CN104345152A - MUC15与p-AKT在制备肝癌预后评估试剂盒中的应用 - Google Patents
MUC15与p-AKT在制备肝癌预后评估试剂盒中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104345152A CN104345152A CN201310345222.2A CN201310345222A CN104345152A CN 104345152 A CN104345152 A CN 104345152A CN 201310345222 A CN201310345222 A CN 201310345222A CN 104345152 A CN104345152 A CN 104345152A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- muc15
- akt
- reagent
- kit
- expression level
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 101000623905 Homo sapiens Mucin-15 Proteins 0.000 title claims abstract description 89
- 102100023128 Mucin-15 Human genes 0.000 title claims abstract description 88
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 title claims abstract description 36
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 title abstract description 27
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 title abstract description 27
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 66
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 21
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 claims abstract description 19
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 32
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 claims description 21
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 17
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 12
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N methanol Substances OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 claims description 7
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 claims description 5
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 claims description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 5
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 5
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 5
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 4
- 239000012916 chromogenic reagent Substances 0.000 claims description 4
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims description 4
- 108010073178 Glucan 1,4-alpha-Glucosidase Proteins 0.000 claims description 3
- 102100022624 Glucoamylase Human genes 0.000 claims description 3
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 claims description 3
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 claims description 3
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims description 3
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 claims description 3
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 claims description 3
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 claims description 3
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 3
