CN103998420A

CN103998420A - (s)2-n(3-o-(丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺的分离的立体异构形式

Info

Publication number: CN103998420A
Application number: CN201280060570.9A
Authority: CN
Inventors: E·卡普兰
Original assignee: Nova Wheat Co Ltd
Current assignee: Nova Wheat Co Ltd; Novaremed Ltd
Priority date: 2011-12-08
Filing date: 2012-12-06
Publication date: 2014-08-20
Anticipated expiration: 2032-12-06
Also published as: EP2788317A1; JP6411893B2; CN103998420B; WO2013084238A1; HUE048570T2; CA2856665C; US9381173B2; AU2012348529A1; EP2788317B1; IN2014MN00919A; CA2856665A1; JP2015500831A; JP2018021023A; US20140275270A1; ES2763946T3; DK2788317T3; AU2012348529B2; EP2788317A4; HK1201059A1

Abstract

本发明涉及化合物(S)2-N(3-O-(丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺的分离的立体异构形式。特别地，本发明涉及(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺在治疗疼痛中的用途。

Description

(S)2-N(3-O-(丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺的分离的立体异构形式

发明领域

本发明涉及化合物(S)2-N(3-O-(丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺的分离的立体异构形式。特别地，本发明涉及(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺在治疗或预防疼痛，特别是神经性疼痛中的用途。

发明背景

化合物2-N(3-O-(丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺在U.S.7,754,771中被公开，并且已经证明在治疗HIV-1感染方面是有效的。此化合物还已经在WO 2009/1099850、WO 2011/030105以及US2011/0086910中被公开用于治疗或预防疼痛和炎症。以前的关于此化合物的公开内容涉及外消旋体，该外消旋体包含所有四种对映体和非对映体，即(S，S)、(S，R)、(R，R)以及(R，S)。在邻近酰胺的手性位置含有S对映体的外消旋体被公开作为特别有利的实施方案。

疼痛是对多种刺激条件的多方面的或多维的、经验性的反应。疼痛被国际疼痛研究协会(IASP)定义为“与实际的或潜在的组织损伤相关的或依照此类损伤描述的令人不快的感觉和情感体验”。

疼痛可以是急性或慢性。急性疼痛通常由软组织损伤、感染和/或炎症以及其它原因引起。慢性疼痛可能没有明显的原因或可能由发展中的疾病或失衡引起。慢性疼痛被定义为疼痛疾病；它的起源、持续时间、强度以及具体的症状可以变化。此外，慢性疼痛可以被分为伤害性的或神经性的。伤害性疼痛包括组织损伤诱发的疼痛和炎症疼痛比如与关节炎有关的那种。伤害性疼痛已经通常通过施用非阿片类镇痛药或阿片类镇痛药来控制，所述非阿片类镇痛药比如乙酰水杨酸、三水杨酸胆碱镁、对乙酰氨基酚、布洛芬、非诺洛芬、二氟尼柳、以及萘普生；所述阿片类镇痛药包括吗啡、二氢吗啡酮、美沙酮、羟甲左吗喃、芬太尼、氧可酮、以及羟吗啡酮。神经性疼痛，因神经损伤而起的使人衰弱的慢性疼痛，以其慢性性质、痛觉过敏、或对无害刺激的异常的疼痛过敏(触诱发痛)为特征。痛觉过敏是对疼痛刺激的夸大反应。触摸痛是将正常刺激当作疼痛刺激的知觉(实例包括服装、暖空气或冷空气等等的接触)。神经性疼痛可以是对在手足中的神经损伤的继续，比如手臂、或更多的时候，腿。诱发事件可以包括创伤或截肢(例如，幻肢痛)。神经性疼痛可以因为药物治疗的副作用发生，例如，长春新碱或紫杉醇(Taxol^TM)，或可以以疾病病理学的组成部分的形式出现，例如1型糖尿病或2型糖尿病、带状疱疹、HIV-1感染、等等。通常，神经性疼痛不对鸦片剂或非甾族类抗炎药比如阿司匹林作出反应。当前建议的对神经性疼痛的药物包括抗癫痫药(例如，加巴喷丁、卡马西平、丙戊酸、托吡酯、苯妥英)、NMDA拮抗剂(例如，氯胺酮、右美沙芬)、局部利多卡因(用于疱疹后神经痛)、以及三环抗忧郁药(例如，氟西汀、舍曲林以及阿米替林)。

神经性疼痛的基本机制仍然有待确定。然而，最近已经提出属于Src家族激酶(SFK)中的成员的Lyn酪氨酸激酶在神经性疼痛的发病机理中起重要作用。Lyn表达在脊髓中受到小神经胶质的高度限制，并且其水平在神经损伤后被增加。已经显示出缺乏Lyn的小鼠在神经损伤后呈现出它们对触诱发痛的显著减弱的能力。得出的结论是神经性疼痛可能与Lyn酪氨酸激酶的上调有关(见Tsuda等，Glia，2008，56：50-8)。

针对神经性疼痛的当前可用的治疗仅具有低至中等的功效，并且多数患者仍然没有明显的疼痛缓解。对于患有神经性疼痛的数百万人以及对于患有其它类型疼痛的那些，没有足够的疼痛缓解代表着巨大的未满足的医疗需求，本发明满足了那种需求。

发明概述

本发明涉及式I化合物(S)2-N(3-O-(丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺的分离的立体异构形式。

特别地，本发明涉及所分离的对映体(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺用于治疗或预防疼痛，特别是神经性疼痛的用途。

本发明部分地基于意外的发现：基本上纯的对映体(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺(还被称为(S，S)对映体或E1)和(S)2-N(3-O-((R)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺(还被称为(S，R)对映体或E2)以相反的方式调节特异性酪氨酸激酶的活性。意外地发现(S，S)对映体激活蛋白酪氨酸激酶LynA和BLK，而(S，R)对映体抑制它们的活性。还意外地显示出(S，S)对映体在疼痛的动物模型中作为疼痛镇痛药是有效的，而(S，R)对映体在这些模型中显示为无效或不太有效。此外，与常用的镇痛剂加巴喷丁在施用之后不超过5小时的期间是有效的相比，(S，S)对映体的镇痛效果是长效的，因为它在施用之后超过24小时的期间有效。

根据第一方面，本发明提供呈基本上纯的形式的具有(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺的特定立体化学的式II化合物或其药学上可接受的盐或水合物。

根据第二方面，本发明提供呈基本上纯的形式的具有(S)2-N(3-O-((R)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺的特定立体化学的式III化合物或其药学上可接受的盐或水合物。

如本文所用并且除非另外指出，术语“基本上纯的”当被用以描述化合物的对映体时意指一种对映体基本上没有化合物的其它立体异构形式。代表性的基本上纯的对映体包括按重量计大于90％的化合物的一种对映体和按重量计少于10％的化合物的其它立体异构形式、优选地按重量计大于95％的化合物的一种对映体和按重量计少于5％的化合物的其它立体异构形式、更加优选地按重量计大于98％的化合物的一种对映体形式和按重量计少于2％的化合物的其它立体异构形式。如在本文所用的“其它立体异构形式”可以包括化合物2-N(3-O-(丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺的(S，S)、(S，R)、(R，S)以及(R，R)对映体形式或非对映体形式中的至少一种。

根据某些实施方案，具有式II的基本上纯的对映体((S，S)对映体)能够激活BLK和LynA酪氨酸激酶。根据其它实施方案，具有式III的基本上纯的对映体((S，R)对映体)能够抑制BLK和LynA酪氨酸激酶。意外地，(S，S)对映体对LynB酪氨酸激酶的活性没有影响，而(S，R)对映体抑制其活性。

