存。

RPMI1640培养液：RPMI1640培养基粉13.3g、NaHCO₃ 2.0g于1L蒸馏水中溶解，加入10％双抗，0.22μm滤膜过滤，使用时加入10％胎牛血清，4℃保存。

1.3实验方法

1)细胞培养

用RPMI1640培养基于5％CO₂，37℃孵育箱中培养，约两天更换一次培养基。细胞汇合度达到80％-90％时传代。传代时，倒掉旧培养基，D-Hanks洗两次(血清会影响胰酶的消化效果)，加入少量0.25％胰蛋白酶，铺平瓶底，37℃下消化约3分钟，倒置显微镜下观察到细胞变圆，倒掉胰酶，D-Hanks洗一次，加入新鲜培养基，吹打混匀，分植入新的培养瓶中，继续培养。

冻存细胞时，收获对数生长期细胞(收集细胞前24h换液)，冻存液(5％DMSO，95％RPMI1640)重悬细胞，调细胞密度为5×106-1×107个/mL，分装入无菌冻存管中，每管加1.5mL细胞悬液，做好标记和记录，冻存管在4℃放置20min，-20℃放置20min，在-80℃超低温冰箱过夜后移入液氮容器中。细胞复苏，从液氮容器中取出冻存管，迅速放入盛有40℃水的烧杯中，不时摇动，使之尽快融化，用酒精棉球消毒冻存管表面，吸出细胞悬液，移入离心管中，补加细胞培养液至10mL，继续培养。

细胞计数：取少量细胞混悬液与0.4％台盼蓝溶液等体积混合，用吸管吹打混匀，取少许(15uL-20uL)混合液滴入计数板与盖玻片的上方空隙中，注意不要产生气泡，于200倍低倍显微镜下观察，死细胞可被台盼蓝染色，而活细胞不会，移动计数板至看到计数方格，数出各对角四个大格的未染色细胞数，记录包括压右线和上线的细胞，下线和左线不计，细胞数/mL＝25％格大格子细胞数×104。

2)MTT检测法

收集对数期细胞，用RPMI1640培养液配成单个细胞悬液，调整细胞悬液浓度以每孔5000-10000个细胞接种到96孔板(边缘孔用D-Hanks填充)。培养24小时，吸去旧培养基，加入含药培养基200μL/孔，药物浓度分别为1×10^-4mol/L，1×10^-5mol/L，1×10^-6mol/L，1×10^-7mol/L，每组每个浓度设3个复孔；以含10％DMSO的RPMI1640培养液作为对照组，设12个复孔。培养48h后加入5mg/mL的MTT 20μL/孔，继续培养4h，吸出孔内液体，加入DMSO 150μL/孔，振摇5min使结晶物充分溶解，在酶联免疫检测仪上测定吸光度(A)，测定波长为570nm。抑制率＝[1-(实验组平均OD值/对照组平均OD值)]×100％。

2PC-3细胞株的抑制活性结果及讨论

PC-3细胞MTT实验筛选结果

具体实施方式(所述实施例只是用来说明本发明，而不是用来限定本发明)

部分化合物的制备实例如下：

核磁共振氢谱仪为Bruker AV 500型(TMS为内标，氘代CDCl₃或氘代DMSO为溶剂)；质谱仪为岛津GCMS-QP2010型质谱仪或Mariner质谱仪；实验中柱层析均采用青岛海洋化工有限公司生产的100-200目硅胶做固定相；化学试剂均为市售化学纯或分析纯产品，出特殊说明外，未经处理直接使用。

实施例1

3β-羟基-去氧雄甾-5-烯-17-肟-3-乙酸酯(I-1)的制备

将5g(15.2mmol)醋酸去氢表雄酮溶于200ml甲醇中，加入盐酸羟胺7.875g(0.113mmol)，乙酸钠9.375g(0.113mmol)，回流反应1.5h，TLC显示反应完全。减压蒸馏大部分甲醇后倒入50ml水中，有大量固体析出，抽滤得白色固体5.18g，收率99.2％。ESI-MS m/z：346[M+H]⁺；

