CN103975970A - 一种植物源抑菌杀菌剂的制备方法及在平菇生产中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种植物源抑菌杀菌剂的制备方法及在平菇生产中的应用，将大蒜、生姜粉碎后与苦瓜粉混合，加入乙酸乙酯在24℃～28℃温度下，振荡0.5～24h，抽滤制得滤液，滤液去除乙酸乙酯，加入无菌水溶解，即得本发明的植物源抑菌杀菌剂，本发明中的植物源抑菌杀菌剂，在最大程度上克服了单一植物源抑菌杀菌剂(如单一大蒜提取液或生姜提取液)因食用菌生产原料偏碱(pH8～10)性对细菌抑杀效果的下降和不稳定的缺点。并且对平菇菌丝的生长无抑制作用，能促进平菇菌丝萌发、加快菌丝生长速度，从根本上提供一种高效、安全的植物源抑菌杀菌剂。

Description

一种植物源抑菌杀菌剂的制备方法及在平菇生产中的应用

技术领域

本发明涉及一种植物源抑菌杀菌剂的制备方法及在平菇生产中的应用，属于食用菌抑菌杀菌剂技术领域。

背景技术

我国是世界上平菇生产、消费第一大国，约占全世界总产量的90％以上，其中平菇生料栽培占50％以上。在平菇生料栽培过程中，防治细菌、真菌等竞争性杂菌污染主要应用化学农药如多菌灵、苯菌灵、甲基硫菌灵、百菌清、噻菌灵、咪鲜胺等。化学农药大量及不合理地应用，一方面对生态环境造成污染和破坏，另一方面食用菌产品中的农残也给人类健康带来严重危害。随着人们生活水平的提高，对平菇产品的质量要求也逐渐提升，而传统的化学农药所带来的严重弊端却阻碍了这种要求的发展。世界各国对多菌灵等化学杀菌剂在食用菌产品中的限量要求非常明确，欧盟2011年7月规定人工栽培食用菌(平菇、双孢菇、香菇等)多菌灵和苯菌灵(以多菌灵计)的残留限量为1mg/kg，日本肯定列表中所有食用菌产品多菌灵限量为3mg/kg，韩国、新加坡的限量都是1mg/kg，美国、英国则不允许在栽培食用菌中使用多菌灵，欧盟未在食用菌生产中登记使用多菌灵。目前我国食用菌产品中滥用化学杀菌剂的现象相对严重，仅2012年9月美国就因多菌灵残留问题退回了10批从中国进口的食用菌罐头，严重影响了我国农产品在国际市场的竞争力，给我们的经济和对外贸易造成很大的损失。

中国专利文献CN1451275(申请号：02110227.9)公开了一种食用菌用杀菌剂。它是由下述含量(重量)的组分组成：甲醇30-60，甲醛30-60，纯净水10-20，防腐剂微量。本发明使用方法独特，可表面喷洒，也可向培养基内注入的方法来防治和杀灭绿霉菌，还可在制作培养基时按一定比例混合后，可有效抑制有害病菌(特别是绿霉菌)的繁殖，保证培养基体内不受有害菌的侵蚀，进而避免了培养基的腐烂变质。

中国专利文献CN1077590(申请号：93103928.2)公开了用于食用菌生产中一种消毒杀菌剂的制备方法，它是以二氯异氰尿酸钠、磷酸三钠或磷酸五钠、磷酸二氢钾或尿素、葡萄糖粉、硫酸钠、硼酸为原料配制而成，对酵母菌、木霉(绿霉)、根霉、毛霉、曲霉、芽孢及孢子所引起的细菌和真菌有极强的消杀能力，并兼治菇蝇、螨类等害虫，有促进食用菌生长和增产的效果，是一种高效、广谱、无残毒、使用方便的良好消毒杀菌剂。

以上两篇专利存在以下缺点：虽然上述两篇专利在一定程度上能有效抑制有害病菌的繁殖，但上述两种杀菌剂仍为化学杀菌剂，广泛使用仍能够造成环境污染、残毒危害、病菌抗药等问题。

中国专利文献CN102210327A(申请号：201110153495.8)公开了一种新型生物广谱杀菌剂及其制备方法，其是由大蒜、洋葱与苦瓜发酵液按照一定重量配比混合发酵而制得。本发明的生物广谱杀菌剂以天然植物与益生菌为核心，纯生物发酵制备，不添加任何化学合成成分，具有高效、无公害、无污染、无副作用，抗菌广谱，药效长的优点，但该专利是通过益生菌营养竞争进行生长繁殖，从而占据生存空间的方式来阻止植物病原菌的生长，能在植物表面迅速形成一层高密保护膜，其含有的抑菌物质在抑制病菌孢子萌发和菌丝生长生长的同时，也抑制了食用菌菌丝萌发和生长，导致食用菌大幅减产。