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 claims description 3
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 28
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 abstract description 16
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 abstract description 12
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 abstract description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 15
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 13
- 102100033810 RAC-alpha serine/threonine-protein kinase Human genes 0.000 description 8
- 108091008611 Protein Kinase B Proteins 0.000 description 7
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 7
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 7
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 108010008707 Mucin-1 Proteins 0.000 description 4
- 102000007298 Mucin-1 Human genes 0.000 description 4
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- 102000038030 PI3Ks Human genes 0.000 description 4
- 108091007960 PI3Ks Proteins 0.000 description 4
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 3
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 238000012752 Hepatectomy Methods 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 108010063954 Mucins Proteins 0.000 description 2
- 102000015728 Mucins Human genes 0.000 description 2
- 108090000430 Phosphatidylinositol 3-kinases Proteins 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 2
- 238000012308 immunohistochemistry method Methods 0.000 description 2
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 2
- DWCZIOOZPIDHAB-UHFFFAOYSA-L methyl green Chemical compound [Cl-].[Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC=C1C(C=1C=CC(=CC=1)[N+](C)(C)C)=C1C=CC(=[N+](C)C)C=C1 DWCZIOOZPIDHAB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 2
- 238000011450 sequencing therapy Methods 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 239000004575 stone Substances 0.000 description 2
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010001167 Adenocarcinoma of colon Diseases 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 101001059454 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase MARK2 Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 101710113459 RAC-alpha serine/threonine-protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100028904 Serine/threonine-protein kinase MARK2 Human genes 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 201000010897 colon adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000006059 cover glass Substances 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 1
