CN104007266A - 含有6-n-甲基赖氨酸残基的抗原在制备辅助诊断系统性红斑狼疮试剂中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了含有6-N-甲基赖氨酸残基的抗原在制备辅助诊断或筛查系统性红斑狼疮试剂或试剂盒中的应用。本发明的实验证明人IgM可以识别6-N-甲基赖氨酸,人IgM可以结合含6-N-甲基赖氨酸残基的任意多肽或蛋白质,6-N-甲基赖氨酸对识别6-N-甲基赖氨酸的IgM具有抑制作用,但是非甲基化修饰的赖氨酸却无抑制作用,大多数健康人存在较高水平的此种IgM抗体,而在系统性红斑狼疮患者中此种IgM抗体水平明显降低。含有6-N-甲基赖氨酸残基的抗原可用于制备辅助诊断或筛查系统性红斑狼疮试剂或试剂盒。
Description
技术领域
本发明涉及含有6-N-甲基赖氨酸(又名Nε-甲基-L-赖氨酸,N6-甲基-L-赖氨酸)残基的多肽或蛋白质抗原的新用途,特别涉及含有6-N-甲基赖氨酸残基的抗原在制备辅助诊断或筛查系统性红斑狼疮(SLE)试剂或试剂盒中的应用。
背景技术
蛋白质翻译后修饰如糖基化、磷酸化、泛素化、乙酰化、甲基化、SUMO化等等是重要的生命现象,影响着基因的表达调控、细胞的活化与抑制、蛋白质的结构和功能各个方面。和本发明相关的是赖氨酸的甲基化修饰,该修饰主要发生在细胞核的组蛋白中,少量的其他一些蛋白如p53,NFκB,STAT3等也会发生赖氨酸甲基化修饰。赖氨酸甲基化修饰有三种形式,即其侧链ε氨基的一、二、三甲基化,这些修饰与基因的沉默和活化密切相关,是近些年来表观遗传学领域的研究重点。各种组蛋白,即连接组蛋白(H1),形成核小体的核心组蛋白(H2A、H2B、H3和H4)以及一些组蛋白变体都可以发生赖氨酸甲基化修饰,其中组蛋白H3的第4、9、27、36和79位,H4的第20位赖氨酸甲基化修饰最为常见。
尽管蛋白质翻译后修饰具有重要的作用,但是各种修饰也带来蛋白质分子结构的变化,可为自身抗体提供新的表位。这些新表位可被T细胞或者B细胞的抗原受体识别,进而产生自身反应。不过迄今为止蛋白质翻译后修饰诱导产生自身抗体的研究报道非常少。Plaué等发现泛素化的组蛋白H2A和H2B是系统性红斑狼疮(SLE)的自身抗原。van der Vlag等报道凋亡相关的组蛋白修饰产生优势抗原H2BK12ac、H3K27me3、H4K8ac3、H4K12ac3和H4K16ac3,可被SLE患者和狼疮鼠的自身抗体识别。在一例患有盘状红斑狼疮和慢性淋巴细胞白血病的患者中发现了针对H3K9me3S10ph的抗体。至于蛋白质翻译后修饰在正常人群中是否能产生抗体以及所产生抗体的性质几乎没有报道。
免疫球蛋白M(IgM)是重要的免疫分子,参与了B细胞的发育、体液免疫反应和免疫调节各种过程。除了参与常规的免疫防御,IgM还有一个重要的功能,即阻止机体产生病理性的自身免疫反应。动物实验表明缺乏分泌型IgM但是可以分泌其他类型抗体的小鼠将自发产生IgG抗DNA抗体,且肾脏出现IgG和补体沉积。用IgM自身抗体处理的狼疮鼠产生蛋白尿的时间较晚,且肾脏受累较轻,生存期明显延长。仅含高水平的自身反应性IgM,但是缺乏自身反应性的IgG的狼疮鼠肾小球的病理状况可得到明显改善,小鼠生存期明显延长。在人类,已知IgM抗dsDNA抗体水平与肾小球肾病呈负相关。具 有高水平的IgM多反应性抗体和IgM抗磷脂酰胆碱抗体的SLE患者症状往往较轻。IgM抗心磷脂抗体和抗dsDNA抗体在肾脏未损伤的患者中水平较高。由此可见,健康人表达的自身反应性IgM不仅不伤害反而有益于机体。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供含有6-N-甲基赖氨酸残基的抗原的新用途。