实施例2

3β-羟基-17-氨基-去氧雄甾-5-烯-3-乙酸酯(I-2)的制备

将0.25g(0.87mmol)中间体I-1溶于16ml甲醇中，加入0.35g(17.4mmol)六水合氯化镍，室温下缓慢分批加入0.275(8.7mmol)NaBH₄，室温反应1h，TLC显示反应完全，加入10ml 1N HCl猝灭反应。搅拌下用浓氨水调PH至5，有固体析出。加CH₂Cl₂萃取3次，合并有机相，饱和NaHCO₃洗，饱和食盐水洗，无水Na₂SO₄干燥，减压蒸馏至干，得浅黄色固体 0.1840g，收率76.7％。ESI-MS m/z：332[M+H]⁺

实施例3

3β-羟基-17-(4’-乙氧基-2’-甲硫基嘧啶-5’-甲酰胺)-去氧雄甾-5-烯-3-乙酸酯(I-3)的制备

将1.076g(5mmol)4-乙氧基-2-甲硫基嘧啶-5-甲酸溶于25mlCH₂Cl₂中，加入0.75g(5.5mmol)HOBt，1.05g(5.5mmol)EDCI，室温搅拌反应0.5h，反应液由浑浊变澄清。加入1.39g(4.2mmol)中间体I-2，室温反应过夜，TLC显示反应结束。反应液加25ml CH₂Cl₂后用饱和NaHCO₃洗涤三次，饱和食盐水洗，无水Na₂SO₄干燥，减压蒸馏至干，得浅黄色油状物粗品2.3543g。柱层析分离(展开剂石油醚∶乙酸乙酯＝4∶1)，得白色纯品1.869g，收率84.3％。ESI-MS m/z：528[M+H]⁺；

实施例4

3β-羟基-17-(4’-乙氧基-2’-甲基亚磺酰基嘧啶-5’-甲酰胺)-去氧雄甾-5-烯-3-乙酸酯(I-4)的制备

冰浴下将1g(1.93mmol)中间体I-3溶于15ml CH₂Cl₂中，加入0.25g(2.42mmol)Na₂CO₃，m-CPBA0.49g(2.42mmol)，0℃搅拌反应，反应液逐渐浑浊，20min后TLC显示反应完全。加入水50ml搅拌30min，分出有机层。水层加CH₂Cl₂萃取3次，合并有机相，饱和食盐水洗，无水Na₂SO₄干燥，减压蒸馏至干，得淡黄色固体0.838g，收率78.2％。ESI-MS m/z：542[M-H]⁺；

实施例5

3β-羟基-17-(4’-乙氧基-2’-二甲胺基嘧啶-5’-甲酰胺)-去氧雄甾-5-烯-3-乙酸酯(I-5A)的制备

0.56g(1.03mmol)中间体I-4溶于5mlDMF中，加入二甲胺盐酸盐0.225g(2.76mmol)，K₂CO₃0.38g(2.76mmol)，室温反应过夜。TLC显示反应完全。反应液倒入25ml水中水析，抽滤得白色固体0.4346g，收率80.41％。ESI-MS m/z：525[M+H]⁺；

实施例6

3β-羟基-17-(4’-乙氧基-2’-二甲胺基-嘧啶-5’-甲酰胺)-去氧雄甾-5-烯(I-6A)的制备

0.4346g(0.83mmol)I-5A溶于5ml甲醇中，加入0.115g(0.83mmol)K₂CO₃，室温搅拌过夜，TLC显示反应完全。反应液倒入25ml水中水析，抽滤得白色粗品。柱层析分离(石油醚∶乙酸乙酯＝2∶3)，得白色纯品0.3162g，收率79.11％。¹H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ：8.6(s，1H，pyrimidine-H)，7.4(d，1H，J＝8.22Hz，17-NH)，5.2(s，1H，6-H)，4.6(s，1H，3-OH)，3.9(t，2H，J＝8.55，-OCH ₂CH₃)，3.1(s，6H，-N(CH₃)₂)，0.9(s，3H，19-CH₃)，0.7(s，3H，18-CH₃)ppm； ESI-MS m/z：483[M+H]⁺；

