CN104013574B - 可温变性无痛纳米磺胺嘧啶金属化合物透明质酸的混悬制剂 - Google Patents

Abstract

一类温变性无痛纳米磺胺嘧啶金属化合物透明质酸混悬制剂，配方包括磺胺嘧啶金属化合物、透明质酸类物质、止痛剂、助分散剂、助悬剂、水，其中磺胺嘧啶金属化合物包括磺胺嘧啶银、磺胺嘧啶锌，透明质酸类物质来源包括生物发酵、动物组织提取等，可为透明质酸或透明质酸盐或者交联透明质酸或者交联透明质酸盐，止痛剂包括罗哌卡因、布比卡因、左旋布比卡因、利多卡因等局部麻醉药或者这些局麻药的组合，助分散剂可为氯已定、吐温系列、油酸或者油酸钠等，助悬剂可包括甘油、纤维素类、泊洛沙姆系列、透明质酸类物质等，该混悬制剂主要用于烧伤、烫伤或者由爆炸、溃疡等引起的创面，临床主要特点为快速镇痛、伤口表面快速成膜，促进伤口快速愈合，目前主要的给药方式主要为喷洒、涂抹、涂敷。

Description

可温变性无痛纳米磺胺嘧啶金属化合物透明质酸的混悬制剂

技术领域

本发明为一类磺胺嘧啶金属化合物，特别是可温变性无痛纳米磺胺嘧啶银或者磺胺嘧啶锌透明质酸混悬制剂的配方，该无痛纳米磺胺嘧啶金属化合物透明质酸混悬制剂主要用于烧伤、烫伤、爆炸以及机械性损伤如擦伤等引起的开放性创面恢复治疗。

背景技术

烧伤、烫伤、爆炸或者机械性损伤致使皮肤表面被损坏，失去了对组织的保护能力，为细菌感染创造了便利的条件，且大量组织液的渗出又为细菌增殖提供了很好的环境，若对受伤部位的治疗不及时，则很容易导致伤口的一系列病理生理变化，使伤情更为复杂和严重，从而增加了创伤的并发症、病死率和致残率。因此，临床治疗以抗感染、止痛、促进上皮组织愈合为主要目标。

目前，市场上主要的磺胺嘧啶金属化合物有两类，即磺胺嘧啶银与磺胺嘧啶锌，特别是磺胺嘧啶银，它是治疗烫伤、烧伤领域一线药物，该药物遇体液后可缓慢分解为磺胺嘧啶和银离子，磺胺嘧啶与对氨苯甲酸竞争性作用于细菌体内的二氢叶酸合成酶，从而阻止细菌以对氨苯甲酸作为原料合成四氢叶酸，进而抑制细菌蛋白质的合成。此外，银离子能与细菌体内的脱氧核苷酸相结合，从而起到抗菌作用，用于预防和治疗Ⅱ度、Ⅲ度烧伤或者烫伤继发的创面感染。磺胺嘧啶银不仅可用于烧烫伤创面的抗感染，还可促使创面干燥、结痂和促进愈合。该药同时具有磺胺嘧啶的抗菌作用和银盐的收敛作用。磺胺嘧啶银抗菌谱广，对大多数革兰阳性菌和阴性菌有良好的抗菌活性，抗菌作用不受脓液中对氨苯甲酸的影响，抗铜绿假单胞菌作用显著强于磺胺米隆。

此外，磺胺嘧啶锌遇体液后也可分为磺胺嘧啶和锌离子，磺胺嘧啶对大多数革兰阳性菌、革兰阴性菌、酵母菌和其他真菌均有良好抗菌作用，且不为对氨基苯甲酸所拮抗，其次，锌因能破坏细菌的DNA结构，亦具有抑菌作用。烧伤患者体内锌大量的丧失，使用本品可补偿体内锌损失，并增强机体抵抗感染和创面愈合能力。

目前，临床上使用的磺胺嘧啶银、磺胺嘧啶锌制剂主要为乳膏剂、软膏剂、散剂以及目前临床上现配现用的混悬剂等，这些制剂均存在一定的缺陷，例如：药物穿透能力差、创面保湿能力不足、给药时刺激性强、药效维持时间短、给药剂量不易控制、若局部药物过量时易引起皮疹、皮炎、肌肉疼痛甚至亚中毒等诸多问题。