目前，市场上急需绿色、无公害、低残留的植物源杀菌剂用于食用菌生产中，以降低食用菌生产中化学杀菌剂的使用，提升我国食用菌产品的安全性和缓解国际贸易的技术性壁垒。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供一种植物源抑菌杀菌剂的制备方法及在平菇生料生产中的应用，该植物源抑菌杀菌剂对食用菌生产中的竞争性杂菌(细菌、真菌)具有广谱性、见效快等特点，并且对平菇菌丝的生长无抑制作用，能促进平菇菌丝萌发生长，可从根本上减少食用菌产品中农药含量的残留，提高产品安全性。

本发明的技术方案如下：

一种植物源抑菌杀菌剂，原料重量百分比如下：

大蒜      40％～50％；

生姜      40％～50％；

苦瓜粉    5％～20％。

将上述大蒜、生姜粉碎后与苦瓜粉混合，加入乙酸乙酯在24℃～28℃温度下，振荡0.5～24h，固液分离制得滤液，滤液去除乙酸乙酯，加入无菌水溶解，即得本发明的植物源抑菌杀菌剂。

上述所述的大蒜、生姜为鲜重，苦瓜粉为干重。

本发明优选的，所述的植物源抑菌杀菌剂，原料重量百分比如下：

大蒜      40％～45％；

生姜      40％～45％；

苦瓜粉    10％～20％。

本发明优选的，所述的植物源抑菌杀菌剂，原料重量百分比如下：

大蒜      45％；

生姜      45％；

苦瓜粉    10％。

上述植物源抑菌杀菌剂的制备方法，包括步骤如下：

(1)大蒜去皮后粉碎成浆状，在空气中酶解10～20min，制得大蒜浆；

(2)生姜粉碎后，过40～60目筛，制得生姜粉；

(3)新鲜苦瓜清洗干净后，切片，烘干后粉碎，过40～60目筛，制得苦瓜粉，密封保存备用；

(4)将步骤(1)制得的大蒜浆、步骤(2)制得的生姜粉与步骤(3)制得的苦瓜粉按配比混合均匀，制得混合物料，向混合物料中加入乙酸乙酯，在24℃～28℃条件下，以120～140r/min的频率振荡0.5～24h提取原料抑菌杀菌活性物质，得固液混合物，所述混合物料与乙酸乙酯的质量体积比为1:1～3；单位：g/L；

(5)将步骤(4)的固液混合物固液分离，取液体去除乙酸乙酯，加入无菌水溶解，即得植物源抑菌杀菌剂。

本发明优选的，步骤(3)中，苦瓜切片厚度为1～3cm，切成的苦瓜片于50℃～65℃烘干。

本发明优选的，步骤(5)中固液分离采取抽滤进行，抽滤后滤液过孔径0.22μm的细菌滤膜。

本发明优选的，步骤(5)中去除乙酸乙酯是将液体旋蒸至乙酸乙酯完全去除，然后按质液比1：1的比例加入无菌水对抽滤瓶洗涤3～5次将蒸发后的产物溶解。

上述植物源抑菌杀菌剂的应用，用于防治平菇病菌，包括如下步骤：

1)将植物源抑菌杀菌剂加水稀释100倍配制成水溶液，按栽培原料总重量的1.0～1.5倍加平菇培养基料中，拌匀，备用；

2)采用4层菌种3层料的方式把步骤1)的平菇培养基料、菌种装入菌袋中，菌袋的规格为17cm×55cm×0.04cm，菌种用量为栽培原料干重的10％～15％；

3)将步骤2)的菌袋放入22℃～24℃条件下，进行培养至菌丝长满菌袋。

有益效果

1、本发明中的植物源抑菌杀菌剂，在最大程度上克服了单一植物源抑菌杀菌剂(如单一大蒜提取液或生姜提取液)因食用菌生产原料偏碱(pH8～10)性对细菌抑杀效果的下降和不稳定的缺点，对平菇具有良好的杀菌抑菌作用，且多品种大蒜混合制得的植物源抑菌杀菌剂对菌丝速度和菌袋污染点优于单品种大蒜制得的植物源抑菌杀菌剂。

