CN104215680A - 毛细管电泳速差模式测定化合物对映体过剩值的装置 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了毛细管电泳速差模式测定化合物对映体过剩值的装置，包括负极贮液槽1，正极贮液槽2和样品槽5，设置在负极贮液槽的负电极通过导线与电源相连，设置在正极贮液槽的正电极通过导线与电源相连，贯穿设置在零极贮液槽3的毛细管4的一端与正极贮液槽2或样品槽5活动连接，毛细管4的另一端与负极贮液槽1或样品槽5活动连接，位于零极贮液槽3内的毛细管设置有导电不传质的缝隙6，在毛细管4的大部分外表面设置有保护层8，在没有设置有保护层的部分为检测窗7，利用本发明的装置在对对映体过量值的测定中，降低了对拆分剂拆分能力的要求，扩大了现有手性拆分剂在对映体过量值测定中的应用范围，降低了手性拆分剂的研发成本。
Description
技术领域
本发明涉及一种毛细管电泳速差模式测定化合物对映体过剩值的装置。
背景技术
许多化合物具有手性结构特点，两个对映体组成相同，结构相似，但常具有不同的性质。例如目前所用药物很大一部分都具有手性，当药物分子进入人体内往往仅一种对映体具有所需药理活性，而另一种无效甚至具有毒性。服用纯的对映体药物可以排除具有药理活性对映体之外的毒副作用，并且可以减少用药剂量及人体对无效对映体的代谢负担，提高药物的专一性，因此对药物对映体过量值的测定是当今医药及生物领域研究的热点。
常用的用于化合物对映体过量值测定的方法包括高效液相色谱法(HPLC)和高效毛细管电泳法(CE)。对于HPLC，其对色谱柱及试剂的消耗量较大，成本较贵，分析时间较长。毛细管电泳(CE)以高效、低耗、分析时间短、应用范围广等成为手性物质分离及对映体过量值测定的备选方法。它以电场作为驱动力，不同物质由于各自淌度的不同而产生距离差实现分离。毛细管电泳进行手性拆分时，通常在缓冲液中加入手性拆分剂，手性拆分剂与不同对映体结合生成具有不同结合常数(K)及不同淌度(μ)的复合物，使两对映体运动速度产生差异，达到分离的目的。
在实际应用中发现，没有一种手性拆分剂可以完成所有手性化合物的拆分，常常是一种手性拆分剂对几种化合物拆分效果明显，对其他化合物拆分效果较弱或完全没有拆分效果。这就促使多种不同类型手性拆分剂得以开发，常用的拆分剂包括金属络合物、蛋白质、冠醚、环糊精及其衍生物，其中最常用的时环糊精及其衍生物。目前，新型有效的手性拆分剂仍旧是手性拆分方法开发的主要手段。
化合物对映体过量值的测定对分离度的要求要更高一些，这是因为对映体过量值测定时一种对映体过量存在，由于径向扩散使得过量存在的对映体区带将微量存在的另一种对映体区带湮没，导致二者分离度下降无法达到基线分离。在两峰有重叠的情况下，峰面积不能进行准确定量，因此无法准确测定化合物对映体的过量值。选用分离效果更好的拆分剂似乎成为唯一可行的解决方案。
我们在研究中发现，在利用CE对外消旋体进行手性拆分时，进样量越低，两种单一异构体分离度越大，这主要缘于样品纵向扩散大幅度减小。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种应用更加广泛的毛细管电泳速差模式测定化合物对映体过剩值的装置。
本发明的技术方案概述如下：
毛细管电泳速差模式测定化合物对映体过剩值的装置，包括负极贮液槽1，正极贮液槽2和样品槽5，设置在负极贮液槽的负电极通过导线与电源相连，设置在正极贮液槽的正电极通过导线与电源相连，贯穿设置在零极贮液槽3的毛细管4的一端与正极贮液槽2或样品槽5活动连接，毛细管4的另一端与负极贮液槽1或样品槽5活动连接，位于零极贮液槽3内的毛细管设置有导电不传质的缝隙6，在毛细管4的大部分外表面设置有保护层8，在没有设置有保护层的部分为检测窗7。
本发明的优点：
利用本发明的装置在对对映体过量值的测定中，降低了对拆分剂拆分能力的要求，即便使用拆分能力稍差的拆分剂，也能实现两种对映体的基线分离，从而进行准确定量计算。扩大了现有手性拆分剂在对映体过量值测定中的应用范围，降低了手性拆分剂的研发成本。
附图说明
图1为毛细管电泳速差模式测定化合物对映体过剩值的装置示意图。
图2为传统毛细管电泳法机理示意图。
图3为使用本发明的方法机理示意图。