- 208000007386 hepatic encephalopathy Diseases 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002991 immunohistochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000012151 immunohistochemical method Methods 0.000 description 1
- 238000012309 immunohistochemistry technique Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000010827 pathological analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000505 pernicious effect Effects 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 230000003334 potential effect Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 1
- 238000007674 radiofrequency ablation Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000004454 trace mineral analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 urase Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57438—Specifically defined cancers of liver, pancreas or kidney
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
- G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
- G01N2333/4701—Details
- G01N2333/4725—Mucins, e.g. human intestinal mucin
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明涉及MUC15与p-AKT在制备肝癌预后评估试剂盒中的应用。首次揭示肝细胞癌中粘蛋白MUC15在癌中较癌旁明显低表达，且这种低表达与肝癌的恶性临床病理指标存在明显的相关性。并且，本发明揭示了肿瘤样本中MUC15和p-AKT水平的负相关性，建立了一种肝细胞癌的预后评估的方法。
Description
技术领域
本发明属于医学生物检测技术领域，更具体地，本发明涉及MUC15蛋白与p-AKT蛋白的负相关性，及其在制备肝癌预后评估试剂盒中的应用。
背景技术
肝细胞癌是最致命的恶性肿瘤之一，世界范围内，占肿瘤相关死亡的第三位，更是肝硬化病人死亡的首要原因[1，2，3]。2008年，新诊断的肝细胞癌病人超过70万，按年龄分层，每10万人中，就有新诊断的肝细胞癌病人16个[4]。经过仔细筛选的早期肿瘤病人，通过肝切除术，肝移植和射频消融，可以得到有效的治疗[5]。但晚期肿瘤病人，因为术后复发转移，预后依然很差[6]。因此，鉴定新的肝癌进展分子标记，并深刻理解肝癌术后转移复发的分子机制，对于阻止肿瘤复发，延长患者生存依然十分重要。
蛋白激酶B(Protein kinase B，PKB或AKT)是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，与磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol3-kinase，PI3K)组成的PI3K/AKT信号通路广泛存在细胞中，在凋亡、衰老、增殖等细胞生命活动中起重要作用[7]。非磷酸化AKT蛋白不具备生物学活性，经磷酸化作用生成磷酸化AKT(Phosphorylated AKT，pAKT)。
粘蛋白属于一类高分子量糖蛋白家族，通常在胞浆或者细胞膜上，会被高度的O型糖基化包被。通常生理条件下，大部分上皮细胞中具有粘蛋白的表达。近年来，很多文献报道粘蛋白在炎症向肿瘤的进展过程中，起到了很重要的作用。粘蛋白MUC15最初是从牛奶脂肪小泡的膜上被分离鉴定的，其基因定位于11号染色体短臂14.3区[8]。MUC15的mRNA在多种人类组织中通过逆转录PCR被检测到。在人类胎盘的发育过程中，MUC15的表达在胚胎晚期比胚胎早期要高。最近有研究揭示，在肿瘤的发生发展及转移过程中，MUC15可能发挥了潜在的作用。例如，在结肠腺癌中，MUC15的表达是异常升高的，并能促进人类结肠癌细胞的恶性表型[9]。但是过表达外源的MUC15，能够抑制滋养层样细胞JAR和JEG-3的侵袭能力[10]。
然而，MUC15在肝癌发生发展及转移复发，以及肝癌术后预后评估中的作用等研究，在国内外上仍是空白。
发明内容
本发明的目的在于提供MUC15与p-AKT联合应用作为肝癌预后评估标志物的用途。
在本发明的第一方面，提供MUC15蛋白和p-AKT蛋白的用途，用于制备进行肝细胞癌预后评估的诊断试剂。
在本发明的另一方面，提供一种用于肝细胞癌预后评估的试剂盒，所述试剂盒中包括：
特异性检测MUC15蛋白表达水平的试剂；和
特异性检测p-AKT蛋白表达水平的试剂。
在一个优选例中，所述的试剂盒中，所述的特异性检测MUC15蛋白表达水平的试剂是抗MUC15蛋白的抗体；和/或所述的特异性检测p-AKT蛋白表达水平的试剂是抗p-AKT蛋白的抗体。
在另一优选例中，所述的抗体是多克隆抗体或单克隆抗体。
在另一优选例中，所述的抗MUC15蛋白的抗体是利用MUC15重组蛋白免疫兔子后制备得到的。
在另一优选例中，所述的试剂盒中还包括：携带有可检测信号分子的检测抗体。
