CN104221863A - 一种珍稀幌菊组培快繁的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种珍稀幌菊组培快繁的方法，包括以下步骤：(1)外植体的选择与消毒处理，(2)发芽培养，(3)继代培养，(4)生根培养，(5)驯化、移栽等步骤。选择了合适的培养基和培养条件，利用枝条作为外植体快速繁殖成功。本发明首次建立起该植物的组织培养快速繁殖技术体系，使其种苗繁殖不受时间、季节等限制，从而极大地缩短了育苗周期，提高了育苗效率，育苗周期由1年缩短到4至5个月，每年育苗批数由2批提高到5至10批，为其大面积推广应用提供了一条有效途径。
Description
技术领域
本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其涉及一种珍稀幌菊组培快繁的方法。
背景技术
幌菊(Ellisiophyllum pinnatum(Wall.)Makino)为田基麻科，幌菊属，原产北美。该植物喜凉爽干燥，不耐湿热、寒冷，要求光照充足，宜肥沃疏松的土壤。可秋播也可春播，秋播9月上旬进行，均行盆播，入低温温室越冬，供春季和夏初开花使用。春播于4月份进行，供秋季观花使用。
幌菊是一种极具观赏价值的花木，半肉质，枝一般三叉。叶对生，矩圆状倒卵形，羽状深裂。花单生于叶腋，合办花，先端5裂，呈线盘状，花有底为亮蓝色，中央呈白色，或白色底，中央黑色，或蓝色，上有紫色脉纹等，花瓣先端有一滴紫色，花期4‐6月。蒴果球形。每两个月剪掉一次带有老叶和黄叶的枝条，只要温度适宜，能四季开花。供花境、花丛、花群栽植，也可盆栽观赏。
种子繁殖、扦插繁殖和嫁接繁殖是花卉苗木常用的常规繁殖方法。到目前为止，幌菊最常用的繁殖方法是种子繁殖。然而，一方面由于幌菊种子极易散落，采集较困难，且种子较小，后熟期长，萌发率较低；另一方面采用幌菊枝条扦插繁殖成活率低；而嫁接繁殖则需要先通过种子繁殖或扦插培育砧木苗。
组培快繁的方法可以在短时间内快速繁殖获得一定数量的苗木。目前，国内外关于幌菊属植物组织培养快速繁殖方面的报道较少，缺乏全面系统的研究，没有建立起组织培养快速繁殖技术体系。因此，我们以幌菊枝条为外植体，探索建立组织培养快速繁殖技术体系，为幌菊大面积育苗提供技术支撑，满足生产需要，具有重要的理论和实践意义。
发明内容
本发明提供了一种珍稀幌菊组培快繁的方法，为幌菊大面积育苗提供技术支撑，满足生产需要，具有重要的理论和实践意义。
为了解决上述技术问题，本发明通过以下技术方案来实现。
一种珍稀幌菊组培快繁的方法，包括以下步骤：
1)以当年生半木质化的幌菊枝条为外植体，将枝条剪成2‐3cm的带腋芽茎段，剪去叶片，用自来水洗去灰尘，用洗洁精溶液浸泡10min，再在自来水下冲洗1h；在超净工作台上用吸水纸吸去水分后，用75％乙醇溶液浸泡30s后，用无菌水荡洗一次；加入5.6％次氯酸钠溶液浸泡并不断摇动，15min后倒去次氯酸钠，再加入0.1％升汞浸泡8‐10min，每隔2min剧烈摇动一次，最后用无菌水冲洗4‐5次，将其放在无菌纸上吸干水分待用。
2)将灭菌后外植体伤口处切掉1‐2mm，将末端向下垂直插入P1培养基中，培养5‐7d后转入到新的P1培养基中，并继续培养10‐15d长出新芽。
3)将长出的新芽茎段基部发黑部分切除后转移至P2培养基中进行新芽伸长培养，20d后新芽伸长大于2.5cm。
4)将伸长生长后的新芽切成1cm左右的小段，将其转入P2培养基中进行继代培养，25‐30d后增殖新芽萌发并伸长到2cm以上，继代增殖培养代数不超过3代。
5)将步骤4)长至2cm以上的新芽剪下，去掉靠近培养基基部的叶片并转入至P3培养基，培养15d后陆续长出新根。
6)生根培养25‐30d后，将根系生长健壮的组培苗移出培养室，经驯化后移栽入大田。
其中，所述各培养基的组份为：
P1培养基：MS基本培养基、35g/L白砂糖、7.3g/L琼脂粉、0.2mg/L 6‐苄氨基腺嘌呤(6‐BA)、0.05mg/L萘乙酸(NAA)，pH为5.9；
P2培养基：MS基本培养基、35g/L白砂糖、7.3g/L琼脂粉、2mg/L 6‐苄氨基腺嘌呤(6‐BA)、0.1mg/L萘乙酸(NAA)，pH为5.9；
P3培养基：1/2MS基本培养基(大量元素减半)、25g/L白砂糖、7.3g/L琼脂粉、0.1mg/L吲哚丁酸(IAA)、0.1mg/L萘乙酸(NAA)，pH为5.9；