本发明所提供的新用途是含有6-N-甲基赖氨酸残基的抗原在辅助诊断或筛查SLE试剂或试剂盒中的应用。
其中,所述的抗原可为含有6-N-甲基赖氨酸残基的多肽或蛋白质。当所述抗原为含有6-N-甲基赖氨酸残基的多肽时,该多肽可交联到载体蛋白上。
上述应用中,所述抗原为含有6-N-甲基赖氨酸残基的多肽或蛋白质或所述多肽与载体蛋白结合形成的交联物。
上述应用中,所述的含有6-N-甲基赖氨酸的多肽包括但是不限于表1中SEQ ID No.1-4中任一所示的多肽。
在本发明的实施方式叙述中,含有6-N-甲基赖氨酸残基的多肽为SEQ ID No.1-4中任一所示的多肽。
上述应用中,用于交联的所述载体蛋白可为不与人IgM特异结合的蛋白质,如牛血清白蛋白(BSA)等。
上述应用中,所述辅助诊断或筛查SLE试剂或试剂盒可为酶联免疫试剂或酶联免疫试剂盒。
SEQ ID No.1-4中任一所示的多肽也属于本发明的保护范围。
其中,SEQ ID No.1是由14个氨基酸残基组成的多肽,名称为GGKme,其第3位为6-N-甲基赖氨酸残基。SEQ ID No.2是由20个氨基酸残基组成的多肽,名称为sH31-19K9me,其第9位为6-N-甲基赖氨酸残基。SEQ ID No.3是由20个氨基酸残基组成多肽,名称为H31-19K9me,其第9位为6-N-甲基赖氨酸残基。sH31-19K9me和H31-19K9me的氨基酸组成一致但序列不同。SEQ ID No.4是由20个氨基酸残基组成多肽,名称为H31-19K4me,其第4位为6-N-甲基赖氨酸残基。
本发明还提供了辅助诊断或筛查SLE试剂或试剂盒。
本发明所提供的辅助诊断或筛查SLE试剂或试剂盒为含有6-N-甲基赖氨酸残基的的多肽或蛋白质以及所述多肽与载体蛋白结合形成的交联物,包括SEQ ID No.1-4中任一所示的多肽与载体蛋白结合形成的交联物。
其中,所述载体蛋白为不与人IgM特异结合的BSA,交联物用多肽-BSA表示。
在本发明工作中比较了健康人和SLE患者的IgM针对组蛋白H3氨基末端1-19位多肽的反应。发现大部分健康人存在针对第4位和第9位的赖氨酸一甲基化多肽 (H31-19K4me,H31-19K9me)的IgM自身抗体,进一步研究显示其表位实际上是6-N-甲基赖氨酸残基。本发明的实验证明人IgM可以识别6-N-甲基赖氨酸,人IgM可以结合含6-N-甲基赖氨酸残基的任意多肽。6-N-甲基赖氨酸对识别含6-N-甲基赖氨酸残基表位的IgM具有抑制作用,但是非甲基化修饰的赖氨酸却无抑制作用。此种与含6-N-甲基赖氨酸残基结合的IgM不与二甲基化或三甲基化赖氨酸反应。大多数健康人存在较高水平的此种IgM抗体,而在SLE患者中此种IgM抗体水平明显降低。因此,含有6-N-甲基赖氨酸的抗原可用于制备辅助诊断或筛查SLE试剂或试剂盒。
附图说明
图1为ELISA方法检测儿童和成人血清样本中IgM针对H31-19K4me和H31-19K9me的反应。
图中,H31-19K4me表示包被的是H31-19K4me-BSA,H31-19K9me表示包被的是H31-19K9me-BSA。pHC表示儿童健康对照血清(n=62),pSLE表示儿童SLE患者血清(n=62),aHC表示成人健康对照血清(n=75),aSLE表示成人SLE患者血清(n=75)。各组中的横线表示均值。健康对照与SLE患者间的P值以Student’s t检验计算。
图2为ELISA检测抗H31-19K9me IgM抗体针对各种多肽的交叉反应。