在另一优选例中，所述的可检测信号分子选自(但不限于)：辣根过氧化物酶、碱性磷酸酯酶、葡萄糖氧化酶、β–D-半乳糖苷酶、脲酶、过氧化氢酶、或葡萄糖淀粉酶。
在另一优选例中，所述的试剂盒中还包括：免疫组化试剂。
在另一优选例中，所述的试剂盒中，所述的免疫组化试剂包括(但不限于)：显色试剂，二甲苯，乙醇，H2O2甲醇液，抗原修复液，封闭液，PBS，中性树脂。
在本发明的另一方面，提供特异性检测MUC15蛋白表达水平的试剂和特异性检测p-AKT蛋白表达水平的试剂的用途，用于制备肝细胞癌预后评估的试剂盒。
在一个优选例中，所述的特异性检测MUC15蛋白表达水平的试剂是抗MUC15蛋白的抗体；和/或所述的特异性检测p-AKT蛋白表达水平的试剂是抗p-AKT蛋白的抗体。
在本发明的另一方面，提供一种肝癌预后评估的方法，所述方法包括：
(1)应用前面任一所述的试剂盒检测受试者离体肝癌组织中MUC15蛋白表达水平和p-AKT蛋白表达水平；
(2)分析蛋白表达水平，
若MUC15高表达且p-Akt低表达，则该受试者预后为低死亡率及低复发率；
若MUC15低表达且p-Akt高表达，则该受试者预后为高死亡率及高发率；
若MUC15和p-Akt均高表达或MUC15和p-Akt均低表达，则该受试者预后为中等死亡率及中等复发率。
在另一优选例中，所述肝癌预后评估方法包括以下步骤：
(a)利用所述试剂盒中的MUC15和p-AKT抗体和免疫组化实验试剂对切片后的肝癌组织进行免疫组化染色；
(b)利用显微镜和成像装置拍摄为数码照片；
(c)利用生物图像处理软件分析整张组织芯片阳性信号强度，给出评分；
(d)根据评分计算肿瘤组织中粘蛋白MUC15和p-AKT蛋白分子表达量；
(e)根据MUC15和p-AKT的表达量水平的负相关性，对肝癌患者预后进行评估。
本发明的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。
附图说明
图1、经p-AKT及MUC15双指标检测后的肝细胞癌组织分类及相应患者预后情况。
图2、免疫组化显示肝癌组织中MUC15蛋白表达量显著低于对应的癌旁组织。
(A)肝癌(Tumor)及癌旁组织(Peri-tumor)中MUC15免疫组化结果；
(B)313名患者肝癌及癌旁组织中MUC15表达量统计分析结果。
图3、313个临床样本中MUC15与p-Akt存在明显负相关。r=-0.185，p=0.001。
图4、临床样本中MUC15与p-Akt负相关典型图片。
图5、结合MUC15和p-Akt显著增加了单独因素预测预后的效能。
具体实施方式
本发明人经过广泛而深入的研究，首次发现肝细胞癌中粘蛋白MUC15在癌中较癌旁明显低表达。大样本验证发现，这种低表达与肝癌的恶性临床病理指标存在明显的相关性。同时，本发明人将肿瘤样本中MUC15和p-AKT水平的负相关性结合起来，建立了一种肝细胞癌的术后预后方法，该方法较应用MUC15或p-AKT单一因素具有更好的预后准确性。
本发明利用免疫组化技术、显微镜拍照和计算机图像处理软件测定肿瘤组织中MUC15与p-AKT蛋白的表达量，并结合术后随访信息，确定MUC15与p-AKT的负相关性可用于判断手术后肝癌患者的预后效果，为肝癌病人术后监控与序贯治疗提供了重要的指导。
为了准确地测定样本中MUC15和p-AKT蛋白的表达水平，本发明人建立了针对MUC15和p-AKT蛋白的灵敏检测系统，从而有利于方便、快捷地用于临床检测。作为本发明的优选方式，所述的检测系统是一种检测试剂盒，所述的试剂盒中含有特异性结合MUC15和p-AKT蛋白的抗体。
作为本发明的优选方式，所述的特异性检测MUC15蛋白表达水平的试剂是抗MUC15蛋白的抗体；和/或所述的特异性检测p-AKT蛋白表达水平的试剂是抗p-AKT蛋白的抗体。
制备抗体的技术是本领域中众所周知的。本发明的抗体可以是对MUC15或p-AKT蛋白具有特异性的单克隆抗体。单克隆抗体可以利用杂交瘤技术来制备(见Kohler等人,Nature256;495,1975;Kohler等人,Eur.J.Immunol.6:511,1976;Kohler等人,Eur.J.Immunol.6:292,1976;Hammerling等人,In MonoclonalAntibodies and T Cell Hybridomas,Elsevier,N.Y.,1981)。所述单克隆抗体可以利用MUC15或p-AKT蛋白或蛋白片段或功能区，通过免疫技术获得。此外，还可以利用重组方法制备或利用多肽合成仪合成。
本发明的抗体也可以是对MUC15或p-AKT蛋白具有特异性的多克隆抗体。所述的多克隆抗体可通过常规的方法来制备，例如，可通过将所述的MUC15或p-AKT蛋白导入动物中来获得，例如，将MUC15或p-AKT蛋白与弗氏佐剂按照适当比例(如1:1)混合后免疫动物。免疫方法可使用动物皮下注射。所述动物可选自兔、羊、牛等。作为本发明的优选方式，采用兔来生产所述的多克隆抗体：兔免疫2-3个月后，从其静脉血中收获抗血清并纯化，获得特异性多克隆抗体。
在获得了特异性检测MUC15蛋白表达水平的试剂和特异性检测p-AKT蛋白表达水平的试剂后，可以方便地制备出用于特异性检测MUC15和p-AKT蛋白的检测试剂盒。所述试剂盒中除了含有所述抗体以外，还可以包含：携带有可检测信号分子的检测抗体(用于与抗MUC15抗体或抗p-AKT抗体结合)，以及疫组化试剂。所述的免疫组化试剂包括但不限于：显色试剂，二甲苯，乙醇，H2O2甲醇液，抗原修复液，封闭液，PBS，中性树脂等。
如本文所用，所述的“可检测信号分子”是指用于确定待检测样品中MUC15和p-AKT蛋白的存在与否以及存在的量的标志物。在确定了本发明的试剂盒所采用的特异性抗体和检测抗体后，可以采用本领域常规用于与检测抗体结合来进行检测的各种可检测信号分子。例如，可检测信号分子可以选自：辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酯酶(AP)、葡萄糖氧化酶、β–D-半乳糖苷酶、脲酶、过氧化氢酶或葡萄糖淀粉酶。
当采用如上所示的一些酶作为可检测信号分子时，还需要采用一些与相应的酶结合的底物，从而可通过显色等方式来报导可检测信号分子的存在情况或者存在量。所述的底物例如：用于辣根过氧化物酶的邻苯二胺(OPD)、四甲基联苯胺(TMB)、ABTS；用于碱性磷酸酯酶的对硝基苯磷酸酯(p-nitrophenylphosphate，p-NPP)；等等。本领域人员可根据所采用的可检测信号分子的种类和特性，选择适宜的底物。
