CN103995063A - 一种盐酸苯达莫司汀中有关物质的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种盐酸苯达莫司汀中有关物质的检测方法，采用高效液相色谱分析方法，选用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，以0.1％的三氟乙酸溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱，流速为0.8-1.2mL/min，柱温30-35℃，样品的检测波长为242nm或254nm；所述的流动相进行梯度洗脱0.1％的三氟乙酸溶液与乙腈的体积比为85-90％：10-15％，0-5min；50-55％：45-50％，25-35min；85-90％：10-15％，36-46min。本方法具有简单可行，流动相易配制，灵敏度高的优点。
Description
本发明涉及一种有关物质的检测方法，特别涉及一种盐酸苯达莫司汀中有关物质的检测方法。
背景技术
众所周知，药物纯度对病人的影响是非常大的。注射药物不纯是引起药物不良反应（如过敏、药物热等）的主要原因。口服药物不纯，可能增加不良反应的发生率，如恶心、呕吐、腹痛、腹泻等。同时，可能影响的是药物的吸收，从而影响药物疗效。因此，药物纯度的检测方法就显的尤为重要。
目前，对于药物纯度的检测方法也有多种，其中，有关物质检测是控制药品质量的重要指标。盐酸苯达莫司汀，化学名为4-[5-[双-(2-氯乙基)氨基]-1-甲基-2-苯并咪唑]丁酸盐酸盐，结构式为：
它是一种双功能基烷化剂，具有抗肿瘤和杀细胞作用。对于其有关物质的检测方法，申请号201010256873.0的发明专利申请中，请求保护的高效液相色谱分析方法。
该技术方案所存在的主要问题是其有关物质方法为等度洗脱，在有关物质检查中，等度相对梯度来说，等度可能洗脱能力不够，或者容易把杂质冲到一起去，所以等度方法不如梯度洗脱。
本实验方案采用梯度洗脱，更好的将有关物质从极性小的到极性大的洗脱出来，明显解决了该问题。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中所存在的上述不足，提供一种盐酸苯达莫司汀中有关物质的检测方法。
为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：
一种盐酸苯达莫司汀中有关物质的检测方法，采用高效液相色谱分析方法，选用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，以0.1％的三氟乙酸溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱，流速为0.8-1.2mL/min，柱温30-35℃，样品的检测波长为242nm或254nm；
所述的流动相进行梯度洗脱0.1％的三氟乙酸溶液与乙腈的体积比为85-90％：10-15％，0-5min；50-55％：45-50％，25-35min；85-90％：10-15％，36-46min。我们采用梯度洗脱的方式，前期乙腈比例比较小，主要洗脱极性比较大的杂质，后面慢慢增大乙腈比例，保证所有有关物质完全冲出并达到基线分离。
优选的，所述的流动相进行梯度洗脱0.1％的三氟乙酸溶液与乙腈的体积比为90％：10％，0-5min；55％：45％，25-35min；85％：15％，36-46min。采用该体积比进行梯度洗脱，分离度达到基线分离，就可比较明显的看出每个峰的分离程度，分离度越大，两个组分峰分的越开，最大可达到30。柱效越高，半峰宽越小，峰越瘦，最大可达到30万。拖尾因子小于等于1.5，越接近1，峰越对称。
所述的十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱填料的颗粒度为3-5μm，规格为250mm×4.6mm或150mm×4.6mm。
所述的样品为0.2-0.6mg/mL的盐酸苯达莫司汀的二甲基亚砜、甲醇或乙醇溶液。选用二甲基亚砜作为溶剂配制的样品溶液，样品溶解性、稳定性好，稳定期达到一个星期。选用甲醇或乙醇作为溶剂配制的样品溶液，样品溶解性好、稳定性好，同时，检测时没有溶剂峰，具有更好的分离效果。
取所述样品10-20μL，进样测定，按外标法以峰面积计算盐酸苯达莫司汀中有关物质含量。
与现有技术相比，本发明的有益效果：选用0.1％的三氟乙酸溶液-乙腈流动相进行梯度洗脱，分离效果操作简便。选用二甲基亚砜、甲醇或者乙醇作为样品溶剂，配制的样品稳定性好、溶解性好。
附图说明：
图1为实施例1高效液相色谱图。
图2为实施例2高效液相色谱图。
图3为实施例3高效液相色谱图。
图4为对比例高效液相色谱图。
具体实施方式
下面结合试验例及具体实施方式对本发明作进一步的详细描述。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本发明内容所实现的技术均属于本发明的范围。
实施例1
