CN103989660A

CN103989660A - 一种含阿奇霉素的缓释滴眼液及其制备方法

Info

Publication number: CN103989660A
Application number: CN201410246481.4A
Authority: CN
Inventors: 祁梅芳; 杨波; 耿海明; 于艳春
Original assignee: WUHAN WUYAO TECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: WUHAN WUYAO TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2014-06-05
Filing date: 2014-06-05
Publication date: 2014-08-20

Abstract

本发明涉及一种以阿奇霉素为有效成分的具有缓释作用的滴眼液及其制备方法，本发明方法针对阿奇霉素水溶性差以及脂质体物理化学性质不稳定等问题，采用乳化蒸发-低温固化法制备壳聚糖修饰的阿奇霉素固体脂质纳米粒，提高了脂质纳米粒在储存中的稳定性，实现了阿奇霉素在眼部的缓慢释放，使得药物充分发挥药效，起到最好的治疗作用。本发明的眼药水主要应用于治疗细菌性结膜炎。

Description

一种含阿奇霉素的缓释滴眼液及其制备方法

技术领域

本发明属于药物制剂领域，具体是一种以阿奇霉素为活性成分的具有抗菌作用的缓释滴眼液。

技术背景

细菌性结膜炎是最常见的眼科疾病，约占所有结膜炎的5％，常致眼组织不同程度的损害，有时后果严重，危害视力，是主要的致盲眼病之一。细菌性结膜炎具有自愈性，但抗感染治疗可缩短疾病进程、防止传染、减少并发症发生。细菌性结膜炎的致病菌种类很多，革兰氏阳性葡萄球菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌是最常见的病原体。抗生素是目前治疗细菌性结膜炎的主要手段，因作用迅速，疗效明显而广泛应用于临床。

阿奇霉素是一种半合成的氮杂十五元环大环内酯类抗菌药物，常用于敏感细菌所引起的感染，主要通过与细菌细胞中的核糖体50S亚基结合，阻碍细菌转肽过程，抑制依赖于RNA的蛋白质合成而发挥抗菌作用。阿奇霉素通过吞噬细胞吸收和转运，具有很好的组织细胞渗透能力，在机体组织中浓度高，作用持续时间长，抗菌谱广，抑菌效果好，不良反应小。目前临床应用的剂型主要有片剂、胶囊、干混悬剂、注射剂、散剂和颗粒剂等。2007年4月美国食品药品管理局批准了阿奇霉素眼用溶液(商品名:)用于治疗细菌性结膜炎和沙眼。但作为传统的眼用制剂，它势必存在滞留时间短、生物利用度低等一系列问题，并且临床应用主要的不良反应为眼部刺激性。

为了提高眼部生物利用度，延长作用时间，眼部给药主要集中在研究新剂型给药系统方面，如胶粒系统、微粒系统、凝胶系统、眼部插入剂和植入剂、给药装置等，取得一定的进展。

CN103211755A公开了无菌稳定的阿奇霉素滴眼液的生产方法，将活性成分的阿奇霉素和药学可接受的辅料按冻干工艺制备成无菌冻干粉未，然后在临床使用中溶解在无菌的专用溶剂中，此方法克服现有的阿奇霉素滴眼液在生产过程中的不稳定性，但该滴眼液存在使用上的不便，使用者须自行配置，冻干粉末和无菌溶剂的用量难以控制，造成药量不均。且在使用过程中有可能再次污染。

CN101077352A公开了一种含乳糖酸阿奇霉素的眼用制剂，该发明包括2个剂型，即乳糖酸阿奇霉素滴眼液和眼用凝胶。解决了制剂的稳定性和刺激性，但传统的凝胶剂因为热压灭菌会对凝胶结构造成不可逆的破坏，所以需在制备凝胶之前对所用的原料进行灭菌并在生产过程中保持严格的无菌操作，此外凝胶为半固体制剂，存在给药剂量不准确的缺点。

CN102106812A公开了一种阿奇霉素超细粉体原位凝胶滴眼液及其制备方法，解决阿奇霉素溶解度低、常规凝胶中药物分散不均导致给药剂量不准等问题，但在耐受性方面效果不理想，凝胶长时间滞留在眼部会引起不适，且该专利工艺复杂，很难从技术上达到要求。