实施例7

3β-羟基-17-(4’-乙氧基-2’-甲胺基-嘧啶-5’-甲酰胺)-去氧雄甾-5-烯(I-6B)的制备

具体操作参照化合物(I-6A)的合成，投入化合物(I-4)0.43g，得白色纯品0.2746g，收率74.15％。¹H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ：8.5(s，1H，pyrimidine-H)，7.4(d，1H，J＝8.22Hz，17-NH)，5.2(s，1H，6-H)，4.5(s，1H，3-OH)，3.9(t，2H，J＝8.55，-OCH ₂CH₃)，2.5(s，3H，-NHCH ₃)，0.9(s，3H，19-CH₃)，0.7(s，3H，18-CH₃)ppm；ESI-MS m/z：469[M+H]⁺；

实施例8

3β-羟基-17-(4’-乙氧基-2’-二乙胺基嘧啶-5’-甲酰胺)-去氧雄甾-5-烯(I-6C)的制备

具体操作参照化合物(I-6A)的合成，投入化合物(I-4)0.43g，得白色纯品0.2667g，收率66.04％。¹H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ：8.6(s，1H，pyrimidine-H)，7.3(d，1H，J＝8.22Hz，17-NH)，5.2(s，1H，6-H)，4.5(s，1H，3-OH)，3.9(t，2H，J＝8.55，-OCH ₂CH₃)，3.6(m，4H，-N(CH ₂CH₃)₂)，0.9(s，3H，19-CH₃)，0.7(s，3H，18-CH₃)ppm；ESI-MS m/z：510[M+H]⁺；

实施例9

3β-羟基-17-(4’-乙氧基-2’-乙胺基嘧啶-5’-甲酰胺)-去氧雄甾-5-烯(I-6D)的制备

具体操作参照化合物(I-6A)的合成，投入化合物(I-4)0.43g，得白色纯品0.2487g，收率65.16％。¹H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ：8.5(s，1H，pyrimidine-H)，7.4(d，1H，J＝8.22Hz，17-NH)，5.2(s，1H，6-H)，4.6(s，1H，3-OH)，3.9(t，2H，J＝8.55，-OCH ₂CH₃)，3.1(t，2H，-NHCH ₂CH₃)，0.9(s，3H，19-CH₃)，0.7(s，3H，18-CH₃)ppm；ESI-MS m/z：483[M+H]⁺；

实施例10

3β-羟基-17-(4’-乙氧基-2’-(吡咯烷-1-基)嘧啶-5’-甲酰胺)-去氧雄甾-5-烯(I-6E)的制备

具体操作参照化合物(I-6A)的合成，投入化合物(I-4)0.43g，得白色纯品0.2933g，收率71.42％。¹H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ：8.6(s，1H，pyrimidine-H)，7.3(d，1H，J＝8.22Hz，17-NH)，5.2(s，1H，6-H)，4.6(s，1H，3-OH)，3.9(t，2H，J＝8.55，-OCH ₂CH₃)，3.5(t，3H，CH ₂-N-CH ₂)，0.9(s，3H，19-CH₃)，0.7(s，3H，18-CH₃)ppm；ESI-MS m/z：509[M+H]⁺；

实施例11

3β-羟基-17-(4’-乙氧基-2’-正丁胺基嘧啶-5’-甲酰胺)-去氧雄甾-5-烯(I-6F)的制备

具体操作参照化合物(I-6A)的合成，投入化合物(I-4)0.43g，得白色纯品0.2189g，收率53.32％。¹H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ：8.6(s，1H，pyrimidine-H)，7.4(d，1H，J＝8.22Hz，17-NH)，5.2(s，1H，6-H)，4.5(s，1H，3-OH)，3.5(t，2H，＝8.55，-OCH ₂CH₃)，3.1(s，3H， -NHCH ₂CH₂)，0.9(s，3H，19-CH₃)，0.7(s，3H，18-CH₃)ppm；ESI-MS m/z：511[M+H]⁺；