根据第二方面，本发明提供用于治疗疼痛的治疗剂，该治疗剂包括作为活性成分的BLK和/或LynA酪氨酸激酶的活化剂。根据某些实施方案，疼痛是急性疼痛。根据某些其它的实施方案疼痛是慢性疼痛。根据某些实施方案慢性疼痛是伤害性疼痛。根据某些当前优选的实施方案，慢性疼痛是神经性疼痛。每种可能性代表本发明单独的实施方案。

根据某些实施方案，BLK和/或Lyn A酪氨酸激酶的活化剂是基本上纯的(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺或其药学上可接受的盐或水合物。

根据某些实施方案，神经性疼痛是选自下述的至少一种症状：在疱疹后神经痛中的神经性疼痛、在三叉神经痛中的神经性疼痛、在糖尿病性神经痛中的神经性疼痛、在癌痛中的神经性疼痛、在持续性术后疼痛或创伤后疼痛中的神经性疼痛、在痛觉过敏中的神经性疼痛、在触摸痛中的神经性疼痛、在开胸术后疼痛中的神经性疼痛、在CRPS中的神经性疼痛、在与多发性硬化相关的疼痛中的神经性疼痛、在AIDS中的神经性疼痛、在丘脑痛中的神经性疼痛、在由脊髓病引发的截瘫疼痛中的神经性疼痛、在痛性感觉缺失中的神经性疼痛以及在幻肢痛中的神经性疼痛。

根据第三方面，本发明提供药物组合物，所述药物组合物包括作为活性成分的BLK和/或LynA酪氨酸激酶的活化剂。每种可能性代表本发明单独的实施方案。根据某些实施方案，药物组合物包括基本上纯的(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或稀释剂。根据某些实施方案，药物组合物对治疗疼痛是有用的。根据某些实施方案，疼痛可以是急性或慢性。根据某些另外的实施方案，慢性疼痛可以是伤害性疼痛或神经性疼痛。

根据某些实施方案，药物组合物被配制成单位剂型。根据某些实施方案，单位剂型包括从0.1mg至500mg的基本上纯的(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺或其药学上可接受的盐或水合物。根据某些实施方案，药物组合物被配制用于口服给药。

根据另一方面，本发明提供用于治疗或预防需要其的受试者中的疼痛的方法，所述方法包括对受试者施用药物组合物，所述药物组合物包括作为活性成分的化合物，所述化合物包括基本上纯的(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺或其药学上可接受的盐或水合物。根据某些实施方案，本发明所述方法包括施用日剂量1.0mg至15g的活性成分。根据特定的实施方案，本发明所述的方法在单次施用所述药物组合物之后24小时的时期内提供镇痛作用。

本发明还涉及基本上纯的(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺或其药学上可接受的盐或水合物用于制备用于治疗或预防疼痛的药物的用途。根据某些实施方案疼痛是神经性疼痛。根据特定的实施方案，本发明所述的方法在单次施用所述药物组合物之后24小时的时期内提供镇痛作用。

从以下的附图和其优选实施方案的详细描述中，本发明将被更加充分地理解。

附图简述

图1示出使用甩尾试验平均延迟时间测量。研究组从左至右包括：溶媒(组1)；吗啡(组2)；3mg/kg的基本上纯的(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺(组3)；10mg/kg的基本上纯的(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺(组4)；20mg/kg的基本上纯的(S)2-N(3-O4(S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺(组5)以及10mg/kg的基本上纯的(S)2-N(3-O-((R)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺(组6)。*＝p＜0.01对溶媒；&＝p＜0.05治疗前对治疗后；^＝p＜0.05治疗前对治疗后。

图2示出使用甩尾测量的治疗后延迟时间和治疗前延迟时间之间的差别(秒)。研究组从左至右包括：溶媒(组1)；吗啡(组2)；3mg/kg的基本上纯的(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺(组3)；10mg/kg的基本上纯的(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺(组4)；20mg/kg的基本上纯的(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺(组5)以及10mg/kg的基本上纯的(S)2-N(3-O-((R)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺(组6)。*＝p＜0.01对溶媒；#＝p＜0.05对溶媒。

图3示出在研究过程期间所测量的不同研究组的平均组体重(第1天、第7天、第14天以及第21天)。研究组从左至右包括：溶媒(组1)；加巴喷丁(组2)；30mg/kg的基本上纯的(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺(组3)；15mg/kg的基本上纯的(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺(组4)；7.5mg/kg的基本上纯的(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺(组5)。

图4示出用于缩回手术过的左腿所需要的平均Von Frey力，所述平均Von Frey力在研究的第14天治疗后的2小时、5小时以及24小时测量和在研究的第21天在7天治疗后的2小时、5小时、24小时以及48小时测量。研究组从左至右包括：溶媒(组1)；加巴喷丁(组2)；30mg/kg的基本上纯的(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺(组3)；15mg/kg的基本上纯的(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺(组4)；7.5mg/kg的基本上纯的(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺(组5)。*p＜0.05对溶媒#p＜0.05治疗前对治疗后。

图5示出健康的右腿和手术过的左腿之间的差别(Δ)力，所述差别(Δ)力在研究的第14天治疗后的2小时、5小时以及24小时测量和在研究的第21天治疗后的2小时、5小时、24小时以及48小时测量。研究组从左至右包括：溶媒(组1)；加巴喷丁(组2)；30mg/kg的基本上纯的(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺(组3)；15mg/kg的基本上纯的(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺(组4)；7.5mg/kg的基本上纯的(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺(组5)。*p＜0.05对溶媒#p＜0.05治疗前对治疗后。

图6A-D示出由本发明的化合物对蛋白酪氨酸激酶、BLK、LynA、LynB以及Src的调节，以IC₅₀曲线和EC₅₀曲线的形式呈现。

图7A-C示出(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺和(S)2-N(3-O-((R)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺的手性分离，这使用与手性固定相结合的超临界流体色谱法(SFC)。A：E1和E2对映体的外消旋体；B：基本上纯的E1对映体；C：基本上纯的E2对映体。

详细描述

本发明涉及化合物(S)2-N(3-O-(丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺的分离的立体异构形式并且涉及其用途，所述用途用于治疗性调节激酶介导过程以及用于治疗疾病和疾病症状，特别是由某些激酶介导的那些。特别地，本发明涉及基本上纯的(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺治疗疼痛，优选地神经性疼痛的用途。

如在本文所用并且除非另外指出，术语“基本上纯的”当被用以描述化合物的对映体时意指一种对映体基本上没有化合物的其它立体异构形式。代表性的基本上纯的对映体包括按重量计大于约80％的化合物的一种对映体和按重量计少于约20％的化合物的其它立体异构形式、优选地按重量计大于约85％的化合物的一种对映体和按重量计少于约15％的化合物的其它立体异构形式、优选地按重量计大于约90％的化合物的一种对映体和按重量计少于约10％的化合物的其它立体异构形式、更优选地按重量计大于约95％的化合物的一种对映体和按重量计少于约5％的化合物的其它立体异构形式、更优选地按重量计大于约96％的化合物的一种对映体和按重量计少于约4％的化合物的其它立体异构形式、更加优选地按重量计大于约97％的化合物的一种对映体形式和按重量计少于约3％的化合物的其它立体异构形式、更加优选地按重量计大于约98％的化合物的一种对映体形式和按重量计少于约2％的化合物的其它立体异构形式以及最优选地按重量计大于约99％的化合物的一种对映体形式和按重量计少于约1％的化合物的其它立体异构形式。如在本文中所用的“其它立体异构形式”可以包括化合物2-N(3-O-(丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺的(S，S)、(S，R)、(R，S)以及(R，R)对映体形式或非对映体形式中的至少一种。