步骤2)、3)的培养条件为温度24‐26℃，光周期为14h光照/10h黑暗，光强为1500Lx；
步骤4)的培养条件为温度为23±1℃，12h/d的光周期，光照强度2000Lx；
步骤5)的培养条件培养温度为23±1℃，14‐18h/d的光周期，光照强度1000Lx；
所述驯化移栽方法为组培苗从培养室运出，松开组培瓶盖，在室内环境中生长3‐5d；移栽时，先用自来水洗净组培苗根部培养基，再用800～1000倍百菌清溶液浸泡根部3‐5min，后栽入到装有育苗基质的穴盘中；全部移栽后，用塑料薄膜外罩黑色遮阳网覆盖遮阳、保湿，3d后逐渐打开塑料薄膜和遮阳网；每隔3d喷施一次800～1000倍百菌清溶液；待植株生长健壮后栽入到大田。
本发明有益效果是：针对幌菊常规繁殖效率低的问题，首次建立起该植物的组织培养快速繁殖技术体系，使其种苗繁殖不受时间、季节等限制，从而极大地缩短了育苗周期，提高了育苗效率，育苗周期由1年缩短到4至5个月，每年育苗批数由2批提高到5至10批，为其大面积推广应用提供了一条有效途径。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。
实施例
一种珍稀幌菊组培快繁的方法，具体如下：
1)以当年生半木质化的幌菊枝条为外植体，将枝条剪成2‐3cm的带腋芽茎段，剪去叶片，用自来水洗去灰尘，用洗洁精溶液浸泡10min，再在自来水下冲洗1h；在超净工作台上用吸水纸吸去水分后，用75％乙醇溶液浸泡30s后，用无菌水荡洗一次；加入5.6％次氯酸钠溶液浸泡并不断摇动，15min后倒去次氯酸钠，再加入0.1％升汞浸泡8‐10min，每隔2min剧烈摇动一次，最后用无菌水冲洗4‐5次，将其放在无菌纸上吸干水分待用。
2)将灭菌后外植体伤口处切掉1‐2mm，将末端向下垂直插入P1培养基中，培养5‐7d后转入到新的P1培养基中，并继续培养10‐15d长出新芽。
3)将长出的新芽茎段基部发黑部分切除后转移至P2培养基中进行新芽伸长培养，20d后新芽伸长大于2.5cm。
4)将伸长生长后的新芽切成1cm左右的小段，将其转入P2培养基中进行继代培养，25‐30d后增殖新芽萌发并伸长到2cm以上，继代增殖培养代数不超过3代。
5)将步骤4)长至2cm以上的新芽剪下，去掉靠近培养基基部的叶片并转入至P3培养基，培养15d后陆续长出新根。
6)生根培养25‐30d后，将根系生长健壮的组培苗移出培养室，经驯化后移栽入大田。
其中，所述各培养基的组份为：
P1培养基：MS基本培养基、35g/L白砂糖、7.3g/L琼脂粉、0.2mg/L 6‐苄氨基腺嘌呤(6‐BA)、0.05mg/L萘乙酸(NAA)，pH为5.9；
P2培养基：MS基本培养基、35g/L白砂糖、7.3g/L琼脂粉、2mg/L 6‐苄氨基腺嘌呤(6‐BA)、0.1mg/L萘乙酸(NAA)，pH为5.9；
P3培养基：1/2MS基本培养基(大量元素减半)、25g/L白砂糖、7.3g/L琼脂粉、0.1mg/L吲哚丁酸(IAA)、0.1mg/L萘乙酸(NAA)，pH为5.9；
其中的含量(g/L或mg/L)均为各组分占总培养基的重量体积比。
所述MS基本培养基含有大量元素、微量元素、铁盐、有机成分四类。P1、P2培养基中，MS基本培养基，以1L计，组成为：NH4NO31650mg，KNO31900mg，CaCl2·2H2O 440mg，KH2PO4170mg，MgSO4·7H2O 370mg，FeSO4·7H2O 27.8mg，Na2EDTA 37.3mg，H3BO36.2mg，MnSO4·H2O 16.9mg，ZnSO4·7H2O 8.6mg，Na2MoO4·2H2O 0.25mg，CuSO4·5H2O 0.025mg，CoCl2·6H2O 0.025mg，KI 0.83mg，肌醇100mg，甘氨酸2mg，烟酸0.5mg，维生素B10.1mg，维生素B60.5mg和余量的无菌水。
P3培养基中的大量元素减半，即NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、KH2PO4、MgSO4·7H2O的含量减半，其它成分的含量不变。
步骤2)、3)的培养条件为温度24‐26℃，光周期为14h光照/10h黑暗，光强为1500Lx；
步骤4)的培养条件为温度为23±1℃，12h/d的光周期，光照强度2000Lx；
步骤5)的培养条件培养温度为23±1℃，14‐18h/d的光周期，光照强度1000Lx；