实施例12

17-((2’-二甲胺基-4’-乙氧基)嘧啶-5’-甲酰氨)基-4-雄甾烯-3-酮(I-7A)的制备

N₂保护下将80mgI-6A溶于2ml无水甲苯中，加入无水环己酮20μl，异丙醇铝24mg，升温至回流。9h后滤去不溶物，加水带干溶剂。粗品用大板分离(CH₂Cl₂∶EA＝1∶1)，并回收原料。得淡黄色固体45mg，收率56.25％。m.p.：104-107℃；IR(KBr)v：3416，2936，1655，1596，1526，1430，1406，1385，1260，1222，1021，799cm^-1；¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ：8.9(s，1H，pyrimidine-H)，7.4(d，1H，J＝8.22Hz，17-NH)，5.7(s，1H，6-H)，4.5(m，2H，-OCH₂CH₃)，4.0(dd，2H，17-H)，3.1(s，6H，-N(CH₃)₂)，1.0(s，3H，19-CH₃)，0.7(s，3H，18-CH₃)ppm；ESI-MS m/z：481[M+H]⁺；HRMS for C₂₈H₄₀N₄O₃+H calcd 481.3173found 481.3188；

实施例13

17-((2’-甲胺基-4’-乙氧基)嘧啶-5’-甲酰氨)基-4-雄甾烯-3β-酮(I-7B)的制备

具体操作参照化合物(I-7A)的合成，投入化合物(I-7B)80mg，得淡黄色纯品55mg，收率68.75％。m.p.：135-137℃；IR(KBr)v：3414，1638，1595，1527，1401，1260，702cm^-1；¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ：8.9(s，1H，pyrimidine-H)，7.4(d，1H，J＝8.22Hz，17-NH)，5.7(s，1H，6-H)，4.5(m，2H，-OCH₂CH₃)，4.0(dd，2H，17-H)，3.0(s，3H，-NHCH₃)，1.0(s，3H，19-CH₃)，0.7(s，3H，18-CH₃)ppm；ESI-MS m/z：467[M+H]⁺；HRMS for C₂₇H₄₈N₄O₃+H calcd467.3017found526.3763；

实施例14

17-((2’-二乙胺基-4’-乙氧基)嘧啶-5’-甲酰氨)基-4-雄甾烯-3β-酮(I-7C)的制备

具体操作参照化合物(I-7A)的合成，投入化合物(I-7C)80mg，得淡黄色纯品52mg，收率65.00％。m.p.：120-124℃；IR(KBr)v：3414，2935，1655，1595，1522，1417，1384，1254cm^-1； ¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ：8.9(s，1H，pyrimidine-H)，7.4(d，1H，J＝8.22Hz，17-NH)，5.7(s，1H，6-H)，4.5(m，2H，-OCH₂CH₃)，4.0(dd，2H，17-H)，3.5(s，4H，-N(CH ₂CH₃)₂)，1.0(s，3H，19-CH₃)，0.7(s，3H，18-CH₃)ppm；ESI-MS m/z：509[M+H]⁺；HRMS for C₃₀H₄₄N₄O₃+Hcalcd509.3486found 509.3502；

实施例15

17-((2’-乙胺基-4’-乙氧基)嘧啶-5’-甲酰氨)基-4-雄甾烯-3β-酮(I-7D)的制备

具体操作参照化合物(I-7A)的合成，投入化合物(I-6D)80mg，得淡黄色纯品47mg，收率58.75％。m.p.：97-99℃；IR(KBr)v：3416，2933，1655，1596，1521，1425，1252cm^-1；¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ：8.9(s，1H，pyrimidine-H)，7.4(d，1H，J＝8.22Hz，17-NH)，5.7(s，1H， 6-H)，4.5(m，2H，-OCH₂CH₃)，4.0(dd，2H，17-H)，3.6(s，2H，-NHCH ₂CH₃)，1.0(s，3H，19-CH₃)，0.7(s，3H，18-CH₃)ppm；ESI-MS m/z：467[M+H]⁺；HRMS for C₂₇H₄₈N₄O₃+H calcd 467.3017found526.3763；