如在本文所用的术语“约”表示至多所示值的±10％，优选地至多±5％。

根据本发明的某些实施方案的分离的对映体可以通过本领域已知的方法作为外消旋体被合成，比如在US 7,754,771、US 7,642,290、US7,674,829或US 2011/0086910中描述的方法。该外消旋体可以通过本领域已知的用于分离手性化合物的方法被进一步分离。根据例示性的实施方案，对映体可以作为外消旋体被合成(包括(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺和(S)2-N(3-O-((R)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺)并且通过与手性固定相结合的超临界流体色谱法(SFC)被进一步地分离。特别地，(S，S)化合物和(S，R)化合物可以在RegisPack^TM柱即多糖涂覆的手性柱(具有三-(3，5-二甲基苯基)氨基甲酰基纤维素选择子)上被分离，所述手性柱通常用于范围广泛的外消旋体类型的对映体分离(图7A-C)。

根据某些实施方案，对映体可以被直接合成，例如使用方案1中描述的用于制备(S，S)对映体的方法。

(S，R)对映体可以相应地被合成，通过使(S)-OBn酪氨醇与(R)-甲磺酸酯反应以形成(S，R)-双-保护。

手性化合物合成过程中可能遇到的问题之一为在一个(或多个)合成步骤中发生外消旋化。此处第一次表明反应温度和原料的添加顺序在所形成产物的手性纯度方面起着非常重要的作用。还表明的是，外消旋化特别地发生在第一反应步骤，该步骤涉及将乳酸甲酯(S或R对映体)转化成2-苄氧基乳酸甲酯(S或R对映体)。根据某些实施方案，为了在用于制备(S，S)或(S，R)化合物的方法中减少外消旋化的发生，在第一反应步骤，苄基溴和乳酸甲酯在它们添加至碱溶液(例如氢化钠)之前被混合在一起。根据某些实施方案外消旋化的发生可以通过在低于室温的温度下进行反应来减少，优选地低于10℃，优选地低于5℃，优选地低于2℃，更优选地在低于-10℃的温度，最优选地在-15℃或更低的温度。根据某些确定的优选实施方案，最少的外消旋化(即＜1％外消旋化)通过使氢化钠在THF中在至少约-10℃的温度下制浆来获得，优选地在至少约-15℃的温度。(S)乳酸甲酯和苄基溴的混合物在至少约-10℃的温度下被添加至氢化钠溶液中，优选地在至少约-15℃的温度。

还已经首次发现，根据某些实施方案，涉及(S)-OBn-酪氨醇和甲磺酸酯(S或R对映体)的反应的反应步骤的收率可以通过使用DMF代替DMSO作为溶剂并且使用氢化钠作为碱代替叔丁醇钾而被增加至约15％，优选地至约20％，更优选地至约25％。每种可能性代表本发明的单独的实施方案。

本发明提供：治疗剂，其用于治疗或预防疼痛、优选地神经性疼痛，所述治疗剂包括(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺作为活性成分；药物组合物，其用于治疗或预防疼痛、优选地神经性疼痛，所述药物组合物包括治疗有效量的(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺和药学上可接受的载体；以及用于治疗或预防疼痛、特别地神经性疼痛的方法，所述方法包括施用药物组合物，该药物组合物包括治疗有效量的(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺。

神经性疼痛的非限制性实例包括在疱疹后神经痛中的神经性疼痛、在三叉神经痛中的神经性疼痛、在糖尿病性神经痛中的神经性疼痛、在癌痛中的神经性疼痛、在持续性术后疼痛或创伤后疼痛中的神经性疼痛、在非特异性下背痛中的神经性疼痛、在痛觉过敏中的神经性疼痛、在触摸痛中的神经性疼痛、在坐骨神经痛中的神经性疼痛、在开胸术后疼痛中的神经性疼痛、在CRPS中的神经性疼痛、在与多发性硬化相关的疼痛中的神经性疼痛、在AIDS(或HIV-相关的神经病变)中的神经性疼痛、在纤维肌痛中的神经性疼痛、在丘脑痛中的神经性疼痛、在由脊髓病引发的截瘫疼痛中的神经性疼痛、在痛性感觉缺失中的神经性疼痛、在幻肢痛中的神经性疼痛等等。用于神经性疼痛的治疗剂根据本发明对治疗痛觉过敏和触摸痛特别有效。另外，神经性疼痛病况包括与通常的非疼痛感觉比如“四肢发麻”(触觉异常和触物感痛)相关的疼痛、对接触增强的敏感性(感觉过敏)、因无害刺激而起的疼痛感觉(动态触摸痛、静态触摸痛、热触摸痛或冷触摸痛)、对有害刺激增强的敏感性(热痛觉过敏、冷痛觉过敏、机械性痛觉过敏)、在除去刺激后持续的痛觉(痛觉过敏)或没有或缺乏选择性的感觉传导路径(痛觉减退)。

术语“治疗有效量”为基本上纯的(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺的足以对被施用了基本上纯的(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺的受试者提供有益效果的量。更特别地，治疗有效量意指能有效缓解或减轻在受治疗的受试者中的疼痛症状的基本上纯的(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺的量。

在本发明的背景下，术语“治疗”指的是症状治疗并且术语“预防”被用以意指在已经受过折磨的受试者中预防症状或在受过折磨的受试者中预防症状的复发并且不限于完全预防痛苦。

根据本发明的用于治疗或预防疼痛的治疗剂选自基本上纯的(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺，该治疗剂可以被口服施用或不经肠胃地施用，对施用方式没有特别的限定。根据本发明的作为用于神经性疼痛的治疗剂的活性成分的(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺可以被独自地提供，或作为与药学上可接受的载体或药物添加剂一起被包含在制剂中来提供。

药学上可接受的载体或可用在本发明中的添加剂的实例包括赋形剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、包衣剂、着色剂、稀释剂、溶剂、溶解助剂、张度剂、pH调节剂、稳定剂以及类似物。

适当地，本发明的组合物可以被配制成单位剂型。每个单位剂型可包括全部或预定部分的日剂量的本发明的一种或多种化合物，例如，一半的日剂量或四分之一的日剂量。

因此，组合物可被配制成片剂、丸剂、胶囊、粉剂、细颗粒剂、颗粒剂、无菌肠胃外溶液或无菌肠胃外悬浮液、计量气雾剂或液体喷雾剂、糖浆剂、滴剂、安瓿、自动注射器装置、栓剂、乳膏或凝胶。所述组合物可适用于口服给药、肠内给药、肠胃外给药、鞘内给药、鼻内给药、舌下给药、直肠给药或局部给药、或适用于通过吸入或吹入给药。口服组合物如片剂、丸剂、胶囊或片是特别优选的。

为了制备固体剂型如片剂，所述一种或多种化合物可以与一种或多种药用赋形剂混合比如微晶纤维素、柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸氢二钾、甘氨酸以及类似物，并且可与任何不同类型的崩解剂和颗粒形成用的粘合剂一起使用，所述崩解剂比如淀粉(优选玉米淀粉、马铃薯淀粉或木薯淀粉)、藻酸、某些类型的硅酸复盐等，所述粘合剂比如聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、明胶、阿拉伯树胶或类似物。润滑剂对片剂形成通常是非常有效的，比如硬脂酸镁、月桂基硫酸钠、滑石粉或类似物。填充有相同类型的固体组合物的明胶胶囊可以被使用。与此有关的优选使用的物质包括乳糖以及高分子量聚乙二醇。为了制备用于口服施用的水性悬浮液和/或酏剂，活性成分可与任何不同类型的甜味剂、调味剂、着色剂或染料、任选地乳化剂和/或悬浮剂、以及稀释剂诸如水、乙醇、丙烯甘油、甘油或类似物或其组合一起使用。