CN102125577A公开了一种将阿奇霉素眼用制剂制成脂质体原位凝胶的方法，脂质体的生物相容性可以避免凝胶对眼部的刺激，但是原位凝胶在发生相变时，由于黏度变大，脂质体无法均匀分散于凝胶介质中，容易导致剂量不易控制，且原位凝胶发生相变依赖于眼部pH、温度等发生变化，而这种变化会对脂质体的稳定性产生影响，使得脂质体中包封的药物迅速渗漏，影响治疗效果。

因此，发明一种含阿奇霉素的缓释滴眼液，既能解决阿奇霉素水溶性差、一般制剂生物利用度低、对眼部有刺激等问题，又能保证阿奇霉素在眼部的缓慢释放，且能规模化大生产，是我们急待解决的问题。

发明内容

本发明为一种阿奇霉素的缓释滴眼液，其主要优势在于将阿奇霉素包封于固体脂质纳米粒中，解决阿奇霉素水溶性低，不稳定等问题，且利用可生物降解、无毒、生物相容性好的水溶性壳聚糖对固体脂质纳米粒进行表面修饰，构建具有较高稳定性和缓释作用的眼部给药系统，克服了未经修饰的固体脂质纳米粒表面荷负电，不利于药物角膜渗透的缺点。

脂质体是由天然的或合成的磷脂双分子层包裹而成的水溶性微小囊泡，易与生物融合，具有良好的生物相容性，且无毒、无免疫原性。脂质体的这种结构使其作为药物载体，具有增加角膜透过性、可降解性等优点。近年来，眼用脂质体取得了较大的进展，出现了如噻吗洛尔脂质体滴眼剂、阿昔洛韦脂质体滴眼剂、毛果芸香碱脂质体滴眼剂、流动态脂质体包裹抗生素滴眼剂、聚维酮碘脂质体滴眼剂等。脂质体用于眼前段给药主要是用来改善角膜附着，提高聚合物渗透性；用于眼后段疾病的治疗主要是保证药物能在视网膜中靶向释放，达到改善药物在玻璃体内半衰期的作用。

传统脂质体的缺点是载药量低，稳定性差，无菌脂质体的大工业生产成本高，技术上有难度。固体脂质纳米粒(solid lipidnanoparticles，SLNs)是以固态天然或合成的生物相容的高熔点脂质材料(如硬脂酸，饱和脂肪酸甘油酯等)为载体，将药物包裹于类脂核中或吸附于纳米粒表面形成粒径为50-1000nm的固体胶粒给药体系。SLNs既具备聚合纳米粒物理稳定性高，避免药物的降解或泄漏以及良好的缓释性的优势，又兼具了脂质体，乳剂毒性低，能大规模生产的优点，是一种很有发展前景的药物载体。

然而，普通SLNs眼部给药也面临几个问题：首先，由于SLNs的粒径远大于细胞间隙，不易通过细胞间紧密连接被吸收，又无法有效诱导细胞内吞，因而透过角膜吸收的能力不是很理想。其次，受到眨眼及流泪的影响，SLNs在眼中停留时间较短，往往尚未被完全摄取即被清除，生物利用度低。为了解决上述问题，有必要对SLNs进行修饰，延长药物在角膜前的滞留时间及增加药物的角膜渗透性。

壳聚糖是甲壳素脱去乙酰基的衍生物。它是自然界中存在的唯一荷正电的碱性多糖，在生物体内可被溶菌酶降解，具有无毒、良好的生物相容性、低免疫排斥反应、生物粘附性及跨细胞膜转导能力等一系列特性。

本发明结合壳聚糖和固体脂质纳米粒的优势，制备壳聚糖修饰的固体脂质纳米粒(CS-SLNs)，利用壳聚糖与角膜表面电荷间的静电力等因素有助于促进药物与粘膜特异性结合，从而延长CS-SLNs在角膜的滞留时间，利于其透过屏障，提高角膜对CS-SLNs的摄取率。CS-SLNs滴眼给药，眼内无异物感，不影响眼部正常的生理功能，患者顺应性好。同时，壳聚糖具有抗菌性，该制剂不需要添加防腐剂，具有缓释，提高药物生物利用度的优势，且壳聚糖包覆的固体脂质纳米粒Zeta电位发生明显变化，可改善其储存稳定性。