实施例16

17-((2’-(吡咯烷-1-基)-4’-乙氧基)嘧啶-5’-甲酰氨)基-4-雄甾烯-3β-酮(I-7E)的制备

具体操作参照化合物(I-7A)的合成，投入化合物(I-6E)50mg，得淡黄色纯品27mg，收率53.92％。m.p.：119-123℃；IR(KBr)v：3415，2962，1654，1594，1518，1423，1260，1096，1021，800cm^-1；¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ：8.9(s，1H，pyrimidine-H)，7.4(d，1H，J＝8.22Hz，17-NH)，5.7(s，1H，6-H)，4.5(m，2H，-OCH₂CH₃)，4.0(dd，2H，17-H)，3.6(t，4H，CH ₂-N-CH ₂)，1.0(s，3H，19-CH₃)，0.7(s，3H，18-CH₃)ppm；ESI-MS m/z：507[M+H]⁺；HRMS for C₃₀H₄₃N₄O₃+Hcalcd 507.3330found 507.3349；

实施例17

17-((2’-正丁胺基-4’-乙氧基)嘧啶-5’-甲酰氨)基-4-雄甾烯-3β-酮(I-7F)的制备

具体操作参照化合物(I-7A)的合成，投入化合物(I-6F)30mg，得淡黄色纯品22mg，收率73.33％。m.p.：94-96℃；IR(KBr)v：3415，2933，2870，1654，1595，1522，1416，1384，1350，1252，1121，1023cm^-1；¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ：8.9(s，1H，pyrimidine-H)，7.4(d，1H，J＝8.22Hz，17-NH)，5.7(s，1H，6-H)，4.5(m，2H，-OCH₂CH₃)，4.0(dd，2H，17-H)，3.6(q，2H，NHCH ₂)，1.0(s，3H，19-CH₃)，0.7(s，3H，18-CH₃)ppm；ESI-MS m/z：509[M+H]⁺；HRMS forC₃₃H₄₅N₄O₃+H calcd 509.3502found 509.3486；

实施例18

N-(5’-乙氧甲酰基-2’-甲硫基嘧啶-4-基)-3β-羟基-17-氨基-去氧雄甾-5-烯-3-乙酸酯(II-3)的制备

将3g(9mmol)中间体I-2溶于60ml DMF中，加入4-氯-2-甲硫基嘧啶-5-甲酸乙酯1.64g(7mmol)，1.24g(9mmol)K₂CO₃，室温搅拌反应12h，TLC显示反应基本完全。反应液倒入300ml水中水析，抽滤得粗品。柱层析纯化(石油醚∶乙酸乙酯＝6∶1)，得白色纯品2.8041g收率58.7％。ESI-MS m/z：528[M+H]⁺；

实施例19

N-(5’-乙氧甲酰基-2’-甲基亚磺酰基基嘧啶-4-基)-3β-羟基-17-氨基-去氧雄甾-5-烯-3-乙酸酯(II-4)的制备

冰浴下将2.8g(5.3lmmol)中间体II-3溶于42ml CH₂Cl₂中，加入Na₂CO₃0.7g(6.64mmol)，m-CPBA1.14g(6.64mmol)，搅拌反应，反应液逐渐浑浊，20min后TLC显示反应完全。加入水50ml搅拌30min，分出有机层。水层加CH₂Cl₂萃取3次，合并有机相，饱和食盐水洗，无水Na₂SO₄干燥，减压蒸馏至干，得淡黄色固体2.28g，收率86.4％。ESI-MS m/z：542[M-H]⁺；