根据某些实施方案，固体预制剂组合物然后被细分成上文所述种类的单位剂型，所述单位剂型每个可以含有从0.1mg至约500mg的本发明的化合物。根据某些实施方案，单位剂型包含从1mg至500mg的化合物，例如1mg、5mg、10mg、25mg、50mg、100mg、200mg、300mg、或500mg。

根据某些实施方案，当被配制成片剂或丸剂时，所述片剂或丸剂可以被包衣或被另外复合以提供产生延长作用的优势的剂型。例如，所述片剂或丸剂可以包括内剂量组分和外剂量组分，后者以包封物的形式存在于前者之上。这两种成分可以被肠溶层分开，该肠溶层用来抵抗在胃中的崩解并且允许内组分完整无损地经过到十二指肠内或允许内组分延迟释放。多种材料已知用于此类肠溶层或包衣，此类材料包括大量的聚合物酸和聚合物酸与此类材料如虫胶、鲸蜡醇以及纤维素乙酸酯的混合物。

根据某些实施方案，本发明所述药物组合物可以被配制成液体剂型用于口服施用或通过注射、栓剂以及类似物用于肠胃外给药；例如水溶液、适当加味的糖浆、水悬浮液或油悬浮液或加味乳剂(带有食用油比如例如棉花籽油、芝麻油、椰子油或花生油)、以及酏剂或类似的药物溶媒。用于水悬浮液的合适的分散剂或悬浮剂包括合成树胶和天然树胶，例如，黄蓍胶、阿拉伯树胶、海藻酸盐、葡聚糖、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或明胶。在必要的时候，水溶液适当地被缓冲(优选pH至8或更高)以首先等张(isotonize)液体稀释剂。这样的水溶液适合于静脉内注射，并且含油溶液适合于关节内注射、肌内注射和皮下注射。液体剂型可以容易地在无菌条件下通过被本领域技术人员所熟知的标准制药技术来产生。此外，本发明的活性成分可以被局部施用至皮肤或类似部位。在这种情况下，期望的是按照标准的药物实践以乳膏、胶状物、糊剂或软膏剂的形式局部施用活性成分。

根据本发明的用于神经性疼痛的治疗剂可以以适当的剂量施用，没有特别的限制，这根据不同病况选择，该病况包括疼痛的类型、患者年龄或症状、给药途径、治疗目的、以及存在或不存在其它药物与该试剂一起使用。用于神经性疼痛的治疗剂的日剂量根据本发明为：例如，约0.1mg/Kg体重至约100mg/Kg体重、优选地1mg/Kg体重至50mg/Kg体重、更优选地5-30mg/Kg体重。

实施例

以下实施例意图阐明本公开内容并且然而没有限制其范围。

实施例1：E1的合成

E1的一般合成工艺被概述在方案1中。特别地，E1使用包括以下步骤的方法来合成：

1.2gr的乳酸甲酯与过量的苄基溴反应以得到880mg的(S)-苄氧基乳酸甲酯。反应通过使氢化钠在THF中制浆并且冷却至大约-15℃来进行。反应混合物然后被允许缓慢升温至室温并且搅拌大约1小时至2小时。反应用饱和氯化铵溶液淬灭并且用MTBE萃取2次随后在旋转蒸发仪上除去溶剂以得到粗油。粗产物通过柱色谱纯化以得到纯的(S)-2-苄氧基乳酸甲酯。(R)-2-苄氧基乳酸甲酯异构体仅存在0.93％。根据某些实施方案，此步骤的收率可以通过避免反应溶液(即THF)中存在水分来增加。

2.在步骤1中所获得的880mg(S)-2-苄氧基乳酸甲酯使用氢化锂铝来还原以得到(S)-2-苄氧基丙二醇，收率为83.8％，纯度为98.7％。纯的(S)-2-苄氧基乳酸甲酯在二氯甲烷中的溶液被搅拌并且氢化锂铝的溶液在大约5℃下缓慢地被添加至其。反应通过TLC系统来监控并且通过USP-PW水来非常小心地淬灭。在此步骤中没有出现外消旋化。

3.然后(S)-2-苄氧基丙二醇与甲磺酰氯在二氯甲烷中在三乙胺的存在下反应以得到甲磺酸酯，收率为88％。步骤2的溶液在二氯甲烷中搅拌并且甲磺酰氯在＜5℃下被逐滴添加至其。在添加完成后，反应进展由TLC系统监控。反应用USP-PW水淬灭。在分层之后，水层用二氯甲烷反萃取。二氯甲烷层然后被合并并且用USP-PW水洗3次以除去大部分的甲磺酸。在此步骤没有出现外消旋化。

4.甲磺酸酯(步骤3的)与(S)-O-苄基酪氨醇偶联以形成双保护的E1，收率为22.7％，纯度为97.4％。反应在室温下使用DMF作为溶剂和氢化钠作为碱的组合来进行。反应在室温下搅拌至少12小时之后进行到完全。

当DMSO被用作溶剂和叔丁醇钾用作碱时，出现的是，由碱与DMSO反应形成的demsyl阴离子分解甲磺酸酯或将其转化成杂质。结果是或仅仅痕量的产物形成或没有产物形成。

5.340mg的步骤4的产物在碳催化剂上10％的钯和盐酸的存在下使用二氯甲烷作为溶剂在50℃下通过氢化被还原。反应在大约4小时内进行到完全，在没有外消旋化的情况下产生E1，收率为84.3％并且纯度为98.9％。

实施例2：E2的合成

如在US 2011/0086910中描述，E2对映体作为(S，S)和(S，R)对映体的外消旋体被合成并且在RegisPack^TM柱即多糖涂覆的手性柱(带有三-(3，5-二甲基苯基)氨基甲酰基纤维素选择子)上被进一步拆分(图7A-C)。