发明人选用人体组织相容性较好的药用辅料，同时添加相应的麻醉性镇痛剂，将磺胺嘧啶银、锌制成具有一定粘度、高药效并且使用时具有很好镇痛作用的纳米混悬制剂，旨在克服现有制剂的不良缺陷。这些辅料主要有泊洛沙姆、透明质酸或其盐，可包括其钠盐、锌盐、银盐、羧甲基纤维素以及甘油、聚乙二醇等，其中，泊洛沙姆又称普朗尼克，为聚氧乙烯-聚氧丙烯醚嵌段共聚物，它是一类新型的高分子非离子表面活性剂，也是目前市场上一类新兴的药用辅料，其水溶液均具有特殊的反温度凝胶性质(随分子量的增加温变凝胶性质越明显)、在体缓慢降解的特性、无热源特性、无刺激性质、组织相容性好等特性；透明质酸类物质、甘油是目前市场上较普遍的药用辅料，刺激性低、组织相容性好并且具有很好的保湿型，也是目前市场主流的美容用品辅材。

目前，国内、国际专利中有关磺胺嘧啶银、锌制剂较少，包括不同材质的凝胶制剂、乳膏剂或者粉剂，且均为相应的普通制剂，其中，上海建华精细生物有限公司的专利《一种复方透明质酸磺胺嘧啶银凝胶的制备方法》，专利号为：200810200476.4，单纯的将透明质酸钠和磺胺嘧啶银制成普通凝胶制剂，该制剂动物实验中呈现诸多缺点，本专利所构建的制剂为可温变性的无痛纳米制剂(优选喷雾型)，与简单的将透明质酸钠和磺胺嘧啶银混合制成凝胶制剂有极大不同，该制剂的开发为烧伤领域纳米制剂增加新成员。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种高效、长效、使用携带方便的可温变性无痛纳米磺胺嘧啶金属化合物透明质酸混悬制剂。

本发明所述的制剂，主要由磺胺嘧啶金属化合物、止痛剂、助分散剂、助悬剂、透明质酸类物质、溶剂组成。

其中，磺胺嘧啶金属化合物为磺胺嘧啶银、磺胺嘧啶锌或二者混合物。磺胺嘧啶金属化合物的平均粒径在3000nm以下，优选为1400nm以下，较优选为50-1200nm，进一步优选的在平均粒径在100-900nm之间，特别是平均粒径在200-800nm之间时，制剂具有很好的稳定性，长期低温静置后具有很好的再分散性。

本发明所述的制剂，由以下成分制：

优选的，本发明的制剂，由以下成分制成：

其中，透明质酸类物质为交联透明质酸类物质，可以是不同来源、不同交联剂修饰的不同交联度的网状透明质材料，透明质酸类物质包括透明质酸及其盐，特别是目前临床上已使用的钠盐、锌盐、银盐。较优选的为透明质酸或其钠盐。

透明质酸类物质为皮肤主要成分之一，其制剂中的主要作用为促使伤口的愈合，减少药物对开放性伤口的刺激，其在高浓度时1-5％时同时具有助悬剂作用。

制剂中所使用的透明质酸类物质平均分子量为30-300万道尔顿。

其中，止痛剂主要为局部麻醉剂，包括利多卡因、布比卡因、普鲁卡因、依替卡因、罗哌卡因、丁卡因或者地布卡因，可以是其游离碱，也可以是其相应的盐。

较优止痛剂选自：利多卡因、布比卡因、左布比卡因、普鲁卡因、罗哌卡因、丁卡因其中之一、两种或两种以上的混合物。

最优选的止痛剂是布比卡因、左布比卡因、罗哌卡因其中之一、两种或两种以上的混合物。

其中，助分散剂选自：吐温系列(主要包括：吐温20、吐温21、吐温40、吐温60、吐温61、吐温80、吐温81、吐温85)；司盘系列(主要包括：司盘20、司盘60、司盘80)；醋酸氯已定，油酸或油酸钠，助分散剂可以是其中之一、两者或两者以上的组合物。

较优选的助分散剂选自：吐温20、吐温80、醋酸氯已定之一、两者或两者以上的组合物。

其中，助悬剂选自：纤维素：其包括羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素、甲基纤维素；泊洛沙姆：其包括泊洛沙姆188、泊洛沙姆407；PG系列：平均分子量300-6000之间的聚乙二醇、甘油、透明质酸类物质，助悬剂可以是其中之一、两者或两者以上的混合物。

优选的助悬剂选自：羧甲基纤维素、甲基纤维素、甘油、泊洛沙姆188、泊洛沙姆407、透明质酸类物质、平均分子量300-6000之间的聚乙二醇之一、两者或两者以上的混合物。

最优选的混悬剂选自：

(1)、泊洛沙姆188、泊洛沙姆407之一或者二者的混合物；

(2)、泊洛沙姆188、泊洛沙姆407之一或者二者的混合物与其它混悬剂的混合物，其它混悬剂包括：甘油、平均分子量在300-6000之间的聚乙二醇、透明质酸类物质。