在获得了本发明提供的试剂盒后，可以利用多种免疫学相关方法来检测样品中MUC15和p-AKT蛋白的表达量，这些方法均被包含在本发明中。
作为一种优选方式，本发明提供了使用上述试剂盒用于体外检测MUC15和p-AKT蛋白在肝癌组织中的表达量的方法，该方法包括以下步骤：
(a)利用所述试剂盒中的MUC15和p-AKT抗体和免疫组化实验试剂对切片后的肝癌组织进行免疫组化染色；
(b)利用显微镜和成像装置拍摄为数码照片；
(c)利用生物图像处理软件分析整张组织芯片阳性信号强度，给出评分；
(d)根据评分计算肿瘤组织中粘蛋白MUC15和p-AKT蛋白分子表达量。
本发明人应用组织芯片免疫组织化学评分方法，对大量患者(313例)样本进行了免疫组化分析，用Image Scope软件对组织芯片进行扫描，扫描后采用该软件的Algorithms(Positive Pixel Count)程序对每个芯片点进行“阳性Pixel”计算。如表1计算数据。最终确定：MUC15高低表达标准可以以表达评分中位数(0.35)为界限；p-AKT高低表达标准可以以表达评分中位数(0.37)为界限。高于所述界限可确定为高表达，低于所述界限可以确定为低表达。上述界限可以作为临床诊断的依据。
综上，根据MUC15和p-AKT的表达量水平的负相关性，对肝癌患者预后进行评估。本发明首次提出利用MUC15及p-AKT的负相关性进行检测并预测肝细胞癌手术后复发转移等事件，并判断预后，对于肝细胞癌病人术后监控和序贯治疗也具有重要的指导意义。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如J.萨姆布鲁克等编著，分子克隆实验指南，第三版，科学出版社，2002中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1、MUC15在肝癌及癌旁组织中的差异化表达
1、临床组织样本的选取
313例原发性肝细胞癌组织标本随机取自于2006年1月-2009年9月在第二军医大学东方肝胆外科医院接受肝切除手术的HCC病人。书面知情同意书均于术前获得。入组和排除的标准：术前体能评分WHO0-1；肝功能Child-Pugh分级为A级；没有远处转移；无肉眼可见腹水；无肝性脑病；术前未接受任何放化疗；均为根治性切除；所有病人术后病理均证实为肝细胞癌。按照国际抗癌联盟(UICC)2002第六版进行TNM分期。本研究313例肝细胞癌患者中男性为281例，女性32例，男女比例为9:1；平均年龄49.6±10.2岁，范围21-83岁；本组病例均为HBsAg阳性(313/313)；无围手术期死亡病例。
实施例2、免疫组化法检测肝癌及癌旁组织中MUC15的表达情况
对上述313例肝癌患者的癌及癌旁组织，进行MUC15免疫组化实验，结果表明肝癌组织中MUC15蛋白的表达水平明显低于对应的癌旁组织(Peritumor)，如图2。
实施例3、MUC15与p-AKT在肝癌患者中表达情况与预后的关联
1、组织芯片的构建
首先对上述313例病人的每一个供体蜡块进行切片和苏木素-伊红(HE)染色。显微镜下对所需穿取的目标组织进行定位，分别选取有代表性的癌和癌旁组织各3个位点，利用组织芯片制作仪依次从供体蜡块上穿取直径为1mm的组织芯，插入有240个点阵的受体蜡块中，以4μm的厚度连续切片，所得的组织芯片的每个点都经过病理诊断。
2、免疫组化(DAB法)步骤
(1)-20℃取组织块，石蜡包埋，切片。
(2)石蜡切片60℃烤箱过夜。
(3)切片脱腊、水合：二甲苯①10min→二甲苯②10min→二甲苯③10min→100%乙醇5min→95%乙醇5min→85%乙醇5min→75%乙醇5min→双蒸水5min。
(4)3%H2O2甲醇液，室温放置20min，去除内源性过氧化物酶。
(5)双蒸水洗5min×3次。
(6)抗原修复：切片放入0.01M柠檬酸盐缓冲液中煮沸5min，停火10min，再煮沸5min。
(7)自然冷却至室温，双蒸水洗5min×3次。
(8)1%BSA封闭30min，37℃。
(9)甩去封闭液，不洗，直接加一抗(抗MUC15多克隆抗体或抗p-AKT多克隆抗体)，置入湿盒中30min，37℃，后4℃冰箱过夜。
(10)4℃取出，室温下复温15min，0.01M PBS洗5min×4次。
(11)滴加DAKO二抗(辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG抗体)，湿盒中45min，37℃。
(12)0.01M PBS洗5min×4次，DAB显色2-10min，镜下观察。
(13)双蒸水终止显色，0.01M PBS洗5min×1次。
(14)苏木精-伊红或甲基绿复染2min，无水乙醇脱色5-10s。
(15)二甲苯脱水透明，滴中性树脂后盖玻片覆盖封片。
(16)显微镜下观察阳性染色。
3、免疫组化结果判定方法
组织芯片免疫组织化学评分方法：采用Image Scope (Aperio公司)软件对整张组织芯片进行扫描，扫描后采用该软件的Algorithms(Positive Pixel Count)程序对每个芯片点进行“阳性Pixel”计算。获得计算数据如表1。
表1
每个组织芯片点的组化评分计算方法为Log10[255/Iavg]，其中Iavg=(Iwp+Ip+Isp)/(Nwp+Np+Nsp)，即平均强度，计算方法：
平均强度=(弱阳性象素总强度+阳性象素总强度+强阳性象素总强度)/(弱阳性象素数量+阳性象素数量+强阳性象素数量)。
MUC15高低表达标准以313例肝癌组织中MUC15表达评分的中位数(0.35)为界；p-AKT高低表达标准以313例肝癌组织中p-AKT表达评分的中位数(0.37)为界。
如图3所示，在临床样本中，MUC15的表达和p-Akt的表达存在明显的负相关关系。图4显示了较典型的三例样本中MUC15和p-Akt的染色情况。
结合患者肿瘤组织中MUC15表达水平和p-Akt表达水平，将313例肝癌患者分为四组：