实施例3：在甩尾试验中对E1和E2的镇痛效果的评价：

在本研究中，基本上纯的对映体E1和E2的镇痛效果在小鼠中使用用于伤害性疼痛的甩尾模型来评价。

试验项目和试验材料的制备：

吗啡的制备：19ml生理盐水(saline)被添加至1ml吗啡安瓿并且每20g小鼠0.1ml的所得溶液被注射(5mg/kg)。

溶媒的制备：1ml DMSO溶解在4ml生理盐水中。

E1和E2样品的制备(2mg/ml的浓度用于10mg/kg的给药)：

·称量4mg的E1或E2。

·所测量的E1或E2被完全溶解在0.4ml DMSO中。

·该溶液然后被稀释在1.6ml生理盐水中。

用于B部分的E1的制备：

E1储备溶液按照如下制备：

·称量16.5mg的E1。

·所测量的E1被完全溶解在0.82ml DMSO中。

·该溶液然后被稀释在3.28ml生理盐水中。

E1的制备(4mg/ml的浓度用于20mg/kg的给药)：

20mg/kg的来自储备溶液的E1溶液以5ml/kg的注射体积经由IP给药。

E1的制备(2mg/ml的浓度用于10mg/kg的给药)：

来自储备溶液的0.7ml被稀释在0.7ml溶媒中。

来自储备溶液的10mg/kg的E1溶液以5ml/kg的注射体积经由IP给药。

E1的制备(0.6mg/ml的浓度用于3mg/kg的给药)：

来自储备溶液的0.5ml被稀释在3.35ml溶媒中。

来自储备溶液的3mg/kg的E1溶液以5ml/kg的注射体积经由IP给药。

试验系统(见表1)：

实验使用雄性ICR品系7周龄小鼠(25-27g)来进行。(由Harlan Israel，Ltd.提供)。

实验包括总数18只的小鼠(A部分)和总数20只的小鼠(B部分)。

在治疗开始时动物的重量差异不超过平均重量的±20％。

在这项研究中所使用的动物的健康状况一经它们到达就进行了检查。仅仅使健康状况良好的动物适应实验室条件并在研究中使用。

使动物适应5天。在适应期间和在整个研究期间，动物住在有限使用的啮齿动物设施内并且在每个聚丙烯笼最多6只小鼠的情况下被成组地饲养。该笼装有固体底部和填充有无菌木屑作为垫底材料。动物用商业的、无菌的啮齿动物食物被任意供给并且有权自由使用饮用水，所述饮用水通过聚乙烯瓶用不锈钢吸取导管被供给至各笼。水被定期监测。自动控制环境条件被设定为在研究室内保持温度在20℃-24℃、具有30％-70％的相对湿度(RH)、12小时：12小时的光：暗周期以及15-30换气次数/小时。温度和RH每天被监测。

在实验期间，各给药组被关在单独的笼子里以避免交叉污染，所述交叉污染可能通过排泄物的消耗发生。在研究结束时，存活的动物通过CO₂窒息被安乐死。

表1：本研究的试验组和给药方案：

甩尾试验的原理：

对疼痛的反应使用利用Ugo Basile甩尾仪器的甩尾方法被评估。在尾巴向后伸直的情况下，动物被放置并被轻轻固定在Ugo Basile甩尾仪器(TF)的表面上和在用作热源的光电管上。热源和计时器通过脚踏板压力机被打开，并且当动物甩动其尾巴离开放射管时自动关掉。延迟作为镇痛效果被测量和分析。

本研究的描述：基准甩尾在实验开始之前的一天被测量。在实验当天，动物体重被首先测量，随后IP施用试验项目(溶媒、吗啡、NRD13 S E1和E2)。施用试验项目30分钟后，动物经受甩尾试验。继甩尾实验之后对所有组取血样。在所有组的脊髓和脑髓已经被收集之后实验被终止。

统计资料和数据评价：所有参数被表示为平均值和平均值的标准误差(SEM)。使用双侧未配对T-检验来分析数据以将每个治疗组与溶媒治疗组对比。双侧配对T-检验被用以对比每个治疗组的治疗前和治疗后。概率值p＜0.01和p＜0.05被认为是有意义的。

结果：

体重：所有动物的平均体重为27.42±0.22g。组之间没有发现统计学上的差异。

甩尾试验：

甩尾试验的结果以延迟时间(秒)呈现在图1中，所述延迟时间为动物甩动其尾巴远离热源所耗费的时间。结果也可以呈现为治疗后的TF延迟时间减去治疗前的TF延迟时间之间的差别(图2)。对于动物，延迟时间之间的差别的增加呈现较健康的状态。

甩尾的延迟时间(秒)在表2，4-5列中概括：对于溶媒治疗的动物(组1)平均延迟时间在基准(治疗前)时为8.72±0.65秒；药物施用之后30分钟，平均延迟时间为7.78±0.36秒，这在统计学上没有不同于基准。

当与治疗前的值相比时，用5mg/kg剂量的吗啡的治疗(组2)在增加延迟时间上是明显有效的：治疗前7.92±0.17秒对治疗后15.38±1.47秒(p＜0.01)。

当与治疗前的值相比时，用10mg/kg剂量的E1的治疗(组4)在增加延迟时间上是明显有效的：治疗前8.16±0.39秒对治疗后10.63±0.64秒(p＜0.01)。另外，当与溶媒治疗的动物(组1)对比时，用10mg/kg和20mg/kg剂量的E1的治疗显示出疼痛缓解活性：10.63±0.64秒(组4)和10.65±0.81秒(组5)对7.78±0.36秒溶媒(p＜0.01)。

虽然治疗前的状态和治疗后的状态之间的延迟时间增加，但这样的增加对于用3mg/kg剂量的E1的治疗或用10mg/kg剂量的E2的治疗在统计学上是没有意义。此外，当与溶媒相比时，这些治疗在减少疼痛上不是明显有效的。

治疗前的甩尾延迟时间和治疗后的甩尾延迟时间之间的差别(秒)：

治疗前的延迟时间和治疗后的延迟时间之间的差别越大，疼痛缓解活性越大。这样的差别在表2，右列中概括。可以看出的是，当与溶媒治疗相比时，E1显示出明显的疼痛缓解活性，尤其在10mg/kg和20mg/kg的剂量下(p＜0.01)。与此相反，E2在甩尾延迟时间上不能引起任何在统计学上有意义的差别。

表2：甩尾实验数据汇总

*＝p＜0.01对溶媒

&＝p＜0.05对于组编号4测量的治疗前对治疗后

^＝p＜0.05对于组编号5测量的治疗前对治疗后

#＝p＜0.05对溶煤

结论：

考虑到在本研究条件下获得的并且限于寿命内(in-life)数据的研究结果，当与溶媒治疗组相比时，在用于伤害性感受的甩尾模型中E1在10mg/kg和20mg/kg的剂量下在减少疼痛上是有效的。

试验项目E1在3mg/kg的剂量下仅在用于治疗前和治疗后的TF延迟时间之间所计算出的差别上显示出明显的疼痛缓解活性，这表明了活性的趋势。在本研究中，E2在10mg/kg的剂量下是无效的。

实施例4：在大鼠中使用脊髓神经结扎(Chung)模型对E1的治疗活性的评价：

在大鼠中E1的抗伤害性感受活性和镇痛活性在用于神经性疼痛的脊髓神经结扎(SNL或Chung)模型中被评价。

在研究的第0天，所有动物经历Chung手术，该Chung手术包括其中左边L5-L6脊髓神经被分离并且切断的手术。手术后14天，使用来自VonFrey试验的痛阈结果来挑选动物。只有显示出机械性痛觉过敏症状的动物被包括在本研究中。在选择进行之后，动物被分组并且试验项目经由IP被施用。疼痛反应使用Von Frey方法学在研究的第14天在试验项目施用后的2小时、5小时、以及24小时和在7天的试验项目施用后在研究的第21天在2小时、5小时、24小时以及48小时来测量。

所有动物在研究期间体重增加。组之间在体重增加上没有明显的差别。在整个研究中这样的体重增加反映出普遍良好的健康状况。

材料及其制备：

溶媒：1ml DMSO(Sigma)溶解在4ml生理盐水中(供应商：TEVAmedical)。

阳性对照：加巴喷丁(供应商：USP)以粉末存在。为得到150mg/kg的剂量，250mg的加巴喷丁溶解在5ml的生理盐水中(50mg/ml)。

重200g的大鼠用0.6ml的溶解的溶液来注射。

E1储备溶液：2.43g的E1完全溶解在81ml DMSO。

·E1的制备(6mg/ml的浓度用于30mg/kg的给药)：来自储备溶液的3ml用12ml生理盐水稀释。

·E1的制备(3mg/ml的浓度用于15mg/kg的给药)：来自储备溶液的1.5ml用1.5ml DMSO和12ml生理盐水稀释。

·E1的制备(1.5mg/ml的浓度用于7.5mg/kg的给药)：来自储备溶液的0.75ml用2.25ml DMSO和12ml生理盐水稀释。

对于所有制剂应用体积为5ml/kg。

试验系统：

本研究的试验组和给药方案在表3中概括。

物种：50SD年幼的成年雄性大鼠，在研究开始225g-260g(HarlanLaboratories，Israel.Ltd.)。

体重：动物的重量差异在治疗开始的时候没有超过平均重量的±20％。

动物健康：在本研究中所用动物的健康状况一经它们到达就被检测。仅仅使健康状况良好的动物适应实验室条件并且被用在本研究中。

适应：5天。

笼：在适应期间以及在整个研究期间，动物住在有限使用的啮齿动物设施内并且在每个聚丙烯笼最多3只大鼠的情况下被成组饲养。该笼装有固体底部并且填充有无菌木屑作为垫底材料。