可温变性无痛纳米磺胺嘧啶金属化合物透明质酸混悬制剂所用分散介质为水，可以是纯化水，也可以是注射用水、生理盐水以及等渗磷酸盐缓冲液(pH为4-10)。

本发明可温变性无痛纳米磺胺嘧啶金属化合物透明质酸混悬制剂的制备方法为常用的球磨法和空气粉碎技术，此类制备方法应用较为普遍，在此不再详细叙述，主要参数在制备过程中予以说明。

本发明的可温变性无痛纳米磺胺嘧啶金属化合物透明质酸混悬制剂适用范围及部位包括烧伤、烫伤或者由爆炸、溃疡等引起的特殊开放创面，也包括割、切、刺等机械性方式引起的创面。

本发明的可温变性无痛纳米磺胺嘧啶金属化合物透明质酸混悬制剂给药方式主要为喷洒、涂抹、涂敷。

本发明的可温变性无痛纳米磺胺嘧啶金属化合物透明质酸混悬制剂用途为抗感染、镇痛、促进伤口快速愈合。

本发明的可温变性无痛纳米磺胺嘧啶金属化合物透明质酸混悬制剂为外用制剂，可以是喷雾剂、气雾剂、凝胶剂或者液体涂膜剂。

本发明的可温变性无痛纳米磺胺嘧啶金属化合物透明质酸混悬制剂载药器具可以是西林瓶、喷雾瓶、气雾瓶、安瓿、药用不透光塑料/玻璃瓶、预灌封注射器。

本发明的有益效果主要体现在以下几个方面：

1、本发明可温变性无痛纳米磺胺嘧啶金属化合物透明质酸混悬制剂，主要将磺胺嘧啶金属化合物制成纳米级产物，同时配备具有良好组织相容性的辅料，在使用时，可以提高磺胺嘧啶金属合物的穿透力与生物利用度，降低并明确给药量，减少不良反应的发生，延长药物在体作用时间。

2、本发明涉及的可温变性无痛纳米磺胺嘧啶金属化合物透明质酸混悬制剂，其中透明质酸类物质可以是透明质酸或其钠盐，透明质酸类物质在低浓度时，其可促进皮肤组织的愈合及伤口的修复，透明质酸类物质在高浓度时，其不仅可促进皮肤组织的愈合及伤口的修复，同时具有处方中的助悬剂作用，若制剂中的透明质酸类物质为透明质酸锌盐、银盐时，制剂遇到体液时所游离出的锌离子、银离子具有一定的抑菌和补充体内锌盐损失的作用，同磺胺嘧啶银、锌金属化合物具有协同作用。

3、本发明在制剂中采用了一定量的局部麻醉剂作为镇痛药，降低了伤口敷药时的痛苦和在患者恢复过程中的瘙痒等不适感，有利于伤口的愈合。

4、本发明涉及的可温变性无痛纳米磺胺嘧啶金属化合物透明质酸混悬制剂，当助悬剂为泊洛沙姆或含泊洛沙姆的混合物时，制剂具有很好的温变性能，低温时具有很好的流动性，可以喷雾形式附着于伤口上形成一层保护性薄膜，可预防伤口感染并加速伤口愈合。

5、本发明涉及的无痛纳米磺胺嘧啶金属化合物透明质酸混悬制剂，使用方式多样并且方便，可通过滴上、喷洒、涂抹、涂敷等途径实施到患处。

6、本发明涉及的可温变性无痛纳米磺胺嘧啶金属化合物透明质酸混悬制剂，制备工艺简单，球磨技术和空气粉碎技术成熟，无需特殊设备。

7、动物实验结果表明，磺胺嘧啶银和透明质酸钠普通凝胶制剂与本制剂相比较具有以下明显差异：

7.1、给药时，纳米制剂在体附着时间比普通凝胶制剂明显长，纳米制剂附着于动物伤口上迅速凝胶化，与等浓度不含泊洛沙姆的普通制剂相比较不易流动，因此，在治疗效果上有差异。

7.2、普通凝胶制剂伤口涂抹，动物挣扎厉害，甚至用爪剥去伤口表面药物，临床顺应性较差，纳米制剂给药方式更为便捷，伤口直接低温喷雾涂抹，动物顺应性好，提示纳米制剂中的局部麻醉药会立即阻断伤口附近神经，提高动物给药舒适感。