MUC15高表达(表达评分高于0.35)且p-Akt高表达(表达评分高于0.37)组；
MUC15高表达(表达评分高于0.35)且p-Akt低表达组(表达评分低于0.37)；
MUC15低表达(表达评分低于0.35)且p-Akt高表达组(表达评分高于0.37)；
MUC15低表达(表达评分低于0.35)且p-Akt低表达(表达评分低于0.37)组。
将上述四组患者进行长期观察，每年统计患者的复发情况及生存率。将72个月的跟踪分析，发现肿瘤样本中较低的MUC15表达水平和较高的p-Akt水平明显具有更差的总体生存率和更高的术后复发率；而肿瘤样本中较高的MUC15表达水平和较低的p-Akt水平则明显具有较高低生存率和较低的术后复发率，差异显著，如图5和图1。
并且，将MUC15水平和p-Akt水平结合后，明显较单独MUC15或p-Akt一个因素能更好的预测患者的预后。
实施例4、检测试剂盒的制备
本实施例中，制备的试剂盒组成如下：
1、p-AKT多克隆抗体(购自Cell Signaling Technology公司)；
2、MUC15多克隆抗体(购自Sigma公司)；
3、辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG抗体(购自DAKO公司，丹麦)。
4、其它免疫组化试剂：二甲苯，乙醇，3%H2O2甲醇液，抗原修复液，封闭液，DAB显色试剂，甲基绿，0.01M PBS，中性树脂，苏木精-伊红。
实施例5、检测试剂盒的临床应用
获得5位临床患者的肝癌组织，如实施例3的方法制备免疫组化样本(组织芯片)，如实施例3采用Image Scope软件对组织芯片进行扫描，扫描后采用该软件的Algorithms(Positive Pixel Count)程序对每个芯片点进行“阳性Pixel”计算。MUC15高低表达评分以0.35为界；p-AKT高低表达标准以中位数0.37为界。
结合MUC15表达水平和p-Akt表达水平，去预测患者的预后。结果如下：
2位患者MUC15低表达(表达评分显著低于0.35)且p-Akt高表达(表达评分显著高于0.37)组，预后为高死亡率、高复发率；建议后续进行积极检查和治疗。
2位患者MUC15高表达(表达评分显著高于0.35)且p-Akt低表达(表达评分显著低于0.37)组，预后为低死亡率、低复发率；预后较为乐观，但需定期回访检查，必要时进行治疗。
1位患者MUC15高表达(表达评分显著高于0.35)且p-Akt高表达(表达评分显著高于0.37)组，预后为中等死亡率及复发率；建议后续进行积极检查和治疗。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
参考文献：
[1]Jemal A,Bray F,Center MM,et al.Global cancer statistics.CA Cancer J Clin2011;61:69–90.
[2]Venook AP,Papandreou C,Furuse J,et al.The incidenceand epidemiology ofhepatocellular carcinoma:a global and regional perspective.Oncologist2010;15:5–13.
[3]Alazawi W,Cunningham M,Dearden J,et al.Systematic review:outcome ofcompensated cirrhosis due to chronic hepatitis C infection.Aliment Pharmacol Ther2010;32:344–55.
[4]Ferlay J,Shin HR,Bray F,et al.Estimates of worldwide burden of cancer in2008:GLOBOCAN2008.Int J Cancer2010;127:2893–917.
[5]Bruix J,Sherman M.Management of hepatocellular carcinoma:an update.Hepatology2011;53:1020–2.
[6]Portolani N,Coniglio A,Ghidoni S,et al.Early and late recurrence after liverresection for hepatocellular carcinoma:prognostic and therapeutic implications.Ann Surg2006;243:229-35.
[7]Lee BL，Lee HS，Jung J，et al.Nuclear factor-kappaB activation correlates withbetter prognosis and Akt activation in humam gastric cancer.Clin Cancer Res2005;11(7):2518-2525.
[8]Pallesen LT,Berglund L,Rasmussen LK,et al.Isolation and characterization ofMUC15,a novel cell membrane-associated mucin.Eur.J.Biochem2002;269:2755–63.
[9]Huang J,Che MI,Huang YT,et al.Overexpression of MUC15activates extracellularsignal-regulated kinase1/2and promotes the oncogenic potential of human colon cancer cells.Carcinogenesis2009;30:1452-8.
[10]Shyu MK,Lin MC,Shih JC,et al.Mucin15is expressed in human placenta andsuppresses invasion of trophoblast-like cells in vitro.Human Reproduction2007;22:2723–32.