食物和水：动物用商业的、无菌的啮齿动物饮食被任意供给并且有权自由使用饮用水，所述饮用水通过聚乙烯瓶用不锈钢吸取导管被供给至各笼。饲养场对在本研究中所用饮食批次的分析被包括在研究数据的档案内。水被定期监测。

环境：自动控制的环境条件被设定为在研究室内保持温度在20℃-24℃、带有30％-70％的相对湿度(RH)、12小时：12小时的光：暗周期以及15-30换气次数/小时。温度和RH每天被监测。光周期被控制时钟监测。

各给药组被关在单独的笼子里以避免交叉污染，所述交叉污染可能通过排泄物的消耗发生。每个笼子住2或3只动物。

终止：在研究结束时，存活的动物通过CO₂窒息被安乐死。

表3：本研究的试验组和给药方案：

试验过程：

Chung诱发模型的原理：Chung模型是用于神经性疼痛的可靠性模型，其使得在动物从手术中醒来后立刻就测量动物的痛阈成为可能。

包括手术和治疗的研究时间表(研究第1天直至研究第14天)，在表4中概括：

表4：E1在大鼠中使用脊髓神经结扎(Chung)模型的治疗活性。研究时间表：

神经性疼痛诱发：当处于使用克他命/甲苯噻嗪钠的麻醉情况下时并且在区域被剃光之后，大鼠以俯卧位放置并且左边的椎旁肌与棘突在L4-S2水平被分离。L6脊椎横突用小咬骨钳被小心地除去以在视觉上辨认出L5-L6脊髓神经。左边的L5-L6脊髓神经被切断。然后肌肉用4-0缝合丝线被封闭并且皮肤通过夹钳被封闭。手术后，大鼠被送回笼并且仍处于加热灯之下直到它们醒来。

用于预选的入选/排除标准：在手术后第14天，使用Von Frey方法学在被放置在其试验组之前来测试动物的机械性痛觉过敏。对于手术过的腿，只有具有≤26g的痛阈的动物被包括在本研究中。为了形成同源治疗组并且坚持随机化，所有手术过的大鼠根据入选/排除标准来分组。

治疗：

治疗开始：使用疼痛发展参数(Von Frey试验)来挑选动物并且然后被放置到其试验组中。

溶媒和E1从研究第14天直至研究第21天被施用。

加巴喷丁，阳性对照，仅在试验第14天、第15天以及第21天被施用。

Von Frey试验在试验项目施用之前(在TI注射之前)进行以及在研究第14天和第21天在TI施用之后(在TI注射之后)的2小时和5小时进行。

Von Frey试验在研究第15天在TI的施用之前(在研究第14天在TI的施用之后24小时)进行以及在研究第22天和第23天进行(各自在研究第21天在TI的施用之后的24小时和48小时)。

给药途径：E1(试验项目)；溶媒和阳性对照(加巴喷丁)被IP施用。在所有情况下，除非在本研究的过程中另外决定，所有给药溶液按照一天一次施用被应用在每个重复给药期间。

终止：在本研究结束时，用CO₂来使动物安乐死。

实验观察：

体重：在研究第-1天每隔一定时间体重被测量用于基准值并且在手术之后7天(研究第7天)每隔一定时间体重被测量。另外，在研究第14天显示出用于机械性痛觉过敏的标准的动物在研究第14天和第21天在挑选和分组之后也被称重。

疼痛反应评价：疼痛反应使用用于机械性痛觉过敏的Von Frey试验来评价。

用于机械性痛觉过敏的Von Frey试验以应用对幼稚动物不痛的短脉冲压力为基础。事实上，为了从幼稚动物获得爪的缩回，所应用的压力有时高于60g。这通常需要研究者用Von Frey丝应用足够的压力以实际地抬起幼稚动物的爪。然而，在疾病状况中，动物对很低的压力感到敏感并且经历因正常非疼痛刺激而起的疼痛。

机械性痛觉过敏评价(Von Frey试验)：对触觉刺激的触摸痛反应使用VonFrey装置()来评估。

大鼠被放置在围栏里并且被安放在金属网表面之上，但被允许自由移动。大鼠的小屋用红色玻璃纸来遮盖以减少环境扰乱。试验在探究行为停止后开始。如由Von Frey装置制造商(Ugo Basil)提供的Von Frey单丝装置提供实际作用力的对数刻度和所感知到的强度的直线标度。工作原理：当给定长度和直径的光纤的尖端以直角被挤压在皮肤上时，只要研究者继续使探针前进直到光纤弯曲，应用的力就增加。在光纤弯曲之后，探针继续前进，导致光纤弯曲得更多，但没有附加力被应用到爪。

表5：力(g)和其相应的单丝尺寸

尺寸	力(g)
		1.65	0.008
2.36	0.02
		2.44	0.04
2.83	0.07
		3.22	0.16
3.61	0.40
		3.84	0.60
4.08	1.00
		4.17	1.40
4.31	2.00
		4.56	4.00
4.74	6.00
		4.93	8.00
5.07	10
		5.18	15
5.46	26
		5.88	60
6.10	100
		6.45	180
6.65	300

当其爪被意外地触摸时，啮齿动物呈现爪的缩回反射。触摸试验^TM感觉鉴别器可以被用在大鼠足的趾面上。动物将会通过拉回其爪来显示感觉。提升缩回反射需要的最小力被指定/被认为是对照值。

统计资料/数据评价：所有数据呈现为平均值±SEM。每个治疗组与其相关的溶媒组相比使用双侧未配对的T-检验(软件：Excel)。对于每个试验组，双侧配对T-检验被用以对比治疗前的疼痛反应与治疗后的疼痛反应。p值＜0.05被认为代表显著性差异。

Von Frey试验在研究的第22天和第23天进行(各自在研究的第21天TI的施用后的24小时和48小时)。

结果：

体重(表6；图3)：所有动物在研究期间体重增加；然而，在组之间，在体重增加上没有显著性差异。在研究的第-1天，对于所有动物，基准体重为243.76±1.21g。

体重也在研究第7天、第14天和第21天测量。在研究的第7天，对于所有组，平均体重为258.12±1.71g。在研究的第14天，对于所有组，平均体重为286.34±1.93g。在研究的第21天，平均体重为302.34±2.29g。

表6：在所有研究组中的平均组体重

Von Frey试验(表7、8、9以及10；图4和5)：结果显示为手术过的左腿的平均缩回力(g)。机械性痛觉过敏作为动物对Von Frey丝的敏感性的增强在研究的第14天的不同时间点(2小时、5小时以及24小时)和在研究的第21天的不同时间点(2小时、5小时、24小时以及48小时)被观察到。所有的值也被计算并且显示为缩回健康右腿所需要的力减去缩回手术过的左腿所需要的力。这样的计算结果显示处在健康状态下的动物的所述值接近0，因此对于两条腿，缩回力是相等的。处在疼痛状态的动物显示在健康右腿和手术过的左腿之间较大的力的差距。在缩回力差别(Δ力)上的增加显示出更疼痛的状态。