图中,H31-19表示包被的是H31-19-BSA,H31-19K4me表示包被的是H31-19K4me-BSA,H31-19K4me2表示包被的是H31-19K4me2-BSA,H31-19K4me3表示包被的是H31-19K4me3-BSA,H31-19K9me表示包被的是H31-19K9me-BSA,H31-19K9me2表示包被的是H31-19K9me2-BSA,H31-19K9me3表示包被的是H31-19K9me3-BSA,H31-19K9ac表示包被的是H31-19K9-BSA,sH31-19表示包被的是sH31-19-BSA,sH31-19K9me表示包被的是sH31-19K9me-BSA。
图3为ELISA检测用6-N-甲基赖氨酸或赖氨酸竞争IgM针对H31-19K9me和sH31-19K9me的反应。
图中,H31-19K9me表示包被的是H31-19K9me-BSA,sH31-19K9me表示包被的是sH31-19K9me-BSA。Kme表示的是用6-N-甲基赖氨酸抑制IgM抗体的反应,K表示的是用未修饰的赖氨酸抑制IgM抗体的反应。横坐标表示的是不同的赖氨酸或6-N-甲基赖氨酸的浓度。
图4为ELISA检测比较IgM针对H31-19、H31-19K9me和GGKme多肽的反应。
图中,H31-19表示包被的是H31-19-BSA,H31-19K9me表示包被的是H31-19K9me-BSA,GGKme表示包被的是GGKme-BSA。横坐标表示的是H31-19K9me珠纯化的IgM不同的稀释度。
图5为ELISA检测血清样本中IgM针对H31-19K9me和GGKme的反应。
图5中A包被的是H31-19K9me-BSA,图5中B包被的是GGKme-BSA。aHC表示成人健康对照血清(n=25),aSLE表示成人SLE患者血清(n=25)。各组中的横线表示均值。健康对照与SLE患者间的P值以Student’s t检验计算。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明,但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法,如无特殊说明,均为常规方法。下述实施例中的所有数据均用GraphPad Prism软件(Version 5.01)分析。P值以Student’s t检验计算,P<0.05时被认为数据间具有显著性差异。
下述实施例中所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。
实施例1.用H31-19K4me-BSA和H31-19K9me-BSA辅助诊断SLE
1.多肽及其多肽-BSA交联物的制备
该步骤制备了含有6-N-甲基赖氨酸残基的多肽H31-19K4me和H31-19K9me。H31-19K4me与H31-19K9me氨基酸序列相同但是赖氨酸甲基化修饰位置不同,H31-19K4me是第4位赖氨酸甲基化修饰,H31-19K9me是第9位赖氨酸甲基化修饰。
上述多肽由北京中科亚光公司采用固相多肽合成法合成,纯度≧90%。其序列如表1所示。每个多肽末端均包含一个半胱氨酸残基,并通过这个半胱氨酸残基与BSA交联形成交联物,即H31-19K4me-BSA和H31-19K9me-BSA。交联方法如下:2mg BSA溶于反应液(0.1M NaH2PO4,NaCl 0.15M,pH 7.2),终浓度为8.3mg BSA/ml。0.5mg Sulfo-SMCC(货号22322,美国Pierce公司)加入BSA溶液,室温放置1小时。加到PD10柱(货号17-0851-01,美国GE公司)上,用含5mM EDTA的反应液洗脱,接收BSA组分。将活化的BSA加到2mg多肽中,室温放置3个小时。最后透析至PBS中,-80℃保存。
表1.多肽序列
名称 | 序列 | 在序列表中的编号 |
GGKme | GGK(me)GGSGGSGGSGC | SEQ ID No.1 |