所述驯化移栽方法为组培苗从培养室运出，松开组培瓶盖，在室内环境中生长3‐5d；移栽时，先用自来水洗净组培苗根部培养基，再用800～1000倍百菌清溶液浸泡根部3‐5min，后栽入到装有育苗基质的穴盘中；全部移栽后，用塑料薄膜外罩黑色遮阳网覆盖遮阳、保湿，3d后逐渐打开塑料薄膜和遮阳网；每隔3d喷施一次800～1000倍百菌清溶液；待植株生长健壮后栽入到大田。
本发明针对幌菊常规繁殖效率低的问题，首次建立起该植物的组织培养快速繁殖技术体系，使其种苗繁殖不受时间、季节等限制，从而极大地缩短了育苗周期，提高了育苗效率，育苗周期由1年缩短到4至5个月，每年育苗批数由2批提高到5至10批，为其大面积推广应用提供了一条有效途径。
Claims (4)
1.一种珍稀幌菊组培快繁的方法，其特征在于包括以下步骤：
1)以当年生半木质化的幌菊枝条为外植体，将枝条剪成2‐3cm的带腋芽茎段，剪去叶片，用自来水洗去灰尘，用洗洁精溶液浸泡10min，再在自来水下冲洗1h；在超净工作台上用吸水纸吸去水分后，用75％乙醇溶液浸泡30s后，用无菌水荡洗一次；加入5.6％次氯酸钠溶液浸泡并不断摇动，15min后倒去次氯酸钠，再加入0.1％升汞浸泡8‐10min，每隔2min剧烈摇动一次，最后用无菌水冲洗4‐5次，将其放在无菌纸上吸干水分待用；
2)将灭菌后外植体伤口处切掉1‐2mm，将末端向下垂直插入P1培养基中，培养5‐7d后转入到新的P1培养基中，并继续培养10‐15d长出新芽；
3)将长出的新芽茎段基部发黑部分切除后转移至P2培养基中进行新芽伸长培养，20d后新芽伸长大于2.5cm；
4)将伸长生长后的新芽切成1cm左右的小段，将其转入P2培养基中进行继代培养，25‐30d后增殖新芽萌发并伸长到2cm以上，继代增殖培养代数不超过3代；
5)将步骤4)长至2cm以上的新芽剪下，去掉靠近培养基基部的叶片并转入至P3培养基，培养15d后陆续长出新根；
6)生根培养25‐30d后，将根系生长健壮的组培苗移出培养室，经驯化后移栽入大田。
2.根据权利要求1所述的一种珍稀幌菊组培快繁的方法，其特征在于所述各培养基的组份为：
P1培养基：MS基本培养基、35g/L白砂糖、7.3g/L琼脂粉、0.2mg/L 6‐苄氨基腺嘌呤(6‐BA)、0.05mg/L萘乙酸(NAA)，pH为5.9；
P2培养基：MS基本培养基、35g/L白砂糖、7.3g/L琼脂粉、2mg/L 6‐苄氨基腺嘌呤(6‐BA)、0.1mg/L萘乙酸(NAA)，pH为5.9；
P3培养基：1/2MS基本培养基、25g/L白砂糖、7.3g/L琼脂粉、0.1mg/L吲哚丁酸(IAA)、0.1mg/L萘乙酸(NAA)，pH为5.9。
3.根据权利要求1或2所述的一种珍稀幌菊组培快繁的方法，其特征在于所述步骤2)、3)的培养条件为温度24‐26℃，光周期为14h光照/10h黑暗，光强为1500Lx；步骤4)的培养条件为温度为23±1℃，12h/d的光周期，光照强度2000Lx；步骤5)的培养条件培养温度为23±1℃，14‐18h/d的光周期，光照强度1000Lx。
4.根据权利要求1或2所述的一种珍稀幌菊组培快繁的方法，其特征在于所述驯化是指组培苗从培养室运出，松开组培瓶盖，在室内环境中生长3‐5d；移栽时，先用自来水洗净组培苗根部培养基，再用800～1000倍百菌清溶液浸泡根部3‐5min，后栽入到装有育苗基质的穴盘中；全部移栽后，用塑料薄膜外罩黑色遮阳网覆盖遮阳、保湿，3d后逐渐打开塑料薄膜和遮阳网；每隔3d喷施一次800～1000倍百菌清溶液；待植株生长健壮后栽入到大田。
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Cited By (1)
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| CN105706933A (zh) * | 2016-03-04 | 2016-06-29 | 中国科学院合肥物质科学研究院 | 一种滁菊株系离体再生的方法 |
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| CN105706933A (zh) * | 2016-03-04 | 2016-06-29 | 中国科学院合肥物质科学研究院 | 一种滁菊株系离体再生的方法 |
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