2、本发明的植物源抑菌杀菌剂对食用菌生产中常见的竞争性杂菌(细菌、真菌)具有广谱性、见效快等特点，并且对平菇菌丝的生长无抑制作用，能促进平菇菌丝萌发、加快菌丝生长速度，从根本上提供一种高效、安全的的植物源抑菌杀菌剂。

3、本发明的植物源抑菌杀菌剂的制备方法，其制备工艺简单，使用方便，便于广泛应用。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的技术方案做进一步说明，但本发明所保护范围不限于此。

实施例1

下面结合实施例对本发明做详细的说明，但不限于此。

实例中设备：植物组织粉碎机、恒温振荡箱、抽滤装置、旋转蒸发仪等均为本领域普通市售设备。

大蒜、生姜、苦瓜均为市售产品。

一种植物源抑菌杀菌剂的制备方法，包括步骤如下：

(1)取鲁蒜一号鲜蒜、苍山蒲棵大蒜、青杆软叶大蒜鳞茎剥皮后的蒜瓣用植物组织粉碎机打成浆状，在空气中酶解10min后，制得大蒜浆；

(2)生姜用植物组织粉碎机打碎后，过60目筛，制得生姜粉；

(3)新鲜苦瓜清洗干净后，切片，切片厚度为2cm，切成的苦瓜片于50℃烘干，烘干后粉碎，过60目筛，制得苦瓜粉，密封保存备用；

(4)取步骤(1)的大蒜浆、步骤(2)制得的生姜粉、步骤(3)制得的苦瓜粉混合，各原料所占的重量百分比分别为45％、45％、10％，混合制得混合物料，向混合物料中加入乙酸乙酯放入恒温振荡箱中，在28℃条件下，以120r/min的频率振荡2h提取原料抑菌杀菌活性物质，得固液混合物，所述混合物料与乙酸乙酯的质量体积比为1:1；单位：g/L；

(5)将步骤(4)的固液混合物放入抽滤装置进行固液分离，抽滤后滤液过孔径0.22μm的细菌滤膜。取液体放入旋转蒸发仪旋蒸至乙酸乙酯完全去除，然后按质液比1：1的比例加入无菌水对抽滤瓶洗涤3～5次将蒸发后的产物溶解，制得植物源抑菌杀菌剂。

实施例2

一种植物源抑菌杀菌剂的制备方法，包括步骤如下：

(1)取苍山蒲棵大蒜鳞茎剥皮后的蒜瓣用植物组织粉碎机打成浆状，在空气中酶解10min后，制得大蒜浆；

(2)生姜用植物组织粉碎机打碎后，过50目筛，制得生姜粉；

(3)新鲜苦瓜清洗干净后，切片，切片厚度为2cm，切成的苦瓜片于60℃烘干，烘干后粉碎，过50目筛，制得苦瓜粉，密封保存备用；

(4)取步骤(1)的大蒜浆、步骤(2)制得的生姜粉、步骤(3)制得的苦瓜粉混合，各原料所占的重量百分比分别为50％、40％、10％，混合制得混合物料，向混合物料中加入乙酸乙酯放入恒温振荡箱中，在27℃条件下，以120r/min的频率振荡6h提取原料抑菌杀菌活性物质，得固液混合物，所述混合物料与乙酸乙酯的质量体积比为1:2；单位：g/L；

(5)将步骤(4)的固液混合物放入抽滤装置进行固液分离，抽滤后滤液过孔径0.22μm的细菌滤膜。取液体放入旋转蒸发仪旋蒸至乙酸乙酯完全去除，然后按质液比1：1的比例加入无菌水对抽滤瓶洗涤3～5次将蒸发后的产物溶解，制得植物源抑菌杀菌剂。

实施例3

一种植物源抑菌杀菌剂的制备方法，包括步骤如下：

(1)取鲁蒜一号鲜蒜、苍山蒲棵大蒜、高脚子大蒜鳞茎剥皮后的蒜瓣用植物组织粉碎机打成浆状，在空气中酶解15min后，制得大蒜浆；

(2)生姜用植物组织粉碎机打碎后，过45目筛，制得生姜粉；

(3)新鲜苦瓜清洗干净后，切片，切片厚度为2.5cm，切成的苦瓜片于50℃烘干，烘干后粉碎，过45目筛，制得苦瓜粉，密封保存备用；

(4)取步骤(1)的大蒜浆、步骤(2)制得的生姜粉、步骤(3)制得的苦瓜粉混合，各原料所占的重量百分比分别为40％、50％、10％，混合制得混合物料，向混合物料中加入乙酸乙酯放入恒温振荡箱中，在26℃条件下，以120r/min的频率振荡12h提取原料抑菌杀菌活性物质，得固液混合物，所述混合物料与乙酸乙酯的质量体积比为1:3；单位：g/L；