sH31-19K9me | KTRARAQTK(me)TGSAGKQKPRC | SEQ ID No.2 |
H31-19K9me | ARTKQTARK(me)STGGKAPRKQC | SEQ ID No.3 |
H31-19K4me | ARTK(me)QTARKSTGGKAPRKQC | SEQ ID No.4 |
H31-19 | ARTKQTARKSTGGKAPRKQC | |
H31-19K4me2 | ARTK(me2)QTARKSTGGKAPRKQC | |
H31-19K4me3 | ARTK(me3)QTARKSTGGKAPRKQC | |
H31-19K9me2 | ARTKQTARK(me2)STGGKAPRKQC | |
H31-19K9me3 | ARTKQTARK(me3)STGGKAPRKQC | |
H31-19K9ac | ARTKQTARK(ac)STGGKAPRKQC | |
sH31-19 | KTRARAQTKTGSAGKQKPRC |
[0037] 表1中的K(me)表示6-N-甲基赖氨酸,即MeLys,是一甲基化赖氨酸。K(me2)表示6-N-二甲基赖氨酸;K(me3)表示6-N-三甲基赖氨酸;K(ac)表示6-N-乙酰基赖氨酸。
2.患者及健康对照血清样本
儿童SLE患者(pSLE)的样本及资料收集于2001年至2012年,来自首都儿科研究所风湿免疫科,共62名(男性11名,女性51名;平均年龄10.69±3.12岁,年龄范围在2-14岁之间)。成人系统性红斑狼疮患者的样本(aSLE)及资料收集于2012年,来自北京协和医院肾内科,共75名(男性11名,女性64名;平均年龄35.00±11.19岁,年龄范围在19-67岁之间)。患者及健康对照的资料列于表2中。所有患者的发病情况都符合美国风湿学会所指定的分类标准中的至少四项,确诊为SLE患者。
健康对照的实验样本及资料来自于常规健康体检人群且在样本收集时未发现有任何风湿病。儿童健康对照共62例,成人健康对照共75例,具体信息见表2。
患者及健康对照的血清均来自于全血,使用前-80℃冷冻保存。
表2.SLE患者及健康对照样本的基本信息
3.检测人血清样本中的IgM辅助诊断SLE
将交联物H31-19K4me-BSA和H31-19K9me-BSA以1μg/ml BSA浓度分别溶于包被缓冲液中(含有15mM Na2CO3,35mM NaHCO3,pH 9.6),于96孔微孔板中每孔加入100μl,4℃包被过夜。次日用含有0.05%吐温-20的PBS缓冲液(PBST)冲洗板孔后,用200μl/孔含有2%BSA的PBST室温封闭板孔2小时。封闭完成后,血清样本用含有2%BSA的PBST以1:100稀释,每孔加入100μl,室温孵育1小时。PBST冲洗板孔,加入小鼠抗人IgM单克隆抗体KT16(ab110653,英国Abcam公司),室温孵育1小时。PBST冲洗板孔后,加入HRP(辣根过氧化物酶)标记的羊抗小鼠IgG(A2554,美国Sigma-Aldrich公司)室温孵育1小时。PBST冲洗板孔并加入HRP作用底物2,2’-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉磺酸(ABTS,美国Amresco公司),显色20分钟,于405nm波长处检测OD值。