Claims (10)
1.MUC15蛋白和p-AKT蛋白的用途，用于制备进行肝细胞癌预后评估的诊断试剂。
2.一种用于肝细胞癌预后评估的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括：
特异性检测MUC15蛋白表达水平的试剂；和
特异性检测p-AKT蛋白表达水平的试剂。
3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述的特异性检测MUC15蛋白表达水平的试剂是抗MUC15蛋白的抗体；和/或
所述的特异性检测p-AKT蛋白表达水平的试剂是抗p-AKT蛋白的抗体。
4.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中还包括：携带有可检测信号分子的检测抗体。
5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述的可检测信号分子选自：辣根过氧化物酶、碱性磷酸酯酶、葡萄糖氧化酶、β–D-半乳糖苷酶、脲酶、过氧化氢酶、或葡萄糖淀粉酶。
6.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中还包括：免疫组化试剂。
7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述的免疫组化试剂包括：显色试剂，二甲苯，乙醇，H2O2甲醇液，抗原修复液，封闭液，PBS，中性树脂。
8.特异性检测MUC15蛋白表达水平的试剂和特异性检测p-AKT蛋白表达水平的试剂的用途，用于制备肝细胞癌预后评估的试剂盒。
9.如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述的特异性检测MUC15蛋白表达水平的试剂是抗MUC15蛋白的抗体；和/或
所述的特异性检测p-AKT蛋白表达水平的试剂是抗p-AKT蛋白的抗体。
10.一种肝癌预后评估的方法，其特征在于，所述方法包括：
(1)应用权利要求2-7任一所述的试剂盒检测受试者离体肝癌组织中MUC15蛋白表达水平和p-AKT蛋白表达水平；
(2)分析蛋白表达水平，
若MUC15高表达且p-Akt低表达，则该受试者预后为低死亡率及低复发率；
若MUC15低表达且p-Akt高表达，则该受试者预后为高死亡率及高发率；
若MUC15和p-Akt均高表达或MUC15和p-Akt均低表达，则该受试者预后为中等死亡率及中等复发率。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310345222.2A CN104345152B (zh) | 2013-08-08 | 2013-08-08 | MUC15与p-AKT在制备肝癌预后评估试剂盒中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310345222.2A CN104345152B (zh) | 2013-08-08 | 2013-08-08 | MUC15与p-AKT在制备肝癌预后评估试剂盒中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104345152A true CN104345152A (zh) | 2015-02-11 |
| CN104345152B CN104345152B (zh) | 2016-09-21 |
Family
ID=52501204
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310345222.2A Expired - Fee Related CN104345152B (zh) | 2013-08-08 | 2013-08-08 | MUC15与p-AKT在制备肝癌预后评估试剂盒中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104345152B (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107904295A (zh) * | 2017-11-22 | 2018-04-13 | 南宁科城汇信息科技有限公司 | 一种肝癌关键因子的临床验证和临床价值评估方法 |
| CN116819085A (zh) * | 2023-06-02 | 2023-09-29 | 中山大学肿瘤防治中心（中山大学附属肿瘤医院、中山大学肿瘤研究所） | 生长抑素受体2在用于制备肝细胞癌预后评估的试剂盒中的应用 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005058950A2 (en) * | 2003-12-11 | 2005-06-30 | Sidney Kimmel Cancer Center | Methods for generating immunity to antigen |
| WO2007147601A2 (de) * | 2006-06-21 | 2007-12-27 | Sirion Gmbh | Verfahren zum einfrieren und lagern von zellen |
| WO2008109773A2 (en) * | 2007-03-06 | 2008-09-12 | Cornell Research Foundation, Inc. | Chronic obstructive pulmonary disease susceptibility and related compositions and methods |
| US20090313707A1 (en) * | 2005-06-06 | 2009-12-17 | Genentech, Inc. | Novel Gene Disruptions, Compositions and Methods Relating Thereto |
| CN103091493A (zh) * | 2013-01-08 | 2013-05-08 | 中国人民解放军第二军医大学 | Psmd4蛋白在制备肝癌预后评估试剂盒中的应用 |
-
2013
- 2013-08-08 CN CN201310345222.2A patent/CN104345152B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005058950A2 (en) * | 2003-12-11 | 2005-06-30 | Sidney Kimmel Cancer Center | Methods for generating immunity to antigen |
| US20090313707A1 (en) * | 2005-06-06 | 2009-12-17 | Genentech, Inc. | Novel Gene Disruptions, Compositions and Methods Relating Thereto |
| WO2007147601A2 (de) * | 2006-06-21 | 2007-12-27 | Sirion Gmbh | Verfahren zum einfrieren und lagern von zellen |
| WO2008109773A2 (en) * | 2007-03-06 | 2008-09-12 | Cornell Research Foundation, Inc. | Chronic obstructive pulmonary disease susceptibility and related compositions and methods |
| CN103091493A (zh) * | 2013-01-08 | 2013-05-08 | 中国人民解放军第二军医大学 | Psmd4蛋白在制备肝癌预后评估试剂盒中的应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 郭人花 等: "肝癌组织Survivin和p-AKT及ＥＲ表达及其临床意义分析", 《中华肿瘤防治杂志》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107904295A (zh) * | 2017-11-22 | 2018-04-13 | 南宁科城汇信息科技有限公司 | 一种肝癌关键因子的临床验证和临床价值评估方法 |