试验项目对溶媒的Von Frey反应：溶媒治疗过的动物(组1)缩回手术过的左腿所需要的基准平均力为56.60±3.40g。在研究的第14天在治疗之前，左腿的缩回力显著地低于基准测量，这表明疼痛状态：10.00±0.93g；p＜0.05。

E1 30mg/kg IP(组3)：当与溶媒对照(组1)相比较时，在研究的第14天用30mg/kg剂量的E1的治疗在其施用之后的2小时没有抑制触摸痛(13.20±1.70g ns.对在溶媒组中的10.70±0.98g)。与溶媒治疗过的动物相比较，在研究的第14天用30mg/kg剂量的E1的治疗在其施用之后的5小时有效地抑制触摸痛：30.60±5.10g对在溶媒组中的10.10±0.60g；p＜0.05并且还有在其施用之后的24小时：25.20±6.25g ns对在溶媒组中的11.80±1.79g；p＝0.05。

当与溶媒对照相比较时，在研究的第21天用30mg/kg剂量的E1的治疗有效地抑制触摸痛，在其施用之后2小时：19.40±1.80g对在溶媒组中的11.40±1.01g，p＜0.05；在其施用之后5小时：22.90±4.64g对在溶媒组中的9.80±0.90g，p＜0.05；并且还有在其施用之后24小时：17.50±2.48g对在溶媒组中的11.00±1.11g，p＜0.05。

当与溶媒对照相比较时，在研究的第21天用30mg/kg剂量的E1的治疗在其施用之后48小时没有抑制触摸痛：8.90±0.82g对在溶媒组中的9.90±1.21g。

表7：用于缩回手术过的左腿所需要的平均Von Frey力(g)：测量在研究的第14天进行：

*p＜0.05对溶媒

#p＜0.05治疗前对治疗后

E1 15mg/kg IP(组4)：当与溶媒对照(组1)相比较时，在研究的第14天用15mg/kg剂量的E1的治疗在其施用之后2小时没有抑制触摸痛。

与溶媒治疗过的动物相比较，在研究的第14天用15mg/kg剂量的E1的治疗在其施用之后5小时和还有在其施用之后24小时后抑制触摸痛。

当与溶媒对照相比较时，在研究的第21天治疗前、在其施用之后2小时、5小时以及24小时，用15mg/kg剂量的E1的治疗抑制了触摸痛，然而，在研究的第21天用15mg/kg的剂量的治疗在其施用之后48小时不太有效。

表8：用于缩回手术过的左腿所需要的平均Von Frey力(g)：测量在研究的第21天进行：

*p＜0.05对溶媒

#p＜0.05治疗前对治疗后

E1 7.5mg/kg IP(组5)：当与溶媒对照(组1)相比较时，在研究的第14天用7.5mg/kg剂量的E1的治疗在其施用之后的2小时、5小时以及还有24小时有效地抑制触摸痛。

当与溶媒对照相比较时，用7.5mg/kg剂量的E1的治疗在研究的第21天治疗前以及还有在其施用之后的2小时、5小时、24小时乃至48小时抑制触摸痛。

加巴喷丁150mg/kg IP(组2)：当与溶媒对照(组1)相比较时，在研究的第14天用加巴喷丁的治疗在其施用之后2小时抑制触摸痛；但在其施用之后5小时是无效的。

当与溶媒对照相比较时，在研究的第21天用加巴喷丁的治疗在其施用之后的2小时有效地抑制触摸痛；但在其施用之后已经5小时是无效的。

表9：健康右腿和手术过的左腿之间的差别(Δ)力(g)：14天的研究。通过从健康右腿的缩回力值减去手术过的左腿的缩回力值来计算差别。

*p＜0.05对溶媒

#p＜0.05治疗前对治疗后

试验项目的Von Frey反应-治疗后对治疗前：

E1 30mg/kg IP(组3)：当与治疗前的值相比较时，在研究的第14天用30mg/kg剂量的E1的治疗在其施用之后5小时治疗前和治疗后抑制触摸痛。当与治疗前的值相比较时，在研究的第21天用30mg/kg剂量的E1的治疗在其施用之后2小时、5小时乃至24小时抑制触摸痛。

表10：健康右腿和手术过的左腿之间的差别(Δ)力(g)：21天的研究。通过从健康右腿的缩回力值减去手术过的左腿的缩回力值来计算差别。

*p＜0.05对溶媒

#p＜0.05治疗前对治疗后

E1 15mg/kg IP(组4)：当与治疗前的值相比较时，在研究的第14天用15mg/kg剂量的E1的治疗在其施用之后5小时乃至24小时抑制触摸痛。

E1 7.5mg/kg IP(组5)：当与治疗前的值相比较时，在研究的第14天用7.5mg/kg剂量的E1的治疗在其施用之后2小时、5小时乃至24小时抑制触摸痛。当与治疗前的值相比较时，在研究的第21天用7.5mg/kg剂量的E1的治疗在其施用之后5小时抑制触摸痛。

加巴喷丁150mg/kg IP(组2)：当与治疗前的值相比较时，在研究的第14天用加巴喷丁的治疗在其施用之后2小时抑制触摸痛；但在其施用之后24小时是无效的。

当与治疗前的值相比较时，在研究的第21天用加巴喷丁的治疗在其施用之后2小时抑制触摸痛。

试验项目的Δ缩回力对溶媒的Δ缩回力：

E1 30mg/kg IP(组3)：在第14天两只腿之间的Δ缩回力的计算结果显示出在30mg/kg的剂量下在其施用之后5小时对于E1的显著的疼痛缓解活性。在第21天两只腿之间的Δ缩回力的计算结果显示出在30mg/kg的剂量下在其施用之后2小时、5小时乃至24小时对于E1的显著的疼痛缓解活性。

E1 15mg/kg IP(组4)：在第14天两只腿之间的Δ缩回力的计算结果显示出在15mg/kg的剂量下在其施用之后5小时乃至24小时对于E1的显著的疼痛缓解活性：29.20±6.66g对在溶媒组中的49.90±0.60g；p＜0.05。

在研究的第21天治疗前、在其施用之后2小时、5小时乃至24小时，两只腿之间的Δ缩回力的计算结果显示出在15mg/kg的剂量下对于E1的显著的疼痛缓解活性。

E1 7.5mg/kg IP(组5)：在第14天两只腿之间的Δ缩回力的计算结果显示出在7.5mg/kg的剂量下在其施用之后2小时、5小时以及还有24小时对于E1的显著的疼痛缓解活性。

在研究的第21天治疗前、在其施用之后2小时、5小时、24小时以及还有48小时，两只腿之间的Δ缩回力的计算结果显示出在7.5mg/kg的剂量下对于E1的显著的疼痛缓解活性。

加巴喷丁150mg/kg IP(组2)：

在第14天和在第21天两只腿之间的Δ缩回力的计算结果显示出在其施用之后2小时对于加巴喷丁的显著的疼痛缓解活性。

试验项目的Δ缩回力-治疗后对治疗前：

E1 30mg/kg IP(组3)：当与治疗前的Δ缩回力值相比较时，在第14天用30mg/kg剂量的E1的治疗在其施用之后5小时抑制触摸痛。当与治疗前的Δ缩回力值相比较时，在第21天用30mg/kg剂量的E1的治疗在其施用之后2小时、5小时以及24小时抑制触摸痛。