用H31-19K4me-BSA对上述62例pSLE和75例aSLE患者血清进行检测,并用62例健康儿童(pHC)和75例健康成人(aHC)作为对照,结果表明无论对于儿童还是成人,大多数健康对照样本(pHC和aHC)对H31-19K4me-BSA产生了很强的反应,但pSLE和aSLE血清中抗H31-19K4me-BSA的IgM明显低于健康对照(P<0.0001)(图1中A和1中C)。若将抗H31-19K4me-BSA的IgM阳性值设为高于SLE患者和健康对照样本的均值,反之为IgM阴性。结果表明62例pHC血清样本中,有34例IgM阳性,28例IgM阴性;62例pSLE血清样本中,16例IgM阳性,46例IgM阴性;75例aHC的血清样本中,有44例IgM阳性,31例IgM阴性;75例aSLE患者的血清样本中,有14例IgM阳性,61例IgM阴性。说明54.8%的健康儿童和58.7%的健康成人为H31-19K4me-BSA IgM阳性,然而仅25.8%的pSLE和18.7%的aSLE患者为H31-19K4me-BSA阳性。
用H31-19K9me-BSA对上述62例pSLE和75例aSLE患者血清进行检测,并用62例健康儿童(pHC)和75例健康成人(aHC)作为对照,结果表明无论对于儿童还是成人,大多数健康对照样本(pHC和aHC)对H31-19K9me-BSA产生了很强的反应,但pSLE和aSLE血清中抗H31-19K9me-BSA的IgM明显低于健康对照(P<0.0001)(图1中B和1中D)。若将抗H31-19K9me-BSA的IgM阳性值设为高于SLE患者和健康对照样本的均值,反之为IgM阴性。结果表明62例pHC血清样本中,有47例IgM阳性,15例IgM阴性;62例pSLE血清样本中,13例IgM阳性,49例IgM阴性;75例aHC的血清样本中,有50例IgM阳性,25例IgM阴性;75例aSLE患者的血清样本中,有14例IgM阳性,61例IgM阴性。说明75.8%的健康儿童和66.7%的健康成人为H31-19K9me-BSA IgM阳性,然而仅21.0%的pSLE和18.7%的aSLE患者为H31-19K9me-BSA阳性。
另外,实验证实人IgM与BSA不发生特异反应。具体方法如下:96孔微孔板中加入用包被缓冲液稀释的BSA溶液,浓度为1μg/ml,4℃过夜。PBST冲洗板孔后,用含有2%BSA的PBST 200μl/孔室温封闭2小时。健康儿童血清样本用含有2%BSA的PBST以1:100稀释,100μl/孔室温孵育1小时。PBST冲洗板孔,加入小鼠抗人IgM单克隆抗体KT16,室温孵育1小时。PBST冲洗板孔后,加入HRP(辣根过氧化物酶)标记的羊抗小鼠IgG室温孵育1小时。PBST冲洗板孔并加入HRP作用底物ABTS,显色20分钟,于405nm波长处检测OD值。结果表明OD405nm检测值为0.193±0.03(n=6),说明人IgM与BSA不发生特异反应。
以上实验结果说明H31-19K4me-BSA和H31-19K9me-BSA可以作为辅助诊断或筛查SLE试剂,H31-19K4me和H31-19K9me可以用于制备辅助诊断或筛查SLE试剂。
实施例2.抗H31-19K9me IgM抗体的表位是一甲基化的赖氨酸
1、多肽及其多肽-BSA交联物的制备
该步骤制备了表1列出的11个多肽,即GGKme,sH31-19K9me,H31-19K9me,H31-19K4me, H31-19,H31-19K4me2,H31-19K4me3,H31-19K9me2,H31-19K9me3和H31-19K9ac。K后面的数字表示赖氨酸在多肽中的位置,me表示一甲基化修饰,me2表示二甲基化修饰,me3表示三甲基化修饰,ac表示乙酰化修饰。其中H31-19,H31-19K4me,H31-19K4me2,H31-19K4me3,H31-19K4me,H31-19K9me2,H31-19K9me3和H31-19K9ac具有相同的氨基酸序列但是H31-19没有修饰,其他赖氨酸修饰位置各异。sH31-19K9me与H31-19K9me组成完全一样,但是氨基酸序列完全不同。sH31-19与H31-19组成完全一样,但是氨基酸序列完全不同
