CN104352484B - 一种原发性肝癌小鼠模型的建立方法 - Google Patents
一种原发性肝癌小鼠模型的建立方法 Download PDFInfo
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Abstract
一种原发性肝癌小鼠模型的建立方法,涉及一种肝癌小鼠模型的建立方法。本发明是要解决现有的原发性肝癌小鼠模型的建立方法存在建立时间长、饲养成本高,并易出现饲养中死亡的问题。方法:一、选用4周龄的ICR雄性鼠,观察饲养2周;二、饲养2周后,测定每只鼠的体重和每天饮水量;三、用体积浓度为75%的酒精棉对鼠腹部进行消毒,腹腔注射DEN水溶液,12小时后开始让鼠饮用含体积百分浓度0.15%DEN的水,饲喂4周;四、4周后,腹腔再次注射DEN水溶液,然后进行饲养,饲养期间自由饮水,水中含DEN;五、从第一次注射DEN水溶液开始计算,饲养至第10周,即得到原发性肝癌小鼠模型。用于建立原位肝癌动物模型。
Description
技术领域
本发明涉及一种肝癌小鼠模型的建立方法。
背景技术
原发性肝癌是我国发病率较高的恶性肿瘤之一,近几年来,肝癌的发病率呈上升状态,已占我国恶性肿瘤的第2位。肝癌的发生发展过程是多因素作用的结果,目前肝癌的致病机理尚未研究清楚,没有安全有效的治疗手段,因此深入探讨发病机理是治疗肝癌的重要基础。实验动物癌症模型是人类癌症研究中建立的能够模拟人类癌症表现的模型。因此利用鼠模型研究肝癌的发病原因和致病机理,是对肝癌研究的重要手段。
原位肝癌动物模型的建立方法大致分为四类,即自发性肝癌模型、诱发性肝癌模型、移植性肝癌模型和转基因动物肝癌模型,模型动物最常选用的是鼠。自发性肝癌模型在发生学上与人相似,但发生率较低且不稳定,发生时间较难预测;转基因动物肝癌模型制作技术要求高,价格昂贵,操作复杂,因此开展较少。原位移植性肝癌模型操作繁琐,成功率依赖于技术的成熟性,因此不易获得。诱发性肝癌模型操作简单、成本低、稳定性强,并且简单易得是生物医药研究中最常用的模型建立方法。
目前常用的方法有(1)DEN水溶液按10mg/kg体重用量0.25%的浓度灌胃每周一次,其余时间按0.025%的浓度饮水,约4个月可诱导肝癌的发生,5~6个月80%以上可发生癌症;亦可用浓度为0.05%的DEN饮水8个月诱发肝癌。(2)Solt-Farber诱癌模型的方法:第1d根据大鼠体重换算按200mg/kg一次性腹腔注射DEN,2周后开始饲喂2-乙酰氨基芴(2-acetylaminofluorene,2-AAF)饲料含有0.02%的DEN2周,在第3周末做2/3肝切除术,第4周末恢复标准饲料喂养,在第4周显微镜下观察可见肝内出现变异肝细胞灶。(3)选用体重200g的雄性Wistar大鼠,根据体重换算200mg/kgDEN腹腔注射,然后给予浓度为0.05%的DEN饮水,12周诱癌成功。(4)选用体重200g的雄性Wistar大鼠,通过应用DEN自由饮水,16周诱癌成功。现有的方法虽能制备出鼠的原发性肝癌模型,但鼠的饲养时间长,饲养成本高,并且易出现饲养中死亡的现象,不适用于简单快速制备模型的需要。
发明内容
本发明是要解决现有的原发性肝癌小鼠模型的建立方法存在建立时间长、饲养成本高,并易出现饲养中死亡的问题,提供一种原发性肝癌小鼠模型的建立方法。
本发明原发性肝癌小鼠模型的建立方法,按以下步骤进行:
一、选用4周龄的ICR雄性鼠,观察饲养2周;
二、饲养2周后,测定每只鼠的体重和每天饮水量;
三、用体积浓度为75%的酒精棉对鼠腹部进行消毒,腹腔注射DEN水溶液,12小时后开始让鼠饮用含体积百分浓度0.15%DEN的水,饲喂4周;
四、4周后,腹腔再次注射DEN水溶液,然后进行饲养,饲养期间自由饮水,水中含体积百分浓度0.15%的DEN;
五、从第一次注射DEN水溶液开始计算,饲养至第10周,即得到原发性肝癌小鼠模型。
本发明的有益效果:用此方法建立的肝癌模型具有以下特点:(1)肝癌的发生过程与人类原发性肝癌的发生相似;(2)生物学特性稳定;(3)肝癌模型的建立周期短,发展快;(4)操作简单、快捷,操作所致死亡率低,为0,动物模型稳定性、重复性好、成功率高,可达到100%;(5)模型动物饲养周期短,廉价易于饲养。因此本发明建立的模型是一种可以用于研究原发性肝癌发生发展机制和抗肝癌药物研究的动物模型。
附图说明
图1为正常肝脏HE染色照片;图2为注射DEN水溶液1-4周肝脏HE染色照片;图3为注射DEN水溶液5-6周肝脏HE染色照片;图4为注射DEN水溶液7-8周肝脏HE染色照片;图5为注射DEN水溶液9-10周肝脏HE染色照片。
具体实施方式
本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式,还包括各具体实施方式间的任意组合。
具体实施方式一:本实施方式原发性肝癌小鼠模型的建立方法,按以下步骤进行:
一、选用4周龄的ICR雄性鼠,观察饲养2周;
二、饲养2周后,测定每只鼠的体重和每天饮水量;
三、用体积浓度为75%的酒精棉对鼠腹部进行消毒,腹腔注射DEN水溶液,12小时后开始让鼠饮用含体积百分浓度0.15%DEN的水,饲喂4周;
四、4周后,腹腔再次注射DEN水溶液,然后进行饲养,饲养期间自由饮水,水中含体积百分浓度0.15%的DEN;
五、从第一次注射DEN水溶液开始计算,饲养至第10周,即得到原发性肝癌小鼠模型。
具体实施方式二:本实施方式与具体实施方式一不同的是:步骤三中每只小鼠的DEN注射剂量为每kg体重的小鼠注射200mg的DEN。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式三:本实施方式与具体实施方式一不同的是:步骤四中每只小鼠的DEN注射剂量为每kg体重的小鼠注射200mg的DEN。其它与具体实施方式一相同。
实验1:
本实验原发性肝癌小鼠模型的建立方法,按以下步骤进行:
一、选用60只4周龄的ICR雄性鼠,观察饲养2周;其中分为实验组53只和对照组7只;
二、饲养2周后,测定每只鼠的体重,并取体重的平均值,为30±2g,每只鼠的每天饮水量约为5mL;
三、将7μLDEN溶液加水稀释到1mL,得到DEN水溶液;
DEN溶液由东京化成工业株式会社生产,商品名称是二乙基亚硝胺。DEN溶液的纯度为99%(体积百分比浓度)。
四、用体积百分浓度为75%的酒精棉对鼠腹部进行消毒,实验组每只鼠腹腔注射1mLDEN水溶液,12小时后开始让实验组的鼠饮用含体积百分浓度0.15%DEN的水,饲喂4周;对照组的鼠饮用纯水;
五、4周后,实验组每只鼠腹腔再次注射1mLDEN水溶液,然后进行饲养,饲养期间自由饮水,水中含体积百分浓度0.15%的DEN;对照组的鼠饮用纯水;
六、从第一次注射DEN水溶液开始计算,每周断颈处死2只小鼠,取肝脏,直到第10周。
将肝脏在福尔马林溶液中固定保存后制作病理切片,进行HE染色观察。
轻度变性坏死(1-4周):肝组织结构基本正常,可见少数肝细胞水变性、坏死,并伴有轻度的脂肪变性,肝窦扩张,汇管区周围有轻度炎细胞浸润。肝脏HE染色照片如图2所示。
重度变性坏死(5-6周):肝组织结构基本正常,肝细胞水变性严重,并有不同程度的脂肪变性。肝窦扩张充血加重。炎细胞浸润范围扩大,由汇管区向周围组织浸润,并逐渐出现纤维组织增生。肝脏HE染色照片如图3所示。
结节性增生-肝硬变(7-8周):肝小叶结构被破坏,出现大小不等的假小叶结构,结节内肝细胞异型增生明显,病理性核分裂较多,并伴有不同程度的胆管上皮增生。肝脏HE染色照片如图4所示。
肝癌(9-10周):主要是肝细胞癌,同时伴有胆管细胞癌。表现为细胞异型,核圆形或卵圆形,核内染色质凝集,细胞排列为索状、腺状,向周围组织浸润。肝脏HE染色照片如图5所示。
对照组:细胞间界限清晰,肝细胞大小基本一致,胞质均匀,核仁清晰。正常肝脏HE染色照片如图1所示。
本实验选择60只4周龄的ICR雄性鼠,其中7只作为对照组,实验过程中非病理性死亡的小鼠为8只,病理性死亡的为5只,除去对照、病理性死亡和非病理性死亡的小鼠,成功建立40只原发性肝癌小鼠,此方法建立的模型小鼠肝癌发生率为100%。操作致死率为0。
其中所述非病理性死亡是指被同伴咬死;病理性死亡是指第一次注射DEN水溶液4周后由于个体体质原因对疾病不耐受而死亡。
Claims (1)
1.一种原发性肝癌小鼠模型的建立方法,其特征在于该方法按以下步骤进行:
一、选用4周龄的ICR雄性鼠,观察饲养2周;
二、饲养2周后,测定每只鼠的体重和每天饮水量;
三、用体积浓度为75%的酒精棉对鼠腹部进行消毒,腹腔注射DEN水溶液,12小时后开始让鼠饮用含体积百分浓度0.15%DEN的水,饲喂4周;
四、4周后,腹腔再次注射DEN水溶液,然后进行饲养,饲养期间自由饮水,水中含体积百分浓度0.15%的DEN;
五、从第一次注射DEN水溶液开始计算,饲养至第10周,即得到原发性肝癌小鼠模型;
步骤三中每只小鼠的DEN注射剂量为每kg体重的小鼠注射200mg的DEN;
步骤四中每只小鼠的DEN注射剂量为每kg体重的小鼠注射200mg的DEN。
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