实施例20

N-(5’-乙氧甲酰基-2’-二甲胺基嘧啶-4-基)-3β-羟基-17-氨基-去氧雄甾-5-烯(II-6A)的制备

具体操作参照化合物(I-6A)的合成，投入化合物(II-4)0.43g，得白色纯品0.3249g，收率85.12％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ：8.6(s，1H，pyrimidine-H)，5.3(s，1H，6-H)，4.1～4.3(m，3H，-COOCH ₂CH₃，3-H)，3.8(s，1H，-NH)，3.2(s，6H，-N(CH ₃)₂)，0.9(s，3H，19-CH₃)，0.8(s，3H，18-CH₃)ppm；ESI-MS m/z：483[M+H]⁺；

实施例21

N-(5’-乙氧甲酰基-2’-甲胺基-4-基)-3β-羟基-17-氨基-去氧雄甾-5-烯-3-乙酸酯(II-6B)的制备

具体操作参照化合物(I-6A)的合成，投入化合物(II-4)0.47g，得白色纯品0.2719g，收率73.37％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ：8.5(s，1H，pyrimidine-H)，5.4(s，1H，6-H)，4.1～4.3(m，3H，-COOCH ₂CH₃，3-H)，3.0(s，3H，-NHCH ₃)，0.9(s，3H，19-CH₃)，0.8(s，3H，18-CH₃)ppm；ESI-MS m/z：469[M+H]⁺；

实施例22

N-(5’-乙氧甲酰基-2’-二乙胺基嘧啶-4-基)-3β-羟基-17-氨基-去氧雄甾-5-烯-3-乙酸酯(II-6C)的制备

具体操作参照化合物(I-6A)的合成，投入化合物(II-4)0.47g，得白色纯品0.2945g，收率72.94％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ：8.5(s，1H，pyrimidine-H)，5.4(s，1H，6-H)，4.2～4.3(m，3H，-COOCH ₂CH₃，3-H)，3.8(s，1H，-NH)，3.0(t，4H，-N(CH ₂CH₃)₂)，0.9(s，3H，19-CH₃)，0.8(s，3H，18-CH₃)ppm；ESI-MS m/z：511[M+H]⁺；

实施例23

N-(5’-乙氧甲酰基-2’-乙胺基嘧啶-4-基)-3β-羟基-17-氨基-去氧雄甾-5-烯-3-乙酸酯(II-6D)的制备

具体操作参照化合物(I-6A)的合成，投入化合物(II-4)0.5g，得白色纯品0.3046g，收率68.62％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ：8.5(s，1H，pyrimidine-H)，5.4(s，1H，6-H)，4.2～4.3(m，3H，-COOCH ₂CH₃，3-H)，3.8(s，1H，-NH)，3.4(t，2H，-NHCH ₂CH₃)，0.9(s，3H，19-CH₃)，0.8(s，3H，18-CH₃)ppm；ESI-MS m/z：483[M+H]⁺；

实施例24

N-(5’-乙氧甲酰基-2’-(吡咯烷-1-基)嘧啶-4-基)-3β-羟基-17-氨基-去氧雄甾-5-烯(II-6E) 的制备

具体操作参照化合物(I-6A)的合成，投入化合物(II-4)0.5g，得白色纯品0.2976g，收率62.57％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ：8.6(s，1H，pyrimidine-H)，5.4(s，1H，6-H)，4.2～4.3(m，3H，-COOCH ₂CH₃，3-H)，3.5(m，2H，-CH ₂NHCH ₂)，0.9(s，3H，19-CH₃)，0.8(s，3H，18-CH₃)ppm；ESI-MS m/z：509[M+H]⁺；

实施例25

N-(5’-乙氧甲酰基-2’-正丁胺基嘧啶-4-基)-3β-羟基-17-氨基-去氧雄甾-5-烯(II-6F)的制备

具体操作参照化合物(I-6A)的合成，投入化合物(II-4)0.5g，得白色纯品0.2976g，收率62.57％。¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ：8.5(s，1H，pyrimidine-H)，5.4(s，1H，6-H)，4.2～4.3(m，3H，-COOCH ₂CH₃，3-H)，3.5(t，2H，-NHCH ₂CH₃)，0.9(s，3H，19-CH₃)，0.8(s，3H，18-CH₃)ppm；ESI-MS m/z：511[M+H]⁺；