7.3、给药时，纳米制剂低温时(4℃)轻摇易均匀分散，而等浓度的普通制剂则易聚成小团，提示可能是纳米制剂药物颗粒小并且有助分散剂的缘故。

7.4、抑菌试验显示，纳米制剂与等浓度的普通制剂相比较，抑菌作用更强，其原因可能为纳米制剂药物颗粒小易析出并且与菌液环境的相对接触面更大。

7.5、特别重要的是，达到同样的甚至更好的治疗效果，纳米制剂给药量与普通制剂相比较大幅降低并且具有一定的可控性，提示纳米制剂中磺胺嘧啶金属化合物给药后进入人体血液循环药量明显较少，安全性较高。

附图说明

附图为具体实施方式中第三个实验：发明制剂中主药特性研究中的粒径分布图

其中，

图1、主药为磺胺嘧啶银的制剂，粒径分布图。

图2、主药为磺胺嘧啶锌的制剂，粒径分布图。

图3、主药为磺胺嘧啶银和磺胺嘧啶锌的混合物的制剂，粒径分布图。

具体实施方式

下面通过实施例进一步说明本发明。应该理解的是，本发明实施例的产品和制备方法仅仅是用于说明本发明，而不是对本发明的限制，在本发明的构思前提下对本发明产品和制备方法的简单改进都属于本发明要求保护的范围。除非另有说明，本发明中的“％”均是质量基准。

1、发明制剂粒径与球磨参数探讨

研究组方，制备方法：球磨法。

结果统计

注：1、粒径测定次数为3次求平均值进行统计，2、粒径分布：+标示大于平均粒径的百分比不大于10％，++标示大于平均粒径的百分比不大于20％，+++标示大于平均粒径的百分比不大于30％，3、黏度测定3次求平均值统计。

研磨时，研磨球粒径在0.5-5之间，转速在200-800转/分钟之间时，磺胺嘧啶银均可达到纳米级别平均粒径在340-900nm之间，粒径大小与首次研磨参数密切相关，与二次研磨参数无相关性。其中，当球磨珠粒径在1-2mm之间，转速在600-800转/分钟之间时研磨效果较好，平均粒径可达到340-580nm，若转速为1000转/分钟时，罐内温度过高可能引起药物变化。

结论：小规模研究时，研磨技术完全可以满足主药粒径的要求。

2、发明制剂粒径与高速气流粉碎技术参数探讨

技术研究组方，制备方法：气流粉碎法。

试验结果：

注：1、粒径测定次数为3次求平均值进行统计，2、粒径分布：+标示大于平均粒径的百分比不大于10％，++标示大于平均粒径的百分比不大于20％，+++标示大于平均粒径的百分比不大于30％，3、黏度测定3次求平均值统计。

气流粉碎技术规模性粉碎磺胺嘧啶银是可以达到制备纳米混悬剂的要求，在0.1-1.0kg·h-1范围内，随着加料量的增加，纳米粒子的粒径逐步增大，粒径分布比均为65％以上，制剂制备方法更为简洁易操作。

结论：规模性生产时，气流粉碎技术完全可以满足制剂对于粒径的要求。

3、发明制剂中主药特性研究

制剂方法：球磨法，转速为600转，氧化锆珠直径为1mm，制备量为30g。

处方组成

试验结果：

结论：实验效果见附图1-3所示，磺胺嘧啶银和磺胺嘧啶锌或二者混合物均可利用球磨法达到制剂粒径要求，其中，二者混合物效果略好。

4、助悬剂筛选研究(1)

制备方法：研磨法，转速：600转/分钟，氧化锆珠直径：1mm，制备量为25g。

处方组成

助悬剂数据统计

试验数据统计

注：1、粒径测定次数为3次求平均值进行统计，2、粒径分布：+标示大于平均粒径的百分比不大于10％，++标示大于平均粒径的百分比不大于20％，+++标示大于平均粒径的百分比不大于30％，3、黏度测定3次求平均值统计，温度为25℃。

结论：羟甲基纤维素钠、甲基纤维素、甘油、泊洛沙姆188、泊洛沙姆407、聚乙二醇300、聚乙二醇6000均可作为助悬剂，其中泊洛沙姆188、泊洛沙姆407略好，当交联透明质酸类物质用量较大时，也具有很好的助悬作用。

5、助悬剂筛选研究(2)

制剂制备方法如4所示，制备量为50g。

测定方法：将混悬剂放于量筒中，混匀，测定混悬剂的总容积V0，静置一定时间后,观察沉降面不再改变时沉降物的容积Vu，其沉降容积比F为:F＝(Hu/H0)×100％，沉降容积比也可用高度表示，H0为沉降前混悬液的高度，Hu为沉降后沉降面的高度。F值愈大混悬剂愈稳定。F值在1～0之间。混悬微粒开始沉降时，沉降高度Hu随时间而减小。