本发明的另外一个目的是提供一种含阿奇霉素的缓释滴眼液的制备工艺。

目前，固体脂质纳米粒的制备主要有高压乳化法，但此法对设备要求高，且所得的固体脂质纳米粒粒径较大且分布广，质量难以控制；微乳技术所得分散液的固体含量较低；高剪切乳化超声法存在金属污染等问题；而乳化蒸发-低温固化法可避免上述缺点，且操作简单，可工业化大生产。但此法有少量粒子聚集现象。若在处方中加入一定量的壳聚糖后聚集现象消失，这可能是由于壳聚糖通过静电、氢键和疏水键等作用与固体脂质纳米粒结合，增加粒子间的斥力，防止粒子的聚集，形成“构象云”从而产生较大的空间位阻，提高固体脂质纳米粒的稳定性。目前，未见公开刊物有报道用乳化蒸发-低温固化法制备阿奇霉素固体脂质纳米粒，笔者通过大量实验证实此法简单可行，且经改进后的工艺制备的阿奇霉素固体脂质纳米粒质量合格。具体操作步骤如下：

①称取处方量的磷脂、胆固醇和阿奇霉素，加入到有机溶剂中，70℃加热，涡旋使完全溶解，置于水浴中保温，作为有机相；

②配置处方量的乳化剂/助乳化剂溶液，构成内水相，水浴加热至相同温度70℃；

③用定量针头吸取有机相，通过5#针头大小的孔径，缓慢滴入同温度的内水相中，恒温搅拌使有机溶剂蒸发并浓缩至适当的体积，得到初乳；

④按处方量称取壳聚糖，加入到pH缓冲液中，配置成连续相(外水相)，保持温度0-4℃；

⑤搅拌下将所得的初乳迅速倾倒入外水相中，搅拌继续固化2h，恢复到室温；

⑥补加注射用水至全量；

⑦过0.45μm的微孔滤膜，除菌，分装即得。

该法制备壳聚糖修饰的固体脂质纳米粒的工艺具有操作简便，适合工业化生产，制得的固体脂质纳米粒粒径大小均匀，有较高的可重复性等优点，无需超声等高能乳化过程，实现了低能乳化，是一种值得推广应用的制备方法。稳定性初步考察试验表明本发明所制得的壳聚糖修饰的固体脂质纳米粒在4℃低温条件下，六个月内，纳米粒外观、包封率、粒径、PI值、Zeta电位没有显著变化，且未见凝聚沉淀现象，说明该制剂在冰箱(4℃)中质量稳定性良好。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种含阿奇霉素的缓释滴眼液，原辅料组成以重量百分比计，包括：阿奇霉素0.5％-3％；磷脂1％-6％；胆固醇0.8％-4％；乳化剂0.2％-3％；pH缓冲液0.1％-1.5％；抗氧剂0.01％-3％；稳定剂0.01％-5％；壳聚糖3％-10％；渗透压调节剂0.01％-2.5％。

所述磷脂为大豆磷脂、蛋黄磷脂、磷脂酰胆碱中的一种或几种的组合；所述有机溶剂为甲醇、丙酮、三氯甲烷、无水乙醇中的一种或几种的组合；所述乳化剂为聚甘油硬脂酸酯、聚甘油油酸酯、聚氧乙烯蓖麻油、聚山梨酯80、泊洛沙姆188、司盘、PEG中的一种或几种的组合；所述pH缓冲液为磷酸钠缓冲液、醋酸钠缓冲液、枸橼酸钠缓冲液中的一种或几种的组合，且pH6.0-7.5；所述抗氧剂为维生素C、维生素E、丁基化羟基甲苯、丙二醇、甘油、柠檬酸、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、茶多酚、芦丁脂肪酸酯、姜黄素、肌肽中的一种或几种的组合；所述渗透压调节剂为氯化钠、甘露醇、葡萄糖、乳糖、硼砂、甘油中的一种或几种的组合；所述稳定剂为聚乙二醇、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚山梨酯80中的一种或几种的组合。

为了考察本发明所得制剂的稳定性和生物利用性，我们做了如下试验。

实验1：本发明制剂稳定性研究：

(1)实验方法：按照实施例1制备壳聚糖修饰的阿奇霉素固体脂质纳米粒滴眼液，以性状、pH、含量、无菌、有关物质为考察项目，进行加速试验(温度25±2℃，相对湿度75％±5％条件下避光保存，1、2、3、6个月时取样检测)和长期试验(温度6±2℃，相对湿度60％±10％条件下避光保存，3、6、9、12、18、24个月时取样检测)。