(5)将步骤(4)的固液混合物放入抽滤装置进行固液分离，抽滤后滤液过孔径0.22μm的细菌滤膜。取液体放入旋转蒸发仪旋蒸至乙酸乙酯完全去除，然后按质液比1：1的比例加入无菌水对抽滤瓶洗涤3～5次将蒸发后的产物溶解，制得植物源抑菌杀菌剂。

实施例4

实施例1所述的植物源抑菌杀菌剂的应用，用于防治平菇病菌，步骤如下：

1)按照实施例1所述的方法制备植物源抑菌杀菌剂，

2)栽培原料配方：棉籽壳90％，麸皮6％，生石灰3％，石膏1％，称量好备用。

3)将步骤1)制得的植物源抑菌杀菌剂按质液比100:1加水稀释100倍配制成水溶液，取50kg平菇培养料和植物源抑菌杀菌剂水溶液0.5L，拌匀，然后再加入30L水(料水比1:1.2)，拌匀，备用。

4)采用4层菌种3层料的方式把步骤1)的平菇培养基料、菌种装入聚乙烯塑料菌袋中，菌袋的规格为17cm×55cm×0.04cm，平菇菌种为早秋615，菌种用量为5kg。

5)按照2)～4)的步骤不加植物源抑菌杀菌剂装袋，作为对照组。

6)将加入植物源抑菌杀菌剂和对照组的菌袋放入22℃～24℃条件下，进行培养。

试验结果发现：加入植物源抑菌杀菌剂的菌袋在菌丝萌发时间、菌丝生长速度与对照组无显著差异，但加入植物源抑菌杀菌剂菌袋的污染点为4个，对照组污染点为12个，污染率降低66.67％；加入本产品的菌袋前2潮菇的产量比对照高11.5％。

实施例5

实施例1所述的植物源抑菌杀菌剂的应用，用于防治平菇病菌，步骤如下：

1)按照实施例1所述的方法制备植物源抑菌杀菌剂，

2)栽培原料配方：棉籽壳90％，麸皮6％，生石灰3％，石膏1％，称量好备用。

3)将步骤1)制得的植物源抑菌杀菌剂按质液比100:1加水稀释100倍配制成水溶液，取50kg平菇培养料和植物源抑菌杀菌剂水溶液0.5L，拌匀，然后再加入30L水(料水比1:1.2)，拌匀，备用。

4)采用4层菌种3层料的方式把步骤1)的平菇培养基料、菌种装入聚乙烯塑料菌袋中，菌袋的规格为17cm×55cm×0.04cm，平菇菌种为黑丰268，菌种用量为5kg。

5)按照2)～4)的步骤不加植物源抑菌杀菌剂装袋，作为对照组。

6)将加入植物源抑菌杀菌剂和对照组的菌袋放入22℃～24℃条件下，进行培养。

试验结果发现：加入植物源抑菌杀菌剂的菌袋在菌丝萌发时间、菌丝生长速度与对照组无显著差异，但加入植物源抑菌杀菌剂菌袋的污染点为3个，对照组污染点为14个，污染率降低78.57％；加入本产品的菌袋前2潮菇的产量比对照高13.7％。

试验例

对比例：中国专利文献CN102210327A(申请号：201110153495.8)公开的一种新型生物广谱杀菌剂。

将实施例1-3及对比例的杀菌剂应用于平菇生产，按照实施例5步骤的2)～6)，对菌丝萌发时间、菌丝生长速度，菌袋污染情况以及生物转化率进行检测，检测结果如表1所示：

表1实施例1-3及对比例对平菇(黑丰268)生产的影响

处理	菌丝萌发时间	菌丝速度(萌发后10d)	菌袋污染点(个)	前3潮生物转化率(％)
					实施例1	36h	4.678mm/d	2	121.6％
实施例2	48h	4.553mm/d	3	116.7％
					实施例3	48h	4.564mm/d	2	126.3％
对比例	60h	3.653mm/d	23	85.7％