不同助悬剂制剂沉降容积比测定结果(室温)

结果显示：甲基纤维素、羟甲基纤维素钠、交联透明质酸钠(100万分子量)、甘油、泊洛沙姆188、407均有一定的维持纳米磺胺嘧啶金属合物悬浮状态，其中甲基纤维素、羟甲基纤维素钠、交联透明质酸钠(100万分子量)、泊洛沙姆407效果略好。

6、助分散剂筛选研究

制剂制备方法：研磨法，仪器：双螺旋高速球磨机，转速：600转/分钟，氧化锆珠直径：1mm，制备量为25g。

处方组成

助分散剂数据统计

测定结果

注：1、粒径测定次数为3次求平均值进行统计，2、粒径分布：+标示大于平均粒径的百分比不大于10％，++标示大于平均粒径的百分比不大于20％，+++标示大于平均粒径的百分比不大于30％，3黏度测定3次求平均值统计。

7、发明制剂温变性能探索(泊洛沙姆单独使用时)

制剂制备方法：研磨法，仪器：双螺旋高速球磨机。转速：600转/分钟，氧化锆珠直径：1mm，制备量为25g。

处方组成

注：制剂组方中泊洛沙姆为凝胶黏度调节剂同时也为制剂中的助悬剂。

处方中泊洛沙姆温变性能研究统计

实验结果统计(n＝6)

结果显示：

制剂中泊洛沙姆温变性能比较显著，4℃时呈现液态，而37℃则为凝胶状态，

其中，泊洛沙姆188易呈现凝胶状态的浓度为40％(W/W)；泊洛沙姆407易呈现凝胶状态的浓度为20％(W/W)。

8、发明制剂温变性能探索(泊洛沙姆407和188混用时)

制剂制备方法：研磨法，仪器：双螺旋高速球磨机。转速：600转/分钟，氧化锆珠直径：1mm，制备量为25g。

处方组成

注：制剂组方中泊洛沙姆为凝胶黏度调节剂同时也为制剂中的助悬剂。

处方中泊洛沙姆温变性能研究统计实验结果统计(n＝6)

结果显示：制剂中泊洛沙姆188与泊洛沙姆407合用时，在温变性方面具有协同作用。

9、发明制剂镇痛效果测定

制备方法：研磨法，仪器：双螺旋高速球磨机，转速：600转/分钟，氧化锆珠直径：1mm，制备量为25g。

处方组成

镇痛剂数据统计

镇痛效果测定试验：Wistar大白鼠52只，雌雄各半，体重250±10g，烫伤前1d背部脱毛，取出4只设定为空白对照组，其余大鼠造模当天采用2.5％戊巴比妥钠(35mg/kg)腹腔注射麻醉，90℃热水浸烫20s制成10％体表面积深Ⅱ度烫伤模型，圆形伤口直径为1.5cm，在其伤口边缘均匀标记4点。待动物恢复知觉后，在其以消毒后的电子刺痛仪测定疼痛指数并记录，依照疼痛指数将大鼠随机分12组，每组4只，其中，1组为阴性对照组，其余11组为给药组，每只大鼠给药重量为1g，利用电子刺痛仪分别记录给药后2h、4h、8h、24h、28h的痛阈值并记录。

试验结果统计

结果：不同种类的局部麻醉药都具有一定的镇痛效果，其中罗哌卡因、布比卡因效果较好。

10、发明制剂伤口愈合试验研究

制剂制备方法：研磨法，仪器：双螺旋高速球磨机，转速为600转，氧化锆珠为1mm，制备量：30g。

制剂组方列表1：不同规格磺胺嘧啶银纳米制剂对伤口愈合的影响

制剂组方列表2：不同规格磺胺嘧啶锌/银纳米制剂对伤口愈合的影响

制剂组方列表3：含不同分子量透明质酸物质、泊洛沙姆407的磺胺嘧啶银纳米制剂对伤口愈合的影响

制剂组方列表4：含不同规格泊洛沙姆的磺胺嘧啶银制剂对伤口愈合的影响

实验方案：健康日本白兔120只，体重3±0.5kg，雌雄不限，每组4只，依照上组方列表进行分组，分别为阴性对照组(不敷任何药物)、阳性对照组(磺胺嘧啶银粉剂)、给药组(不同种配方)，分4批次进行试验，实验前一周购入动物，单笼喂养，将大白兔背部毛剪短,用硫化钡-可溶性淀粉配制的脱毛剂脱毛，温热水冲洗干净，兔子经耳静脉注射2％戊巴比妥钠(30mg/kg)麻醉，在其背部选取直径为2cm的表皮，使用90±1℃恒温水浴烫15s致2度烫伤创面，30min后施加药物，给药量为磺胺嘧啶金属化合物普通粉，足量给药(每次约0.5-1g左右，少量脱落)/每次，纳米制剂给药组为2g(制剂)每次，普通制剂2g/次(制剂)每次，均匀涂于伤口表面，给药次数为1次/天，共给药10天，分别于首次给药后的0天、2天、4天、8天、12天对伤口愈合情况进行评分并进行统计，伤口愈合率以百分比表示。

实验结果

制剂组方列表1：不同规格磺胺嘧啶银纳米制剂对伤口愈合的影响结果统计

试验结果：

与模型组相比较，各磺胺嘧啶银制剂组伤口愈合较快；与普通磺胺嘧啶银粉组相比较，各纳米制剂组伤口愈合较好，并且随着制剂中磺胺嘧啶银浓度增加，伤口愈合速度增加，组方2、3、4各组同组方1相比较，伤口愈合速度略快，组方2、3、4之间无明显差异。

结果提示：

1、磺胺嘧啶银纳米制剂在治疗伤口愈合实验中，磺胺嘧啶银含量增加，伤口愈合速度增快，当磺胺嘧啶银浓度超过1％时，治疗效果呈现“饱和状态”，伤口愈合速度不再增加。

2、磺胺嘧啶银纳米制剂与普通制剂相比较，伤口愈合速度明显增加。

3、磺胺嘧啶银纳米制剂与普通制剂相比较，磺胺嘧啶银粉附着伤口时间较短，伤口易干燥并且颜色加深，而纳米制剂附着伤口时间相对较长、伤口较为湿润并且伤口表面颜色浅。

制剂组方列表2：不同规格磺胺嘧啶锌/银纳米制剂对伤口愈合的影响结果统计

试验结果：

普通磺胺嘧啶锌制剂、不同规格的纳米磺胺嘧啶锌制剂、不同规格纳米磺胺嘧啶锌/银制剂与模型组相比较伤口愈合较快，随着纳米制剂中磺胺嘧啶锌浓度的增加，伤口愈合速度相应的增加，纳米制剂“饱和”浓度为2％，纳米磺胺嘧啶锌/银混合物制剂与同等规格的纳米磺胺嘧啶锌制剂相比较，伤口愈合较快，这可能与银离子的杀菌能力有关，其次，试验现场观察显示，普通制剂给药时动物挣扎，且给药后动物用爪挠伤口药物，药物伤口附着时间短。

制剂组方列表3：含不同分子量透明质酸物质、泊洛沙姆407的磺胺嘧啶银纳米制剂对伤口愈合的影响结果统计

实验结果：

各组方纳米制剂与模型组相比较，均有很好的促伤口愈合作用，组方1、2、3相比较表明：透明质酸钠平均分子量对伤口愈合速度无明显影响，组内之间各时间点无明显差异。

组方1和4、2和5、3和6相比较显示：添加泊洛沙姆407的制剂对伤口愈合明显的促进作用并且在12天时呈现显著性差异，试验现场观察提示，添加泊洛沙姆407各组方制剂在伤口表面可形成明显的薄膜，制剂黏度增大，伤口附着时间明显增长。

制剂组方列表4：含不同规格泊洛沙姆的磺胺嘧啶银制剂对伤口愈合的影响结果统计

结果显示：与模型组相比较，含不同规格泊洛沙姆的磺胺嘧啶银制剂对伤口愈合均有促进作用，不同规格泊洛沙姆对伤口愈合速度无明显影响，试验现场观察显示，含较低浓度的泊洛沙姆给药时较为方便，但是制剂在伤口的粘附性与含高浓度的泊洛沙姆相比较略差。

11、不同粒径发明制剂伤口愈合试验研究

制剂制备方法：研磨法，仪器：双螺旋高速球磨机，转速为200，600转，氧化锆珠为0.5-5mm，每样品制备量：30g。

制剂组方列表：不同粒径的磺胺嘧啶银制剂对伤口愈合的影响

实验方案：健康日本白兔28只，体重3±0.5kg，雌雄不限，每组4只，分别为阴性对照组(不敷任何药物)、给药组(1-6不同种配方)实验前一周购入，单笼喂养，将大白兔背部毛剪短,用硫化钡-可溶性淀粉配制的脱毛剂脱毛，温热水冲洗干净，兔子经耳静脉注射2％戊巴比妥钠(30mg/kg)麻醉，在其背部选取直径为2cm的表皮，使用90±1℃恒温水浴烫15s致2度烫伤创面，给药组30min后施加药物，纳米制剂给药组为2g(制剂)每次，均匀涂于伤口表面，给药次数为1次/天，共给药10天，分别于首次给药后的0天、2天、4天、8天、12天对伤口愈合情况进行评分并进行统计，伤口愈合率以百分比表示。

试验结果统计

实验结果：

同模型组相比较，各制剂组伤口愈合速度明显增快，纳米制剂组1、2、3组同普通制剂组4、5、6相比较，伤口愈合速度较快并且呈现显著性差异，纳米制剂组1、2、3、4相比较，随着磺胺嘧啶银粒径的增加，治疗效果依次降低。

试验现场观察显示：组方4和组方5、6相比较，组方4给药时动物顺应性较好，组方5、6有动物抓、挠伤口现象；组方5与6相比较，组方5黏度较小，施加药物时，制剂伤口附着性较差，组方6持续时间较长；组方1-4与6相比较，组方1-4低温时流动相好，比较容易涂抹在伤口上并可立即成膜，而组方6敷药较为困难，并且动物挣扎剧烈。

12、不同粒径发明制剂抑菌试验研究

制剂研究组方如表实施例11所示；

研究浓度梯度如实验方案所示；

试验菌种：链球菌、大肠杆菌K88；

药敏试纸:每片药物含量:头胞他啶30μg,环丙沙星5μg,青霉素10μg；

试验样品：依照制剂试验组方、方法制备样品30ml备用；

实验过程：

1、供试菌悬液的制备：取大肠杆菌K88、链球菌菌株接种到LB培养基上,37℃培养24h,用接种环挑单菌到3ml LB液体培养基中,37℃、200r/min震荡培养制备菌悬液；

2、抑菌测试样品制备：制备直径为7mm的滤纸片，紫外照射灭菌，在超净工作台下，将不同组方的样品依照下表涂抹于滤纸片上；

涂抹剂量如下表所示：

3、不同粒径样品抑菌性比较：无菌操作,取100μL菌悬液均匀涂布于LB/SS平板,放置约30min后,直径为7mm的伤口敷料放在平板上,抑菌测试样品滤纸片放置平板上并同时放置药敏试纸放在平板上作为对照,37℃培养24h,用游标卡尺量出各抑菌圈的直径,每种样品重复3次取其平均值,观察抑菌圈的大小。

链球菌抑菌结果统计：

大肠杆菌K88抑菌结果统计：

统计结果显示：

随着粒径的变小，抑菌效果越好。

特别是，等剂量给药条件下，当制剂中磺胺嘧啶银粒径为200-800nm时，与未经研磨的普通制剂相比较，抑菌效果增强约80％以上；当制剂中磺胺嘧啶银粒径为1200nm时，与未经研磨的普通制剂相比较，抑菌效果增强约40％以上；而当制剂中磺胺嘧啶银粒径为3000nm时，与普通制剂相比较，抑菌效果略好但差异不明显，这可能与制剂中的局部麻醉药有关。

13、发明制剂促伤口愈合研究

制剂制备方法：研磨法，仪器：双螺旋高速球磨机，转速：500转，氧化锆珠：1mm，制备量：30g。

制剂组方统计

实验方案：Wistar大白鼠96只，雄性，体重250±10g。烫伤前1d背部脱毛，随机分为8组，每组12只，大鼠造模当天采用2.5％戊巴比妥钠(35mg/kg)腹腔注射麻醉，90℃热水浸烫20s制成10％体表面积深Ⅱ度烫伤模型，圆形伤口直径为1.5cm，待动物恢复知觉后30min开始给药，其中，1组为阴性对照组，1组为磺胺嘧啶银粉剂组，组方1组为普通制剂组，组方2-6为纳米制剂组，每只大鼠给药重量为1g，每天给药1次，共给药14次，分别于给药后的2天、4天、8天、14天分别处死动物3只。取背部烧伤部位部分皮肤组织粉碎匀浆，等渗PBS溶液稀释，流式细胞仪测定细胞周期分布，统计S期细胞分布百分比；酶联免疫法测定羟脯氨酸含量和免疫组化法测定EGF含量。

试验测定结果如下：

S周期分布结果统计(n＝3)

羟脯氨酸含量结果统计(μg/mg，n＝3)

bFGF阳性表达率结果统计(n＝3)