(2)实验结果见下表：

6个月加速试验

24个月长期试验

经加速试验6个月和长期留样24个月试验考察，结果表明本发明滴眼液长期储存稳定性良好，可暂定保质期为两年。

实验2：本发明滴眼液制剂家兔眼内药物动力学研究：

(1)实验方法：按照实施例1制备壳聚糖修饰的阿奇霉素固体脂质纳米粒滴眼液，以阿奇霉素溶液剂为参比制剂，按平行试验设计，采用健康新西兰大耳白家兔，体重2.5-3.0kg，多剂量眼部给予两种阿奇霉素滴眼液，给药剂量为30μl∕只眼。滴眼后于5min、15min、30min、45min、60min、120min、240min、360min和480min后将滤纸条置于眼睑内吸取泪液，精密称量，40℃下氮气吹干，冷冻保存于﹣20℃冰箱中至测定。采用UPLC∕MS∕MS法测定泪液中阿奇霉素的浓度，获得药代动力学参数。

(2)实验结果见下表

参数	单位	本发明滴眼液制剂	阿奇霉素溶液剂
				AUC_0-t	μg·h/mL	2461.583±885.257	1532.389±441.595

AUC_0-∞	μg·h/mL	2778.395±972.74	1631.500±476.105
				AUMC_0-t	μg·h/mL	3936.211±1593.127	2349.310±783.976
AUMC_0-∞	μg·h/mL	8284.653±2679.999	3578.121±1880.389
				T_1/2	h	3.898±1.325	2.388±0.815
MRT_0-t	h	1.587±0.225	1.547±0.384
				MRT_0-∞	h	3.057±0.536	2.166±0.782

结果表明壳聚糖修饰的阿奇霉素固体脂质纳米粒在眼部能达到有效抑菌浓度，且具有缓释，提高药物生物利用度的优势。

实验3：单次给药刺激性试验

(1)实验方法：按照实施例1制备壳聚糖修饰的阿奇霉素固体脂质纳米粒滴眼液，以阿奇霉素溶液剂为参比制剂。家兔随机分为两组，左眼结膜囊内用微量加样器分别滴入本发明滴眼液和阿奇霉素溶液剂50μL，作为实验组，右眼滴入生理盐水作为对照组。给药8小时后观察眼部组织的反应情况，按Draize眼部刺激试验评分标准对角膜、虹膜、结膜分别进行评分，每只家兔眼刺激反应总积分等于每只家兔眼角膜、虹膜、结膜的刺激反应分值之和，并自身进行比较。按下表的评价标准判断本发明制剂和阿奇霉素溶液剂的眼刺激性。

分值	刺激性
		-3	无刺激性
4-8	轻度刺激
		9-12	中等刺激

13-16

刺激性强

(2)实验结果见下表：

结果表明：本发明制剂单次给药对兔眼无刺激性。

具体实施方案

下列实施例仅用来阐明本发明，毫无限制本发明保护范围之意。

实施例1：

处方：1000ml

制备方法：称取处方量的磷脂、胆固醇和阿奇霉素，加入到100mL无水乙醇中，70℃加热，涡旋使完全溶解，置于水浴中保温，作为有机相；另取含聚山梨酯80和PEG400的混合溶液300mL，构成内水相；将有机相以5#针头，缓慢滴入1200rpm搅拌下的同温度的内水相中，继续搅拌使有机溶媒完全蒸发并使体系浓缩至100mL，得到初乳；

将所得的初乳快速倾倒入500mL1000rpm搅拌下连续相(0-4℃)中，连续相为壳聚糖、丙二醇、甘露醇和磷酸缓冲液(pH6.5)。搅拌继续固化2h，恢复到室温，补加注射用水至全量，过0.45μm的微孔滤膜，即得。