| CN116819085A (zh) * | 2023-06-02 | 2023-09-29 | 中山大学肿瘤防治中心（中山大学附属肿瘤医院、中山大学肿瘤研究所） | 生长抑素受体2在用于制备肝细胞癌预后评估的试剂盒中的应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104345152B (zh) | 2016-09-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Li et al. | Nipple involvement in breast cancer: retrospective analysis of 2323 consecutive mastectomy specimens | |
| Zhang et al. | The exosome-mediated PI3k/Akt/mTOR signaling pathway in cervical cancer | |
| Wei et al. | Decreased expression of sestrin 2 predicts unfavorable outcome in colorectal cancer | |
| Zhao et al. | Overexpression of HABP1 correlated with clinicopathological characteristics and unfavorable prognosis in endometrial cancer | |
| Kim et al. | Prognostic significance of expression of VEGF and Cox‐2 in nasopharyngeal carcinoma and its association with expression of C‐erbB2 and EGFR | |
| Zhu et al. | Nuclear localization of annexin A1 correlates with advanced disease and peritoneal dissemination in patients with gastric carcinoma | |
| Chen et al. | Prognostic value of TROP2 expression in patients with gallbladder cancer | |
| Roy et al. | A tumor specific antibody to aid breast cancer screening in women with dense breast tissue | |
| Zhou et al. | The expression and clinical significance of HERC4 in breast cancer | |
| Zhao et al. | Correlation between the expression of Id-1 and hyperthermia-associated molecules in oral squamous cell carcinoma | |
| Mao et al. | Increased N-myc downstream-regulated gene 1 expression is associated with breast atypia-to-carcinoma progression | |
| Deng et al. | Close association of metastasis-associated protein 1 overexpression with increased angiogenesis and poor survival in patients with histologically node-negative gastric cancer | |
| Fan et al. | Increased NDRG1 expression is associated with advanced T stages and poor vascularization in non-small cell lung cancer | |
| Shi et al. | Prognostic prediction and diagnostic role of intercellular adhesion molecule-1 (ICAM1) expression in clear cell renal cell carcinoma | |
| Fan et al. | Detection of Brk expression in non-small cell lung cancer: clinicopathological relevance | |
| Sheng et al. | Expression of HAX1 and Ki-67 in breast cancer and its correlations with patient’s clinicopathological characteristics and prognosis | |
| Merikallio et al. | Smoking-associated increase in mucins 1 and 4 in human airways | |
| Knoener et al. | Limited value of KAI1/CD82 protein expression as a prognostic marker in human gastric cancer | |
| Guerrero et al. | Microfibril associated protein 4 (MFAP4) is a carrier of the tumor associated carbohydrate sialyl-Lewis x (sLex) in pancreatic adenocarcinoma | |
| Gao et al. | Elevated HABP1 protein expression correlates with progression and poor survival in patients with gastric cancer | |
| Li et al. | High levels of phosphatase and tensin homolog expression predict favorable prognosis in patients with non-small cell lung cancer | |
| CN104345152B (zh) | MUC15与p-AKT在制备肝癌预后评估试剂盒中的应用 | |
| Iovino et al. | Serum vascular endothelial growth factor (VEGF) levels correlate with tumor VEGF and p53 overexpression in endocrine positive primary breast cancer | |
| CN109999184A (zh) | Tak1蛋白在制备食管癌预后评估试剂或试剂盒中的应用 | |
| CN106290895A (zh) | Chka蛋白在制备肝癌预后评估试剂盒中的应用、试剂盒及方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20160921 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |