CN104012209B - 一种促进全缘叶绿绒蒿种子萌发的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种促进全缘叶绿绒蒿种子萌发的方法，首先将全缘叶绿绒蒿种子在30-40℃条件下烘10-15小时；然后再在-15～-10℃，湿度为70%～80%，黑暗条件下放置24-48小时；随后将种子放置于质量浓度为12-16%的聚乙二醇溶液中，保持温度为2-6℃，在黑暗条件下浸泡15-24小时；然后在10wt.%的氨水环境下浸泡2-4小时，然后用蒸馏水将种子表面清洗干净；再将种子浸泡在50-400mg/L的赤霉素溶液中处理12-18小时，然后用蒸馏水将种子表面清洗干净；最后种子在5-10℃，湿度为80-90%，黑暗的条件下发芽。本发明提供的促进全缘叶绿绒蒿种子萌发的方法在20天时发芽率达到了87%以上。
Description
技术领域
本发明属于种子萌发领域，具体涉及一种促进全缘叶绿绒蒿种子萌发的方法。
背景技术
全缘叶绿绒蒿Meconopsis integrifolia(Maxim.)Franch为一年生至多年生草本，产于青藏高原及周边地区，主要生长在海拔3200～3800m的高山草甸和灌丛中，作为经典藏药“吾巴拉”使用，具有清热解毒、消炎止痛等功效，用于治疗肺炎、肝炎、头痛、水肿等病症。
近年来由于生态破坏、群落退化等原因，野生资源濒临灭绝，人工种植是满足其用药需求的唯一途径，全缘叶绿绒蒿主要采用种子繁殖。据《西北植物学报》2008年第9期，石慧珍，刘明霞，许静等在《青藏高原高寒草甸罂粟科植物种子萌发特性研究》文章中报道，采用5℃、10℃、15℃、20℃、25℃条件下，将种子均匀放在玻璃培养皿中，培养皿底部垫有两层滤纸，每天加水一次，在黑暗条件下培养，5℃条件下培养60天后在室温下培养20天，结果表明，绿绒蒿种子只在 5℃时的萌发率为7.3%,其余温度均不萌发，因此无法满足大面积生产的需要。
目前常用于促进种子萌发的方式有以下几种：
第一，要选择籽粒饱满、新鲜种子，既为种子的萌发奠定了物质基础，又保证了种子有较高的发芽率。
第二，在催芽或播种前，进行晒种，促进种子加快终止休眠；也可以采用化学药剂处理，如用赤霉素（10mg/kg）、萘乙酸（10mg/kg）等打破种子休眠，提高种子的发芽率和发芽势。
第三，在生产上，为了减轻种皮的胶质透明层和木质厚壁细胞层对种子萌发的不利影响，常在催芽或播种时，先进行浸种，再搓去种皮。同时浸种则为种子的吸水膨胀提供了充足的水分条件，能缩短种子的萌发时间。
第四，在进行大量种子的催芽时，要经常翻动种子，改善种子的通气条件，保障所有的种子能够获得充足的氧气，促进种子萌发整齐一致，也能防止出现烂种现象。还可以散失种子自身活动所释放的热量，避免内部种子受到高温伤害。
第五，在催芽过程中，一般结合冲洗和翻动种子时给予一定的散射光照，每天可进行4～5次短时间的间歇光照。
第六，播种要浅，并要求保持表土湿润和疏松，以促使种子迅速萌发和子叶出土，以免种子在土壤中过分消耗体内养分，在芽未出土之前营养耗尽而死亡，或幼芽出土后生长不良。
但是，由于全缘叶绿绒蒿种子生长的特殊环境，因此目前还没有快速促进其种子萌发的有效手段，同时对于其人工培养育种的方法也鲜有报道。
由此可见，建立促进全缘叶绿绒蒿种子萌发的方法，为大田生产提供催芽技术对扩大其群体，保护其野生资源，维持其遗传多样性，以及规范化种植都有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于为了克服以上现有技术的不足而提供一种促进全缘叶绿绒蒿种子萌发的方法。
本发明是通过以下技术手段实现的：
一种促进全缘叶绿绒蒿种子萌发的方法，包括以下步骤：
（1）将全缘叶绿绒蒿种子在30-40℃条件下烘10-15小时；
（2）将步骤（1）烘后的种子在-15～-10℃，湿度为70%～80%，黑暗条件下放置24-48小时；
（3）将步骤（2）得到的种子放置于质量浓度为12-16%的聚乙二醇溶液中，保持温度为2-6℃，在黑暗条件下浸泡15-24小时；
（4）将步骤（3）浸泡后的种子放置于10wt.%的氨水中浸泡2-4小时，然后用蒸馏水将种子表面清洗干净；
（5）将步骤（4）清洗干净的种子浸泡在50-400mg/L的赤霉素溶液中处理12-18小时，然后用蒸馏水将种子表面清洗干净；
（6）将步骤（5）清洗干净的种子在10-15℃，湿度为80-90%，黑暗的条件下发芽。
所述的促进全缘叶绿绒蒿种子萌发的方法，在步骤（1）之前可以选择饱满且表面无杂质的全缘叶绿绒蒿种子。
所述的促进全缘叶绿绒蒿种子萌发的方法，步骤（3）中聚乙二醇可以为聚乙二醇2000。
所述的促进全缘叶绿绒蒿种子萌发的方法，步骤（3）中聚乙二醇溶液的质量浓度优选为15%，温度优选为5℃。
所述的促进全缘叶绿绒蒿种子萌发的方法，步骤（5）中赤霉素溶液浓度优选为100mg/ L。
本发明所提供的促进全缘叶绿绒蒿种子萌发的方法中，首先通过低温将种子烘干，在不破坏种子萌发能力的情况下时种子保持脱水的“饥饿”状态，然后再将其放置于低温高湿以及黑暗条件下促使种子自然吸收水分，经试验表明，采用这种方式会使种子进入萌发准备状态，并且开始迅速吸收水分；然后将种子置于聚乙二醇溶液中，种子会迅速吸胀，为萌发储备充足的水分，使用氨水能促使全缘叶绿绒蒿种子中酶原的活化，加速细胞的代谢，从而促使种子迅速萌发；然后在赤霉素溶液中浸泡处理会使种子进一步活化，促进萌芽。
通过本发明提供的促进全缘叶绿绒蒿种子萌发的方法进行全缘叶绿绒蒿种子萌发试验，结果表明，在6天时发芽率已经达到了60%以上，在20天时发芽率达到了87%以上，很好的解决了全缘叶绿绒蒿种子萌发困难，对萌发条件要求苛刻的问题，为大田生产提供了非常好的催芽技术，对扩大其群体，保护其野生资源，维持其遗传多样性，以及规范化种植都具有非常重要的意义。
具体实施方式：
以下实施例和对照例中使用的全缘叶绿绒蒿种子为采集当年野生的全缘叶绿绒蒿种子，用筛子去除杂质，选取净度为100%的种子进行试验。
实施例1
一种促进全缘叶绿绒蒿种子萌发的方法，包括以下步骤：
（1）将全缘叶绿绒蒿种子200粒，在30℃条件下烘15小时；
（2）将步骤（1）烘后的种子在-15℃，湿度为70%，黑暗条件下放置48小时；
（3）将步骤（2）得到的种子放置于质量浓度为12%的聚乙二醇2000溶液中，保持温度为6℃，在黑暗条件下浸泡2天；
（4）将步骤（3）浸泡后的种子放置于10wt.%的氨水中浸泡2小时，然后用蒸馏水将种子表面清洗干净；
（5）将步骤（4）清洗干净的种子浸泡在50mg/L的赤霉素溶液中处理12小时，然后用蒸馏水将种子表面清洗干净；
（6）将步骤（5）清洗干净的种子放置于种子发芽盒（15cm*15cm）中，每个发芽盒放置50粒，在15℃，湿度为90%，黑暗的条件下发芽。
实施例2
一种促进全缘叶绿绒蒿种子萌发的方法，包括以下步骤：
（1）将全缘叶绿绒蒿种子200粒，在36℃条件下烘13小时；
（2）将步骤（1）烘后的种子在-13℃，湿度为75%，黑暗条件下放置24小时；
（3）将步骤（2）得到的种子放置于质量浓度为16%的聚乙二醇2000溶液中，保持温度为2℃，在黑暗条件下浸泡2天；
（4）将步骤（3）浸泡后的种子放置于10wt.%的氨水中浸泡4小时，然后用蒸馏水将种子表面清洗干净；
（5）将步骤（4）清洗干净的种子浸泡在250mg/L的赤霉素溶液中处理18小时，然后用蒸馏水将种子表面清洗干净；
（6）将步骤（5）清洗干净的种子放置于种子发芽盒（15cm*15cm）中，每个发芽盒放置50粒，在13℃，湿度为80%，黑暗的条件下发芽。
实施例3
一种促进全缘叶绿绒蒿种子萌发的方法，包括以下步骤：
（1）将全缘叶绿绒蒿种子200粒，在35℃条件下烘12小时；
（2）将步骤（1）烘后的种子在-12℃，湿度为80%，黑暗条件下放置40小时；
（3）将步骤（2）得到的种子放置于质量浓度为15%的聚乙二醇2000溶液中，保持温度为5℃，在黑暗条件下浸泡3天；
（4）将步骤（3）浸泡后的种子放置于10wt.%的氨水中浸泡3小时，然后用蒸馏水将种子表面清洗干净；
（5）将步骤（4）清洗干净的种子浸泡在100mg/L的赤霉素溶液中处理15小时，然后用蒸馏水将种子表面清洗干净；
（6）将步骤（5）清洗干净的种子放置于种子发芽盒（15cm*15cm）中，每个发芽盒放置50粒，在10℃，湿度为85%，黑暗的条件下发芽。
实施例4
一种促进全缘叶绿绒蒿种子萌发的方法，包括以下步骤：
（1）将全缘叶绿绒蒿种子200粒，在40℃条件下烘10小时；
（2）将步骤（1）烘后的种子在-10℃，湿度为80%，黑暗条件下放置48小时；
（3）将步骤（2）得到的种子放置于质量浓度为16%的聚乙二醇2000溶液中，保持温度为2℃，在黑暗条件下浸泡2天；
（4）将步骤（3）浸泡后的种子放置于10wt.%的氨水中浸泡4小时，然后用蒸馏水将种子表面清洗干净；
（5）将步骤（4）清洗干净的种子浸泡在400mg/L的赤霉素溶液中处理12小时，然后用蒸馏水将种子表面清洗干净；
（6）将步骤（5）清洗干净的种子放置于种子发芽盒（15cm*15cm）中，每个发芽盒放置50粒，在15℃，湿度为90%，黑暗的条件下发芽。
将以上实施例中步骤（6）得到的待发芽种子进行持续发芽观察，以胚根长到种子一半长度为发芽指标，每两天观察统计一次，观察20天，计算种子发芽率，具体数据见表一。
表1实施例1-4中种子的发芽率
| 项目 | 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 实施例4 |
| 6天发芽率（%） | 60 | 66 | 68 | 63 |
| 12天发芽率（%） | 68 | 76 | 75 | 71 |
| 16天发芽率（%） | 79 | 85 | 88 | 82 |
| 20天发芽率（%） | 87 | 90 | 92 | 89 |
从以上结果可以看出，以上实施例处理得到的种子萌发率得到了相当显著的提高，在6天时发芽率已经达到了60%以上，在20天时发芽率达到了87%以上，同时可以看出实施例3中在第6天与第20天时发芽率最好，因此作为优选实施例。
对照例1
按照实施例3提供的促进全缘叶绿绒蒿种子萌发的方法进行试验，省去步骤（1）与步骤（2）直接进行聚乙二醇2000溶液的浸泡试验，步骤如下：
（1）将全缘叶绿绒蒿种子放置于质量浓度为15%的聚乙二醇溶液中，保持温度为5℃，在黑暗条件下浸泡3天；
（2）将步骤（1）浸泡后的种子放置于10wt.%的氨水中浸泡3小时，然后用蒸馏水将种子表面清洗干净；
（3）将步骤（2）清洗干净的种子浸泡在100mg/L的赤霉素溶液中处理15小时，然后用蒸馏水将种子表面清洗干净；
（4）将步骤（3）清洗干净的种子放置于种子发芽盒（15cm*15cm）中，每个发芽盒放置50粒，在10℃，湿度为85%，黑暗的条件下发芽。