图4为传统毛细管电泳法测定氨氯地平过剩值的结果。
图5为使用本发明测定氨氯地平过剩值的结果。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步的说明。
毛细管电泳速差模式测定化合物对映体过剩值的装置，包括负极贮液槽1，正极贮液槽2和样品槽5，设置在负极贮液槽的负电极通过导线与电源相连，设置在正极贮液槽的正电极通过导线与电源相连，贯穿设置在零极贮液槽3的毛细管4的一端与正极贮液槽2或样品槽5活动连接，毛细管4的另一端与负极贮液槽1或样品槽5活动连接，位于零极贮液槽3内的毛细管设置有导电不传质的缝隙6，在毛细管4的大部分外表面设置有保护层8，在没有设置有保护层的部分为检测窗7。
实施例1
首先采用传统毛细管电泳法进行对照试验，见图2，试验使用样品、拆分剂、缓冲液及分离通道情况与本发明毛细管电泳速差模式完全一致，由于S-氨氯地平对映体过量，R-氨氯地平对映体的峰被S-氨氯地平对映体的峰完全湮没，无法计算对映体过剩值，试验结果见图4。
实施例2
毛细管电泳速差模式测定化合物对映体过剩值的方法，见图3，包括如下步骤：
(1)使用本发明的毛细管电泳速差模式测定化合物对映体过剩值的装置，先将毛细管4的一端与正极贮液槽2连接，将毛细管4的另一端与负极贮液槽1连接，向负极贮液槽1，正极贮液槽2，零极贮液槽3和毛细管4中加入含3％(w/v)拆分剂α-环糊精，pH＝2.50,30mM Tris-磷酸缓冲液，有效分离长度31厘米；
(2)向样品槽5中加入浓度为93.73μg/mL待测定化合物氨氯地平(R-对映体：S-对映体＝1：100)的水溶液和内标物二苯胍；
(3)用样品槽5替换正极贮液槽2与毛细管4的一端连接，通过压力进样使待测定化合物氨氯地平进入毛细管4；用正极贮液槽2替换样品槽5与毛细管4的一端连接，施加场强为200伏/厘米的电场使待测定化合物氨氯地平在毛细管4中泳动；当待测定化合物氨氯地平迁移速度较快的部分泳动过缝隙6时(通过泳动速度更快的内标物二苯胍来确定)，调整待测定化合物已经过的毛细管电场场强(图1中的I)为零并持续1分钟后恢复原场强，使剩余部分待测样品通过检测器，得到电泳图。S-氨氯地平对映体与R-氨氯地平对映体基线分离，可以根据各峰的峰面积计算得出对映体过剩值，见图5。
在上述测定过程中，存在两个运动相：I运动相和II运动相。
毛细管的缝隙6的制备：在运动相I、II间，用刀片在垂直于毛细管的方向上轻轻切割毛细管一侧，用拇指抵着未被切割的一侧轻轻将切点掰开，形成一个切口，然后恢复原状，将切口处朝下用AB胶将其固定在零极贮液槽3内。
由于切口处形成的缝隙很小，不足以让样品流出，但可以让离子通过，也就是说，切口处具有导电不传质的特性。在零极贮液槽3内中插入零极，与毛细管两端的正、负极分别形成电回路。
通过使用三电极电源，调节两个电回路的电压大小可以在毛细管电泳过程中形成两个电场强度。
在测定手性对映体过量值时，一般来说有一种对映体(假设为R)过量，另外一种对映体(假设为S)微量。我们假设在一定手性拆分条件下，对映体S迁移速度比R快。当样品通过I运动相到达零极时，对映体S集中在整个样品区带的前沿部分，此时将I运动相的电场强度调整到零，则大部分对映体R仍停留在I运动相中，而对映体S和少部分对映体R进入II运动相继续迁移。由于进入II运动相的两种对映体样品量均较少，因此对映体R和S容易达到基线分离。综合计算对映体R和S的峰面积，便可计算出手性对映体的过量值。
Claims (1)
1.毛细管电泳速差模式测定化合物对映体过剩值的装置，包括负极贮液槽(1)，正极贮液槽(2)和样品槽(5)，设置在负极贮液槽的负电极通过导线与电源相连，设置在正极贮液槽的正电极通过导线与电源相连，其特征是贯穿设置在零极贮液槽(3)的毛细管(4)的一端与正极贮液槽(2)或样品槽(5)活动连接，毛细管(4)的另一端与负极贮液槽(1)或样品槽(5)活动连接，位于零极贮液槽(3)内的毛细管设置有导电不传质的缝隙(6)，在毛细管(4)的大部分外表面设置有保护层(8)，在没有设置有保护层的部分为检测窗(7)。
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