E1 15mg/kg IP(组4)：

当与治疗前的Δ缩回力值相比较时，在第14天用15mg/kg剂量的E1的治疗在其施用之后5小时乃至24小时抑制触摸痛。

E1 7.5mg/kg IP(组5)：

当与治疗前的Δ缩回力值相比较时，在第14天用7.5mg/kg剂量的E1的治疗在其施用之后2小时、5小时以及24小时抑制触摸痛。

当与治疗前的Δ缩回力值相比较时，在第21天用7.5mg/kg剂量的E1的治疗在其施用之后5小时抑制触摸痛。

加巴喷丁150mg/kg IP(组2)：

当与治疗前的Δ缩回力值相比较时，在第14天用加巴喷丁的治疗在其施用之后2小时抑制触摸痛然而在施用后5小时是无效的。

当与治疗前的Δ缩回力值相比较时，在第21天用加巴喷丁的治疗在其施用之后2小时有效地抑制触摸痛。

要注意的是，如上文所述用试验化合物的治疗，用E1治疗过的动物将手术过的爪完全放在Von Frey装置的金属网表面上。

结论：

考虑到在本研究条件下所获得的发现，在研究的第14天在试验项目施用之后5小时和在研究的第21天在试验项目施用后2小时、5小时以及24小时，在大鼠的神经性疼痛的脊髓神经结扎模型中，30mg/kg剂量的E1作为疼痛止痛项目是有效的，如反映在机械性痛觉过敏的参数中。

在研究的第14天在试验项目施用之后5小时以及24小时和在研究的第21天在试验项目施用后2小时、5小时以及24小时，15mg/kg剂量的E1作为疼痛止痛项目是有效的，如反映在机械性痛觉过敏的参数中。

在研究的第14天在试验项目施用之后2小时、5小时以及24小时和在研究的第21天在试验项目施用后2小时、5小时、24小时以及48小时，7.5mg/kg剂量的E1作为疼痛止痛项目是有效的，如反映在机械性痛觉过敏的参数中。

加巴喷丁是本研究中的阳性对照，在研究的第14天和第21天在其施用之后2小时是有效的。与试验项目相比，加巴喷丁的镇痛活性在给药之后5小时、24小时以及48小时未再检测到。

实施例5：E1和E2对映体调节酪氨酸激酶的活性

E1和E2对映体在BLK、LynA、Lyn B以及Src(仅仅E1)激酶测定中以一系列的从1.0E^-03至1.0E^-05(M)的5个浓度被测试。研究包括BLK、LynA、LynB以及Src激酶测定。每种化合物和浓度在双孔中被测试。

此方案使用Caliper LabChip3000和12-吸样针LabChip来完成。LabChip测定是基于分离的，这意味着产物和底物是电泳分离过的，由此使干扰最小并且产生可用在任何筛选平台上的最高的数据质量。用于EZ读取器和LC3000酶测定两者的Z’因子通常在0.8至0.9的范围内。LabChip测定的优势包括高的Z’值、几乎没有假阳性、几乎没有假阴性以及分析质量的重复性。

芯片外温育泳动率变动激酶测定使用微流体芯片来测量荧光肽底物向磷酸化产物的转化。来自微量滴定板孔的反应混合物经过毛细管吸样针被引入到芯片之上，其中未磷酸化的底物和磷酸化的产物通过电泳被分离并且通过激光诱导荧光被检测到。荧光信号的特征随时间的变化揭示出反应程度。

微流体的精确性能够检测出候选药物和治疗靶点之间微妙的相互作用。该技术能够以高准确度检测出强抑制剂和弱抑制剂两者，并且通常识别出常规技术漏掉的候选药物。测定条件在表8中概括：

表8：激酶测定条件

测定对照数据：所有测定必须通过内部QA/QC标准，包括每轮测定的参考IC50，其必须在所接受的历史平均数的二分之一对数单位(正或负)内。测定对照数据在表9中概括：

表9：激酶测定对照数据：

结果：E1和E2对映体作为多种蛋白酪氨酸激酶的调节剂的活性在图6A-D中用图表(IC₅₀曲线)呈现。IC₅₀曲线使用GraphPad5和标准4-参数非线性回归模型(log(抑制剂)对响应-可变斜率)来生成。EC₅₀曲线使用GraphPad5和标准4-参数非线性回归模型(S形剂量响应-可变斜率)来生成。数据点为双孔的平均数。误差条代表平均值±重复％活性。

将被本领域技术人员理解的是，本发明不限于上文在此所特别示出和描述的那些。更确切地说本发明的范围由以下权利要求所界定。

Claims

1.一种式II化合物或其药学上可接受的盐或水合物，

所述化合物具有(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺的特定的立体化学，其中所述化合物呈基本上纯的形式。

2.根据权利要求1所述的化合物，其中所述基本上纯的形式包括至少90％的(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺和少于10％的所述化合物的其它立体异构形式。

3.根据权利要求1所述的化合物，其中所述基本上纯的形式包括至少95％的(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺和少于5％的所述化合物的其它立体异构形式。

4.根据权利要求1所述的化合物，其中所述基本上纯的形式包括至少98％的(S)2-N(3-O-((S)丙2-醇)-1-丙基-4-羟基苯)-3-苯基丙酰胺和少于2％的所述化合物的其它立体异构形式。

5.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物用于治疗或预防疼痛。

6.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物用于治疗急性疼痛或慢性疼痛。

7.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物用于治疗神经性疼痛。

8.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物用于治疗伤害性疼痛。

9.一种药物组合物，所述药物组合物包括治疗有效量的权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或稀释剂。

10.根据权利要求9所述的药物组合物，其中所述药物组合物被配制成单位剂型。

11.根据权利要求9所述的药物组合物，其中所述药物组合物被配制用于口服给药。

12.根据权利要求9所述的药物组合物，其中所述药物组合物被配制成单位剂型，所述单位剂型包括从0.1mg至约500mg的权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐或水合物。

13.根据权利要求9所述的药物组合物，所述药物组合物用于治疗或预防疼痛。

14.根据权利要求13所述的药物组合物，其中所述疼痛选自急性疼痛和慢性疼痛。

15.根据权利要求13所述的药物组合物，其中所述疼痛为伤害性疼痛。

16.根据权利要求13所述的药物组合物，其中所述疼痛为神经性疼痛。

17.根据权利要求16所述的药物组合物，其中所述神经性疼痛为选自下述的至少一种症状：在疱疹后神经痛中的神经性疼痛、在三叉神经痛中的神经性疼痛、在糖尿病性神经痛中的神经性疼痛、在癌痛中的神经性疼痛、在持续性术后疼痛或创伤后疼痛中的神经性疼痛、在痛觉过敏中的神经性疼痛、在触摸痛中的神经性疼痛、在开胸术后疼痛中的神经性疼痛、在CRPS中的神经性疼痛、在与多发性硬化相关的疼痛中的神经性疼痛、在AIDS中的神经性疼痛、在丘脑痛中的神经性疼痛、在由脊髓病引发的截瘫疼痛中的神经性疼痛、在痛性感觉缺失中的神经性疼痛以及在幻肢痛中的神经性疼痛。

18.一种用于治疗或预防需要其的受试者中的疼痛的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐或水合物。

19.根据权利要求18所述的方法，其中所述化合物作为药物组合物被施用，所述药物组合物包括治疗有效量的权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐或水合物和药学上可接受的载体或稀释剂。

20.根据权利要求19所述的方法，其中所述药物组合物被配制成单位剂型。

21.根据权利要求19所述的方法，其中所述药物组合物被配制用于口服给药。

22.根据权利要求19所述的方法，其中所述药物组合物被配制成单位剂型，所述单位剂型包括从0.1mg至500mg的权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐或水合物。

23.根据权利要求19所述的方法，其中日剂量1.0mg至15g的权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐或水合物被施用。