对照例2
按照实施例3提供的促进全缘叶绿绒蒿种子萌发的方法进行试验，省去使用聚乙二醇2000溶液浸泡的步骤，过程如下：
（1）将全缘叶绿绒蒿种子200粒，在35℃条件下烘12小时；
（2）将步骤（1）烘后的种子在-12℃，湿度为80%，黑暗条件下放置40小时；
（3）将步骤（2）放置后的种子放置于10wt.%的氨水中浸泡3小时，然后用蒸馏水将种子表面清洗干净；
（4）将步骤（3）清洗干净的种子浸泡在100mg/L的赤霉素溶液中处理15小时，然后用蒸馏水将种子表面清洗干净；
（5）将步骤（4）清洗干净的种子放置于种子发芽盒（15cm*15cm）中，每个发芽盒放置50粒，在10℃，湿度为85%，黑暗的条件下发芽。
对照例3
按照实施例3提供的促进全缘叶绿绒蒿种子萌发的方法进行试验，省去用氨水浸泡的步骤，具体过程如下：
（1）将全缘叶绿绒蒿种子200粒，在35℃条件下烘12小时；
（2）将步骤（1）烘后的种子在-12℃，湿度为80%，黑暗条件下放置40小时；
（3）将步骤（2）得到的种子放置于质量浓度为15%的聚乙二醇2000溶液中，保持温度为5℃，在黑暗条件下浸泡3天；
（4）将步骤（3）得到的种子浸泡在100mg/L的赤霉素溶液中处理15小时，然后用蒸馏水将种子表面清洗干净；
（5）将步骤（4）清洗干净的种子放置于种子发芽盒（15cm*15cm）中，每个发芽盒放置50粒，在10℃，湿度为85%，黑暗的条件下发芽。
对照例4
按照实施例3提供的促进全缘叶绿绒蒿种子萌发的方法进行试验，省去在赤霉素溶液中浸泡的步骤，具体过程如下：
（1）将全缘叶绿绒蒿种子200粒，在35℃条件下烘12小时；
（2）将步骤（1）烘后的种子在-12℃，湿度为80%，黑暗条件下放置40小时；
（3）将步骤（2）得到的种子放置于质量浓度为15%的聚乙二醇2000溶液中，保持温度为5℃，在黑暗条件下浸泡3天；
（4）将步骤（3）浸泡后的种子放置于10wt.%的氨水中浸泡3小时，然后用蒸馏水将种子表面清洗干净；
（5）将步骤（4）清洗干净的种子放置于种子发芽盒（15cm*15cm）中，每个发芽盒放置50粒，在10℃，湿度为85%，黑暗的条件下发芽。
对照例5
平行设置3组全缘叶绿绒蒿种子样品，每组200粒，称重求得每组种子总重量，记为m，按照实施例3中的步骤（1）进行试验：将全缘叶绿绒蒿种子200粒，在35℃条件下烘12小时后取出，将每组种子样品称得总重量，记为m1，然后再按照实施例3中的步骤（2）进行试验：将步骤（1）烘干后的种子在-12℃，湿度为80%，黑暗条件下放置40小时，然后将每组种子样品的总重量进行称量，记为m2，经计算得到烘干后种子的平均失水率[（m-m1)/m]为8.9%；在-12℃，湿度为80%，黑暗条件下放置40小时后种子相对于烘干前种子的平均吸水率[（m2-m1)/m]为11.5%，说明经过步骤（1）与步骤（2）两部处理后，种子会迅速吸收水分。
平行设置3组全缘叶绿绒蒿种子样品，每组200粒，称重求得每组种子总重量，记为m3，将各组种子直接浸入水中，在-12℃，黑暗条件下放置40小时，然后将每组种子样品的总重量进行称量，记为m4，经计算得到种子的平均吸水率[（m4--m3）/ m3]为2.8%，说明将种子直接浸入水中后种子仍然保持钝化状态，不会迅速吸收水分。
对照例7
按照对照例6的方法进行试验，只将-12℃分别替换为0℃和室温25℃，最后得到种子的平均吸水率为2.7%和3.1%，与对照例6相比没有明显变化，说明种子仍然处于钝化状态，不会迅速吸收水分。
对以上对照例1-4按照与实施例相同的发芽指标及发芽时间，得到的各对照例发芽率情况见表2。