上述多肽由北京中科亚光公司采用固相多肽合成法合成,纯度≧90%。其序列如表1所示。每个多肽末端均包含一个半胱氨酸残基,并通过这个半胱氨酸残基与BSA交联形成交联物,其方法与实施例1所述相同。
2.抗H31-19K9me抗体的提纯
将H31-19及H31-19K9me分别与Sepharose CL-4B珠子(货号17-0430-01,美国GE公司)进行交联,分别得到H31-19珠和H31-19K9me珠。交联好的珠子以50%的体积悬于含0.1%叠氮化钠的PBS中。
将实施例1中的成人健康对照血清样本混合,并用0.22μm的膜过滤。1.5ml过滤过的血清样本与10μl H31-19珠混合并于4℃混悬吸收10小时。用微型离心柱(美国Pierce公司)离心分离H31-19珠吸收过的血清。吸收过的血清再次与5μl H31-19珠混悬吸收,以确保抗H31-19的抗体被完全吸收。将H31-19珠吸收过的血清与H31-19K9me珠混合并于4℃混悬吸收10小时,混悬吸收过的H31-19K9me珠用PBS清洗两次并用1M的NaCl清洗5次后,用50μl 0.1M的甘氨酸(pH 2.5)洗脱两次,10min/次,收集洗脱液并立即用Tris·Cl中和,得到抗H31-19K9me的抗体。
3.H31-19K9me珠提纯的IgM抗体与含一甲基化赖氨酸残基的多肽发生特异性反应
将H31-19-BSA,H31-19K4me-BSA,H31-19K4me2-BSA,H31-19K4me3-BSA,H31-19K9me-BSA,H31-19K9me2-BSA,H31-19K9me3-BSA,H31-19K9ac-BSA,sH31-19-BSA和sH31-19K9me-BSA以1μg/mlBSA浓度分别溶于包被缓冲液中,于96孔微孔板中每孔加入100μl,4℃包被过夜。次日用PBST冲洗板孔后,用200μl/孔含有2%BSA的PBST室温封闭板孔2小时。封闭完成后,用H31-19K9me珠提纯的抗体用含有2%BSA的PBST以1:100稀释,每孔加入100μl,室温孵育1小时。PBST冲洗板孔,加入小鼠抗人IgM单克隆抗体KT16,室温孵育1小时。PBST冲洗板孔后,加入HRP标记的羊抗小鼠IgG,室温孵育1小时。PBST冲洗板孔并加入HRP作用底物ABTS,显色20分钟,于405nm波长处检测OD值。结果显示由H31-19K9me珠提纯的IgM抗体可以与一甲基化的H31-19K4me、H31-19K9me和sH31-19K4me反应,但是不与未修饰的H31-19和其它二甲基化、三甲基化以及乙酰化修饰的赖氨酸反应(图2)。
4.H31-19K9me珠提纯的IgM抗体对多肽的反应可被6-N-甲基赖氨酸抑制
将H31-19K9me-BSA和sH31-19K9me-BSA以1μg/ml BSA浓度分别溶于包被缓冲液中(含 有15mM Na2CO3,35mM NaHCO3,pH 9.6),于96孔微孔板中每孔加入100μl,4℃包被过夜。H31-19K9me珠纯化的抗体用含有2%BSA及不同浓度赖氨酸或6-N-甲基化赖氨酸的PBST以1:100稀释,室温混悬1小时后,抗体以100μl/孔加入96孔板中并室温孵育1小时。KT16及HRP标记的羊抗小鼠IgG用于检测IgM的结合情况,步骤同上。
结果如图3所示,表明6-N-甲基赖氨酸可以完全抑制IgM抗体与H31-19K9me和sH31-19K9me的反应,而赖氨酸并不具有该作用。
5、IgM抗体可以像结合H31-19K9me一样结合肽段GGKme
