CN103975840B - 一种淡水红毛菜的培养液 - Google Patents

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Abstract

本发明针对淡水红毛菜培养困难这一问题，配制出一种适合其生长的培养液，并能在室内长期保存，从而弥补现有技术的不足。本发明的培养液，包含有0.20-0.34mg/ml CaCO3、0.14-0.27mg/ml MgCl2、体积比为10-15％的海水和8-12％的紫菜提取液。本发明的培养液不同于一般高等植物和藻类的培养液，为典型的碱性培养液，Ca/Mg离子含量非常高，pH值为7.9-8.2。该培养液配制简单，营养成分却很丰富，不同于已有的藻类培养液，如f/2，PES，MES等，配制起来十分繁杂且成分仍嫌单一。且本培养液配方中含有丰富的矿物离子、氨基酸以及植物生长所必须的维生素、植物激素等次生代谢物质，为红毛菜的生长提供充足的营养。

Description

一种淡水红毛菜的培养液
技术领域
本发明属于藻类养殖技术领域，具体涉及一种淡水红毛菜的培养液。
背景技术
红毛菜(Bangia Lyngb.)是一种味道鲜美、营养丰富的原始红藻，。研究表明红毛菜中含有丰富的游离氨基酸、类胡萝卜素、藻红蛋白和藻蓝蛋白。每100g干藻中EPA达500mg以上，是迄今已知EPA含量最高的大型藻类。基于红毛菜丰富的营养和鲜美的口感，其产品一直广受欢迎。我国于1990年代建立了海水红毛菜的栽培产业，规模达5000亩以上，目前已成为我国主流栽培海藻种类之一。产品主要销往东南亚国家和地区，市场前景十分广阔。
不同于紫菜，红毛菜在淡水环境也有分布。最早的红毛菜标本来源淡水，是由Roth于1806年在德国威泽河采集到的。海水红毛菜广泛分布于世界各地沿海，从北极圈到热带海域。而淡水红毛菜对环境的要求十分苛刻。我国从山西娘子关泉采集到的淡水红毛菜，对其生长和分布情况进行连续多年的考察，发现仅生长在娘子关瀑布内。而且，随着全球气候环境的变化，淡水红毛菜种群极易发生不可逆的衰退和消亡。因此，在实验室内成功保存淡水红毛菜的种质十分重要。但是不同于海水红毛菜，淡水红毛菜仅有单位体的原叶体(配子体)阶段，不具有二倍体的丝状体(孢子体)阶段，即使通过体细胞工程技术也难以生产丝状体。因此，淡水红毛菜不可能像海水红毛菜那样以丝状体作为种质长期保存。且淡水红毛菜的原叶体阶段在室内采用已有的各种藻类或植物培养液均难以养成。
发明内容
本发明针对淡水红毛菜培养困难这一问题，配制出一种适合其生长的培养液，并能在室内长期保存，从而弥补现有技术的不足。
本发明的培养液，包含有0.20-0.34mg/ml CaCO3、0.14-0.27mg/mlMgCl2、体积比为10-15％的海水和8-12％的紫菜提取液。
其中紫菜提取液的制备方法如下：将紫菜粉碎后加入磷酸缓冲液，浸泡后离心弃去沉淀，上清液即为紫菜提取液。
或将清洗干净的紫菜藻体，加入磷酸缓冲液后用搅拌机充分粉碎，离心弃去沉淀，上清液即为紫菜提取液。
其中磷酸缓冲液的配制如下：其成分按照质量体积百分比浓度为K2HPO45.59mg/ml、KH2PO40.41mg/ml。
上述培养液的pH值为7.9-8.2。
本发明还提供一种淡水红毛菜的养殖方法，是将淡水红毛菜干净藻体置于上述培养液中培养，培养的光温条件为：13-17℃，500-2000lx，8-10h光照/天；在培养期间每隔2-3天将藻体干露1-2h，每隔7-10d更换一次培养液。
本发明的培养液不同于一般高等植物和藻类的培养液，为典型的碱性培养液，Ca/Mg离子含量非常高，pH值为7.9-8.2。该培养液配制简单，营养成分却很丰富，不同于已有的藻类培养液，如f/2，PES，MES等，配制起来十分繁杂且成分仍嫌单一。且本培养液配方中含有丰富的矿物离子、氨基酸以及植物生长所必须的维生素、植物激素等次生代谢物质，为红毛菜的生长提供充足的营养。
具体实施方式
基于淡水红毛菜对生长环境的严苛要求，淡水红毛菜种群的分布很受限，且随着全球气候环境的变化，种群极易发生不可逆的衰退和消亡。因此，在实验室内成功保存淡水红毛菜的种质十分重要。但是不同于海水红毛菜，淡水红毛菜仅有单位体的原叶体(配子体)阶段，不具有二倍体的丝状体(孢子体)阶段。因此，不能像海水红毛菜那样以丝状体作为种质长期保存。且淡水红毛菜的原叶体阶段在室内采用已有的各种藻类或植物培养液均难以养成。