表2 对照例1-4中全缘叶绿绒蒿种子的发芽率
| 项目 | 对照例1 | 对照例2 | 对照例3 | 对照例4 |
| 6天发芽率（%） | 8 | 28 | 15 | 27 |
| 12天发芽率（%） | 19 | 42 | 22 | 41 |
| 16天发芽率（%） | 28 | 58 | 33 | 57 |
| 20天发芽率（%） | 36 | 63 | 42 | 71 |
从以上对照例的发芽率数据可以看出，对照例1中省去了将全缘叶绿绒蒿种子先进行低温烘干，然后再在低温、黑暗以及高湿的条件下放置的步骤以后，种子的发芽率较低，20天后发芽率只有36%，同时结合对照例5、对照例6以及对照例7可以看出，全缘叶绿绒蒿种子在经过低温烘干后，再在合适的条件下，种子就会迅速吸收水分，原因可能是由于种子在烘干后，处于“饥饿”状态，在合适的条件下就会迅速吸水，然后结束休眠，开始为萌发做准备；对照例2中 省去了用聚乙二醇2000溶液浸泡的步骤，结果导致20天时发芽率为63%，与实施例相比差别仍然较大，但是比对照例1高，原因可能是聚乙二醇2000溶液浸泡会使种子进一步吸水达到吸胀状态，同时进一步促使种子萌发；对照例3中省去了氨水浸泡的步骤，结果表明种子发芽率在20天时达到了42%，表明氨水对全缘叶绿绒蒿种子发芽具有很好的促进作用，原因可能是氨水会促使全缘叶绿绒蒿种子中酶原的活化，加速细胞的代谢，从而促使种子迅速萌发；对照例4省去在赤霉素溶液中浸泡的步骤，结果表明在20天时种子发芽率达到了71%，为对照例中最高，但与实施例相比仍有差距，表明赤霉素溶液可以起到促进种子进一步萌发的作用。
综合以上所述，本发明提供的促进全缘叶绿绒蒿种子萌发的方法中，各步骤均在促进全缘叶绿绒蒿种子萌发的过程中起到了重要的作用，其中步骤（1）和步骤（2）以及步骤（4）对促进全缘叶绿绒蒿种子的萌发尤为关键。因此，本发明很好的解决了全缘叶绿绒蒿种子萌发困难，对萌发条件要求苛刻的问题，为大田生产提供了非常好的催芽技术，对扩大其群体，保护其野生资源，维持其遗传多样性，以及规范化种植都具有非常重要的意义。
Claims (4)
1.一种促进全缘叶绿绒蒿种子萌发的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将全缘叶绿绒蒿种子在30-40℃条件下烘10-15小时；
（2）将步骤（1）烘后的种子在-15～-10℃，湿度为70%～80%，黑暗条件下放置24-48小时；
（3）将步骤（2）得到的种子放置于质量浓度为12-16%的聚乙二醇溶液中，保持温度为2-6℃，在黑暗条件下浸泡15-24小时；所述聚乙二醇为聚乙二醇2000；
（4）将步骤（3）浸泡后的种子放置于10wt.%的氨水中浸泡2-4小时，然后用蒸馏水将种子表面清洗干净；
（5）将步骤（4）清洗干净的种子浸泡在50-400mg/L的赤霉素溶液中处理12-18小时，然后用蒸馏水将种子表面清洗干净；
（6）将步骤（5）清洗干净的种子在10-15℃，湿度为80-90%，黑暗的条件下发芽。
2.根据权利要求1所述的促进全缘叶绿绒蒿种子萌发的方法，其特征在于，在步骤（1）之前选择饱满且表面无杂质的全缘叶绿绒蒿种子。
3.根据权利要求1所述的促进全缘叶绿绒蒿种子萌发的方法，其特征在于，步骤（3）中聚乙二醇溶液的质量浓度为15%，温度5℃。
4.根据权利要求1所述的促进全缘叶绿绒蒿种子萌发的方法，其特征在于，步骤（5）中赤霉素溶液浓度为100mg/ L。
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