结果分析：由上述检测结果可以看出，实施例1、实施例2、实施例3的菌丝萌发时间分别为：36h、48h、48h，而对比例的菌丝萌发时间为60h，从而可以看出实施例1-实施例3菌丝萌发时间明显短于对比例的菌丝萌发时间，从萌发后10d的菌丝生长速度可以看出，实施例1-实施例3的菌丝生长速度明显优于对比例的菌丝生长速度，因此本发明的植物源抑菌杀菌剂有促进平菇菌丝萌发生长的作用，从菌袋污染点数可以明显看出，本发明实施例1-实施例3的菌袋污染点明显少于对比例的，对比实施例1、实施例2、实施例3的菌丝生长速度和菌袋污染点数，实施例1和实施例3的菌丝生长速度稍快于实施例2的，实施例1和实施例3的菌袋污染点数稍少于实施例2的，由此可以看出，多品种大蒜混合制得的植物源抑菌杀菌剂对菌丝速度和菌袋污染点优于单品种大蒜制得的植物源抑菌杀菌剂，可能是因为不同品种大蒜中成分略有不同导致抑菌效果不同，因此本发明的植物源抑菌杀菌剂有促进平菇菌丝萌发的作用并且具有良好的杀菌抑菌作用。

Claims (8)

1.一种植物源抑菌杀菌剂，原料重量百分比如下：

大蒜      40％～50％；

生姜      40％～50％；

苦瓜粉    5％～20％。

将上述大蒜、生姜粉碎后与苦瓜粉混合，加入乙酸乙酯在24℃～28℃温度下，振荡0.5～24h，固液分离制得滤液，滤液去除乙酸乙酯，加入无菌水溶解，即得本发明的植物源抑菌杀菌剂。

2.根据权利要求1所述的植物源抑菌杀菌剂，其特征在于，原料重量百分比如下：

大蒜      40％～45％；

生姜      40％～45％；

苦瓜粉    10％～20％。

3.根据权利要求1所述的植物源抑菌杀菌剂，其特征在于，所述的植物源抑菌杀菌剂，原料重量百分比如下：

大蒜      45％；

生姜      45％；

苦瓜粉    10％。

4.权利要求1所述的植物源抑菌杀菌剂的制备方法，包括步骤如下：

(1)大蒜去皮后粉碎成浆状，在空气中酶解10～20min，制得大蒜浆；

(2)生姜粉碎后，过40～60目筛，制得生姜粉；

(3)新鲜苦瓜清洗干净后，切片，烘干后粉碎，过40～60目筛，制得苦瓜粉，密封保存备用；

(4)将步骤(1)制得的大蒜浆、步骤(2)制得的生姜粉与步骤(3)制得的苦瓜粉按配比混合均匀，制得混合物料，向混合物料中加入乙酸乙酯，在24℃～28℃条件下，以120～140r/min的频率振荡0.5～24h提取原料抑菌杀菌活性物质，得固液混合物，所述混合物料与乙酸乙酯的质量体积比为1:1～3；单位：g/L；

(5)将步骤(4)的固液混合物固液分离，取液体去除乙酸乙酯，加入无菌水溶解，即得植物源抑菌杀菌剂。

5.根据权利要求4所述的植物源抑菌杀菌剂的制备方法，其特征在于，所述的步骤(3)中，苦瓜切片厚度为1～3cm，切成的苦瓜片于50℃～65℃烘干。

6.根据权利要求4所述的植物源抑菌杀菌剂的制备方法，其特征在于，步骤(5)中固液分离采取抽滤进行，抽滤后滤液过孔径0.22μm的细菌滤膜。

7.根据权利要求4所述的植物源抑菌杀菌剂的制备方法，其特征在于，步骤(5)中去除乙酸乙酯是将液体旋蒸至乙酸乙酯完全去除，然后按质液比1：1的比例加入无菌水对抽滤瓶洗涤3～5次将蒸发后的产物溶解。

8.权利要求1所述的植物源抑菌杀菌剂的应用，用于防治平菇病菌，包括如下步骤：

1)将植物源抑菌杀菌剂加水稀释100倍配制成水溶液，按栽培原料总重量的1.0～1.5倍加平菇培养基料中，拌匀，备用；

2)采用4层菌种3层料的方式把步骤1)的平菇培养基料、菌种装入菌袋中，菌袋的规格为17cm×55cm×0.04cm，菌种用量为栽培原料干重的10％～15％；

3)将步骤2)的菌袋放入22℃～24℃条件下，进行培养至菌丝长满菌袋。