将H31-19-BSA,H31-19K9me-BSA和GGKme-BSA以1μg/ml BSA浓度分别溶于包被缓冲液中,于96孔微孔板中每孔加入100μl,4℃包被过夜。次日用PBST冲洗板孔后,用200μl/孔含有2%BSA的PBST室温封闭板孔2小时。封闭完成后,用H31-19K9me珠提纯的抗体用含有2%BSA的PBST以不同浓度稀释,每孔加入100μl,室温孵育1小时。PBST冲洗板孔,加入小鼠抗人IgM单克隆抗体KT16,室温孵育1小时。PBST冲洗板孔后,加入HRP标记的羊抗小鼠IgG,室温孵育1小时。PBST冲洗板孔并加入HRP作用底物ABTS,显色20分钟,于405nm波长处检测OD值。结果显示由H31-19K9me珠提纯的IgM抗体不能与未修饰的H31-19反应,但是可以像结合H31-19K9me一样结合GGKme多肽,因此该肽段中一甲基化的赖氨酸残基是IgM抗体唯一的表位(图4)。
以上实验结果说明一甲基化的赖氨酸残基是IgM抗体唯一的表位,可以用含一甲基化的赖氨酸残基的抗原检测健康人和SLE患者所含的特异性IgM的浓度。
实施例3.用GGKme-BSA辅助诊断SLE
将H31-19K9me-BSA和GGKme-BSA以1μg/ml BSA浓度分别溶于包被缓冲液中,于96孔微孔板中每孔加入100μl,4℃湿盒中包被过夜。次日用PBST冲洗板孔后,用200μl/孔含有2%BSA的PBST室温封闭板孔2小时。对实施例1中所述75例aSLE和aHC血清样本随机抽取的25例进行ELISA检测。结果表明血清样本也可以与GGKme-BSA反应且aSLE血清与健康对照血清对GGKme-BSA结合水平间的差异更大,这可能是由于血清对GGKme的结合比对H31-19K9me的结合具有更低的非特异性反应(图5)。将H31-19K9me-BSA的IgM阳性设为高于SLE患者和健康对照样本的均值,反之为IgM阴性。结果表明25例aSLE患者中,用H31-19K9me-BSA和GGKme-BSA检测,均有4例IgM阳性,21例IgM阴性。25例aHC对照中,用H31-19K9me-BSA检测,14例为IgM阳性,11例IgM阴性;用GGKme-BSA检测,16例为IgM阳性,9例IgM阴性。说明健康成人中56%为H31-19K9me-BSA IgM阳性,64%为GGKme-BSA IgM阳性。aSLE患者中16%为H31-19K9me-BSA阳性和GGKme-BSA阳性。
以上实验结果说明GGKme-BSA可以作为辅助诊断SLE试剂,GGKme可以用于制备辅助诊断和筛查SLE试剂。
Claims (8)
1.含有6-N-甲基赖氨酸残基的抗原在制备辅助诊断或筛查系统性红斑狼疮试剂或试剂盒中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:所述抗原为含有6-N-甲基赖氨酸残基的多肽或蛋白质或所述多肽与载体蛋白的交联物。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于:所述含有6-N-甲基赖氨酸残基的多肽为SEQ ID No.1-4中任一所示的多肽。
4.根据权利要求2或3所述的应用,其特征在于:所述载体蛋白为不与人IgM特异结合的蛋白质。
5.根据权利要求1-4中任一所述的应用,其特征在于:所述辅助诊断或筛查系统性红斑狼疮试剂或试剂盒为酶联免疫试剂或酶联免疫试剂盒。
6.SEQ ID No.1-4中任一所示的多肽。
7.辅助诊断或筛查系统性红斑狼疮试剂或试剂盒,其特征在于:所述试剂或试剂盒含有SEQ ID No.1-4中任一所示的多肽或所述多肽与载体蛋白结合形成的交联物。
8.根据权利要求7所述的试剂或试剂盒,其特征在于:所述载体蛋白为不与人IgM特异结合的蛋白质。
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