一种盐酸苯达莫司汀中有关物质的检测方法，采用高效液相色谱分析方法，选用MN. Nucleodur Sphinx RP 18色谱柱，填料的颗粒度为5μm，规格为250mm×4.6mm。以0.1％的三氟乙酸溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱，流速为1.0mL/min，柱温30℃，样品的检测波长254nm。
所述的流动相进行梯度洗脱0.1％的三氟乙酸溶液与乙腈的体积比为90％：10％，0-5min；55％：45％，25-35min；85％：15％，36-46min。
取0.5mg/mL的盐酸苯达莫司汀的甲醇溶液，进样10ul测定，按外标法以峰面积计算盐酸苯达莫司汀中有关物质含量。检测结果如图1所示。分离度最高达到24.93。柱效最高达到292663.64。拖尾因子最小为1.12，接近1，峰形对称。
实施例2
一种盐酸苯达莫司汀中有关物质的检测方法，采用高效液相色谱分析方法，选用Agilent zorbax SB-C18色谱柱，填料的颗粒度为3μm，规格为150mm×4.6mm。以0.1％的三氟乙酸溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱，流速为1.0mL/min，柱温32℃，样品的检测波长242nm。
所述的流动相进行梯度洗脱0.1％的三氟乙酸溶液与乙腈的体积比为85％：15％，0-5min；50％：50％，25-35min；90％：10％，36-46min。
取0.25mg/mL的盐酸苯达莫司汀的乙醇溶液，进样20ul测定，按外标法以峰面积计算盐酸苯达莫司汀中有关物质含量。检测结果如图2所示。分离度最高达到30.13;柱效最高达到221507.7;拖尾因子最小为1.06，接近1，峰形对称
实施例3
一种盐酸苯达莫司汀中有关物质的检测方法，采用高效液相色谱分析方法，选用资生堂 MG ⅡC18色谱柱，填料的颗粒度为5μm，规格为250mm×4.6mm。以0.1％的三氟乙酸溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱，流速为1.0mL/min，柱温35℃，样品的检测波长254nm。
所述的流动相进行梯度洗脱0.1％的三氟乙酸溶液与乙腈的体积比为87％：13％，0-5min；45％：45％，25-35min；87％：13％，36-46min。
取0.5mg/mL的盐酸苯达莫司汀的二甲基亚砜溶液，进样10ul测定，按外标法以峰面积计算盐酸苯达莫司汀中有关物质含量。检测结果如图3所示。分离度最高达到30.13;柱效最高达到247447.5;拖尾因子最小达到1.02，非常接近1，峰形对称
对比例
一种盐酸苯达莫司汀中有关物质的检测方法，采用高效液相色谱分析方法，选用MN. Nucleodur Sphinx RP 18色谱柱，填料的颗粒度为5μm，规格为250mm×4.6mm。以0.1％的三氟乙酸溶液-乙腈进行等度洗脱，所述的流动相进行等度洗脱0.1％的三氟乙酸溶液与乙腈的体积比为55％：45％，0-35min。
流速为1.0mL/min，柱温30℃，样品的检测波长254nm。
取0.5mg/mL的盐酸苯达莫司汀的二甲基亚砜溶液，进样10ul测定，按外标法以峰面积计算盐酸苯达莫司汀中有关物质含量。检测结果如图4所示，该方法为等度洗脱，洗脱力度太大，造成只有两个峰，杂质A,B,C均未出峰，主峰RT只有3.665，保留时间太短。
Claims (5)
1.一种盐酸苯达莫司汀中有关物质的检测方法，采用高效液相色谱分析方法，其特征在于：选用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，以0.1％的三氟乙酸溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱，流速为0.8-1.2mL/min，柱温30-35℃，样品的检测波长为242nm或254nm；
所述的流动相进行梯度洗脱0.1％的三氟乙酸溶液与乙腈的体积比为85-90％：10-15％，0-5min；50-55％：45-50％，25-35min；85-90％：10-15％，36-46min。
2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的流动相进行梯度洗脱0.1％的三氟乙酸溶液与乙腈的体积比为90％：10％，0-5min；55％：45％，25-35min；85％：15％，36-46min。
3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱填料的颗粒度为3-5μm，规格为250mm×4.6mm或150mm×4.6mm。
4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的样品为0.2-0.6mg/mL的盐酸苯达莫司汀的二甲基亚砜、甲醇或者乙醇溶液。
5.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：取所述样品10-20μL，进样测定，按外标法以峰面积计算盐酸苯达莫司汀中有关物质含量。
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