实验结果显示：各纳米给药组治疗效果明显优于阳性对照组、普通制剂组，三种测定因子变化趋势相同，给药后第8天测定值最高。

实施例1

制备方法：球磨法，制备体积为30g。

处方：

实施例2

制备方法：球磨法，制备体积为30g

处方：

实施例3

制备方法：球磨法，制备体积为30g

处方：

实施例4

制备方法：球磨法，制备体积为30g

处方：

实施例5

制备方法：球磨法，制备体积为30g

处方：

实施例6

制备方法：球磨法，制备体积为30g

处方：

实施例7

制备方法：球磨法，制备体积为30g

处方：

实施例8

制备方法：球磨法，制备体积为30g

处方：

实施例9

制备方法：球磨法，制备体积为30g

处方：

实施例10

制备方法：球磨法，制备体积为30g

处方：

实施例11

制备方法：球磨法，制备体积为30g

处方：

实施例12

制备方法：球磨法，制备体积为30g

处方：

实施例13

制备方法：球磨法，制备体积为30g

处方：

实施例14

制备方法：球磨法，制备体积为30g

处方：

实施例15

制备方法：球磨法，制备体积为30g

处方：

实施例16

制备方法：球磨法，制备体积为30g

处方：

实施例17

制备方法：气流粉碎技术，制备量为3000g

处方：

实施例18

制备方法：气流粉碎技术，制备量为5000g

处方：

实施例19

制备方法：气流粉碎技术，制备量为3000g

处方：

实施例20

制备方法：气流粉碎技术，制备量为5000g

处方：

Claims (16)

1.一种可温变性无痛纳米磺胺嘧啶金属化合物透明质酸混悬制剂，由以下成分制成：

其中，磺胺嘧啶金属化合物为磺胺嘧啶银、磺胺嘧啶锌或二者混合物，磺胺嘧啶金属化合物的平均粒径在1400nm以下；

其中，止痛剂选自：利多卡因、布比卡因、普鲁卡因、依替卡因、罗哌卡因、丁卡因或者地布卡因的一种或者两种以上的混合物；

其中，助分散剂选自：吐温20、吐温21、吐温40、吐温60、吐温61、吐温80、吐温81、吐温85、司盘20、司盘60、司盘80、醋酸氯已定、油酸或油酸钠中的一种或者两种以上的混合物；

其中，助悬剂选自：羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素、甲基纤维素、泊洛沙姆188、泊洛沙姆407、平均分子量300-6000之间的聚乙二醇、甘油中的一种或者两种以上的混合物；

其中，分散介质选自：纯化水、注射用水、生理盐水或者等渗的磷酸盐缓冲液。

2.根据权利要求1所述的制剂，其特征在于，其中磺胺嘧啶金属化合物的平均粒径选自50-1200nm之间。

3.根据权利要求2所述的制剂，其特征在于，其中磺胺嘧啶金属化合物的平均粒径选自100-900nm之间。

4.根据权利要求3所述的制剂，其特征在于，其中磺胺嘧啶金属化合物的平均粒径选自200-800nm之间。

5.根据权利要求1所述的制剂，由以下成分制成：

6.根据权利要求1所述的制剂，其特征在于，交联透明质酸选自：交联透明质酸钠、交联透明质酸锌、交联透明质酸银中的一种、两种或两种以上的混合物。

7.根据权利要求1所述的制剂，其特征在于，止痛剂选自：利多卡因、布比卡因、普鲁卡因、罗哌卡因、丁卡因其中之一、两种或两种以上的混合物。

8.根据权利要求1所述的制剂，其特征在于，止痛剂选自：罗哌卡因、布比卡因其中之一、两种或两种以上的混合物。

9.根据权利要求1所述的制剂，其特征在于，助分散剂选自：醋酸氯已定、吐温20、吐温80、司盘20、司盘80中的一种或以上的混合物。

10.根据权利要求1所述的制剂，其特征在于，助分散剂选自：醋酸氯已定、吐温20、吐温80其中之一、两种或两种以上的混合物。

11.根据权利要求1所述的制剂，其特征在于，助悬剂选自：洛沙姆188、泊洛沙姆407其中之一或者二者的混化合物、甘油、平均分子量300-6000的聚乙二醇之一、两者或两者以上的混合物。

12.根据权利要求1所述的制剂，其特征在于，助悬剂可选自：泊洛沙姆188、泊洛沙姆407其中之一或者二者的混化合物。

13.根据权利要求1所述的制剂，其特征在于，交联透明质酸平均分子量为30-300万道尔顿。

14.根据权利要求1所述的制剂，其特征在于，所述制剂为外用制剂。

15.根据权利要求1所述的制剂，其特征在于，所述制剂的剂型为喷雾剂、气雾剂、凝胶剂或者液体涂膜剂。

16.根据权利要求1所述的制剂，其特征在于，装载该制剂的药器具选自：喷雾瓶、气雾瓶、西林瓶、安瓿、预灌封注射器、药用不透光塑料瓶。