下面结合具体实施例对本发明的培养液及培养方法进行详细的描述。
实施例1：
准备工作：在配制培养液之前，准备好以下材料：
自来水，海水，蒸馏水，CaCO3，MgCl2或MgCl2.6H2O，磷酸缓冲液(0.1mol.L-1，pH8.0)，紫菜提取液。
(1)水处理：自来水利用空气泵充气12-24h，加热煮沸5-10min，冷却，置暗处13-17℃备用。海水加热到出现大气泡(刚刚沸腾)，冷却，置暗处13-17℃备用。蒸馏水高压灭菌。
(2)磷酸缓冲液配制：5.59g K2HPO4+0.41g KH2PO4+1000ml蒸馏水。置4℃冰箱备用。
(3)紫菜提取液制备：紫菜用自来水冲洗干净，然后用消毒淡水冲洗3遍，拭去表面水分，用液氮速冻后，压碎成粉末，最后按10:1(体积V：质量W)比例加磷酸缓冲液，离心(4℃，8000g，5min)，弃去沉淀，上清液置4℃冰箱备用。
或将清洗干净的紫菜藻体，按5:1(体积V：质量W)比例加磷酸缓冲液，用搅拌机充分粉碎，离心(4℃，8000g，5min)，弃去沉淀，上清液置4℃冰箱备用。
1.培养液配制(1L)：
100-150mL海水+80-120mL紫菜提取液+200-340mg CaCO3+140-270mg MgCl2，用处理过的自来水补平至1000mL。
2.淡水红毛菜的培养：
将淡水红毛菜干净藻体置于培养液中培养。培养的光温条件为：
13-17℃，500-2000lx，8-10h光照(24h周期)。
3.培养期管理：
每隔2-3天将藻体干露1-2h，每隔7-10d更换一次培养液。更换培养液时用筛绢过滤后，用50％消毒海水冲洗3-5遍，然后添加新的培养液培养。
具体养殖如下：
淡水红毛菜2013年4月20日采自山西娘子关泉，挑取健康的藻体，阴干后-20℃冷冻5-7d，于4℃的培养液中复苏1-2d。培养液中含12％海水，8％坛紫菜提取液(采用上述液氮提取法)，具体组成为：12％海水+8％mL坛紫菜提取液+0.23mg/ml CaCO3+0.17mg/ml MgCl2，pH7.9。置于13℃，1000lx，8h光照条件下培养。1个月后，藻体湿重增长3倍。藻体一直健康保存至今。
实施例2
本实施例的培养液中含10％海水，10％坛紫菜提取液(采用上述搅拌机粉碎法)，具体组成为：10％海水，10％坛紫菜提取液，0.3mg/ml CaCO3，0.27mg/ml MgCl2，pH8.0；置于17℃，2000lx，10h光照条件下培养。1个月后，藻体湿重增长4.5倍。藻体一直健康保存至今。
实施例3：
培养液中含15％海水，12％末水条斑紫菜提取液(采用上述搅拌机粉碎法),具体组成为：15％海水，12％条斑紫菜提取液，0.34mg/ml CaCO3,0.27mg/mlMgCl2,pH8.2。置于15℃，1500lx，10h光照条件下培养。1个月后，藻体湿重增长4.8倍。藻体一直健康保存至今。
上述结果表明本发明培养液可以有效的用于淡水红毛菜的养殖及保种。

Claims (3)

1.一种淡水红毛菜的培养液，其特征在于，所述的培养液包含有0.20-0.34mg/ml CaCO3、0.14-0.27mg/ml MgCl2、体积比为10-15％的海水和8-12％的紫菜提取液；所述的紫菜提取液的制备方法如下：将清洗干净的紫菜藻体，加入磷酸缓冲液后用搅拌机充分粉碎，离心弃去沉淀，上清液即为紫菜提取液；其中磷酸缓冲液中K2HPO4的浓度为5.59mg/ml、KH2PO4浓度为0.41mg/ml。
2.如权利要求1所述的培养液，其特征在于，所述的培养液的pH值为7.9-8.2。
3.一种淡水红毛菜的养殖方法，其特征在于，所述的养殖方法是将淡水红毛菜干净藻体置于权利要求1所述的培养液中培养，培养的光温条件为：13-17℃，500-2000lx，8-10h光照/天；在培养期间每隔2-3天将藻体干露1-2h，每隔7-10d更换一次培养液。
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