实施例26

N-(2’-正丁氨基-5’-乙氧甲酰基嘧啶-4-基)-17-氨基-5-雄甾烯-3β-醇(II-7A)的制备

具体操作参照化合物(I-7A)的合成，投入化合物(II-4)0.5g，得白色纯品0.43g，收率62.57％。m.p.：141-145℃；IR(KBr)v：3423，2964，1671，1599，1262，1101，1021，803cm^-1；¹HNMR(CDCl₃，300MHz)δ：8.6(s，1H，pyrimidine-H)，5.8(s，1H，4-H)，4.2～4.3(m，3H，-COOCH₂CH₃，3-H)，3.2(s，6H，-N(CH ₃)₂)，0.9(s，3H，19-CH₃)，0.8(s，3H，18-CH₃)ppm；ESI-MSm/z：481[M+H]⁺；HRMS for C₂₈H₄₁N₄O₃+H calcd 481.3173found 481.3187；

实施例27

N-(2’-正丁氨基-5’-乙氧甲酰基嘧啶-4-基)-17-氨基-5-雄甾烯-3β-醇(II-7B)的制备

具体操作参照化合物(I-7A)的合成，投入化合物(II-4)0.5g，得白色纯品0.43g，收率62.57％。m.p.：95-98℃；IR(KBr)v：3414，2934，1678，1599，1552，1437，1400，1246，1121，805cm^-1；¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ：8.6(s，1H，pyrimidine-H)，5.8(s，1H，4-H)，4.2～4.3(m，3H，-COOCH₂CH₃，3-H)，3.5(m，1H，17-H)，3.2(s，3H，-NHCH ₃)，0.9(s，3H，19-CH₃)，0.8(s，3H，18-CH₃)ppm；ESI-MS m/z：481[M+H]⁺；

实施例28

N-(2’-正丁氨基-5’-乙氧甲酰基嘧啶-4·基)·17-氨基-5-雄甾烯-3β-醇(II-7C)的制备

具体操作参照化合物(I-7A)的合成，投入化合物(II-4)0.5g，得白色纯品0.43g，收率62.57％。m.p.：200-205℃；IR(KBr)v：3415，2938，1675，1637，1617，1600，1578，1533，1432，1249，1102cm^-1；¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ：8.6(s，1H，pyrimidine-H)，5.8(s，1H，4-H)，4.2～4.3(m，3H，-COOCH₂CH₃，3-H)，3.8(s，1H，17-H)，3.6(s，4H，-N(CH ₂CH₃)₂)，0.9(s，3H，19-CH₃)， 0.8(s，3H，18-CH₃)ppm；ESI-MS m/z：509[M+H]⁺；HRMS for C₃₀H₄₄N₄O₃+H calcd509.3486found 509.3502；

实施例29

N-(2’-正丁氨基-5’-乙氧甲酰基嘧啶-4-基)-17-氨基-5-雄甾烯-3β-醇(II-7D)的制备

具体操作参照化合物(I-7A)的合成，投入化合物(II-4)0.5g，得白色纯品0.43g，收率62.57％。m.p.：131-135℃；IR(KBr)v：3422，2921，1670，1596，1568，1533，1458，1420，1262，1122，1109cm^-1；¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ：8.6(s，1H，pyrimidine-H)，5.8(s，1H，4-H)，4.2～4.3(m，2H，-COOCH₂CH₃，3-H)，3.2(s，3H，17-H，-NHCH₂CH₃)，0.9(s，3H，19-CH₃)，0.8(s，3H，18-CH₃)ppm；ESI-MS m/z：481[M+H]⁺；HRMS for C₃₀H₄₂N₄O₃+H calcd 507，3330found507.3343；