实施例2：

处方：1000ml

制备方法：称取处方量的磷脂、胆固醇、维生素E和阿奇霉素，加入到100mL甲醇中，70℃加热，涡旋使完全溶解，置于水浴中保温，作为有机相；另取含聚氧乙烯蓖麻油和PEG2000的混合溶液300mL，构成内水相；将有机相以5#针头，缓慢滴入1200rpm搅拌下的同温度的内水相中，继续搅拌使有机溶媒完全蒸发并使体系浓缩至100mL，得到初乳；将所得的初乳快速倾倒入500mL1000rpm搅拌下连续相(0-4℃)中，连续相为壳聚糖、氯化钠、和枸橼酸钠缓冲液(pH6.3)。搅拌继续固化2h，恢复到室温，补加注射用水至全量，过0.45μm的微孔滤膜，即得。

实施例3：

处方：1000ml

制备方法：称取处方量的磷脂、胆固醇和阿奇霉素，加入到100mL无水乙醇中，70℃加热，涡旋使完全溶解，置于水浴中保温，作为有机相；另取含聚甘油油酸酯和丁基化羟基甲苯的混合溶液300mL，构成内水相；将有机相以5#针头，缓慢滴入1200rpm搅拌下的同温度的内水相中，继续搅拌使有机溶媒完全蒸发并使体系浓缩至100mL，得到初乳；将所得的初乳快速倾倒入500mL1000rpm搅拌下连续相(0-4℃)中，连续相为壳聚糖、PEG6000、硼砂和磷酸缓冲液(pH6.8)。搅拌继续固化2h，恢复到室温，补加注射用水至全量，过0.45μm的微孔滤膜，即得。

Claims

1.一种含阿奇霉素的滴眼液，其特征在于：所述滴眼液的有效成分阿奇霉素经乳化蒸发-低温固化法制备成阿奇霉素固体脂质纳米粒。

2.根据权利要求1所述的滴眼液，其特征在于：固体脂质纳米粒为用壳聚糖修饰的磷脂双分子膜。

3.根据权利要求1所述的滴眼液，其特征在于：滴眼液的原辅料组成包括：阿奇霉素、磷脂、胆固醇、壳聚糖、乳化剂、抗氧剂、稳定剂、pH缓冲液、渗透压调节剂。

4.根据权利要求1所述的滴眼液，其特征在于：不需要添加防腐剂。

5.根据权利要求3所述的滴眼液，其特征在于：磷脂为大豆磷脂、蛋黄磷脂、磷脂酰胆碱中的一种或几种的组合；乳化剂为聚甘油硬脂酸酯、聚甘油油酸酯、聚氧乙烯蓖麻油、聚山梨酯80、泊洛沙姆188、司盘中的一种或几种的组合，优选泊洛沙姆188；抗氧剂为维生素C、维生素E、丁基化羟基甲苯、丙二醇、甘油、柠檬酸、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、茶多酚、芦丁脂肪酸酯、姜黄素、肌肽中的一种或几种的组合，优选维生素C；稳定剂为聚乙二醇、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、油酸中的一种或几种的组合，优选聚乙二醇；pH缓冲液为磷酸钠缓冲液、醋酸缓冲液、硼酸缓冲液、枸橼酸缓冲液中的一种或几种的组合，优选磷酸钠缓冲液，且pH6.0-7.5；渗透压调节剂为氯化钠、甘露醇、葡萄糖、乳糖、硼砂、甘油中的一种或几种的组合，优选甘露醇。

6.根据权利要求3所述的滴眼液，其特征在于：原辅料组成以重量百分比计，包括阿奇霉素0.5％-3％；磷脂1％-6％；胆固醇0.8％-4％；乳化剂0.2％-3％；pH缓冲液0.1％-1.5％；抗氧剂0.01％-3％；稳定剂0.01％-5％；壳聚糖3％-10％；渗透压调节剂0.01％-2.5％。

7.一种含阿奇霉素的缓释滴眼液的制备方法，包括以下步骤：

③用定量针头吸取有机相，通过规定孔径的针头，缓慢滴入同温度的内水相中，恒温搅拌使有机溶剂蒸发并浓缩至适当的体积，得到初乳；

⑥补加注射用水至全量；

⑦过0.45μm的微孔滤膜，除菌，分装即得。

8.根据权利要求7所述的制备工艺，其选择的定量取样针头的孔径优选4-6#注射器孔径，优选5#注射器孔径。

9.根据权利要求1所述的滴眼液，其特征在于：该组合物主要用于治疗急性细菌性结膜炎、沙眼等眼科疾病。