实施例30

N-(2’-正丁氨基-5’-乙氧甲酰基嘧啶-4-基)-17-氨基-5-雄甾烯-3β-醇(II-7E)的制备

具体操作参照化合物(I-7A)的合成，投入化合物(II-4)0.5g，得白色纯品0.43g，收率62.57％。m.p.：102-106℃；IR(KBr)v：3415，2934，1676，1598，1546，1491，1424，1241，1147，1121，1097，806cm^-1；¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ：8.5(s，1H，pyrimidine-H)，5.8(s，1H，4-H)，4.2～4.3(m，3H，-COOCH₂CH₃，17-H)，3.5(m，4H，CH ₂-N-CH ₂)，0.9(s，3H，19-CH₃)，0.8(s，3H，18-CH₃)ppm；ESI-MS m/z：481[M+H]⁺；HRMS for C₂₈H₄₁N₄O₃+H calcd481.3173found481.3187；

实施例31

N-(2’-正丁氨基-5’-乙氧甲酰基嘧啶-4-基)-17-氨基-5-雄甾烯-3β-醇(II-7G)的制备

具体操作参照化合物(I-7A)的合成，投入化合物(II-4)0.5g，得白色纯品0.43g，收率62.57％。m.p.：52-56℃；IR(KBr)v：3335，2959，1675，1598，1547，1422，1367，1303，1240，1115，1090，806cm^-1；¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ：8.5(s，1H，pyrimidine-H)，5.8(s，1H，4-H)，4.2～4.3(m，3H，-COOCH₂CH₃，17-H)，3.5(m，2H，-NHCH ₂CH₂)，2.4(s，6H，N(CH₃)₂)，0.9(s，3H，19-CH₃)，0.8(s，3H，18-CH₃)ppm；ESI-MS m/z：509[M+H]⁺；HRMS for C₃₀H₄₄N₄O₃+Hcalcd509.3486found 509.3513；

实施例32

N-(2’-正丁氨基-5’-乙氧甲酰基嘧啶-4-基)-17-氨基-5-雄甾烯-3β-醇(II-7J)的制备

具体操作参照化合物(I-7A)的合成，投入化合物(II-4)0.5g，得白色纯品0.43g，收率62.57％。m.p.：84-87℃；IR(KBr)v：3414，2963，2360，1676，1598，1560，1541，1420，1261，1239，1121，1103，1021，805cm^-1；¹H NMR(CDCl₃，300MHz)δ：8.5(s，1H，pyrimidine-H)，5.8(s， 1H，4-H)，4.2～4.3(m，3H，-COOCH₂CH₃，17-H)，3.5(m，2H，N-CH ₂)，2.5(m，2H，N-CH ₂)，2.3(s，6H，N(CH₃)₂)，0.9(s，3H，19-CH₃)，0.8(s，3H，18-CH₃)ppm；ESI-MS m/z：481[M+H]⁺；HRMS for C₃₀H₄₅N₅O₃+H calcd 524，3595found 524.3616；

实施例33

2-甲硫基-4-氯-嘧啶-5-甲酸(2’)的制备

将2g(6.6mmol)原料1’溶于10ml无水乙醇中，加入NaOH固体0.68g，水10ml，升温至回流。1h后TLC显示反应完全。旋干乙醇，用6NHCl调PH至3，有大量固体析出。抽滤可得白色晶体1.69g，收率91.8％。ESI-MS m/z：214[M+H]⁺。

Claims

1.下列通式的化合物或者其药学上可接受的立体异构体：

其中X表示-NH-或-NH-CO-；

R1表示H或乙基；

R2表示H，乙基，正丁基或异丁基；

或R1、R2相连成四氢吡咯基；

R₃表示-OEt或-COOEt。

2.权利要求1中的化合物或其药学上可接受的盐，其中X表示-NH-CO-。

3.一种药物组合物，其中含有权利要求1-2中任一项的化合物或其药学上可接受的盐与药学上可接受的载体。

4.权利要求1-3中任一化合物或其药学上可接受的盐用于制备治疗前列腺癌的药物的用途。